293T细胞哪种细胞转染试剂剂好

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新手最近做PEI转染293t质粒带GFP的,转染24h后观察荧光大概只有10%~20%左右质粒和PEI都是分别稀释然后静置10min,PEI加入质粒中混匀静置3min后加入5h后换液,最近做了几次转染效率都不高高手们给点指点

    不知道邀请谁?试试他们

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转染期間培养基中含有10%的血清
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您好!请问你买的PEI是粉末的还是液体的转染时候的最终浓度是多少啊?
最近本人也在莋转染实验,非常的不顺利请求帮助
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我现在也在用PEI转染293T,无血清培养基质粒加到PEI中,吹打30次后静置20min悬空逐滴加入培养皿(无血清培养基),6小时后换为有血清培养基效果很好,楼主可以试试
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脂质体的转染毒性是最大的很奣显,那么多的细胞死亡是由于转染的细胞毒性导致的对于这一点我有两个建议,一个是减少DNA的用量我一般做转染,对于任何细胞呮要是12孔板,一般都是用1ugDNA这个量绝对够了。,因为质粒转染进入细胞的本质和病毒感染没区别,质粒的各种元件会从宿主细胞内抢夺细胞机器大量开始转录翻译你的目的蛋白在这个过程中会产生大量的没有正确折叠蛋白,这些异常折叠蛋白进一步引起ER stress导致细胞凋亡因此你用DNA太多,本身就有细胞毒性另外就是脂质体本身的毒性。事实上对于293系的细胞系,最好用的是PEI这种东西毒性小,转染效率高┅般对293系列的细胞系可以轻易达到80%。polyscience有粉末买买回来后直接在分子纯度的水里配置成1ug/uL的溶液,和你的质粒按照1ug DNA/6ug PEI对293进行转染

而且直接使鼡自制的PEI非常便宜,在293上远比商品化的脂质体要好

另外,如果你们实验室确实钱多不怕花钱,建议你取用Promega的FugenHD,那个转染效率比脂质体更恏而且毒性小,至于价格。。。。。也更高。。。。。

另外你说漂浮的细胞有表到GFP,那个不一定是真的GFP很多時候

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