pcr扩增条带怎么看后没有出现条带

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-10-11 09:03 标签： pcr扩增条带怎么看

圻明生物课堂：实验中PCR扩增没有絀现目的条带原因分析

圻明生物课堂：实验中没有出现目的条带原因分析
设计PCR用引物时的注意事项：
2. 二条引物之间不能进行Annealing对3′端的3个堿基需特别注意。 
3. GC含量在50～60%避开局部富含GC或AT，为了使引物和模板稳定结合3′端应避开AT rich结构。 
4. 避开引物自身形成二级结构 
5. 选择Tm温度相互接近的二条引物。

PCR反应的关键环节：①模板核酸的制备；②引物的质量与特异性；③酶的质量；④PCR条件


寻找原因亦应针对上述环节进荇分析检测。 
        f．靶序列变异如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，導致PCR不能有效扩增 
二、 引物：引物的设计、引物质量是PCR扩增成败的关键。
        a．引物设计不合理如引物长度不够、引物之间形成二聚体等，需要重新设计引物
        c．引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期4℃保存导致引物降解失效。
三、 酶失活：需更换新酶或新舊两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或活性降低而导致没有产物
        a．PCR扩增条件：变性对PCR扩增相当重要，如变性温度低、变性时間短都有可能出现扩增无产物；退火温度过低可导致非特异性扩增而降低特异性扩增效率；退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR擴增效率。 
        c．反应体系：通常进行PCR预实验采用的是小体系正式实验如需扩大体系时，一定要重新摸索条件否则容易出现扩增效果不理想或者失败。

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