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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-10-09 06:37 标签： 200母细胞筛网

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产品名称：SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞）

SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞）细胞简介：

组织来源脑神经母细胞瘤，转移部位骨髓

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞）培养：

1.取出小鼠后沥干酒精，放入超净台内，固定在泡沫板上。

2.用镊子提起皮肤，用解剖剪剪开皮肤一个横切口，将皮肤向上撕开，然后剪开肌肉等，暴露出腹腔，在左侧找到脾脏，用弯头眼科镊取出脾脏，置于无菌培养皿中。

3.用生理盐水将取出的脾脏清洗多次，并剔除多余无用的组织。

4.将筛网置于平皿中，脾脏置于筛网上，用弯头镊镊住，轻轻在筛网上进行碾磨，同时不停滴加不含血清的培养液冲洗。

5.将碾磨好的细胞悬液吸入至离心管中，离心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。

6.加入10ml培养液，吹打混匀，取样计数。

7.将稀释好的细胞悬液分装于培养瓶中，轻轻摇晃混匀，在培养瓶上。

SH-SY5Y（人神经母细胞瘤细胞）细胞培养的优点：

1.研究的对象是活细胞

在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。

2.研究条件可以人为控制

pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。

3.研究的样本可以达到比较均一性

通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。

4.研究内容便于观察、检测和记录

采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  

记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。

5.研究的范围比较广泛

应用的学科领域较为宽广，如细胞学、免疫学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等； 

适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。

6.研究的费用相对较经济

可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

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华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 中文摘要 研究目的 1. 建立DMBA诱导的胰腺癌模型，并探讨其遗传学特征 2. 探讨BMSCs在胰腺癌发生中的作用 3. 探讨BMSCs在胰腺癌发展中的作用 研究方法 1. 大鼠胰腺DMBA包埋3月后收集瘤样包块，评估组织病理学特征。运用PCR与DNA 测序技术检测病变组织K-ras与p16突变模式。 2. 流式细胞术检测小鼠GFP标记的骨髓间充质干细胞（GFP-BMSCs ）表面标志，在 成骨与成脂培养基中培养诱导GFP-BMSCs 向骨细胞与脂肪细胞分化。建立DMBA 诱导的胰腺癌－GFP-BMSCs尾静脉注射模型，应用GFP免疫组化与免疫荧光激光 共聚焦成像技术分析BMSCs在胰腺癌中的迁移与分布；运用导管上皮标志CK-19、 胰腺星状细胞分子标志α-SMA与Desmin免疫组化与免疫荧光双染激光共聚焦成 + + ＋ ＋ 像技术分析胰腺癌组织中BMSCs 的表型，并统计GFP / CK-19 、GFP /α-SMA 、 ＋ ＋ GFP /Desmin 亚群所占比例。 3. 流式细胞术检测成人骨髓间充质干细胞（HMSCs ）表面标志，在成骨与成脂培养 基中培养诱导HMSCs 向骨细胞与脂肪细胞分化。体外试验：利用HMSCs与胰腺癌 细胞直接或间接共培养计数培养后的肿瘤细胞分析HMSCS对胰腺癌细胞增殖的 影响；应用过氧化氢（H O ）诱导胰腺癌细胞凋亡，Annexin V/PI法流式细胞术 2 2 检测HMSCs对胰腺癌细胞凋亡的影响。利用Transwell小室细胞迁移与侵袭试验分 析HMSCs对胰腺癌细胞迁移与侵袭行为的影响。体内试验：建立胰腺癌裸鼠皮下 移植瘤模型，接种胰腺癌细胞时共注射HMSCs ，动态观察其对肿瘤生长的影响； 建立胰腺癌裸鼠胰腺原位移植瘤模型，接种胰腺癌细胞时共注射HMSCs ，观察脾、 肝脏、肠系膜、腹膜后等部位的转移情况。收集上述模型标本，HE染色分析组织 病理学特征；Masson’s trichrome 染色分析HMSCs对肿瘤间质的影响；Ki-67免疫 11 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 组化分析组织水平的增殖指数；TUNEL染色分析组织水平的凋亡指数。 实验结果 1. 组织病理学诊断如下：反应性增生4例(10.26%)、胰腺上皮内瘤变26 例(66.67%)、 胰腺癌9 例(23.07%) 。K-ras基因在85.71% (30/35) 的样本中扩增及测序成功，所 有样本未见外显子1与外显子2点突变。P16基因在所有样本中扩增及测序成功，其 总体突变率为42.86% (15/35) 。突变方式均为点突变，未见同源性缺失。其中 30.77% (8/26) 胰腺上皮内瘤变和77.78% (7/9)胰腺癌中可检测出p16突变，两者突 变率差异有统计学意义（P

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