同学们收集废旧电池参加收集旧电池活动,4人2天共收集旧电池96节。照这样计算,3人收集360节

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-09-24 06:09 标签： 同学们收集废旧电池

治疗性化合物通常先在体外用可荇性分析研究盲细胞计数由人类观察者可以是在细胞数量的微小变化高度敏感，但不评估功能计算机化的可行性分析，如下所述可鉯客观地评估在结构和功能。

在显微镜手动细胞计数评估细胞活力的敏感装置但费时，因此价格昂贵计算机化的可行性分析是昂贵的設备方面，但可以更快更客观的比手工细胞计数。本报告介绍了使用三个这样的可行性分析两个这些测定是红外线和1是发光。两个红外检测依赖于一个16位的奥德赛成像仪一个红外检测使用的DRAQ5染色的细胞核结合蓝宝石染色为细胞??质和可视化在700 nm的通道。其他红外测定Φ一个胞内western，使用抗细胞骨架蛋白（α-微管蛋白或微管相关蛋白2）和标识它们在800 nm处的通道第三个可行性分析是对ATP一种常用的发光检测，但是我们用四分之一的推荐量以节省成本。这些测量都是线性的并与CE的数量关联LLS镀金，但有所不同的敏感性所有这三个实验规避耗时显微镜和样品的整个井，从而减少抽样误差最后，所有的测定法可以很容易地一天实验结束时内完成从而允许更大数目的要在短嘚时间范围进行了实验。然而它们都依赖于假定的细胞数目保持在比例处理，即有时不能满足特别是对细胞内ATP的假设后的信号强度。此外如果细胞增加或治疗后减少的规模，这可能会影响信号强度而不影响细胞数量。我们的结论是所有的可行性分析包括手动计数，从一些需要注意的地方受苦但计算机化的可行性分析是非常值得的初始投资。使用所有这三个实验同时产生细胞结构和功能的全面视圖

在生物科学中最常见的活力测定包括细胞计数。这是由顶部（最近的）出版物200中出现的医学用关键字或者“ 体外 ”或“文化”对2013年4月29ㄖ和二〇一三年四月三十〇日的分析证实这些出版物中，有23.5％的人使用细胞计数分析包括人工细胞数计数，用图像处理软件自动细胞計数数和台盼蓝排斥的活/死测定法用在这些出版物中的1％。使用MTT（3 - 二苯基溴化）的出版物的数量测定的代谢活力为11％文学的这项调查還显示，使用试验如MTT法与细胞计数分析相结合的出版物的数量仅为3.5％。尽管使用一个可行性分析本身评估与细胞的号码组合细胞功能嘚趋势似乎评估蜂窝我最好的选择ntegrity。由自己的细胞计数是不够的因为剩余的细胞可能不是功能性的或，即使它们是存在于井1,2 ??健康楿反，功能性的措施如ATP可以增加或减少在没有在细胞的数量平行的变化从细胞数的代谢读数的解偶联表明，ATP和MTT法不应该被用来作为唯一嘚可行性分析在本报告中，三可行性分析的调查既细胞结构和代谢功能进行了描述对细胞的完整性更全面的视图，而不是本身的任何┅个检测可以负担得起

我们的两个实验都需要一个红外成像仪测量荧光在700和800 nm的渠道。噪音低的红外线的波长从而导致更高的信号-噪声仳3。我们使用奥德赛成像仪拥有4.5日志的动态范围和位深度为16translatin克至2 16或65,536色调红外线。这可以对比对8位彩色成像这仅仅能提供2 8或256彩色浓淡的烸个波长的光。因此16位成像具有较高的分辨率。应当指出的是原始红外图像通常伪彩色绿色（800纳米）和红色（700纳米），在列报发表的報告奥德赛成像器通常既用于Western印迹和在细胞西部片4-7。在细胞西部片甲醛固定的细胞用第一抗体针对感兴趣的任何蛋白质和依次用红外荧咣二抗标记它们这种技术是已知的磷酸化端点6中特别有用。在我们的内嵌式西部片我??们固定染色细胞骨架蛋白α-微管蛋白或神经え微管相关蛋白2（MAP2）在800 nm的通道。这些蛋白质是足够丰富得到高的信号噪声比。我们还弄脏我们的盘子在700纳米通道的原子核与DRAQ5染色和用于與蓝宝石染色细胞质中无论是细胞骨架蛋白和DRAQ5 +蓝宝石污渍从而反映细胞结构。

第三生存试验测量的代谢功能被称为“细胞滴度格洛”茬此荧光素酶为基础的检测，发光值是成正比的ATP水平 ATP测定法是常用来量化活菌8-12。然而包括在测定中的名称的字“效价”是有些用词不當，因为每个细胞ATP的输出可以作为毒素处理的函数改变因此不总是按比例细胞数8。 ATP水平也受昼夜节律13和细胞分裂14和细胞分化15然而，这裏显示的ATP检测是简单的执行和有用的因为ATP是一个强大的测量代谢可行性16-21，如果不是细胞数本身使用此法，以配合红外内嵌式西部片因此产生的细胞的完整性更全面的了解比任何单纯的一个实验

的协议的原理图如图1所示。

板的细胞在96孔板中以不同的接种密度（ 图2）有關的N2a成神经细胞瘤细胞系，板2.5K5K，10K和每孔15000细胞在3或6孔/组的线性度检查。在大鼠原代皮质神经元板25k，50K100K，每200K良好的细胞在3个或6孔/组的线性度检查如果细胞系或感兴趣的原代细胞看起来很健康在不同的接种密度，板在和周围的最佳细胞密度的细胞类型

注意：在本研究中，的N2a细胞铺板在100μl介质和原代皮质神经元在200μl介质上而设计的低蒸发板有关电池的处理，培养基血清，抗生素和毒素治疗的详细信息请参阅Unnithan 等 。为的N2a CELLS 8和Posimo 等 原发性皮质文化22。

    1. 重复该镀上的第二的96孔板一个板将被测定ATP（ 图2A），而另一个与红外分析（ 图2B）人们可以不使用相同的板的ATP和红外线检测由于细胞必须对细胞内ATP的测量被裂解开。
    2. 请务必板块在红外检测为背景减除至少3个额外的井在最佳接种密度（第2列; 图2B）
  2. 新增无介质或细胞，更廉价无菌水外井排A和H和列1和12。避免依赖于从沿边缘井数据存活率通常是低级这里从媒体蒸发和温喥梯度的影响。这些问题与微孔板通常被称为边缘效应23,24不要让这些井空因为再行B和G和列2和11遭受的边缘效应。
    边缘效应可以通过在环境条件下孵育新鲜接种板在室温下转移到CO 2培养箱中24之前被降低此外，最近的一项研究Carralot介绍了使用一个单一的控制列23酶标板的数学校正方法奧利弗和他的同事使用了一种特别设计的强制空气微量滴定板孵化器，以减少热梯度25如果边缘效应是显著的关注，微孔板稳定性试验箱（ 如：BT＆C股份有限公司）就可以买到创建一个均匀的微环境湿度高温度均匀梯度。
  3. 如果需要比图1所示更多的井因为额外的试剂的稀释戓多个接种密度将被测试，用于减去背景边缘的孔中
  4. 等待通宵附件细胞和测定法，如下所述第二天早晨的
  1. 按照细胞滴度格洛制造商的建议与缓冲基材的重建和孵育时间。
    1. 从100或200微升电镀媒体删除50或150微升媒体分别。略少于50微升将在井中留在后面加入25微升的试剂（衬底加緩冲液）中，以1:2稀释的列2-6（ 图2A）
      注：媒体变卷后留下去除可能的差异跨井稀释或浓缩的ATP检测试剂。小心以确保液体中的所有多通道移液器吸头的水平是等价的。立即加入ATP检测试剂以确保准确性之前测量在整个板中选择孔??中的剩余液体用吸管。如果存在从媒体的蒸發罐差别税率高变异横跨板的表面振动性除去所有旧的介质，并立即加入ATP检测试剂之前的新鲜培养基或磷酸盐缓冲盐水（PBS）中相同的体積加至所有孔中如果从板块蒸发变量的水平受到影响，尝试切换到从Costar公司康宁的低蒸发板在后者的板，在图2所示的60内部的井只遭受从岼均0.995％±0.41介质蒸发过夜还有从而在测定时在媒体音量变化可以忽略不计。
    2. 在列7到11中行B至D，除去足够的媒体留下50微升的后面，如上面詳述的并以1:1的稀释度加入50微升的试剂。
    3. 列7至11行E到G，离开细胞在100μl的媒体和1:1稀释加入100μl试剂再次。公司建议将100μl试剂应该在100μl的媒體进行1:1稀释。
      注：为了为了节省成本也能够在数量和在稀释切断这些建议。然而在此之前，确保它不降低测定的线性度和灵敏度
    4. 一旦一个特定的量和所用试剂的稀释因子被发现是令人满意的，坚持使用他们的所有后续实验该标准令人满意的数据在结果部分说明。
    5. 未使用的试剂配制可再冷冻并使用在稍后的日期以节省成本。据生产商再造试剂可以储存在-20℃下进行21周，活动?3％的损失
  2. 将板在定轨搖床上，持续2分钟或章动振荡机中10分钟如果该板的一部分被检测为不同的测量，并且是不可动摇的搅拌的介质用简单的向上和向下的迻液仅在感兴趣的孔中。然而在此步骤中产生过多的气泡将与LUMI干扰nescent输出。
    1. 加入试剂后10分钟转移60微升的孔内容到白色96孔板中。发光值较高的白酒板块较透明或黑色的板因为它们反射光线向上直到检测。
      注：根据我们的经验细胞生存的低蒸发更好，清晰Costar平板比其他板块这些具体的板不与白色的墙壁出售。其次不透明壁和水清见底板是不是完全清楚的板更贵。如果一个发光液体转移到白色板白色面板可洗涤并重复使用，从而节省了使用新的白色板为每一个实验的成本液体转移因此，从长远来看更便宜的选择
    2. 弹出气泡之前读取该板用针，或者最好是用由塑料移液管灯泡的强制空气读板，上有1秒的积分时间（该公司recomme光度计NDS 0.25-1秒为足够的积分时间）读加入ATP检测试剂後板10-12分钟。定时是用于在不同的板比较关键的因为该发光信号是瞬时与快速衰变速率，如由吉尔伯特和同事26
  3. 从3个或6个孔中各基团和情節中，作为细胞数在散点图的函数的平均发光值（参见图3）从每个相应的数据点首先减去相应的空井的平均本底荧光值（11G井2B - 2G，井11B - - 11D和11E井）会出现在这个初始实验（ 图2A）三个不同的群体对每个电镀密度。 ATP水平可以被线性地与细胞密度在1这些基团的部分或全部继续进行的最高稀释度的试剂仍然给人满意的结果，以节省成本令人满意的结果的标准描述我n个结款。
    注意：对于在本研究中使用的媒体在该测定法的背景值不高，因此能够跳过空白孔然而，制造商Promega公司的报告不同的培养基中发光的差异本研究采用Hyclone公司胎儿克隆三，胎牛血清为嘚N2a细胞和初级皮质培养小牛血清合成版本根据制造商，小牛血清减小发光值但不降低该测定的灵敏度。然而如果这是显著的关注，稀释在PBS代替媒体ATP的测定试剂在测定的时间
    1. 如果细胞出现生长不均匀跨列过夜，尽量在6小时镀层的测定它们但是，记住在检测的正常時间（例如，24治疗后HR）的密度是指线性度必须达到的密度
  1. 电镀后的早上，固定细胞在所述第二板在室温下在通风橱中一定要戴手套，這一步和处置固定液为化学废物的因为甲醛是一种致癌物质。在0.1M磷酸盐缓冲液中添加4％的甲醛和4％蔗糖以1:1稀释的现有介质。媒体还可鉯用PBS冲洗掉固定在全强度的固定剂前无论哪种方法效果很好。
    1. 孵育固定液中20分钟然后取出固定液，并在200微升PBS洗涤3次
  2. 用0.2％的叠氮化钠嘚储存板在PBS中于4℃下，如果测定将不会发生在同一天否则，继续进行试验然后将细胞阻断的解决方案，以尽量减少抗体的非特异性结匼
    1. 淡化鱼血清奥德赛块1:1的PBS，并添加0.3％的Triton X-100作为细胞渗透剂创建足够的封闭液以及小学和中学antiboDY解决方案，使35微升可以很好地吸取到每个嘫而，如果大量的气泡移液过程中的观察使> 50微升每个反应孔，否则气泡到达成从结合的细胞和块的抗体过度的肥皂泡沫将显示为未染銫圆形光斑在阱的中间。尝试如果发生这种情况，调整移液
    2. 孵育在室温下30-60分钟，这封闭溶液
      注：来自相同物种作为第二抗体5％牛血清白蛋白或正??常血清也可以用来作为封闭液保存在鱼血清块的成本。阻塞的解决方案可以影响抗体的性能因此，对于每个抗体的最佳块是最好的经验确定
      注：一些研究者把内嵌式西片上呼风唤雨孵化期间。然而这是没有必要的。
  3. 使第一抗体：1:10,000稀释的抗-α-微管蛋白（小鼠单克隆抗体 表1）和1:2000稀释的抗-MAP2（小鼠单克隆抗体， 表1）这些抗体是针对在这些细胞模型感兴趣的蛋白质，特异性为任何免疫细胞囮学染色必不可少的
    注意：MAP2是一个标记为神经元和适合混合性神经元/神经胶质培养物。这里显示的产后的文化也含有一些胶质细胞（?25％）因为星形胶质细胞首先出现在胚胎第18天，与他们的人数在高峰新生儿早期27,28我们不能星形胶质细胞和神经元ATP和DRAQ5 +蓝宝石检测区分。为叻分别测量神经元和星形胶质细胞同时用MAP2和GFAP染色在800和700 nm的渠道，所描述的Mullett和同事4,29留下了DRAQ5 +蓝宝石。但是如果所有的细胞在培养要进行评估，使用一个泛细胞标记如α-微管蛋白，β-肌动蛋白或GAPDH。
    注：这些稀释已优化的的N2a和初级皮层细胞可能无法推广到每一个模型。因此尝试在至少两个初级抗体稀释液，分别在板的左半部分和一个在右边一半（ 见图2B）或者，尝试在每个3口井3-4稀释一抗例如，在抗体嘚插入片的建议稀释可侧接有两个倍的变化换句话说，如果对于免疫细胞化学的推荐稀释度为1:500也尝试1:250和1:1000的稀释因子。
    1. 抗体稀释1:1奥德赛塊：PBS中加入0.3％的Triton-X。为了节省成本尽量使抗体在被施加到所述单元在步骤3.2.1通过在孵育结束时除去该溶液中的封闭溶液。保持细胞在PBS而這样做，他们一定不能干
    2. 孵育在一抗或者1-2小时，在室温或4℃过夜°C对于弱binding抗体和蛋白质，是不丰富孵育过夜可以帮助提高信号。
      注：至少保留3口井堵塞的背景减法的解决方案在每个二级抗体浓度（井2B-2D和2E水井-2G 图2B）不要这些井承受任何一抗任何责任。他们揭示了由次级忼体的非特异性结合的程度并为信号与噪声的比值计算是有用的。如果存在这样的担忧该第二抗体将导致高水平的非特异性结合的，還包括对照孔中未暴露于初级或次级抗体但收到后洗涤的数目相同。这些井和“二次唯一的”井之间的差值将揭示的非特异性结合引起嘚二次抗体单独的程度在我们对小鼠的N2a细胞测试，信号抗鼠二抗强独显0.557±0.032与抗兔信号单独二抗为0.533±0.041，无二次抗体信号是0.357±0.003与第一和苐二抗体信号为11.867±0.911。我们在小鼠细胞使用抗鼠二抗即使这样也没有观察到高浓度的非特异性结合的。有几个制造商的红外线的第二抗体;峩们建议只买高交吸附的注意，这取决于源次级IgG抗体的浓度可以变化
  4. 以每孔，每10分钟洗涤3次的200微升PBS洗去一抗初级抗体可在0.2％叠氮钠保存于4℃几周和重用，直至碎片的微小斑点变得明显时溶液被保持到光。这只是做以节省成本。如果成本不是问题作出新的抗体，烸次使用
  5. 由1:1,000或1:2,000 1:1奥德赛块稀释第二抗体：PBS 0.3％三吨-X（ 图2B）。加入1:1000稀释的板和1:2,000的上半部分的底部板的一半这些浓度可进一步减少，以节省成夲但承诺此之前检查线性度。
    注意：一定要添加相应的二级抗体溶液的背景减除井（ 图2B 2列）
    1. 如果第二种蛋白将被检测到位DRAQ5 +蓝宝石，标記细胞中的α-微管蛋白或MAP2与700nm的山羊抗小鼠IgG和第二蛋白质与来自一个物种比鼠标等初级抗体在800nm??的信道在800纳米通道具有比700nm的信道背景少，并应保留用于所关注的最关键的蛋白质
    2. 孵育中的二抗1小时，在室温下在抽屉避光保存。
  6. 以每孔每10分钟洗涤3次的200微升PBS冲洗二次抗体。 注：用于在一个1毫米的股票被出售而不是一个5毫米的股票DRAQ5。因此一些此前公布的报告中使用1:4,000或1:2,000稀释DRAQ5 8。
    1. 为了节省成本如果两个板同時被检测，同样DRAQ5 +蓝宝石解决方案可用于在序列中的两个板吹打其关闭所述第一板和将其加入到第二个。如果相同的解决方案将用这种方式被使用两次，使用它们在一天之内摊薄DRAQ5 +蓝宝石解决方案不能被保存在4℃或冷冻以备后用。
    2. 在培养这些解决方案为30分钟在室温下，遠离fROM光如果时间很短，DRAQ5 +蓝宝石解决方案将不被重用在其他板块不同的次级添加这些污渍在步骤3.5的二级抗体溶液孵育1小时。
      注意：不要DRAQ5 +藍宝石解决方案添加到背景减法井（ 图2B 2列）因为这些油井不应该在700 nm的通道被染色。
  7. 用200μlPBS中每孔洗涤平板3次，每次10分钟把0.2％叠氮化钠嘚PBS中最后清洗，如果板是将要染色的其它可见光范围的二级抗体后的红外成像完成
  8. 扫描平板上的奥德赛成像仪。通过扫描板的强度5和169 mm分辨率开始无论是“中等质量”或“低质量”的设置就足够了。该公司没有公布详细的激发/发射过滤器的信息然而，发射滤波器是约20纳米宽都围绕720和820纳米，根据制造商
    注：这是可能的扫描板，同时还湿的调查人员可能希望继续污染其与其他标记然而，该公司建议在其网上协议干板导致较少的富裕以及信号传播。如果您扫描他们两个湿然后干燥到比较数据时，一定要删除所有的PBS从井里因为蒸发后剩下的盐会导致沿边缘高背景荧光
    1. 奥德赛成像仪扫描并通过该板的底部。来自不同制造商的板可要求不同的聚焦偏移因为孔的底部可鉯在其厚度和深度变化的板。尝试扫描在不同的聚焦偏移看看那里的最高信号噪声比和干脆的（最重点）信号达到2.5毫米，3.0毫米3.5毫米，4.0毫米也尝试测量井深从板用尺子底部确认发掘的GS上的奥德赛。请记住在塑料中的井的底部可以添加额外的高度，以直尺测量在本研究中使用的Costar平板要求以焦点为4.0mm的偏移。
    2. 使用该软件的内嵌式西方函数将合适大小的网格将其安置在板的图像和数据导出到Microsoft Excel考察在不同焦點的偏移量相同的井“积分强度”的价值观，以找到最高荧光值焦点偏移产生（在免疫染色井信号对“无主阴性对照”孔）的最高信号與噪声的比值是1，选择以下
    3. 一旦一个焦点偏移后决定，以较小的增量再次扫描例如，如果各路信号是在3.5和4.0毫米试着扫描在3.6，3.73.8，和3.9毫米看看是否有信号强度进一步提高。如果焦点偏移是错误的跨在一个空PL的12列中的信号强度吃了（当所有列应该有平等的信号）将显礻为一个U形曲线，而不是一条直线如果这仍然是用塑料板有问题，尝试玻璃底板
  9. 从在700和800纳米通道的每个对应的数据点;减去积分强度的岼均值中减去背景井（2G孔2B - - 2D或井2E 图2B）。然后对各组油井的平均化积分信号强度绘制的数据作为对细胞密度的散点图（ 见图3）。
    1. 比较第一和苐二抗体和DRAQ5 +蓝宝石的两种不同的稀释度以解决在每一个稀释用于随后的实验结果的两个不同稀释度的结果。如果线性度没有实现尝试掃描以不同的强度。重新扫描与强度3和7而不是5和重新分析数据。如果数据改善在这些强度的1但仍然不能令人满意，重新扫描周围的强喥增量
    2. 要小心，不要分析图像其中软件显示白点在井;这些斑点表示饱和信号输出成像的范围。扫描以较低的强度如果发生这种情况。
    3. 如果线性度没有实现也尝试修复在6小时镀层的细胞，因为它们可能会增长或在不同的列死不均匀过夜也可以尝试不同的接种密度，鈈同的扫描强度试剂的稀释因素，玻璃底船板DRAQ5本身为核心，只有色斑或者比抗α-微管蛋白或抗MAP2不同抗体的进一步优化。

在这些实验Φ的限速因素是红外线染色作为ATP测定法的持续时间相对短暂。用于红外测定法我们预计8 96孔板可染色和扫描在一天之内由交错两批各4板（ 见图1）。这个估计假定固定20分钟洗涤30分钟，阻断2小时初级抗体孵育后洗涤30分钟的30分钟，1小时的第二抗体温育后洗涤30分钟30分钟DRAQ5 +蓝宝石后跟30清洗，以及扫描时间为4片34分钟的分钟另外十五分钟分解成图1为洗涤，以占四个独立板块的交错移液时间进行数据分析，不包括茬此估计如果将并行发生的每一个红外线板的ATP分析测量，12板可用于检测在一天 - 六为红外染色s和六项ATP水平

在回归分析满意的数据（ 图3）嘚标准，所提到的协议部分包括铺板密度和信号强度（2 尾 p≤0.05）有显著相关。改变发光或红外信号的大小也应该成比例地变化细胞数目。理想情况下5K细胞应该有大约一半的发光或10K的细胞的ATP水平，和15K的细胞应该具有较大的约50％的值超过10K的细胞 等等 。这个比例反映了测定嘚灵敏度和距离确定中的R 2值或系数明显 ，R 2只的措施以及如何回归线接近真实的数据点即使数据是线性的，在信号强度的相对的变化可能不按比例的变化细胞数目的大小。这可能发生瓦特母鸡回归线具有高R 2但低的斜率，这表明该测定是不很敏感因此，显著的相关性囷数据的比例的标准都应该被满足。最后围绕最优铺板密度变化的信号强度应落在仪器和测定的动态范围内。动态范围的最大和最小鈳能的值之间的比率奥德赛成像仪拥有4.5日志的动态范围和饱和信号显示为一个明亮的白色来代替通常的红色或绿色的图像，以提醒该结果不再量化研究员在测定过程中本身的动态范围是因为问题，如最大和最小铺板密度对任何给定小区类型更窄如果一个人的指示牌，增加细胞密度对于这些实验的饱和曲线，就会发现该电镀密度高于其没有进一步的差异就可以解决或者是因为他们出范围成像器或因為细胞不拥挤过夜无法生存。类似地如果一个板减少的细胞密度，可以测量的最小的细胞密度低于没有进一步的变化信号该测定的动態范围只包括最小和细胞/孔的可分辨极限之间的接种密度。我们还没有测量到的全动态范围为这些特定的实验因为我们的细胞以外的所報告的密度不生存良好。

优化后我们现在弄脏的N2a小鼠神经母细胞瘤细胞的抗-α-微管蛋白在1:10,000稀释，用抗小鼠IgG在1:2000稀释并用DRAQ5 +蓝宝石溶液在1:20,000和1:2,000，分别我们还使用25微升ATP的测定试剂在50μl介质。在这些条件下的结果示于图3AB和 C和已公布江前E 8。在所有三个测定信号强度以每孔细胞数为顯著相关虽然所有三个实验是高度线性的，他们没有在灵敏度相同例如，每孔5K细胞不具有红外线染色的正好一半的量为每孔10K的细胞與此相反的红外线测定中，ATP测定法是变化的铺板密度更敏感换句话说，发光从10K下跌了大约一半到5K并从5K到每孔2.5K细胞。尽管在ATP检测的最高靈敏度这些发现最好是执行所有三个实验的可行性，以获得细胞健康的一个更广阔的画面

我们现在正处在一个1:2,000稀释，用抗小鼠IgG在1:1,000稀释染色的大鼠原代神经元培养物用抗MAP2并与DRAQ5 +蓝宝石溶液在1:10,000和1:1,000，分别与使用25微升在50μl介质（ 图中的ATP的测定试剂的3DE和F）。在DRAQ5 +蓝宝石检测信号的強度是最少的线性所有三个检测的因为有100K和每孔20万细胞在700 nm的通道之间的差别不大。然而在700 nm处的信号强度很好的比例低于每孔10万细胞的細胞数目，我们总是在每孔10万细胞板培养的神经元呢然而，我们还观察到在DRAQ5 +蓝宝石测定是不敏感的毒素疗法与其他两个试验（见下文）。在对比DRAQ5 +蓝宝石信号强度是更好的比例与接种密度为两个MAP2和ATP测定。应当指出的是ATP检测试剂的体积更大可以以每孔20万细胞改善的结果。换句话说发光输出可以提高到以每孔10万细胞中的值完全相同的200％，因为有更多的试剂但是，我们从来没有在那么高的接种密度为experime板皮质培养NTS我们也已经发现，微管相关蛋白和ATP的水平以在新皮层神经元的铺板密度的20％的变化，从每孔20K的细胞以每孔22 120K细胞敏感然而，其他调查人员应在自己的实验室中测试这些分析而不是使用，因为在组织和细胞处理间实验室变异的最佳条件从我们的实验

为了说明這些测定下列毒素治疗的效用，我们表明与MG132蛋白酶体抑制剂（ 图4）处理后的N2a细胞的剂量-反应曲线。 MG132是在谷胱甘肽前体N-乙酰半胱氨酸的存茬或不存在下应用这些数据也可以在我们最近的出版物上的N-乙酰半胱氨酸30的保护作用找到。分析细胞48小时以下MG132治疗 N-乙酰半胱氨酸转移曲线在右边，这表明更MG132被要求杀死细胞中该保护的化合物的存在下进行在N-乙酰半胱氨酸的存在，对于DRAQ5 +蓝宝石的IC 50值为4.64μMMG132（逻辑50 = 0.67±0.05R 2 = 0.8732，希尔斜率= Fioriti可行性报告4小时的60％的损失与50μMMG132处理后再以MTT法32。最后张和他的同事报告可行性60％的损失在10μMMG132，应用Hoechst染色细胞核33计数这些IC50 值是比峩们高。然而我们开始治疗后对存活48小时测定，与这些以往的研究

根据细胞滴度格洛测定中，ATP水平提出了在低浓度的MG132（ 图4C）的这表奣ATP水平不一定是在处理时按比例细胞滴度。 ATP的数据因为它们表明，N-乙酰半胱氨酸也保护新陈代谢功能时的N2a细胞与MG132处理仍然是有用的这證明在T他移入MG132的IC50 值为与N-乙酰半胱氨酸。对ATP的IC -1.0）需要注意的是，导致升高的ATP的浓度被排除在该分析中包括在分析中所有值降低判定系数囷车辆的存在和9.24微米MG132增加的IC50 值至4.03微米的MG132（逻辑50 = 0.61±0.09，R 2 = 0.7224希尔斜率= -1.4） （逻辑50 =

这三种测定法的第二个例子示于FIGUR原代培养物?5。组织从大鼠大脑皮層和allocortex显微解剖分离，以每孔10万细胞处理过的并联与H 2 O 2。我们测试了这两个脑区会在不同的氧化应激的处理因为它们是差分脆弱的神经變性疾病34-39的假说。一些这些数据已被以前出版的结果在该研究中22进一步讨论。该IC 50值DRAQ5 +蓝宝石分别为22.84微米H 2 O 2在新皮层（逻辑50 +蓝宝石测定是示出這种差异最不敏感这可能反映了一种测定法无法从神经元的神经胶质细胞区分开，不像MAP2如前面提到的，我们的培养物含有一些胶质细胞因为它们是从出生后的脑22采收。出人意料的是在高浓度的H 2 O 2（75微米以上），当所有MAP2 +星形胶质细胞在这些文化都是以H 2 O 2更耐比MAP2 +神经元（未顯示）我们推测，新皮层星形胶质细胞不易受比allocortical星形胶质细胞氧化损伤这个图案可以被反映在DRAQ5 +蓝宝石测定，但不能在ATP测定法因为氧囮性损伤的星形胶质细胞是未代谢可行的。不管是什么原因这些醒目的图案，这些原代培养的数据都说明这里只露出了检测并不总是一致的

最后，为了说明与所有三个测定板内变异我们从图6A-C和6G-I上述剂量响应曲线绘出的第二和第三阱“原始数据点 >。同样为了说明板间變异性，我们的原始数据点的平均值（一式三份孔的平均值）从图6D-F和6J-L 2板绘制在重复孔和整个独立实验的信号强度表现出显著的相关性的各项措施。有一个在整个初级神经元培养独立实验的原始值的一些变化也许是因为我们重新使用旧的抗体和DRAQ5 +蓝宝石解决方案，并重新冻結未使用的ATP检测试剂几次另一个原因是在原代培养的高板间变异可能是文化本身的质量。不同死后时间间隔和组织处理在不同实验天可能有助于变异

所有这三个可行性分析（一）和时间表红外分析（二）图1。示意图显示的是对的N2a细胞中的推荐程序。如果DRAQ5 +蓝宝石的解决方案不会对被染色的不同的二抗其他板可以重复使用它们可以与一个最后的1小时温育的抗小鼠第二抗体溶液进行组合，降低了过程通过┅个步骤


ATP的测定（A），并在该程序段中所述的红外分析（二）图2板格式。虽然96孔板图示这些检测可以适应其它的格式，如384孔板以節省试剂和细胞。


图3线性回归中的N2a小鼠神经母细胞瘤三种可行性分析（A，BC）或原发性产后大鼠大脑皮层神经元（D，EF）。信号强度的烸个检测被绘制为铺板密度的函数插图显示了DRAQ5 +蓝宝石（A，D）α-微管蛋白（B）或微管相关蛋白（E）染色的代表性红外图像。原始强度值列出的每个图像下方注意，原始值单个井可以是从3孔的该实验的平均值和从3-4个独立实验的平均值不同原来的红外图像进行伪彩色红（700納米）或绿色（800纳米）。在一式三份孔进行每个实验重复3次为DRAQ5 +蓝宝石两个的N2a细胞和原代神经元3个为α-微管蛋白，4倍于MAP23为ATP中的N2a细胞，并茬神经元4倍为ATP从一式三份孔的数据的平均值为各3-4实验1的最终值。这些3-4最终值的平均值和SEM显示在曲线图请注意，DRAQ5 +蓝宝石值表现出低标准偏差使扫描电镜杆是不可见的。决心和双尾P值评估的相关性的意义中的R 2系数也说明每项措施数据是在的GraphPad棱镜（5.0版）进行分析。从国际鉮经化学61，重印由Unnith一个等 ：P 356-368由爱思唯尔权限“从神经退行性疾病与N-乙酰半胱氨酸，一个两打高通量模型救援”


图4。保护的N2a细胞免受MG132蝳性 N2A细胞用蛋白酶体抑制剂MG132中的抗氧化剂的N-乙酰半胱氨酸（NAC; 3毫摩尔）的存在或不存在指定浓度。所有这三个可行性分析是进行48小时后紸意上升ATP水平在低浓度的MG132（ 三）。在DRAQ5 +蓝宝石染色（A）o否增加平行[Rα-微管蛋白（B）是明显的 ，该DRAQ5 +蓝宝石和α-微管蛋白污渍的代表红外图像進行伪彩色红色和绿色的D和E分别一式三份井进行每个实验重复4倍的DRAQ5 +蓝宝石，4个α-微管蛋白和3x对ATP。从一式三份孔的数据的平均值为各3-4实驗1的最终值这些3-4最终值的平均值和SEM显示。 * P≤0.05为N-乙酰半胱氨酸与水相比Bonferroni校正以下两个因素方差分析。数据是在的GraphPad棱镜（5.0版）进行分析從神经科学，255重印江等人 ：“N-乙酰半胱氨酸减弱proteotoxicity在热休克蛋白依赖性”，页19-32来自爱思唯尔许可。 舔这里查看大图


图5。新皮层和allocortical文化以过氧化氢 ??的毒性鉴别漏洞 。的内嗅和梨状allocortex和产后主运动和感觉皮层的Microdissections解离并以每孔10万细胞关于天体外 2，细胞用的H 2 O 2所示浓度板汾别测定48小时后。需要注意的是allocortex这些幸存的培养条件比大脑皮层更好在基线具有较高的细胞数量。一式三份井进行每个实验重复4倍的DRAQ5 +蓝寶石3倍的微管相关蛋白，与6X对ATP从一式三份孔的数据的平均值为每个3-6实验最后一个值。这些3-6最终值的平均值和SEM显示 *


图6。板内和板间相關性的MG132和H 2的N2a细胞和皮层神经元O 2的剂量反应曲线 所有个别实验在一式三份孔中运行。从各组中的第二两口井的原始数据绘制成重复1和2的板（A中测量的重复性 和 C的N2a细胞和G，H和 I为皮质）来自两个独立实验（一式三份孔的平均值）同一组的数据被绘制为板1和板2的测量穿过板再現性（D，E和 F为的N2a细胞和JK，L为皮质）决心和双尾P值评估的相关性的意义中的R 2系数也说明每项措施。数据是在的GraphPad棱镜（5.0版）进行分析

我們已经发现，在所有三个活力检测的信号强度是线性的并与铺板密度相关。然而并非所有的试验都是同样敏感的2倍或铺板密度1.5倍的变囮。供的N2a细胞红外线检测比ATP测定法较不敏感，特别是在较低的接种密度虽然红外检测比ATP敏感性较低，在DRAQ5 +蓝宝石分析和α-微管蛋白检测囿较好的一致性因为它们揭示的N-乙酰半胱氨酸的高度保护的影响。有红外信号的剂量 - 响应损失与两种测定和所有三个存活率曲线右移与N-乙酰半胱氨酸这种重叠并非总是观察到的所有种类的N2a细胞的治疗，如在α- ??微管蛋白和ATP检测似乎是如氯化铵的化合物比DRAQ5 +蓝宝石测定（參见图4中Unnithan 等人更敏感8 ）。因此可行性phenotypES并不总是同样由所有三个实验来表示。虽然ATP的检测是更好的比例的N2a细胞比镀α-微管蛋白和DRAQ5 +蓝宝石汾析即信号强度反映细胞数目的假设的数量并没有毒素治疗后总能得到满足。 ATP水平上涨的毒素浓度是没有引起类似的上升信号中的红外線检测这些数据揭示的N2a细胞代偿性代谢变化的响应蛋白酶体抑制，并在他们自己的权利非常有用在U形的ATP剂量 - 反应曲线是的现象称为兴奮效应特性。毒物兴奋效应的定义是有利的生物学反应低强度接触到毒素和其他压力40-42。

对于神经元的DRAQ5 +蓝宝石染色较微管相关蛋白和ATP检测茬高密度电镀不太敏感然而，DRAQ5 +蓝宝石微管相关蛋白和ATP测定法以及按比例CE在原代皮质神经元或低于每孔10万细胞LL数量。我们在每孔10万细胞板的神经元从皮层的神经元不知道复制，因此我们更关心的线性度在100K或更低的接种密度。该DRAQ5 +蓝宝石测定是在低于50μM的H 2 O 2浓度的新皮质和allocortex仳任MAP2或ATP之间的差异不敏感此外，ATP水平并没有因?下跌，极大地2 O 2的待遇在其他两个实验的红外信号，也许再次提示代偿性增加ATP的产量彡个试验中的N2a细胞和初级神经元之间的差异可能反映了细胞的功能可以改变之前大体解剖结构的影响，以及细胞结构包括细胞骨架蛋白，可以影响细胞本身失去了很久以前由吉尔伯特多重活力检测和同事令人信服的最新数据说明了不同的可行性措施，如赫斯特核染色和ATP測量产生于特定的细胞特征只有部分和间接地反映生存能力作为一个整体26的信息。因此我们建议同时而不是执行所有三个实验依靠的玳谢活力尽可能多的出版物做一个分析。有关这些措施的任何一个进一步的信息我们建议统计单个细胞，然后评估细胞骨架蛋白的表达囷ATP水平的细胞数的函数

虽然有其他测定代谢活力，如MTT法ATP的测定法的优点在于它的灵敏度和动态范围。 MTT测定法可以高估存活细胞的数量楿比ATP测量，并显示出的IC 50其是2倍高43。此外小资和他的同事报告说，ATP检测能检测每孔1563细胞的下限而MTT法无法检测到少于2.5万个细胞/孔12。信號噪声比（从井用活细胞与井无细胞信号）仅7 MTT法但230对ATP 44。的发光ATP检测过MTT法的另一个优点是该温育时间要短得多。此外自Promega的MTT法检测成本0.28媄分，每孔而来自同一制造商的电池效价测定格洛费0.09美分每口井在我们推荐的稀释度但是，也有局限性所有代谢测定;代谢活性可以是從生存耦合，特别是在坏死如果这是一个问题，在本报告中的测定可以用乳酸脱氢酶释放的测量相结合以确定膜完整性的丧失。这将鈈涉及任何附加的板如乳酸脱氢酶测量是在细胞外介质中简单地进行。

虽然我们介绍这些测定以替代手工计数在显微镜下后者可以是┅个高度敏感和准确的采样单元序号手段，如果适当地进行事实上，我们预期的Hoechst染色细胞核的计数将是在的N2a细胞数量小的变化比DRAQ5 +蓝宝石檢测更为敏感当所有的试验失败的线性测试，手动计数是必不可少的这方面的一个很好的例子就是我们的原代培养星形胶质细胞模型Φ，我们进行了更繁琐的人工计数45然而，解释细胞计数数据时手动计数的固有偏见必须被铭记就像电脑检测的固有缺陷不能置之不理。一些可行性分析的长处和短处以下因此说明。

首先如果DAPI或Hoechst公司污渍被雇用，皱缩和细胞核浓缩通常指定为凋亡1然而，细胞大小細胞核的缩合位于沿着一个光滑连续。与此相反生命和死亡是相互排斥的，二元现象除非是观察两个截然不同的活的或死亡的细胞群體，似乎最好的计数低于阈值的核直径为细胞凋亡与成像软件如的MetaMorph或ImageJ的而不是用眼睛的所有细胞。当然对于阈值直径的选择是任意的，因为我们不知道在什么时候一个不可逆的凋亡级联反应启动此外，根据定义甚至细胞，活化的胱天蛋白酶3不一定途中死亡和或许应該在固定46的时间计算为还活着我们的红外检测避免这种担忧通过将连接到板，在固定的时间仍然住所有单元格只有已飘然而去的细胞嘟算作死了。这会将细胞分化成两种不同的类别并且避免使用共同的缺陷mplex，像核直径的连续函数

第二，手动计数通常取样整个井的一尛部分这可能导致抽样偏差和，有时高平均数的标准误差。与我们的生活力测定法在整个井被采样为ATP和接近整个井采样与红外检测。这种采样模式增加样本量避免了在哪里井抓拍的照片进行手动计数有时武断的决定。如果照片是采取了很好的中心我们必须牢记，這个区域就是细胞的最冲洗过的发生从而导致毒性的潜在高估。与此相反红外线检测扔一格到96孔板中，只有不包括井的极端角的图像如果需要的话，将孔的角部可以包括通过增加在网格中的圆的直径

三，摄影师和细胞计数都应该在手动计数蒙蔽然而，一旦细胞毒素治疗他们通常认为是相当明显的，甚至到一个未经训练的眼睛形态的变化这使得它更具挑战性，以保持平常心失明不是我们的测萣法的要求。

四人工计数耗时和成本的主要研究者更多的薪水。薪金是进行研究的最高成本之一扫描时间为一平板上的奥德赛仅8分钟長的“中等质量”的设置，可以在“低质量”的设置进一步降低应当指出的是，奥德赛仪是昂贵的甚至当一个人购买了用过的演示版夲，但它是一次性的固定成本另一方面，人们也有投资相对昂贵的落射荧光显微镜进行DAPI-或H的手动细胞计数oechst染细胞核尽管初始成本，奥德赛成像仪是一种多用途的机器也测量西方免疫印迹定量的方式47,48。我们已经适应了使用奥德赛的免疫染色在宏观脑结构如大鼠或小鼠紋状体和端脑皮质量化。这种方法也被用于由他人49奥德赛成像仪对组织成像中的一个弱点是，最高分辨率只有21微米因此，不能指望单個细胞并无意以可视化精细解剖细节。

最后将红外线检测可能不那么敏感的细胞数作为手动计数的微小变化。该IC 50值因此不能被认为昰显示出引发细胞数的精确损失50％的浓度，但只作为引出红外线信号的损失50％的浓度。这个警告可能适用于所有活力检测规避单个细胞計数采用显微镜和样品的整个井一次用这样的测定相关的不精确性可能肥大，萎缩或在外观上其他的变化会影响信号强度的函数。例洳用一些毒素，α-微管蛋白在每个小区中的免疫反应性可升毒性的功能我们已经在非常高的浓度MG132 8的处理的N2a细胞中观察到了这种现象。洳果这是值得关注的其他的细胞骨架的标记蛋白质，如β-肌动蛋白或GAPDH的都可以使用此外，强调的N2a细胞往往会形成双极型工艺8,50,51与改变細胞的大小，每个细胞的荧光输出信号也将各治疗组差异我们建议毒素处理过的细胞可以通过标准的高分辨率显微镜下对免疫细胞如在胞内western使用相同的标记物检查。如果胞浆治疗后变化较大的规模但核不，我们建议您使用不带蓝宝石的污渍DRAQ5只量化核用不同的染料，并與其他细胞骨架或其他丰富的蛋白质未来的研究来克服这些障碍

我们的结论是所有测定的注意事项受苦，提出有关敏感性的担忧线性喥，抽样误差信号与噪声的比例，人类的偏见或主观时间和成本。此外所有的检测依赖于并不总是满足的假设。因此我们建议，臸少两种测定被用于描述治疗对细胞培养的影响1，测量代谢健康和一个依赖于解剖可行性以这种方式，人们可以更加有效地确定治疗囮合物是否同时保护结构和功能

没有一个作家有任何冲突披露。

我们承认Juliann Jaumotte为节省在ATP检测试剂的量的概念对此，我们深表感谢玛丽卡鲁索德布威尔森和成龙花拉和以药剂的Mylan公司为学校提供这些研究的财政支持高超的行政支持。还要感谢的Hunkele可怕的疾病基金会和帕金森氏症囷运动障碍基金会主神经元研究的资金支持

在2013年的时候王传福曾经说过这樣的一句话：“如果家庭消费启动，比亚迪可以分分钟造出特斯拉”看似在吹牛，可这句话随着2018年比亚迪全新一代唐的上市逐渐变成叻现实……

从比亚迪首席设计师艾格的“Dragon Face”家族化设计，到只需4.5秒的百公里加速时间再到全球最成熟的“DM3.0”插电式混合动力总成，以及單月过万的销售量无不说明了比亚迪在新能源汽车领域的霸主地位已经确立。而王传福所说的“家庭消费的启动”在2018年比亚迪新能源汽车的销量上更是体现得淋漓尽致。2018年6月比亚迪元EV上市并快速取得市场认可截至目前累计“欠单”已经超过4.5万辆，“一车难求”却抵挡鈈住消费者对这款超值纯电SUV的热情与此同时，比亚迪的动力电池产能规划快速攀升目前已经超过120GWh。除了原本的深圳和惠州两大动力电池生产基地之外比亚迪又如火如荼地在青海银川、重庆璧山、西安等地区筹建了三大动力电池生产基地，以满足消费者对比亚迪新能源汽车高涨的需求这，就是正快速在新能源汽车市场扛起中国力量大旗的比亚迪！

如果说全新一代唐DM的综合性能已经迈开了追上特斯拉的步伐那么在2018年广州车展上正式开启预售的比亚迪唐EV，则在更加关键的技术方面开始超越在外形上，唐EV与唐DM相比并没有太大区别同样采用“Dragon Face”的家族化设计语言，4,870 mm×1,940 mm×1,720 mm的车身尺寸2,820 mm的轴距也与唐DM如出一辙，属中级SUV的典型身材该车配备了两台永磁同步电机，单台最大功率180 kW最大扭矩330 N·m，0-100 km/h加速时间仅为4.4秒比Model X还快0.5 秒!更为关键的是，唐EV采用了全新622镍钴锰三元动力电池组容量为82.8 kWh，系统能量密度达到了161 Wh/kg综合笁况下百公里能耗仅为17.9 kWh。在其帮助下唐EV的工况续航里程超过了500 km，等速续航里程超600 km

列举了一大堆数字之后，我们为什么说唐EV的推出已经標志着比亚迪在技术方面开始超越特斯拉呢下面，我们就来讲讲唐EV这一系列数字背后的故事……

首先还是要先说说“动力电池组”作為纯电动汽车最最核心的零部件，动力电池技术的提升才是新能源汽车碾压竞争对手的杀手锏唐EV采用的是配方比例为6:2:2的镍钴锰三元电池，也就是通常说的“NCM622”理论最大单体能量密度为260 Wh/kg，相比特斯拉采用的松下21700镍钴铝三元电池的300 Wh/kg略低但成组能量密度却与特斯拉不相上下。举个例子说目前在售的特斯拉model X P100D使用的动力电池组容量为100 kWh，电池组重量特斯拉官方从未公布过而P85的85 kWh动力电池组的重量约900 kg。相比之下唐EV 82.8 kWh动力电池组的重量约为559 kg，比85 kWh的特斯拉的动力电池组轻了超过340 kg

那么问题来了！为什么采用电池单体能量密度300 Wh/kg的特斯拉，却输给了单体能量密度低的镍钴锰三元锂电池呢问题的关键还是在电池单体结构和电池包的成组性能上。特斯拉所采用的“21700电池”其单体采用21 mm×70 mm的圆柱形结构，电池外壳为不锈钢材料而唐EV的动力电池为方形铝制外壳电池单体，单从外壳材料上而言铝制壳体相比钢制壳体在重量上就囿非常强的优势；此外，特斯拉电池包采用的是4,000多颗小容量单体串并联而唐EV动力电池采用的是100多颗大容量单体串联。在成组方面非有效化学成分的壳体占比严重影响了特斯拉电池组的系统能量密度;圆柱形电池单体由于先天的圆弧形外壳结构导致了散热系统管路无法最大媔积包覆，所以电池之间的空隙需要使用大量的绝缘导热材料填充以确保每一颗电池单体的有效散热，于是更增加了非化学活性材料的仳例进一步降低了系统能量密度，而唐EV采用的方形电池单体在结构上避免了这样问题的出现避免了散热不均以及圆柱形难以固定的问題，也不会大幅度增加非化学活动材料的使用比例动力电池包重量大幅低于特斯拉也就在情理之中了。

其次除了电池组成组系统能量密度之外，电机也是衡量纯电动汽车的核心性能指标之一特斯拉的Model S/X均采用的是交流感应电机，其最大的特点是技术相对成熟、性能稳定耐用度方面比比亚迪唐EV采用的永磁同步电机要略好。但它们的缺点也是很明显的最大的问题在于感应电机的体积通常较大，并且很难莋到轻量化也就是说这类电机的转矩密度会明显低于永磁同步电机，并最终影响车重和电耗与此同时，感应电机的内部磁场也是要依靠电流产生的所以会加大对电池电量的损耗，从而影响车辆整体的续航能力相比较而言，永磁同步电机的受欢迎程度就更加明显了原因在于其具有功率密度大、效率高、重量轻等优势。

特斯拉Model X 75D配备两台功率为193 kW交流感应电机相比唐EV的前后两台180 kW永磁同步电机动力参数更強，可所带来的5.2秒百公里加速时间却要比后者的4.4秒慢了0.8秒是近乎五分之一的成绩，差距不可谓不小其中比亚迪自主研发的第三代高功率密度永磁同步电机功不可没，因为其具备重量轻、结构紧凑的特点做到功率密度大幅超越对手的同时，还能有效降低电能的自耗在綜合性能上将永磁同步电机技术优势发挥到了新高度。此外唐EV还将永磁同步电机通常仅为10,000rpm上下的最高转速提升到了15,000rpm，从而获得了180 km/h最高车速几乎与燃油车平起平坐。与此同时这款永磁同步电机的最高效率达到了96%，也明显高于特斯拉Model X的交流感应电机（80-90%）帮助其在获得更悝想动力性能的同时，将整车的电耗降至17.9 kWh的水平而特斯拉Model X 75D和100D分别是18.5 kWh和19.7 kWh，唐EV的节电效果明显

再次，除了电池和电机系统足够强大之外能够让比亚迪唐EV具备与特斯拉相抗衡实力的关键还有整车的轻量化技术，而这也是电动车永远无法回避的话题轻量化车身、电池组成组效率、电控系统集成度等等都是工程师们难以逾越的大山。

目前市场上主流的车身材料，按照同等强度要求下的减重效果排序依次是：钢材-热成型钢-铝合金-镁合金-碳纤维树脂。当然这是不考虑成本前提下的结果。铝镁合金、碳纤维树脂一般价格不菲，只有不计成本嘚超豪华跑车才会染指而价格百万级的特斯拉Model X为了最大限度地降低车重，也采用了全铝合金的车身框架当然也带来了因为材质延展性差而维修成本昂贵的问题。正式出于上述原因之后投放市场的Model 3也就不再采用全铝车身了。相比较而言预售价仅为26万元的唐EV也在发动机艙盖等处采用了铝合金材质，而全车高强度钢运用比例达到63%在综合高安全性和低维护成本的前提下，帮助车身减重100公斤如此来看，车身成本更高的特斯拉Model X应该比唐EV更轻才对可事实上两者的整备质量分别是2,459 kg（100D）和2,295 kg，后者反而轻了160多公斤这就要归功于比亚迪在e平台等电動车核心技术领域的突破了。

由于电池组结构不同造成重量差距前文已经介绍过了这里就不再冗述，重点说一下“e平台”这一技术的朂核心思想就是通过系统集成达到减轻重量、提升效率、降低故障率的目的，比如将电机、控制器、变速器三者合一高度集成，从而大量减少了原本必要的机械结构和链接组件系统重量和体积分别降低了25%和30%。同样思路DC、OBC以及PDU在一起的“配电三合一”，也降低了25%的自重与此同时，比亚迪还用集成的一块PCB板整合了仪表、空调、音响、智能钥匙等几乎所有的低压控制模块这样做的好处在于原本“各自为戰”的低压控制系统被“集中管理”了！之前每套系统都需要有自己的固定机械结构、控制单元和线束，如今用一块PCB实现了所有功能可鉯举个例子，原本车辆的空调和音响系统都有自己的控制芯片、供电系统、信号&电流传输线束等等“集中管理”之后它们都要听从一块PCB板发布指令，系统的复杂程度大幅度降低原本独立存在的供电单元整合成了一套，而大量并行的线束结构也被综合在一起甚至各自独竝的封装壳体也只剩下了一个，于是系统重量下来了、体积下来了、成本下来了甚至故障率都下来了。

最后我们一起来整理一下思路。比亚迪唐EV和特斯拉Model X的尺寸差不多分别为500km和552km的工况续航能力也差不多，而分别为4.4秒和5.2秒的百公里加速时间前者还要更优秀一些。在一個预售最低仅为26万元的前提下唐EV相比百万级的Model X有着更轻的整备质量、更低的电耗表现，这背后的故事还是在于核心技术的突破OK!我们回箌文章开头儿的那句——如果家庭消费启动，比亚迪可以分分钟造出特斯拉这其实真实反映了这两家新能源领军品牌的不同思路。特斯拉是以追求行业最新技术为核心，服务一部分高端消费群体但付出了成本的代价；而比亚迪，则是将“家庭消费”放在了首位技术鈈断突破的目标就是要以“惠及大众”为核心。究竟谁会在市占率方面继续领跑也就不言自明了。

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