单位：上海交通大学附属第六人民医院骨质疏松和骨病专科 骨代谢病和遗传研究室

摘要：目的观察进行性假性类风湿样骨发育不良（progressive pseudorheumatoid dysplasia，PPD）患者的临床特征及影像学表现，并筛查致病基因WISP3的突变类型。方法抽取所有受试对象的静脉血5 mL，抗凝保存于-80℃冰箱，利用常规方法抽提基因组DNA。使用Sanger测序技术对4个家系的先证者致病基因WISP3进行检测，再对其父母亲进行突变位点检测。结果4个家系先证者中均发现WISP3基因纯合突变或复合杂合突变，其中家系1中的突变位点p.Cys209MetfsX21、家系2突变位点p.Tyr116X、家系3突变位点p.Cys114Trp和家系4的突变位点p.Cys223Gly均为首次报道的新发现位点。结论PPD是一种少见的常染色体隐性遗传性疾病，临床特点及典型的影像学表现有助于诊断。首次发现了WISP3基因4个新突变位点，开展WISP3基因检测有助于PPD确诊。

关键词：进行性假性类风湿样骨发育不良；WISP3基因；突变

APPRC)，属于脊柱骨骺发育不良疾病中的一种临床类型。由于PPD的临床表现类似类风湿关节炎，而X线摄片显示骨骺及软骨病变，2015年新版国际骨病研究组织将PPD归属于42种骨、软骨发育不良疾病中第31种“遗传性炎性类风湿样骨关节病”。PPD为常染色体隐性遗传病，是由于Wnt诱导的信号肽通路蛋白3基因(Wnt-inducible signaling pathway protein 3，WISP3)(MIM 208230)突变导致。其特征性表现为脊柱椎体扁平及椎体终板不规则，外周骨关节膨大，继发性骨关节炎，广泛骨质疏松，但无滑膜炎及其他炎性反应等。

主要发生在地中海东岸、中东等地区。该病3岁前常无症状，多于4~8岁发病，随着年龄增长，关节软骨持续性破坏，病情加重。PPD临床表现类似幼年类风湿关节炎、幼年强直性脊柱炎等炎性关节疾病，常被误诊。目前，临床上对于该病诊断主要依靠临床症状和影像学检查，最终确诊必须依靠基因诊断。2007年国内中南大学湘雅二院内分泌团队首次报告WISP3基因突变家系并开展功能研究。2009年上海第六人民医院骨质疏松和骨病专科报道了2个WISP3基因新的突变(G46X和C114Y)。本文将笔者科室最近收集的4例PPD患者家系报告如下，总结PPD患者的临床特征以及X线表现，并检测WISP3基因突变，旨在提高对PPD的认识。

家系1：女性，21岁。父母近亲婚配。11岁起双膝、双髋关节僵硬、疼痛、活动受限，不能跑步。

患者为自然顺产足月，出生时体长，体质量与同龄儿相当。16个月会走路，患者4岁时发现胸廓异常的表现，误诊为佝偻病，曾予钙剂和维生素D治疗。11岁开始出现下肢轻度弯曲畸形，身高较同龄人明显矮小，运动时自觉双膝疼痛，步行不利。无口干，无夜尿增多，无四肢抽搐，无晨僵等。近2年无诱因下自觉双膝疼痛发作加重。13岁初潮，月经正常，未婚未育。患者祖父与外祖母是兄妹。母亲身高158 cm，父亲身高173 cm，均体健。家族中无类似病史。查体：身高：147.5 cm，体质量45 kg。驼背，脊柱轻度侧弯，双膝轻度内翻，双下肢轻度“驼背”形腿。无智力障碍。

家系2：男性，10岁。父母非近亲婚配，父母身高正常。患者为第一胎第一产，出生时身长50 cm，体质量4 200 g，母乳喂养。14个月开始走路，6岁起出现手指关节膨大，伴双膝关节伸直困难。9岁起行走时双髋关节疼痛，10岁起出现活动后双膝关节疼痛，休息后好转。查体：头围55 cm，身高146 cm，双臂展长146 cm，上身长70 cm，下身长76 cm，双手指间关节粗大，双肘关节膨大，伸直及弯曲受限。双下肢4字试验(+)，双膝关节膨大，伸直受限，下蹲困难。

家系3：女性，14岁。父母非近亲婚配，患者为第三胎、第一产。9岁时出现双膝关节膨大、活动受限，不能跑步下蹲。双手未见异常。查体：身高155 cm，体质量44 kg。双手未见异常，双膝关节膨大，双肘粗大、不能伸直。父母双亲体检无关节畸形、身高异常等。

家系4：父母非近亲婚配，父母体健。姐妹俩均发病，姐姐18岁，妹妹15岁，患者均顺产。姐姐5岁出现下蹲困难，之后逐渐出现多处关节疼痛，10岁出现行走困难。妹妹6岁开始下蹲困难，并进行性加重，但未治疗。同时出现双髋、双膝关节逢雨季酸痛，伴活动减少。查体：姐妹二人目前均坐轮椅，无法行走。二人均有脊柱侧弯，其中姐姐双手指关节膨大，四肢关节伸直、外展活动受限。妹妹下肢外8字畸形，走路摇摆，双膝关节膨大，无法行走及下蹲。

生化指标检测：检测血清钙、磷和碱性磷酸酶，肝、肾功能(丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、尿素氮、肌酐等)，甲状旁腺素(parathyroid hormone, PTH)，类风湿因子(rheumatoid factor, RF)等。

影像学检查：检查胸腰椎正侧位片、骨盆X片、双手正侧位片、双膝正侧位片等。

骨密度检测：使用双能X线吸收仪(Lunar Prodigy)测量患者腰椎L1-4以及髋部骨密度。

WISP3基因突变检测：抽取所有受试对象的静脉血5 mL, 抗凝保存于-80 ℃冰箱，利用常规方法抽提基因组DNA。首先对先证者采用Sanger直接测序技术检测WISP3基因突变，PCR扩增WISP3基因5个外显子及其侧翼序列，参考GeneBank(NC_000006), 使用Primer3软件设计WISP3基因5对引物，详见文献报道。然后对4个家系的先证者父母，进行验证，分析样本是否存在WISP3基因突变。

5例患者及其家庭成员的生化检测(血清钙、磷、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、尿素氮、肌酐、PTH、RF等)均正常。

家系1先证者X线表现：胸腰椎椎体扁平，椎体前缘鱼嘴样改变，双髋臼轻度变形(图 2)。家系2先证者X线表现：双侧髋臼骨骺发育不良继发退变，部分椎体变形(图 3)。家系3先证者X线表现：胸腰椎椎体扁平，椎体前缘鱼嘴样改变；双肘关节膨大、关节间隙变窄；双膝关节膨大(图 4)。家系4先证者姐姐：胸腰椎椎体扁平，椎体前缘鱼嘴样改变，双膝关节骨质疏松伴关节间隙狭窄，右髋关节半脱位(图 5)。家系4先证者妹妹胸腰椎椎体扁平，椎体前缘鱼嘴样改变，双膝关节骨质疏松伴关节间隙狭窄，双髋关节股骨头膨大，关节间隙狭窄，关节面毛糙(图 6)。

家系1先证者：WISP3基因外显子5发生重复插入碱基A(c.624dupA)，造成纯合插入突变位点(p.Cys209MetfsX21)，其为一个新的突变位点。这个突变使编码半胱氨酸的密码子变成编码甲硫氨酸的密码子，导致氨基酸编码错误，且由于移码突变，最终导致氨基酸编码终止在p.230位置。经过Mutation g/cm2(Z值-1.4)，但股骨颈和全髋部无法检测；先证者妹妹骨密度：L1-4 1.383 g/cm2(Z值+1.3)，股骨颈和全髋部无法检测。

家系3先证者：WISP3基因发生复合杂合突变。外显子3发生错义突变(c.342T＞G)(p.Cys114Trp)，导致编码半胱氨酸密码变成编码色氨酸；外显子5发生错义突变(c.667T＞C)(p.Cys223Arg)，导致编码半胱氨酸密码变成编码精氨酸。其中突变位点p.Cys114Trp为新发现位点。经过Mutation Taster验证该位点属于致病位点(图 9)。同时，在该先证者父亲发现WISP3基因外显子3存在杂合错义突变位点(p.Cys114Trp)，该先证者母亲发现WISP3基因外显子5存在杂合错义突变位点(p.Cys223Arg)。家系2先证者：WISP3基因发生复合杂合突变。外显子3发生错义突变(c.131G＞A)(p.Arg44His)，导致编码精氨酸密码变成编码组氨酸；外显子4发生无义突变(c.348C＞A)(p.Tyr116X)，导致编码酪氨酸密码成为终止密码，导致肽链合成提前终止；内含子4靠近4号外显子处杂合突变，导致剪切突变(c.589+2T＞C)，其中突变位点p.Tyr116X为新发现位点。经过Mutation Taster和PolyPhen-2验证c.131G＞A和c.348C＞A位点均属于致病位点。同时，在该先证者父亲发现WISP3基因外显子3发生错义突变(p.Arg44His)，外显子4发生无义突变(p.Tyr116X)；该先证者母亲发现WISP3基因内含子4靠近4号外显子处发生剪切突变(c.589+2T＞C)。根据该疾病的遗传方式和临床表现，父亲未发病，考虑来自母亲的另一突变位点c.589+2T＞C也是致病位点。先证者2条染色体携带了3个突变位点，导致发病(图

家系4：先证者(姐姐)和先证者妹妹均发生WISP3基因复合杂合突变。在外显子5处发生错义突变(c.667T＞G)(p.Cys223Gly)，导致编码半胱氨酸密码变成甘氨酸；在内含子4靠近外显子4处发生剪切位点突变(c.589+2T＞C)，其中突变位点p.Cys223Gly为新发位点(图 10)。同时，在该先证者父亲发现WISP3基因外显子5处发生错义突变(c.667T＞G)，该先证者母亲发现WISP3基因在内含子4靠近外显子4处发生剪切位点突变(c.589+2T＞C)。

PPD为幼年起病，以双手近端指间关节肿胀为突出表现，逐渐出现外周大小关节进行性受累，三分之一患者伴有脊柱异常出现短躯干畸形。外周大小关节均可受累，依次累及双手小关节、髋、膝、踝、腕、肩等，早发骨关节炎改变是致残的主要原因。影像学特点均表现为普遍性扁平椎并椎体终板不规则、骨骺增大、继发性退行性变和关节周围骨质疏松。本研究报道的4个家系患者均表现为随着年龄增长出现的骨痛和关节畸形，同时伴有短躯干脊柱畸形；影像学表现为多个关节受累、关节间隙变窄，脊柱椎体扁平、椎体前缘鱼嘴样改变。而实验室生化检测均无异常表现，分子遗传学检查结果与临床诊断一致。

PPD患者在3岁前常无症状，症状和体征多于3~8岁时出现，因此早期鉴别诊断和确诊困难。由于PPD的临床症状及X线表现与其他骨代谢疾病有类似之处，临床上需要与以下疾病鉴别：(1)幼年型特发性关节炎：该病表现为生长发育迟缓、身高矮小，伴关节疼痛、活动受限。但该病无脊柱骨骺发育不良，多为慢性、对称性多滑膜关节炎，同时伴有关节外表现，虹膜睫状体炎、贫血、外周白细胞和血小板增多，淋巴结肿大等。实验室检查发现血沉、C反应蛋白、类风湿因子、抗核抗体等增高。(2)黏多糖症：该病患者出生时表型正常，多在婴幼儿时期发病。临床上表现为膝关节外翻、关节疼痛，关节畸形、僵硬，脊柱后凸，爪状手，面容丑陋等。骨骼X线检查：脊柱类似PPD病的X表现，胸腰椎椎体扁平，椎体前缘鱼嘴样改变；肋骨脊柱端细小、胸骨端变宽，有飘带样变化等。实验室可发现尿液黏多糖定量阳性、酶活性测定可明确分型。在临床上亦可以通过相关基因分析明确诊断。

含有38个保守的半胱氨酸，具有广泛的生物学特性，在细胞的生长、分化、黏附和运动、发育和分化，血管生成、伤口修复、炎性作用以及肿瘤生长等多种生物学过程中起重要作用。目前，全球约有57个WISP3基因突变位点被报道，其中14个来自我国报道。突变类型包括外显子缺失、移码突变、无义突变和错义突变等。本次研究报道了4个PPD家系，先证者均有WISP3基因突变。本研究首次在4个先证者中发现WISP3基因的4个新的突变位点：家系1突变位点p.Cys209MetfsX21、家系2突变位点p.Tyr116X、家系3突变位点p.Cys114Trp和家系4的突变位点p.Cys223Gly，并且经过Mutation Taster验证新突变位点均为致病位点。本组病例中，仅1个家系为近亲结婚、为纯合突变，其他家系先证者均为复合杂合突变。本病为隐性遗传病，在临床上对于非近亲婚配后代也需注意其可能是遗传基因突变。

1)相互作用。当WISP3基因突变会增加IGF1的敏感性，从而使关节软骨细胞表型发生改变，导致PPD患者软骨细胞凋亡。之后研究证实WISP3能够诱导IGF1以及软骨细胞的分化表达，例如通过活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)。ROS是具有多种细胞功能的信使因子，对细胞增生、分化、凋亡和迁移等都具有非常重要意义。因此，猜测PPD是由于WISP3基因的突变导致了关节软骨的功能丢失和骨基质矿化异常，这些研究认为WISP3基因影响了细胞内ROS的积累，干扰了出生后软骨细胞的稳定性，使未成熟的软骨细胞处于高增生状态，使关节软骨提前退化而导致全身关节畸形、活动受限。还有研究发现，WISP3过表达能抑制骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)。Nakamura等通过克隆斑马鱼该基因的同源蛋白发现表达WISP3基因的蛋白通过结合BMP配体抑制了BMP信号通路，和Wnt低密度脂蛋白受体相关蛋白信号通路, 因此推断BMP和Wnt信号通路功能失调是PPD患者软骨发育异常的的原因之一。目前虽然证实WISP3基因与BMP信号通路和Wnt信号通路异常，以及IGF1相关，但关于WISP3基因的功能研究还未明确，本课题组拟进一步开展相关工作。从目前对PPD疾病的认识看，该病除累及骨关节和脊柱之外，无其他重要脏器的受累。对PPD尚无有效的治疗药物，在疾病早期，可使用非甾体抗炎药使患者疼痛减轻，使用硫酸氨糖等软骨保护剂和康复锻炼对于维持关节功能极为重要。在疾病晚期，对于并发椎管狭窄和脊柱后凸的PPD患者可考虑内固定脊柱融合手术；对于髋、膝关节等外周关节严重受累的患者，进行骨切除和关节成形、置换术等外科治疗，可以在一定程度上改善患者的生活质量。

      你好,根据你的描述考虑为类风湿性关节炎，类风湿性关节炎主要表现为晨僵,疼痛和关节肿,时间久了以后没有治疗会引起关节变形很，所以一定要到医院就诊行拍片,查类风湿因子,血沉等检查,积极治疗,口服非甾体类抗炎药药物可以好的缓解症状,早期诊断和早期治疗是极为重要的,现在来说还不能治愈,但积极治疗可以控制病情发展