原代细胞培养出现了黑点点黑点是什么？污染了吗？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-07-27 10:05 标签： 细胞培养污染
为何细胞培养基中会出现黑点-技术文章-上海科兴商贸有限公司
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为何细胞培养基中会出现黑点
在培养实验中，一旦您在培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;(2)血清质量不好，反复冻融的结果;(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;(4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;(5)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。在培养基喜爱的环境中培养，就不会易出错啦。如果您还有什么不太理解或者有更多想要咨询的问题，您都可以直接来电的，我们会安排技术人员为您*时间做出分析解答。
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细胞培养的12个常见问题、可能原因及解决方法
1. 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?
建议血清应保存在-2O℃。若一次无法用完一瓶，无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。
将血清从冷冻箱取出后，置于2～8℃冰箱使之缓慢融解，一般是融解过夜。
2. 血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理?
沉淀主要成分是纤维蛋白和脂蛋白，不会影响血清品质。
首先让其沉淀在瓶子底部，中上层无沉淀血清直接转出使用，下层血清装到50ml无菌离心管，400g，离心3分钟即可除去 (一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。
3. 实验室如何选择适合的血清?
稀有的澳洲血清培养娇贵细胞(小鼠ES、原代细胞分离培养)，南美血清或国产胎牛血清用于癌细胞、常规细胞系培养(用量最大)，新生牛血清用于病毒包装(构建稳转细胞株)。
4. 微生物培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗?
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。
5. 有必要做热灭活吗?
实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
若非必须，可以不需要做热处理这一步。不但节省时间，更确保血清的质量!
6. 细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察微生物培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，微生物培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸;
(2)血清质量不好，反复冻融的结果;
(3)配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长;
(4)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
7. EDTA在细胞消化过程中起什么作用?
EDTA是一种螯合剂，它可以螯合Ca2+ 或Mg2+，而细胞表面很多和培养皿或培养瓶结合的蛋白都是带有Ca2+ 或Mg2+的，把这些离子螯合后，可以加速细胞和培养皿的脱离，促进消化。上皮类细胞的连接存在“桥粒”结构，是细胞间最“牢固”的连接，但桥粒的形成依赖于钙离子的存在。在胰酶消化细胞时，加入EDTA，可以破坏细胞的桥粒结构，使细胞能够分散成单个细胞。通俗地说，就是破坏细胞间的粘连。
8. 如何选用特殊细胞系培养基?
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。首选DMEM做贴壁细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养。另外还可以参考ATCC网站的推荐信息。
9. 怎样让细胞适应新的条件?
从原条件逐渐过度：1/4、1/2、3/4，最后是完全新培养基。
10. 为何微生物培养基保存于4℃，颜色会偏暗红色?
1.培养基内之CO2会逐渐溢出，造成微生物培养基越来越偏碱性。颜色也会随碱性增加而更偏暗红。
2.培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。需调整pH值至~7.2.
11. 细胞冻存管应如何解冻?
37℃，1~2分钟内全部融解。
冷冻管建议放在液氮液面上面，由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全(戴护目镜)，预防冷冻管之爆裂。
12.& 培养细胞不贴壁？
可能原因：
(1)胰蛋白酶消化过度
(2)支原体污染
(3)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当
(4)细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性)
(5)接种细胞起始浓度太低或太高
解决办法：
(1)缩短消化时间或降低胰蛋白酶浓度
(2)如发现支原体污染，及时丢弃培养物。
(3)重新配置消化液或培养液
(4)复苏新的保种细胞
(5)调节最佳接种细胞浓度
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&乳腺癌细胞培养McF-7，细胞内很多小黑点，细胞外无
乳腺癌细胞培养McF-7，细胞内很多小黑点，细胞外无
作者 Luna-king
如题，细胞很黑，很多小黑点，1640培养，10%血清，1%双抗，感觉对药物敏感性下降，但是生长速度仍然很快，形态也正常
我们实验室以前养的也是，但是应该不是污染，现在细胞丢失了，你是哪里的？方便给我吗？需要用钱的地方我出，
细胞内的话，没问题的，要是细胞外有小黑点可能就是黑胶虫污染
就没人知道吗
求帮忙，急
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