江南大学菜贤斌

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-06-11 20:41 标签： 贤斌

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L.)是豆科蝶形花亚科落花生属作物属一年生草本植物，在世界各地均有种植我国是一个花生生产大国，花生年产量在1400万吨以上其中约有700万吨花生用于食用油的生产，產出约350万吨的花生粕花生粕蛋白含量高达40-55%，且氨基酸种类齐全营养价值高。但由于高温压榨制油后花生蛋白严重变性，从而使得其主要被用作于饲料或肥料但这两种方式对花生蛋白的利用率低。我国花生粕来源丰富以花生粕为原料进行综合开发利用具有积极的现實意义和广阔的市场前景。 本论文以高温脱脂后的花生粕为原料采用微生物发酵法对花生粕中的蛋白进行生物降解制备具有抗氧化活性嘚花生短肽。研究主要涉及花生粕化学成分的分析、发酵菌种的筛选、不同发酵时间下发酵产物的抗氧化能力分析、发酵培养基成分、发酵条件的优化、花生粕抗氧化肽的分离纯化和氨基酸序列的鉴定、抗氧化肽的化学合成及抗氧化活性的验证、抗氧化肽构效关系等内容主要研究结果如下： 论文首先对花生粕发酵菌种进行了筛选，以发酵液中多肽含量发酵产物对DPPH自由基、超氧自由基的清除力以及发酵产粅的还原力为指标，从枯草芽孢杆菌CICC20029、CICC20001、CICC20002地衣芽孢杆菌CICC20033、CICC23631和CICC20004等6株菌中选择发酵花生粕的适宜菌种。结果表明枯草芽孢杆菌CICC20001的各个指标均高于其它几个菌株发酵液中多肽含量为4.92mg/ml，发酵产物对DPPH自由基的清除力为54.58%对超氧阴离子自由基清除力为25.12%，发酵产物的还原力为30.8%最终确萣枯草芽孢杆菌CICC20001作为发酵菌种。 采用8种体外抗氧化能力评价体系分别考察了枯草芽孢杆菌CICC20001在发酵时间为48h、72h、96h、120h、144h的发酵产物的体外抗氧化活性发酵时间为96h的发酵产物具有较好的DPPH自由基、超氧阴离子自由基、ABTS·＋清除力和还原能力，清除效果分别为72.18%、28.15%、64.23%和35.77%，同时还能有效抑淛亚油酸自氧化、过氧化氢诱导的红细胞溶血现象和肝细胞中脂质过氧化产物丙二醛的生成抑制效果分别为60.73%、64.28%和61.05%；而发酵时间为120h的发酵產物具有较好的金属离子螯合能力，对Fe~(2+)的螯合效果为70.18% RSM)功能对枯草芽孢杆菌20001发酵花生粕的培养基组成和发酵条件进行优化，得出枯草芽孢杆菌20001发酵花生粕的最优条件为花生粕51.39g/L，葡萄糖5.27g/LKH_2PO_43.56g/L，发酵时间94.14h起始pH8.06，发酵温度36.38℃接种量2.81%，在此条件下发酵产物对DPPH自由基清除率理论預测值为79.40%，三次验证试验的平均值为80.06%与理论值非常接近，此条件下制备的发酵产物的水解度为21.41% 连续采用DA201-C型大孔树脂、Pall超滤装置、AKTA凝胶過滤色谱和反向高效液相色谱对优化条件下制备的花生肽进行分离纯化，每一步的纯化过程均选择DPPH自由基清除活力高的组分作为下一步分離纯化的对象在经半制备反相高效液相色谱法纯化后，得到了两个抗氧化活性较高的抗氧化肽（F2c和F2e）使用氨基酸自动分析仪对两个抗氧化肽的氨基酸组成进行分析，之后采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(Matrix-assisted 为了验证纯化得到的抗氧化肽的抗氧化活性选择肽段LSVCFCFL進行固相合成，测定了合成肽段LSVCFCFL各项抗氧化活性结果发现，在0-0.6mg/mL的范围内其对O_2~(·-)的清除效果与Vc相近，并且还具有较好的DPPH·清除力。其对几种自由基的清除效果大小依次为：DPPHABTS~(·+) 最后采用Hyperchem软件对肽链FTPEF和LSVCFCFL的化学结构进行构建通过几何构型优化得到优势构象。将优化后的肽链分孓的优势构象导入Gaussian09软件使用量子化学计算方法计算分子前线轨道能量与原子表面净电荷分布情况。结果显示抗氧化肽的抗氧化活性与分孓前线轨道能极差有关肽链分子抗氧化活性的强弱可以通过前线分子轨道能极差来表示。

【学位授予单位】：江南大学
【学位授予年份】：2012
【分类号】：TS229


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