ECL可乐加洗衣液发光液求助

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-05-07 20:23 标签： 可乐加洗衣液发光
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【原创】ECL发光液使用中常见的六大问题及解决
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这个帖子发布于2年零358天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
ECL发光液越贵越好吗？条带很浓（浅）怎么办？保质期多久使用效果最好？为什么避光保存？等一系列问题一一为您作答。
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Western Blot化学发光(ECL)淬灭的原因？做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生，经常有朋友反映，加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光，可亮光很快就消逝了，压完片后，条带却很弱，甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么？要解释这种情况发生的原因，必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化，产生荧光，这个过程被发光增强剂加强，增强剂在HRP-鲁米诺-H2O2体 系中扮演着核心角色，决定着ECL化学发光的发展。理想的发光增强剂是：1.发光灵敏，目前一般的发光增强剂都可以将发光灵敏度提高1000倍至 100000倍以上，可以检测pmol甚至fmol级别的HRP，发光的灵敏度实际上已不是问题。2.发光稳定，这是目前研究的重点之一，发光不稳定的增 强剂，容易在一些情况下发生“淬灭”，即快速消耗发光试剂，在几秒钟内发强光，又在几秒钟内迅速消逝，不容易被检测的现象。3.本底或背景低，这是发展的 方向之一，由于化学发光反应对增高本底的因素很敏感，因此，化学发光分析欲得到准确可靠的结果，就必须确保试剂的特异性，在无HRP或很少HRP的情况 下，不发光或很少发光。所 以，Western
Blot“淬灭”的原因主要在两方面：含HRP的抗体和发光试剂。由于长期应用某种发光试剂，人们多注意了抗体，不知道发光试剂其实也会对实验结果造成重 大影响。对抗体方面来说，可以采用适当降低抗体的浓度，发光实验时快速操作来解决“淬灭”的问题；对发光试剂来说，可以选用发光稳定的发光试剂来解决“淬 灭”的问题。
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自己配制的AB液体，2，3个月避光保存实验使用效果会下降，最好1月内用完。（实战经验啊）
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这个效果下降是不是因为过氧化氢分解了啊？
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关于丁香园ECL化学发光底物配方
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
有一个配方：
Limnol储备液0.01mol/L :1.772g鲁米诺用0.1mol/L,的氢氧化钠溶液溶解，定容至1L
过硫酸钠贮备液0.1mol/L(或者用H2O2)
直接将两者加到膜上就可以了，注意二抗用HRP标记！
给你另外一个配方，
1.0ml EDTA (1.0&10－２M）
2.0ml Eosin(1.0&10－３M）
1.0ml H２O２(7.5&10－３M) 　　用三蒸水稀释到25ml
每管加入300μl底物溶液，置37℃保温20min。加入300μl 5.0&10－４M luminol。
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以上网友发言只代表其个人观点，不代表新浪网的观点或立场。Ecl发光过程方法_百度文库
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Ecl发光过程方法
&&Ecl发光实验的具体过程方法,注意事项
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