SDS -酚-氯仿法提取动物基因组DNA的抽提液怎么配制,查资料只有浓度,没有体积配比,
SDS -酚-氯仿法提取动物基因组DNA的抽提液怎么配制,查资料只有浓度,没有体积配比,所查资料：0.1mol/L EDTA,10mmol/L Tris-HCl,20ug/ml 胰RNA酶,0.5% SDS,实验过程中需加抽提液600ul,请问各自的体积怎么算,这几个组分能混合么,还是加的时候得分开加,如果混合的话能存放多久,还是需要先用现配,另外 酚应该是什么酚,是平衡酚,还是饱和酚
您好!① 抽提液应该包括TE（0.1mol/L EDTA,10mmol/L Tris-HCl,pH8.0）和0.5% SDS.另外应该还有蛋白酶吧,否则无法裂解细胞.胰RNA酶可以在裂解异丙醇沉淀后再加.② 这几个都可以配成配成母液,用之前再进行混匀,具体母液浓度一般0.5M EDTA（pH8.0）,1M Tris-HCl（pH8.0）,10%SDS.RNA酶10mg/ml.其中EDTA、Tris 4℃保存,SDS室温保存,酶类都是-20℃分装冻存.③ 平衡酚就是饱和酚.
百度教育团队【海纳百川团】为您解答. 感谢您的采纳 O(∩_∩)O .如有疑问,欢迎追问. 再问： 这个抽提液每次用只用几ml就够了，能多混匀一些待用么，如果混匀的话能在多少度下放多久，还有就是请您解答一下各组分的体积加多少合适，谢谢 再答： 除了酶，其他可以多混匀一些，室温放置就行。 您根据母液浓度与实际使用浓度计算一下加入体积就行，这个您应该掌握，特别是刚开始做实验的时候。再问： 使用浓度是根据使用的抽提液体积算的，对么，即600ul抽提液中EDTA的浓度为0.1mol/L,，浓度换算时，EDTA的原浓度为0.5mol/L,体积是600ul，对么 再答： 600ul抽提液中EDTA的浓度为0.1mol/L，那么只需要120ul 0.5MEDTA加水成600ul。再问： 这个600ul应是0.5mol/L EDTA、10mmol/L Tris-Hcl，0.5% SDS的总体积吧，我算了一下0.5M 的EDTA需要120ul；10mM Tris-HCl 60ul, 0.5%SDS 30ul,其余补水至600ul，这样对么 另外我的胰RNA酶是固体的，需用Tris-Hcl、Nacl 配成20ug/ml的浓度，那20ug/ml胰RNA酶用时需要加多少体积，具体在哪一步加合适，我没有用到异丙醇， EDTA、 Tris-HCl、SDS如果用灭菌水配的话，配完以后还用灭菌么；问题肤浅，多谢帮助！ 再答： 算的对。 RNA酶最后加都行。 EDTA、 Tris-HCl可以灭菌，不灭4℃放着半年也没问题。SDS不需要。
与《SDS -酚-氯仿法提取动物基因组DNA的抽提液怎么配制,查资料只有浓度,没有体积配比,》相关的作业问题
酚是强烈的蛋白质变性剂,能有效使蛋白质变性而除去,氯仿有强烈的脂溶性,去除脂类杂质,本身酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的主要作用是抽提蛋白质刚期末考完居然有人问……要再过一星期我就回答不出来了5555
（1）试剂有问题,导致样品里没有DNA.（2）电泳时间过长,或者是电泳方向跑反,导致你的胶里没有DNA.（3）胶里没有加荧光染料（如EB、SyBR Gold等）,这样即使胶里有DNA也无法显色.（4）扫胶仪成像的问题.
事先有测过浓度吗?浓度太低,上样量不够就导致看不见带了
提取过程中操作不当造成基因断裂,或有其他干扰性DNA成分,操作时的污染造成
明显临时加的,CTAB一般都是大瓶配好的,因为用量大,如果预先加巯基乙醇,不都被空气氧化失效了么.
1 首先你的上样量太大,可能早晨有些拖尾现象；2 点样孔有东西,可能是有蛋白质污染,可以用酚氯仿抽提纯化看看还有没有；3 右起第二个样品,可能是RNA没有除干净,有RNA污染,可以用RNase处理一下；4 最左边一个样,DNA明显发生部分降解,有拖带.
CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除
1、苯酚-氯仿是除蛋白的,所以要充分震荡混匀使蛋白变性,但又不能太剧烈而打断DNA；2、离心后要避免再次吸入有机相的苯酚-氯仿,尽量只取上清.
苯酚是很强的蛋白变性剂,PCR酶也是蛋白,会因此而变性.另外加氯仿的作用就是去除可能在抽提的的DNA中残存的苯酚.
线粒体DNA包含在核基因组中,核基因组很大,一般都超几百兆bp,线粒体基因组一般只有1500bp左右. 再问： 那继续做PCR，能P出东西吗，用酚氯仿法能行吗 再答： 你是不是要扩线粒体的一段序列？只要提取的DNA较为完整，PCR体系合适，都可以扩出来。酚氯仿在提取基因组DNA中几种方法中都会用到。如果你用试剂盒直接提
恩 加液氮 磨完之后收集粉末 然后就当那是一堆细胞 该怎么提DNA RNA还是怎么提 再问： 液氮研磨后，继续研磨可以裂解细胞，得到细胞碎片吗 再答： 不可以裂解细胞 液氮的作用不是裂解细胞 只是帮助你把组织磨成粉末而已再问： 那得到细胞之后进一步如何使它裂解呢？还是只能用研磨法 再答： 提RNA就加TRIZOL啊 提
不知道你所说的传统方法是指什么.微生物与土壤混杂在一起,杂质很多,DNA就那么点,确实很容易提取失败.建议在破碎细胞前先将土壤悬液充分摇匀,让微生物尽可能多的进入到悬液中,然后充分过滤,将土壤中较大的杂质过滤掉.由于土壤中DNA量相对较少,所以细胞破碎步骤也很重要,本来就那么点DNA,如果细胞破碎不完全,又会损失掉一部
先说下吸光度和比值的意义.A280nm 是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8,纯RNA为2.0.如果比值低,表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染,需要纯化样品.比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液；A230nm 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波
正常现象,这是由于在氯仿异戊醇(或苯酚)抽提过程中植物色素等杂质没有完全抽提干净,可以由以下几个措施避免：一、用专用的植物DNA提取试剂盒,杂质会比较少一点；二、尽量使用幼嫩的植物组织提取,减少样品中色素含量；三、用氯仿异戊醇多抽提几次,将色素蛋白多糖等杂质萃取干净；四、加乙醇冷冻沉淀后不要离心,用枪头挑出其中的絮状D
水相与氯仿之间有类似白色的膜,那说明上次抽提的还不是很干净,里面有蛋白之类的杂质. 1、你可以再抽提一次,杂质肯定会减少；2、吸样的时候小心点,不要全吸了,动作轻柔点,不要猛吸,否则杂质也会没吸的.如果是叶片的话,用液氮冷冻,转速、时间每个仪器都会有些不同,我用的Thmorgan CK1000组织研磨仪是5mm钢珠,1
没错的,博凌科为的这个产品可以实现同时提取,我们用过.这款试剂盒设计用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA和Protein.独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶,然后裂解混合物DNA/RNA/Protein同时通过一个基因组DNA吸附柱,基因组DNA被吸附而RNA/Pro
我用过CTAB法提取植物叶片DNA,会得到叶片中所有的DNA,总DNA里当然包括叶绿体和线粒体DNA,使用这种模板可以进行叶绿体和线粒体基因组上的扩增,我以前做过TRNL_F这个基因的扩增,用的就是CTAB法提取的植物叶片DNA,不过在做扩增之前建议对模板进行纯化,否则有可能扩不出来哦
2.0到2.1都是正常的数值.也有说法说生物越高等,这个比值也相应会大一些,再大那就是有RNA降解了,导致A260升高.你可以看看《RNA分离与鉴定试验指南——RNA研究方法》.这本书对于RNA质量评价有比较详细的叙述,紫外吸收是其中的第二部分.
RNase free 的DNA酶消化；另外现在有现成的kit中有DNA酶柱上消化.简便、快速测定细胞裂解液中DNA含量的荧光分析--《生物化学与生物物理进展》1986年05期
简便、快速测定细胞裂解液中DNA含量的荧光分析
【摘要】：正 生物组织中DNA的定量测定方法,均需进行样品的处理,步骤烦琐,费时,又影响灵敏度和重现性。Ananda等利用荧光探针——菲啶溴红检测生物样品中核酸的含量,虽然简化了样品的处理过程但仍不能直接测定细胞匀浆中DNA的含量。Rassel和Williamson等报道了4,6-二脒基-2苯吲哚(DAPI)荧光试剂能与DNA特异性结合成荧光复合物。Labarca等利用反苯并咪唑荧光试剂直接检测生物组织粗匀浆液中DNA含量,我们实验室在此基础上建立了直接测定细胞粗裂解液中DNA含量的方法、可检测10ng DNA。
【作者单位】：
【正文快照】：
生物组织中DNA的定量测定方法,均需进行样品的处理,步骤烦琐,费时,又影响灵敏度和重现性。Ana阂:等‘1J利用荧光探针—菲咤澳红检测生物样品中核酸的含量,虽然简化了样品的处理过程但仍不能直接测定细胞匀浆中DNA的含量。Rasse一和willia二on等〔2,33报道了4,6一二眯基一2苯
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【求助】DNA的提取，百思不得其解........收藏
我提取鱼、虾的总DNA用的是STE缓冲液，消化过夜后提取的效果不太好，DNA电泳检测发现没有条带。老师说不用过夜的，用TE缓冲液3h就行了。我觉得问题不在这里，裂解液的配方的确很多种，但效果都是一样的，加了SDS和酶K后都可以裂解细胞，后面的酚氯仿法我做的很熟练，但就是最后的检测没有条带。大家帮我分析一下 到底哪里除了问题呢.55555
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如果你确信去杂纯化没问题，是不是放的时间太长了……
ste缓冲液含0.1mol/L的NaCL,这个浓度DNA溶解度本来就低你还放了一夜，你用的又是苯酚氯仿萃取，这样水层中DNA就更少了。如果你用ste缓冲液的话，倒不如用CTAB，NaCL&0.7mol/L时与DNA结合沉淀，离心取沉淀就好（还能去多糖），再溶解去RNA。
你细胞破碎没有？marker跑的还好吧，我是当场破碎当场提取，提取完了TE溶解过夜才跑电泳的，如果冰乙醇以后有明显沉淀，说明有DNA的，我看有可能是DNA没溶解，TE溶解完DNA室温放置一夜，临用前冰箱放2小时试试看。。。还有千万别在乙醇沉淀前把DNA沉淀扔了。。
marker有没有加了一起跑 marker都没有的话看看eb加了没
贴吧拳王争霸赛中累计获取10场胜利,
…………虽然我知道这么说有点可恶，但是我还是想问……电泳开电源了没？？？在实验室无数次看到有人跑电泳没按start就跑了…………
看到LZ的ID后我断定他玩跑跑
乙醇沉淀那一步，看得到沉淀的DNA么？
楼主啊！你让我等情何以堪。
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