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新型细胞芯片的构建及初步应用.pdf 47页
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新型细胞芯片的构建及初步应用毕业论文
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分群。可以按照不同临床需要，设计不同的抗体组合，进一步降低
成本，提高疾病的检出率，更好的为广大的病人服务。
材料与方法
要固定于醛基玻片上，形成微阵列，构建出细胞芯片A、细胞芯片
B(白血病免疫分型)和细胞芯片C(淋巴瘤免疫分型)三种细胞芯
片。从20例健康志愿者、20例淋巴细胞白血病病人O．5一lml全
血中和20例淋巴瘤病人胸水中分离出的单个核细胞，其中一部分
用丫啶橙预染5rain，经PBS洗涤3次后与细胞芯片杂交，与细胞
芯片杂交，形成特异性选择细胞群。将杂交后的细胞芯片进行胎
色荧光染色、巴氏染色等并观察结果。
该芯片能选择性的结合不同免疫表型的细胞。胎盘兰染色显
示活细胞数&95％；瑞氏染色细胞形态良好，杂交点边缘整齐，背
景干净；荧光染色显示特异性良好。急性淋巴细胞白血病病人与
健康志愿者的淋巴细胞免疫表型有十分明显的差别，T淋巴细胞
HL～一DR+，并显示了明显的单克隆增生的恶性肿瘤的性质，符
合临床诊断。淋巴瘤病人胸水中有大量幼稚淋巴细胞，其中3例
例CD22+，属B细胞淋巴瘤，阳性点上的细胞与非阳性点上细胞
无论在细胞数量、细胞大小、形态规则性上都有明显的不同，用显
微镜观察更是明显。I尸7
j众所周知，形态学在细胞学检查中的重要作用是任何一种方
法取代不了的。可以看到，我们的细胞芯片所捕获的细胞很均一，
纯度高，而且是单层细胞，十分严格的被限定在特异性区域。通过
扫描电镜的观察，细胞保存十分完好，能清楚的看到淋巴细胞膜上
的皱褶和刺状突起，所以可用于进行更为深入的研究。在一张小
小的玻片上可以根据需要排布多种抗体，能将细胞自动分成不同
类群。本实验方法所需的细胞数量要比L撕ssa的要少得多，因为
他的试验样品的细胞在6×108／L时，很少甚至没有杂交信号被检
测到。我们的试验可以使细胞的量减少到107／L或更少，只要增
加摇晃次数就可富集同类细胞。尤其对于象血液、胸腹水等细胞
种类很多的细胞悬液，十分有效。即使细胞数量很少，所产生的信
号不足以被仪器扫描到时，也可以使用普通光学显微镜直接观察
结果。，奉实验是利用了蛋白质的氨基端(NH：)可与醛基(CHO)
发生共价结合，将蛋白质固定在醛基玻片上，在玻片上形成CD抗
体微矩阵。我们选用玻片做为载体，使操作简单易行，它的突出优
点透明性好，可以用普通光学显微镜直接观察细胞形态，实现了免
疫学与形态学相结合。本实验所构建的细胞芯片在自血病免疫分
型中应用的优势是十分明显的。急性白血病是一种单克隆增生性
疾病，由于某种原因，某一蛋白大量增生。大量异常细胞仅集中在
某一抗体点上，而其它点上虽然也有少量细胞，但经形态观察，还
是属于正常细胞。异常增生的肿瘤细胞无论在细胞体积、外形规
则性上与正常细胞都有十分明显的区别，即使是经验不太丰富的
检验人员也能判断出结果。用扫描仪扫描检测可以实现高通量结
果输出，对于白血病病人的检测结果很明显。由于细胞活性良好，
特异性高，可以成为一种研究平台，在制药及基因工程领域也将有
很高的应用价值。f我们这种细胞芯片构建的成功使我们相信，在
不久的将来，细胞志片必将发挥其巨大的作用。fLY、一
关键词 细胞芯片；CD抗体；白血病免疫分型；淋巴瘤免疫，
ConstructionofNew
Microarray
Application
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文档介绍：
河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权归河北医科大学所有。否则,承担相应的法律责任。研究生签名:捌角河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了文中特别加以标注等内容外,文中不包括其他人已经发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。研究生签名:刻禽导师签章:伽2唯年≥月塔日目录中文摘要?????????????????????????...1英文摘要??????????????????????????5研究论文分化抑制因子Id3与Id4在AML、ALL及MDS中的表达及预后的临床意义前言??????????????????????????12刖舌??????????????????????????12材料与方法???????????????????????13结果???????????????????.??????..18附图??????????????????????????22附表??????????????????????????24讨论??????????????????????????30结论??????????????????????????33参考文献????????????????????????34综述分化抑制因子Id3与Id4在血液系统恶性肿瘤中的研究进展??36致{射????????????????????????????45个人简历???????????????..??????????.46中文摘要分化抑制因子ld3与Id4在AML、ALL及MDS中的表达及预后的临床意义摘要目的:观察分化抑制因子(inhibitorofdifferentiation,Id)Id3与Id4在急性髓系白血病(acutemyelogenousleukemia,AML)、急性淋巴细胞白血病(acutelymphocyticleukemia,ALL)及骨髓增生异常综合征(myelodyspl—asticsyndrome,MDS)中的表达水平,并研究Id3与Id4表达水平与AML、ALL及MDS预后的临床意义,指导疾病的诊断、预后及治疗。方法:1收集3.1间在河北医科大学第二医院血液内科住院及门诊就诊的初治AML组患者的骨髓液标本72例,FAB分型:M215例、M326例、M410例、M519例、M62例,初治ALL组患者的骨髓液标本3l例,包括B.ALL2l例和T-ALLl0例,完全缓解AML组患者的骨髓液标本50例,完全缓解ALL组患者的骨髓液标本20例,初治MDS组患者的骨髓液标本16例,对照组(非恶性血液病患者的骨髓液)20例。2使用淋巴细胞分离液提取骨髓液中的单个核细胞。3采用荧光定量RT-PCR(fluorescentquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR)检测各组Id3与Id4的表达情况并分析其意义。4进行统计学处理。结果:1各组中Id3表达情况1。1初治AML组与完全缓解AML组中Id3的表达情况初治AML组共72例,完全缓解AML组共50例,对照组20例f非恶性血液病患者骨髓)。在72例初治AML患者中,Id3的表达水平较对照组明显升高(P=O.000&0.05),在50例完全缓解AML患者中,Id3的表达水平较对照组明显升高(尸=0.000&0.05)。比较初治AML患者组与完全缓解AML患者组Id3的表达水平,两者差异不明显(尸=0.064&0.05)。进一步比较26例初治M3患者与24例完全缓解M3患者的Id3的表达水平,中文摘要两者差异不明显(P=O.377&0.05)。46例初治AML患者(除M3外的初治AML患者)与26例完全缓解AML患者(除M3外的完全缓解AML患者)进行Id3表达水平的比较差异不明显(尸=0.100&0.05)。1.2Id3在初治ALL组与完全缓解ALL组中的表达情况初治ALL组共31例,完全缓解ALL组共20例,对照组20例(非恶性血液病患者骨髓)。在31例初治ALL患者中,Id3的表达水平较对照组明显升高(P=0.000&0.05),在20例完全缓解ALL患者中,Id3表达水平较对照组明显升高(P=o.000&0.05)。比较初治ALL患者组与完全缓解ALL患者组Id3的表达水平,两者差异不明显(P=O.671&O.05)。1.3Id3在初治MDS组中的表达情况在16例初治MDS患者中,Id3的表达水平较对照组明显升高(P=0.000&0.05)。1.4初治AML、ALL及MDS患者,按疾病亚型、性别及白细胞计数分组,Id3在各组中表达情况72例初治AML患者中,M215例、M326例、M410例、M519例、M62例(样本例数少,不进行统计学分析),Id3的表达水平进行两两比较,差异不明显(尸=O.896&0.05);按性别分组,分为男性组48例和女性组24例,比较两组Id3的表达水平差异不明显(P----0.288&0.05);按白细胞计数分组,分为WBC/&50×109/L组47例和WBC&50×109/L组25例,比较两组Id3的表达水平差异不明显(P=-O.219&0.05)。31例初治ALL患者中,包括B.ALL2l例、T-ALLl0例,比较两组的Id3表达水平差异不明显(P=0.128&0.05);按性别分组,分为男性组19例和女性组12例,两组Id3的表达水平差异不明显(P=-0.851&0.05);按白细胞计数分组,分为WBC&/50x109/L组17例和WBC&50×109/L组14例,比较两组Id3的表达水平差异不明显(P=-O.787&0.05)。16例初治MDS患者中,包括MDS.RCMD8例、MDS—RAEB一28例,比较两组的Id3表达水平差异不明显(P=0.844&0.05);按性别分组,分为男性组10例和女性组6例,两组Id3的表达水平差异不明显(严O.689&0.05);16例初治MDS患者中,白细胞计数均&50×109/L,不能对其以白细胞计数分组对Id3的表达水平进行统计学分析。2各组中Id4表达情况中文摘要2.1Id4在初治AML组与完全缓解AML组中的表达情况初治AML组共72例,完全缓解AML组共50例,对照组20例(非恶性血液病患者骨髓)。在72例初治AML患者中,Id4的表达水平较对照组明显降低(P=0.000&0.05),在50例完全缓解AML患者中,Id4的表达水平较对照组明显降低(P=0.000&0.05)。初治AML患者组Id4的表达水平与完全缓解AML患者组相比,两者差异不明显(P=0.1
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区别AML和ALL最常用的细胞化学染色是
悬赏：0&答案豆
提问人：匿名网友
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区别AML和ALL最常用的细胞化学染色是请帮忙给出正确答案和分析，谢谢！
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罕见病例介绍
AML（双表型）的治疗
AML：acute myelocytic leukemia即急性髓细胞白血病，是一类白血病的总称，临床中急性骨髓系白血病可分为M0~M7一共8种。双表型急性白血病（Biphenotypic acute leukemia，BAL），指急性白血病中髓系和淋巴细胞均受累的一个亚群，是一种少见类型白血病。双表型指同一白血病细胞同时表达髓系和淋系标记；双系列型指存在2种和2种以上的细胞亚群，分别表达淋系和髓系标记。双克隆型白血病是否存在尚有争议。区分双表型和双系列型急性白血病需要进行双标记，有作者认为无必要在详细区分双表型和双系列型，统称为“双表型急性白血病”（Biphenotypic&acute&leukemia，BAL）。类型：B系/髓系抗原共同表达（占65%以上）、T系/髓系抗原共同表达（占20%以上）、T/B/髓系抗原共同表达（占4%―10%）。预后不良因素：CD34高表达（1～egrand等报道表达申82%，而闹期AMI为60%），p-即o高表达和有预后不良的染色体核型改变（Ph染色体和11q23重排发生率较高；n1阳性病例可占31%-35%，11号染色体异常占11%）。治疗：双表型急性白血病的治疗一直是个难题，kegrand等报道的完全缓解（CR）率仅47%（采用AML为主方案者6/10例CR，CR率60%；采用ALL方案者5/9例CR，CR率55.6%；其余4例未治疗），明显低于同期AML和ALL的疗效。中位生存期仅7.5个月。医科院血研所报道的病例CR率为31.6%，中位缓解期均不到6个月；BAL的疗效与所用诱导缓解化疔有关，采用兼顾髓系和淋系的方案疗效可能较好，而开始即采用AML诱导缓解方案者疗效较差。临床病例如下：患者女，患AML双表型一年半，伴肺部感染、心功能不全，高血压病，2型。16年检查发现贫血，血小板减少，后进行骨穿显示AL，形态学支持急性非淋巴细胞白血病（m5），白血病融合基因筛查为阴性，诊断为AL双表型，后进行AA联合VP方案化疗。现患者体温控制尚可，下肢水肿，神志清醒，精神尚可，全身乏力，易心慌，自觉腹胀，无腹痛，纳可，咳嗽，咳痰，痰中带血，眠差，胸闷憋气，大便量少，小便尚调，Hb：52g，PLT：7&#/L，WBC：28✖10^/L。现进行中药治疗：半夏泻心汤，加苏梗，杏仁，知母，蛇舌草。为和解剂，具有调和肝脾，寒热平调，消痞散结之功效。主治寒热错杂之痞证。心下痞，但满而不痛，或呕吐，肠鸣下利，舌苔腻而微黄。治疗以寒热平调，消痞散结为主。心下即是胃脘，属脾胃病变。脾胃居中焦，为阴阳升降之枢纽，中气虚弱，寒热错杂，故为痞证。脾气主升，肝气主降，升降失常，故见呕吐，肠鸣下利。方中半夏散结消痞、降逆止呕，故为君药；干姜温中散邪，黄芩、黄连苦寒，邪热消痞，故为臣药；人参、大枣甘温益气，补脾气，为佐药；甘草调和诸药，为使药。配伍特点：寒热互用以和其阴阳，辛苦并进以调其升降，补泻兼施以顾其虚实。后加苏梗行气宽中（苏梗、苏兜较佳），用于脾胃气滞，胸闷呕吐，为行气宽中,行气止呕良药。杏仁可补肺止咳。知母苦，寒，归肺、胃、肾经。清热泻火，滋阴润燥，治疗热病烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热，肠燥。蛇舌草入胃、大肠、小肠经，清热解毒，消痈散结，利尿除湿。在治疗中以稳定改善患者病情，提高生活质量为主。
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