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标准操作规程(SOP)
中国国家流感中心
流感/禽流感病毒红细胞凝集试验
一、目的本SOP为了规范红细胞凝集试验(HA,hemagglutination test)操作,确保试验的质量而制定。
适用于中国国家流感中心所有技术人员进行流感/禽流感病毒红细胞凝集试验。
(一)生物安全要求
季节性流感病毒或经完全灭活的高致病禽流感病毒和H2N2流感病毒操作可以在BSL-2实验室里进行,操作人员采取BSL-2级防护。禽流感H5、H7亚型高致病性禽流感病毒及H2N2亚型流感病毒的操作需要在BSL-3级实验室中进行,操作人员采取BSL-3级防护。具体防护参见“生物安全个人防护SOP”。
1.待测毒株
2.1%红细胞悬液(鸡、豚鼠,由于“O”相毒株不能凝集鸡红细胞,所以在对该类病毒进行鉴定时应使用豚鼠红细胞)
3.磷酸缓冲液(PBS),0.01M, pH 7.4 (Sigma P 3813)
4.多道及单道可调加样器
单通道可调加样器量程为 20μL~200μL、200μL~1000μL
8通道或12道可调加样器量程为 20μL~200μL
5.96孔微量板:鸡红细胞选择“V”型或“U”型底微量板;豚鼠红细胞选择“U”型底微量板。
6.其它耗材,200μL、1000μL滴头、试管、加样槽等。
(三)实验步骤
1.进入实验室前做好个人防护。
2.试验前试剂准备:
(1)PBS配制:按照Sigma的说明书的要求配制PBS缓冲液。121℃高压灭菌20min,分装,4℃储存。
(2)1%红细胞悬液:按照“1%鸡红细胞悬液配制SOP、1%豚鼠红细胞悬液配制SOP”配制红细胞悬液。
3.根据所用的红细胞种类选用适当的微量板.。将微量板横向放置:垂直方向称列,如孔A1~H1称为第一列;平行方向称行,如A1~A12称为A行。标记好待检病毒的实验室编号及加样顺序。
4.加PBS,取8道加样器装好200μL带滤芯滴头,于加样槽中吸取50μL PBS加入微量板的第二列,依次加入50μL PBS直至最后一列。
5.加入待检病毒,单道加样器装好200 μL带滤芯滴头,吸取100μL待检病毒液,加入已标记好的微量板的第一列相对应的孔内。最后的H1孔内加100μL PBS作为红细胞对照。
6.8道加样器装好200 μL带滤芯滴头,从第一列的各孔分别取50
μL病毒液,加入到第二列的相应的各孔,混匀数次。依次从微量板的第二列至第十二列做二倍系列稀释。最后一列每孔弃去50μL液体。
7.8道加样器装好200 μL带滤芯滴头,于加样槽中吸取50μL红细胞悬液。每孔加入50μL 1%的红细胞悬液,轻弹微量板,使红细胞与病毒充分混合。
8.室温孵育30~60min,观察红细胞凝集现象并记录结果。
9.结果判定:红细胞凝集滴度的判定以出现完全凝集的最高稀释度为终点,其稀释度的倒数即为病毒的红细胞凝集滴度。红细胞完全凝集以“+”记录;无凝集或部分凝集“-”记录。
标准操作规程(SOP)
中国国家流感中心
红细胞凝集抑制试验鉴定流感/禽流感病毒方法
一、目的本SOP是为了规范红细胞凝集抑制试验(HI,hemagglutination inhibition test)的操作规程,确保试验质量而制定。
适用于中国国家流感中心所有技术人员进行红细胞凝集抑制试验,鉴定流感/禽流感病毒。
(一)生物安全要求
季节性流感病毒及经完全灭活的高致病禽流感病毒和H2N2流感病毒操作可以在BSL-2实验室里进行,操作人员采取BSL-2级防护。禽流感H5、H7亚型高致病性禽流感病毒及H2N2亚型流感病毒的操作需要在
BSL-3级实验室中进行,操作人员采取BSL-3级防护。具体防护参见“流感中心生物安全个人防护SOP”。
1.流感病毒参比抗原及参比抗血清
2.待检病毒
3.1%红细胞悬液(鸡、豚鼠红细胞,由于“O”相毒株不能凝集鸡红细胞,所以在对该种病毒进行鉴定时应使用豚鼠红细胞)
4.磷酸缓冲液(PBS),0.01M,pH 7.4 (Sigma P 3813)
5.多道及单道可调加样器
单通道可调加样器量程为 20μL~200μL、200μL~1000μL
8通道或12道可调加样器量程为 20μL~200μL
6.96孔微量板:鸡红细胞选择“V”型或“U”型底微量板;豚鼠红细胞选
择“U”型底微量板。
7.其它耗材,200μL、1000μL滴头、试管、加样槽等。
(三)实验步骤
1.试验前准备
(1)PBS配制:按照Sigma的说明书的要求配制PBS缓冲液。121℃高压灭菌20min,分装,4℃储存。
(2)1%红细胞悬液:按照“1%鸡红细胞悬液配制SOP、1%豚鼠红细胞悬液配制SOP”配制红细胞悬液。
(3)制备用于红细胞凝集抑制试验的4个红细胞凝集单位的抗原
1)一个红细胞凝集单位指能引起等量标准化的红细胞凝集时病毒的量。进行红细胞凝集抑制试验时一般用4个红细胞凝集单位(指25μL体积中含有4个红细胞凝集单位)的病毒量。
2)制备4个红细胞凝集抗原时:首先计算出红细胞凝集抑制试验所需的病毒抗原的总量。如每份血清作8孔稀释,每孔用抗原25μL抗原,那么测定一份血清需0.2mL抗原。根据参比血清的份数计算出实验所需病毒抗原量,然后配制抗原。
3)计算出病毒稀释度。用病毒红细胞凝集滴度(HA滴度)除以8,得到的商即为4个红细胞凝集单位的稀释度。如,某病毒的HA滴度为64,除以8等于8。按1:8(1mL病毒液加7mL PBS)稀释该病毒即可得到4个凝集单位/25μL的抗原病毒量。
4)为了保证红细胞凝集抑制试验中抗原用量一致并且准确无误,新配制的4个凝集单位抗原须复核滴定:取50μL稀释好的抗原,用等量PBS做倍比稀释(同病毒滴定)后加入50μL红细胞悬液,至室温孵育30~60min后观察凝集结果。如只有前4孔出现凝集,表明每50μL病毒含有8个凝集单位(即25μL中含有4个红细胞凝集),该病毒稀释准确,可以用于红细胞凝集抑制试验。如第5孔也出现凝集,说明每50μL病毒含有16个凝集单位,该抗原必须等量稀释。如只有前3孔凝集,表明每50μL病毒仅含有4个凝集单位,病毒量需要加倍。此外,4个凝集单位抗原必须每次用前新配制。
2.红细胞凝集抑制试验(HI)鉴定未知病毒
(1)根据所用的红细胞选用适当的微量板。标记好待检病毒的实验室编号及使用标准参照血清的名称。
(2)除A行外,每孔各加25μL PBS。A5、A6各加50μLPBS作为阴性对照。常用的4种抗血清:
1)抗A(H1N1)亚型血清
2)抗A(H3N2)亚型血清
3)抗B型Yamagata系病毒血清
4)抗B型Victoria系病毒血清
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红细胞凝集试验
血球凝集(HA)试验: 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验
血球凝集抑制(HI)试验:病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验
阿氏液（Alsever）：即红细胞保养液
指红细胞凝集的现象。由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的红细胞凝集。
（1）由病毒而引起的凝集：G．H．Hirst（1941）发现流感病毒能使鸡的红细胞发生凝集，其后又发现其它各种病毒也能引起同样的红细胞凝集反应。即红细胞表面存在着对各种病毒的受体，病毒与受体结合，以红细胞为桥梁的结果而引起凝集。利用此反应可以进行病毒的定性和定量。另外，如果存在抗病毒的抗体时，则由病毒引起的凝集作用将被抑制，所以可用于抗病毒抗体的检出。
（2）由抗体引起的凝集：（a）如果存在对红细胞表面决定基的抗体，则红细胞亦将凝集。可用于测定对抗红细胞的抗体的效价或鉴定人的血型。（b）在红细胞表面，如果人为地使之吸附或结合特定的抗原物质，则与该抗原相对应的抗体将引起红细胞凝集（被动凝集反应或间接凝集反应，psssive he-magglntination）。　　 HYPERLINK "http://baike.so.com/doc/7134508.html" \t "_blank" 血凝及血凝抑制试验　　有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。?　　[目的要求]　　掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。　　[材料与试剂]　　1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50 uL定量移液器，滴头，微型 HYPERLINK "http://baike.so.com/doc/4724751.html" \t "_blank" 振荡器。　　2. 生理盐水，0.5%鸡红细胞悬液，新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。　　[实验内容及操作方法]　　（一）血球凝集(HA)试验?　　1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 uL生理盐水。　　2. 于左侧第1孔加50 uL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50 uL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 uL；第12孔为红细胞对照。　　3. 自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 uL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。　　表4-1?病毒血凝试验的操作方法（单位：uL）　　
孔 号123456789101112病毒稀释度1:21:41:81:161:321:641:1281:2561:5121:8对照生理盐水505050505050505050505050病毒液50505050505050505050500.5%红细胞505050505050505050505050弃50结果观察++++++++++++++++++++++++?+++++--4. 结果判定：从静置后10 min开始观察结果，待对照孔红细胞已沉淀即可进行结果观察。红细胞全部凝集，沉于孔底，平铺呈网状，即为100% 凝集（++++），不凝集者（-）红细胞沉于孔底呈点状。　　以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。从表4-1看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:128，则l:128为1个血凝单位，1:64、l:32分别为2、4个血凝单位，或将128/4=32，即1:32稀释的病毒液为4个血凝单位。　　(二)?血球凝集抑制(HI)试验　　1. 根据HA试验结果，确定病毒的血凝价，配制出4个血凝单位的病毒液。　　2. 在96孔微量反应板上进行，用固定病毒稀释血清的方法，自第1孔至第11孔各加50 uL生理盐水。　　3. 第1孔加被检鸡血清50 uL，吹吸混合均匀，吸50 uL至第2孔，依此倍比稀释至第10孔，吸弃50 uL，稀释度分别为：1:2、1:4、1:8 …… ；第12孔加新城疫阳性血清50 uL，作为血清对照。　　4. 自第1孔至12孔各加50 uL 4个血凝单位的新城疫病毒液，其中第11孔为4
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ELISA 试剂盒
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原辅料包材
实验方法原理
有些病毒（如流感病毒等）表面有血凝素（为糖蛋白）在一定条件下，能与鸡，豚鼠的红细胞表面的糖蛋白受体结合而发生凝集现象。利用病毒血凝试验可以检测某些病毒的存在，滴定病毒的血凝效价，便可大致估计病毒颗粒的数量（1 个血凝单位=106病毒颗粒）。若血清中出现特异性抗体与相应病毒结合后，使病毒失去凝集红细胞的能力，从而抑制血凝现象的出现，此为血凝抑制现象。
取一块洗净晾干的20 孔凹窝塑料板，用蜡笔做好标记。用带有橡皮吸头的吸管，于1～6 孔内各加人生理盐水0.2 ml，在第1 孔内加入已经稀释成1：5 的流感病毒尿囊液0.2 m1，混匀后吸出0.2 ml 至第2 孔，再混匀后吸0.2 ml 至第3 孔，如此稀释到第8 孔（病毒稀释度即分别为1：10～1280），自第8 孔吸出0.2 ml 弃去（弃于消毒缸中），第9 孔不加流感病毒尿囊液，作红细胞对照。2.
每孔加人1% 鸡红细胞0.2 m1，摇匀后置室温45 分钟。3.
观察结果时，直接观察塑科板孔内的红细胞凝集式样，判断结果并作记录。最高病毒稀释度呈\&++\& 凝集者作为病毒的红细胞凝集滴度，亦即1 个血凝单位。例如1：320 为& ++&，即为1 个血凝单位，在红细胞凝集抑制试验中，病毒血凝素需用4个单位，按上例1 个血凝单位为1：320，则1：80 含病毒的尿囊液即为4 个血凝单位。
用反复吹吸法稀释混匀病毒或血清时，手法要轻，稳，尽量减少气泡出现；2.
为了实验准确，加红细胞时，应从最后一孔起向前加；3.
加样毕，可将塑料板放光滑台面上慢慢划圈摇匀，但要防止溅出；观察结果时，塑料板底部垫上白纸，减少移动并按时观察，若延续时间太长，则可能出现病毒凝集红细胞后再解离的现象，从而影响结果观察。
取干净凹窝塑料板一块，用蜡笔做好标记，用带有橡皮吸头的吸管，于第2 至第9 孔内各加人生理盐水0.2 mL；2.
于第1 ，第2 及第9 孔中各加入稀释成1：5 的流感病人发病早期血清0.2 ml （血清处理见附录），混匀后，从第2 孔吸出0.2 ml 加入第3 孔，按同法稀释至第8 孔，吸出0.2 ml 弃去（血清稀释度分别为1：5~1：640）。3.
在第1 至第8 孔中，各加入4血凝素单位流感病毒0.2 ml，第9 孔不加，作为血清对照。4.
取同一病人的恢复期血病标本一份，按同法作红细胞凝集抑制试验。5.
另取两孔，分别作病毒血凝素对照和红细胞对照。第10 孔，病毒血凝素对照：盐水0.2 ml+ 4血凝素单位流感病毒0.2 ml。第11 孔，红细胞对照：盐水0.4 ml。6.
温静置10分钟后，于1~11孔中各加入1%鸡红细胞0.2 ml，摇匀。结果观察：最高血清稀释度能完全抑制红细胞凝集者为红细胞凝集抑制效价，比较早期，恢复期血清的血凝抑制抗体的效价，并作出判断。
发病早期，恢复期血清要同时做，以求条件一致。2.
其他事项与红细胞凝集试验类同。
实验方法原理
将抗μ链球蛋白（豚鼠抗兔IgM 抗体）非特异地吸附在固相上，加入待检乙脑病人血清，血清中的IgM 能和抗μ链球蛋白结合。当再加入定量特异性日本乙脑病（JBEV）抗原和酶标记的相应抗体（兔抗IBEV IgG）时，病人血清抗体再与IBEV 抗原和酶标抗IBEV IgG 结合作用于酶底物，酶底物显色反应，借此可测出血中IgM 抗体的含量。
用包被液稀释豚鼠抗兔IgM 抗体至l0 （g/ml，加至40 孔板，每孔0.2 m1。置湿盒37 ℃1 小时，再置4 ℃过夜。用洗涤液洗三次。2.
用稀释液稀释待检血清，然后加至40 孔板，每孔0.2 ml。置湿盒，37 ℃1 小时，用洗涤液洗三次。3.
用稀释液将乙脑病毒抗原稀释至50 个血凝单位，对照抗原用同法稀释。分别加入40 孔板中，每孔0.3 ml。置湿盒4 ℃过夜，用洗涤液洗三次。4.
用稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的兔标JBEV IgG，加至40 孔板，每孔0.2 ml，37 ℃l 小时，用洗涤液洗三次。加邻苯二胺（OPD）底物液，每孔0.2 ml。避光置室温30 分钟。加2M H2SO4 0.05 m1，终止反应。用分光光度计测出各孔OD 值，波长选择495 nm。4.
结果P/N （3.0 为血清JBEV IgM 抗体阳性。标本平均OD 值- 空白对照OD阴性对照OD 值一空白对照OD
实验方法原理
用带EB 病毒衣壳抗原的类淋巴细胞作抗原靶细胞，可与病人血清中的VCA--IgA 抗体结合，形成抗原抗体复合物，再与酶标抗人IgA 抗体结合，加入底物后酶催化底物变为有色产物，使靶细胞着色，产物的量与病人血清中的抗体量直接相关，故可根据颜色反应的深浅对抗体定量分析。
取冷存的EB 病毒抗原靶细胞涂片置室温中吹干。用0.01 M，pH7.4 PBS 将即检血清作1：5，1：10 ，1：20 稀释，将各稀释度血清滴加至细胞涂片的小圆穴中，勿使液体外溢。置于湿盒中在37 ℃温箱作用30 分钟，用同一PBS 浸洗三次，每次5 分钟，末次浸洗后在室温中吹干。滴加酶标抗体于各小圆穴内，置湿盒中在37 ℃作用60 分钟，同上法浸洗三次。将新鲜配制的底物溶液滴加在整个涂片上，避光作用10 分钟后，倾去底物溶液，置于无水乙醇中浸3 分钟使脱水。滴加中性树胶于涂片上，加盖玻片封固，在低倍显微镜下观察结果。结果判断：阴性细胞：细胞不着色，或呈浅棕色与背景相同。阳性细胞：细胞显示不同程度的棕色，胞膜染色较深，细胞表面可见棕色颗粒。按阳性细胞着色强度和数量，将阳性分为四级：++++：每个视野内有100 个以上阳性细胞，是深棕色；+++：每个视野内有数十个阳性细胞，呈棕色；++：每个视野内有少数阳性细胞，是淡咖啡色；+：在若干个视野内才见少数阳性细胞，呈淡咖啡色。
此法简便敏感，适于对人群普查鼻咽癌，有助于早期诊断鼻咽癌。有助于诊断和鉴别诊断鼻咽癌：用VCA-IgA 试验检测鼻咽癌患者，抗体阳性率在90% 以上，抗体滴度1：10 以上或滴度持续上升者，对鼻咽癌有辅助诊断意义。鼻咽癌患者抗体滴度较高，其他肿瘤和正常人血清的抗体阳性率均在6% 以下，且抗体滴度低。有助于判断疗效和预后：病人疗效显著时，血清中的VCA-IgA 抗体逐渐下降或消失；疗效差，鼻咽癌复发或远处转移时抗体滴度回升。
实验方法原理
人类巨细胞病毒（HCMV）感染细胞后，经短期培养48～72 小时，可产生早期蛋白抗原（HCMV-EA），应用已知抗HCMV-EA 的单克隆抗体（McAb-20 K）与之结合，再加入荧光素（FITC）标记羊抗人IgG 荧光抗体，在荧光镜下检查，可见细胞核内或胞浆内有黄绿色荧光。
将已经处理的待检尿液混合于人胚肺纤维母细胞（HEL）中，然后用4 号针头滴加于印有小孔的灭菌玻片上，放CO2 孵育箱中，37 ℃短期培养（48～72 小时）制抗原滴片。取出抗原滴片，冷丙酮固定30 分钟。用0.0l mol/L pH7.8 PBS 漂洗一次，滴加一定稀释度的HCMVAb-20 K 37 ℃孵育2 小时。取出抗原滴片再用PBS 冲洗三次，吸干滴加FITC 标记的羊抗人IgG 荧光抗体，置37 ℃2 小时。再经PBS 洗涤三次，吸干，滴加甘油缓冲液于荧光显微镜下镜检。同法，用HCMV AD139 株感染细胞制片及HEL 细胞片分别作阳性和阴性对照。结果判断：同一抗原片标本上有3 个视野，或一个视野中有2 个以上阴性荧光细胞，判为阳性。
(共2个问题)
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红细胞凝集试验(HA)与红细胞凝集抑制试验
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检验学题库 1（医学三基医技）一、单选题：每一道考试题下面有 A、B、C、D、E 五个备选答案。请从中选择一个最 佳答案。 1．对血沉测定标本影响的提法不准确的是( Ｄ ) A．必须避免脂肪血 B．抗凝剂配制准确，每周配 1 次，冰箱保存 C．抽血应在 30 秒内完成 D．血液凝固可使血沉增快 E．抗凝剂浓度增加使血沉减慢 2．干化学法测定蛋白质系用指示剂蛋白质误差原理，下列哪项提法不准确 ( Ｅ ) A．尿 pH 对测定影响颇大 B．服用奎宁、奎宁丁或嘧啶者，可出现假阳性反应 C．主要对清蛋白敏感 D．标本中含生殖系统分泌物可出现假阳性 E．对肾病患者，特别需要系统观察尿蛋白病例，最佳方法仍为干化学法 3．采集精液标本，错误的是( Ａ ) A．体外排精是最佳的采集方法 B．采集标本前必须禁欲 3～5 天 C．不完整的精液标本，不宜进行精液分析 D．标本采集后应装在洁净、消毒的塑料试管 E．标本采集后立即保温送检，不得超过 1 小时 4．刺激机体产生类风湿因子的抗原是( Ａ A．变性 IgG B．变性 IgM C．变性 IgA D．变性 IgD E．变性 IgE 5．可作为 SLE 特异性标志的自身抗体是( Ｄ A．抗 ssDNA 和抗 Sm B．抗 dsDNA 和 ANA D．抗 dsDNA 和抗 Sm E．抗 DNP 和抗 dsDNA 6．抗体介导的超敏反应有( A．Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型超敏反应 C．Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型超敏反应 E．Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ型超敏反应 )) C．抗 DNP 和抗 SmＢ ) B．Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型超敏反应 D．Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型超敏反应7．下列免疫检测方法中敏感性最高的是( Ｄ ) A．沉淀反应 B．凝集反应 C．补体结合试验 D．放射免疫测定 E．ELlSA 8．下列哪种方法或试验不是凝集反应( Ｃ ) A．抗球蛋白试验 B．肥达试验 C．琼脂扩散 D．交叉配血试验 E．反向间接红细胞凝集试验 9．不参与细胞免疫的细胞是( Ｃ ) A．巨噬细胞 B．THl 细胞 C．TH2 细胞 D．树突状细胞 E．NK 细胞110．革兰阳性菌细胞壁的特殊组分为( A．肽聚糖 B．几丁质 C．胆固醇Ｄ ) D．磷壁酸E．脂多糖11．判断细菌有无动力可用( Ｅ ) A．革兰染色后镜检 B．墨汁染色后镜检 C．美蓝染色后镜检 D．抗酸染色后镜检 E．特殊染色后镜检 12．细菌生长繁殖的方式为( A．有性繁殖 B．二分裂法 Ｂ ) C．形成孢子D．有丝分裂E．复制13．能通过胎盘的螺旋体是( Ｃ ) A．伯氏疏螺旋体 B．回归热螺旋体 C．梅毒螺旋体 D．雅司螺旋体 E．奋森螺旋体 14．不能用于血清蛋白电泳染色的染料是( A．氨基黑 B．丽春红 C．考马斯亮蓝 Ｄ ) D．苏丹黑E．酸性蓝15．引起糖尿病患者并发白内障的原因是( Ｃ ) A．糖异生增加 B．磷酸性糖途经增加 C．山梨醇途经增加 D．醛糖还原酶减少 E．半乳糖激酶增加 16．下列哪项不是 VIS 的特点( Ｅ ) A．是室间质评最常用的计分方法 B．又称变异指数得分 C．VI≤400 时，VIS=VI D．VI&400 时，VIS＝400 E．无论 VI 多大，VIS 始终等于 VI 17．用于化学法检测尿液，如尿中含高浓度维生素 C，对下列哪项不产生负干扰 ( Ｄ ) A．血红蛋白 B．胆红素 C．亚硝酸盐 D．pH E．葡萄糖 18．关于尿糖的形成与机制，错误的是( Ｂ ) A．动脉血通过入球微动脉进入肾小球 B．血中葡萄糖大部分通过滤过膜 C．未被重吸收的糖，出现在尿中形成尿糖 D．尿糖浓度与血糖浓度增高成正比 E．葡萄糖是否出现于血液中，主要取决于血糖浓度、肾血流量及肾糖阈等因素 19．白细胞计数质量控制的两差比值评价法，下面哪种情况为两次结果有显著性差异 ( Ａ ) A．P&1．99 B．&2 秒 C．&2．58 秒 D．&1．96 秒 E．P&0．05 20．脑脊液葡萄糖测定错误的是( Ｃ ) A．常用葡萄糖氧化酶法 B．己糖激酶法特异性更高 C．五管糖半定量法亦可使用 D．标本留取后及时检验 E．标本若需保存，应加适量氟化钠 21．人类的主要组织相容性抗原是( Ｂ2)A．H-2B．HLAC．RLAD．mHE．DLA )22．在宿主抗移植物排斥反应中，下列哪种反应最严重( Ｂ A．急性排斥反应 B．超急性排斥反应 C．慢性排斥反应 D．亚急性排斥反应 E．迟发排斥反应 23．用 ELISA 双抗体夹心法检测 HBsAg 时，固相载体包被物是( A．酶标抗 HBsAB B．未标记 HBsAB C．酶标 HBsAg D．未标记抗球蛋白抗体 E．酶标抗球蛋白抗体 24．沉淀反应中抗原过量的现象称为( Ａ A．后带 B．前带 C．高带 D．等价带 ) E．以上都不是Ｂ)25．风湿性心脏病的发病与下述哪项有关( Ｂ ) A．隐蔽抗原的释放 B．交叉抗原的存在 C．免疫调节功能的缺陷 D．多克隆 BN 胞的激活 E．自身抗原的改变 26．与移植排斥应答无关的细胞是( Ｄ A．TC 细胞 B．TH 细胞 C．B 细胞 D．肥大细胞 E．TDTH 细胞 27．革兰阴性菌细胞壁的特殊组分为( A．肽聚糖 B．磷壁酸 C．外膜 )Ｃ ) D．脂质双层E．脂多糖 Ｃ )28．细菌的芽胞和外毒素在细菌生长的哪一期产生( A．迟缓期 B．对数生长早期 C．对数生长晚期 D．稳定期 E．衰亡期 29．保存菌种最好的方法是( Ｄ ) A．4℃冰箱 B．半固体培养基 C．-20℃冰箱 D．甘油盐水保液 E．真空冷冻干燥法30．DIC 最主要的病理特征是( Ｃ ) A．大量微血栓形成 B．凝血功能失常 C．纤溶过程亢进 D．凝血物质大量消耗 E．溶血性贫血 31．用改良牛鲍计数盘计数白细胞，充池后每大方格容积为( A．1mm3 B．10μ L C．0.1mm3 D．1μ L E．0．1ML 32．变异百分率评价血细胞计数常用于( Ａ ) A．集体考核 B．个人考核 C．对口检查 D．室内质量控制 E．白细胞分类的绝对值考核 33．血细胞计数时，不属于技术误差者是( Ｂ A．充池不当 B．固有误差 C．混合不匀3Ｃ))D．血液凝固E．取血部位不当 Ｂ )34．下列情况红细胞增多，哪项不是由于血液浓缩( A．连续呕吐 B．高山居民 C．反复腹泻 D．咄汗过多 E．大面积烧伤35．化脓细菌感染时，血象不会出现( Ｃ ) A．白细胞总数增多 B．中性粒细胞中度左移及毒性变化 C．嗜酸性粒细胞增加 D．淋巴细胞减少 E．中性粒细胞增多 36．周围血液中不可能发现( Ａ A．血吸虫 B．弓形虫 C．徼丝蚴 37．不用作尿液防腐剂的是( A．二甲苯 B．麝香草酚 Ｅ C．甲醛 ) D．疟原虫 ) D．盐酸E．回归热螺旋体E．硫酸38．混浊尿液加热后混浊消失是( Ｃ ) A．磷酸盐 B．碳酸盐 C．尿酸盐 D．草酸盐 39．作为尿液生化自动分析仪的人工质控液不含( A．葡萄糖 B．尿胆原 C．蛋白质 D．酮体E．无定形磷酸盐 Ｂ ) E．血红蛋白40．属于生物源性的人体寄生线虫是( Ｄ ) A．蛔虫 B．钩虫 C．蛲虫 D．丝虫 E．鞭虫 41．尿蛋白质定量测定不能用( Ｃ ) A．丽春红 S 法 B．考马斯亮蓝法 C．艾氏法 D．双缩脲比色法 E．磺柳酸-硫酸钠法 42．0．1000mmol／LH2SO4 标准溶液滴定 20．00mLNaOH 溶液，滴定至终点时用去此 H2SO422．00mL，该 NaOH 溶液的浓度是( Ｃ ) A．0.2200mEq／L B．2.200mol／L C．0．2200mol／L D．22．00mol／L E．1．000mol／L 43． 欲配制 0． 1mol／L HCl 溶液 1000mL， 应取 12mol／L 浓 HCl 多少毫升( A．10mL B．12mL C．120mL D．83．3mL E．8．33mL 44．基准物质不要求( Ｃ ) A．纯度高 B．组成恒定 C．低温储存 D．性质稳定 E．具有较大的摩尔质量 45．强碱弱酸滴定时选择的指示剂为( A．甲基橙 B．酚酞 C．甲基红 Ｂ ) D．溴酚蓝4Ｅ)E．以上四种均可46．谷丙转氨酶不是( A．GPT B．ALT D．丙氮酸转氨酶Ｃ ) C．AST E．谷氨酸丙酮酸转氨酶47．需要用高渗低琼脂培养基进行培养的是( Ｅ ) A．厌氯菌 B．真菌 C．淋球菌 D．螺旋体 E．L 型细菌 48．引起血小板减少的疾息是( Ｂ ) A．急性出血后 B．脾功能亢进 C．脾切除术后 D．真性红细胞增多症 E．急性化脓性感染 49．用变异百分率法对某单位进行白细胞计数考核，均值为 9．6?10^9／L．某人测得 值为 9?10^9／L，该人可评为：( Ｂ ) A．A 级 B．B 级 C．C 级 D．D 级 E．E 级 50．下面哪个方法或试验不是凝集反应?( Ｃ ) A．抗球蛋白试验 B．肥达试验 C．琼脂单向扩散 D．交叉配血试验 E．反向间接红细胞凝集试验 51．下列哪一种物质不属于 17-OHCS( Ｃ ) A．皮质醇 B．四氢皮质醇 C．雄酮 D．皮质素 52．NAD 在 340nm 处毫摩尔消光系数为( Ｃ A．6．22?10^3 B．6．22?10^-3 C．6．22 D．510 E．1．95?10^4 )E．四氢皮质素53．下列哪项不是自动生化分析仪的特点( Ｃ ) A．所有实验操作步骤均由仪器自动完成 B．提高了工作效率 C．减少了系统误差 D．减少了人为误差 E．具有快速、准确、节省试剂等优点 54．下列哪项不是 VIS 特点( Ｅ ) A．是室间质量评价最常使用的计分方法 B．VIS 称变异指数得分 C．VI≤400B 寸，VIS=VI D．VI&400 时，VIS=400 E．无论 VI 多大，VIS 始终等于 VI 55．下面哪个是急性时相反应蛋白( Ｅ ) A．C 反应蛋白 B．结合珠蛋白 C．铜蓝蛋白 D．α 1 抗胰蛋白酶 E．以上都是 56．下列叙述哪项不正确?( Ａ ) A．误差是测量值与均值之闻的差异 B．均值是所有测量值的平均值 C．标准差是指测定值与均值的离数程度 D．变异系数是标准差与均值之比 E．误差有系统误差，偶然误差，过失误差三类557．常规血栓止血筛选试验包括( A．PLT 计数 B．PT C．APTTＥ ) D．FDPE．以上全是58．凝血时间延长可见于( Ｄ ) A．过敏性紫癜 B．特发性血小板减少性紫癜 D．血友病 E．血栓前状态 59．APTT 缩短见于( Ｅ A．血友病 A B．血友病 B D．DIC E．血栓性疾病 ) C．Ⅺ因子缺乏症C．单纯性紫癜60．影响电泳迁移率的因素有( Ｅ ) A．电场强度 B．溶液 pH 值 C．溶液离子强度 D．电渗强度 E．以上全对 二、配伍选择题题：是一组试题（2 至 4 个）公用一组 A、B、C、D、E 五个备选。选 项在前，题干在后。每题只有一个正确答案。每个选项可供选择一次,也可重复选用， 也可不被选用。考生只需为每一道题选出一个最佳答案。 （61～64 题共用备选答案） A．菌毛 B．鞭毛 C．荚膜 D．芽胞 E．异染颗粒 61．淋病奈瑟菌所具有的致病因素为( Ａ ) 62．艰难梭菌具有( Ｄ ) 63．新生隐球菌具有( Ｃ ) 64．棒状杆菌具有( Ｅ ) （65～68 题共用备选答案） A．ELISA 试验 B．中和试验 C．血凝抑制试验 D．免疫扩散试验 E．红细胞凝集试验 65．可用双抗体夹心法检测抗原的试验是( Ａ ) 66．用活体或细胞检测血清保护性抗体的方法是( Ｅ 67．常用于检测粘病毒和副粘病毒感染的方法是( Ｅ 68．检测 IgM 抗体，用于病毒感染早期诊断的方法是() ) Ｂ )（69～71 题共用备选答案） A．机械阻挡与排菌作用 B．生物拮抗作用 C．呼吸爆发作用 D．保护中枢神经的作用 E．保护胎儿的作用 69．正常菌群具有( Ｂ ) 70．血-脑脊液屏障可产生( Ｄ ) 71．中性粒细胞可产生( Ｃ ) （72～76 题共用备选答案） A．骨髓 B．胸腺 C．法氏囊 D．周围免疫器官 72．再次体液免疫应答发生的场所为( Ｅ ) 73．各种免疫细胞的发源地为( Ａ ) 74．B 淋巴细胞分化成熟的部位为( Ａ ) 75．T 淋巴细胞分化的部位为( Ｂ )6E．淋巴结76．成熟淋巴细胞定居的部位为(Ｄ)（77～78 题共用备选答案） A．缺氧 B．代偿性 C．血浆容量增加，血液被稀释 D．大量失水，血液浓缩 E．原因不明的造血系统增殖性疾病 77．妊娠中后期，红细胞减少，因为( Ｃ ) 78．真性红细胞增多( Ｅ ) （79～80 题共用备选答案） A．枸椽酸钠 B．肝素 C．EDTA 盐 D．草酸盐 E．去纤维蛋白法 79．血气分析采血抗凝剂用( Ｂ ) 80．血液 ACD 保养液中含( Ａ ) （81～82 题共用备选答案） A．线虫 B．吸虫 C．绦虫 81．蓝氏贾弟鞭毛虫是( Ｄ 82．姜片虫是( Ｂ )D．原虫 )E．昆虫三、多选题：由一个题干和 A、B、C、D、E 五个备选答案组成，题干在前，选项在后。 要求考生从五个备选答案中选出二个或二个以上的正确答案，多选、少选、错选均不得 分。 83．T 淋巴细胞介导的超敏反应结果可以是( ABCDE ) A．肉芽肿形成 B．皮肤局部红肿硬结 C．移植排斥反应 D．剥脱性皮炎 E．肺结核空洞形成 84．能产生β -内酰胺酶的菌株是( ABCDE ) A．金黄色葡萄球菌 B．流感嗜血杆菌 C．淋病奈瑟菌 D．革兰阴性厌氧菌 E．肺炎链球菌 85．下列哪些因素可能与自身免疫病有关( ABCDE A．微生物感染 B．环境因素 C．基因缺陷 D．遗传因素 E．激素水平异常 86．L 型细菌的培养特点有( ABCDE ) A．高渗 B．低琼脂 C．生长缓慢 D．菌落呈&油煎蛋&状 E．传代返祖 87．可引起妊娠试验阳性反应的有( ACE A．LH B．VMA C．TSH D．17-KS ) E．FSH )88．脑脊髓液中淋巴细胞增高可见于( ABC ) A．中枢神经系统病毒感染 B．中枢神经系统真菌感染 D．急性脑膜白血病 E．化脓性脑膜炎 89．影响抗原抗体反应主要因素有( ADE7C．结核性；脑膜炎)A．电解质B．渗透量C．振荡D．温度E．pH90．能使尿中 HCG 增高的疾病有( ABCDE ) A．恶性葡萄胎 B．绒毛膜上皮癌 C．妊娠 D．睾丸畸胎瘤 E．异位妊娠 四、填空题：在每题中划有一个或多个空格，答题者在每一个空格处须写上一个正确的 内容。 91．在血液凝固过程中，肉眼所见的血块主要成分为纤维蛋白丝_，这是一系列凝血蛋 白酶促反应的结果。 92．血小板具有血块收缩功能，系因血小板具有收缩蛋白之故。 93．抗原抗体反应中的带现象，其中_抗体_过剩为前带。 94．免疫电泳技术是电泳技术与沉淀反应相结合的技术。 95．抗原抗体反应后分离结合与游离标记物的测定方法称为异相法。 96．Ⅱ型超敏反应又称细胞毒型超敏反应。 97．世界卫生组织推荐的药物敏感试验方法为 KirBy-BauEr(K-B)法。 98．细菌 L 型的形成与细胞壁_结构有关。 99．质粒_既是编码抗性蛋白质又是基因工程的重载体。 100．生长繁殖速度最慢的细菌是_结核分枝杆菌。 101．作血气分析时，如血样中有气泡，可使 PO2 值升高，PCO 值下降。 102．肾上腺皮质功能亢进者，尿中 17-酮类固醇量_增高。 103．某人作白细胞计数，用 RCS 法进行考核，4 个大格分别为 56、68、72 和 60，数 值为 25_％，考核结果为不合格。 104．网织红细胞脱核后即为完全成熟红细胞。 105．风湿性心脏病的免疫学发病机制与交叉抗原的存在_有关。 106． HIV 是获得性免疫缺陷综合征的病原体。 107．免疫系统的三大功能是免疫防御、免疫自稳和免疫监视_。 108．带菌者是指体内携带致病菌，但不产生临床症状的健康人。8109．甲型肝炎病毒的主要传播途径是消化道。 110．乙型肝炎病毒属于嗜肝 DNA 病毒。 111．HBV 感染的主要标志是 HBsAg。 112．室内质控主要是控制分析精密度，而室间质评则是控制分析_准确度_。 113．最适于血液常规检验的抗凝剂是乙二胺四乙酸盐_。 114．氰化高铁血红蛋白法测定血红蛋白后的废液应加次氯酸钠进行处理后才能弃去。 115．氰化高铁血红蛋白法测定血红蛋白的计算公式中 64458 是国际公认的血红蛋白 平均分子质量。 116．红细胞比积(微量法)参考值，男性为_0．467±0．039，女性为_0．421±0．054。 117．凝血时间测定玻片法和毛细血管法已停止使用。 118．如血涂片的玻片带酸性，用瑞特染色时，色彩将偏红色。 119．一病人白细胞计数为 15?10^9／L，在白细胞分类计数时，计数 100 个白细胞遇 到 25 个有核红细胞，其实际白细胞数为 12?10^9／L。 120．Ⅲ型异型淋巴细胞又称为不规则型。 121．尿量多少主要取决于肾小球滤过率、肾小管重吸收和浓缩与稀释功能。 122．尿中盐类析出，尿相对密度(比重)将下降。 123．本-周蛋白是免疫球蛋白的轻链单体或二聚体。 124．检查尿中尿胆原，如有胆红素，应加氯化钡处理胆红素后再测尿胆原。 125．葡萄糖分子质量为 180．158，如某人血糖为 6．4mmol／L，换算成惯用单位为 115．3mg／dl。 126．肾上腺皮质功能亢进者，尿中 17-酮类固醇量增高。 127．作血气分析时，如血样品中有气泡，可使 PO2 值升高，PCO2 值下降. 128．测定结果与真值接近的程度称为准确度。129． 作室间质量调查的钾的结果：=3． 6， X=3． O， 已知 CCV=2． 9， 则 VI=_574． 7，VIS=__400 __，结论是__不及格__。9130．火焰光度分析法是发射光谱分析。 131．胸腺是免疫系统中的免疫器官之一。 132．免疫的三大功能是免疫防御、免疫自稳_和_免疫监视。 133．USR 试验是用抗原检查抗体。 134．免疫球蛋白有五类，它们是_IgG、IgM、IgA、IgD 和 IgE。 135．细菌可分为球状、杆状、弧形(弧菌、弯曲菌)和螺旋状(螺菌、螺旋体)等四种基本 形态 136．SS 培养基的&SS&是指沙门氏菌属和志贺氏菌属，它是一种选择培养基。 137．世界卫生组织推荐的药物敏感试验方法为 Kirby-Bauer（K-B）法。 138．血液凝固是指血液由流动状态转变为凝胶状态。 139．出血时间测定应采用测定器法。 140．测定凝血时间是反映内源性凝血系统的凝血功能。 141．妊娠试验酶免疫法是用酶标记α -HCG 抗体。 142．某人作白细胞计数，用 RCS 法进行考核，四个大格数分别为 56、68、72 和 60， 此结果不合格。 143．血小板计数用的复方尿素液中的尿素作用是破坏红细胞。 144．PT 主要检测外源性凝血系统功能，APTT 主要检测内源性凝血系统功能。 145．NAD 和 NADH 在波长 340nm 处有吸收峰，其摩尔消光系数为 6.22?10^-3。 146．室内质量控制主要是控制分析的精密度。空间质量评价则是控制分析的准确度。 五、问答题：针对相关问题作简明扼要的回答。 147．做凝血酶原时间测定(PT)时，ISI 是什么意思?有何意义? ISI 为每批组织凝血活酶的国际敏感指数(international sensitivity index， ISI)。 它表示 标准品组织凝血活酶与每批组织凝血活酶(PT)校正曲线的斜率。ISI 值越低，表示试剂 愈敏感。 148．为什么病毒一定要在活细胞内增殖? 病毒属非细胞形态的微生物，缺乏合成病毒核酸和蛋白质的原料、能量和酶类；病 毒核酸必须进入敏感细胞后才可利用宿主细胞的原料、能量和酶类，按其核酸指令进行 增殖。10149．何谓消毒、灭菌? 消毒是杀灭病原微生物的方法；灭菌是杀灭所有微生物的方法。 150．试述补体的主要生物学作用。 补体的主要生物学作用有：细胞溶解及杀菌作用；中性粒细胞趋化作用；过敏毒素 作用；中和病毒作用。 151．简述尿素氮和尿素的换算。 尿素氮和尿素的换算方法为： 根据 1 个尿素分子含 2 个氮原子， 或 60g 尿素含有 28g 氮计算，即 1g 尿素相当于 0．467g 尿素氮，或 1g 尿素氮相当于 2．14g 尿素。也可算 成尿素的 mmol 数，即 10mg／L 尿素氮等于 0．357mmol／L 尿素。 152．做凝血酶原时间(PT)测定时，INR 是什么意思?有何意义? INR(international normalizationratio，INR)是作 PT 测定时使用的国际标准化比值； 用其作为 PT 结果报告形式，并用以作为抗凝治疗监测的指标。 153．何谓菌群失调症? 正常情况下机体有一定种类和数量的细菌在体表与外界相通的腔道中寄居， 相互保 持相对平衡，因而不致病。若长期大量使用广谱抗生素，破坏了这种正常菌群的平衡状 态，一些被抑制，另一些未被抑制及外来耐药菌乘机大量繁殖。 154．病毒的致病作用包括哪几个方面? 病毒的致病作用包括：①溶细胞感染；②稳定状态感染；③携带状态感染；④恶性 转化。 155．简述机体抗肿瘤的细胞免疫效应。 机体抗肿瘤的细胞免疫效应：①致敏 T 淋巴细胞；②NK 细胞；③巨噬细胞；④K 细胞；⑤LAK；⑥TCL。 156．常用的区带电泳技术有哪些? 常用的区带电泳技术有：①滤纸电泳，有常压及高压两种；②薄层电泳，包括薄膜 及薄板两类，前者如醋酸纤维素薄膜，后者如硅胶等；③凝胶电泳，如用琼脂、聚丙烯 酰胺凝胶作电泳等。 157．简述普通生物显微镜的基本结构。 普通生物显微镜的基本结构分光学系统和机械系统两大部分。光学系统由反光镜、 光栅(光栏)、聚光器、接物镜、接目镜等部件组成。机械系统由镜座、镜臂、载物台、 转换器、镜筒、粗和细聚焦旋钮、载物台移动控制旋钮(推尺)等部件组成。 158．试述物镜上常用的一些数字。 物镜上常用一些数字表示其光学性能和使用条件。如&40／O．65&中&40&(或&40?&、 &40：1&)表示放大倍数，&0．65&(或&N．A．0．65&或&A0．65&)表示数值孔径。又如&160 ／0．17&中&160&表示使用该物镜时，显微镜的&机械筒长&应为 160mm，&0．17&表示使 用该物镜时，盖玻片厚度应为 0．17mm。 有的低倍物镜(如&4?&)在有无盖玻片的情况下均可使用，所以以&－&代替&0．17&。 159．简述物镜所使用的介质及其折射率。 空气(折射率为 1)用于干燥系物镜；水(折射率为 1．333)用于水浸物镜；香柏油(折 射率为 1．515)、甘油(折射率为 1．405)或石蜡油(折射率为 1．471)等用于油浸系物镜。 160．如何按放大倍数区分物镜? 放大 1～5 倍者称为低倍物镜，5～25 倍者为中倍物镜，25～65 倍者为高倍物镜， 90～100 倍者为油镜。 161．何谓镜口角?它与数值孔径有何关系? 镜口角是指从标本射过来的光线，伸展到接物镜下组透镜边缘所张的角，通常以α 表示。 数值孔径(numerical aperture，N．A．)又称为镜口率，其计算公式为：11N．A．＝η ?sin(α /2) η ：介质折射率α ：镜口角 N．A．是指光线从聚光器经盖片折射后所成光锥底面的孔径数字，为判断物镜或聚光 镜能力的重要依据。 从上式可知要提高 N． A． ， 可采取提高镜口角和介质折射率的办法。 采取提高镜口角的办法，即让标本尽量靠近物镜，但无论怎样靠拢物镜，α 总不会等于 180°，即α 总是&180°；当 a&180°，sin(α /2)&1；因空气的折射率=η =1，故干燥系 物镜的 N．A．总是小于 1，通常为 0．04～0．95 之间。 采取提高η 的办法，即在物镜与标本之间加入折射率较大的介质，如香柏油，此即为什 么要使用油镜的道理。 162．简述显微镜的维护。 (1)防潮：如室内潮湿，光学镜片容易生霉生雾，机械零件也极易生锈，故应将显微 镜置于干燥房间，显微镜箱内应放干燥剂，常用硅胶作干燥剂，并应注意经常检查或更 换。 (2)防尘：尘埃微粒可使镜头受损，故使用显微镜后，应罩好罩子；不要将目镜抽出，严 防尘埃进入光学系统。 (3)防震：强烈震动可使光学元件移位或使机械零件变形受损，故应放置于平衡、不晃动 的工作台上，且移动时应轻拿轻放。 (4)防腐蚀：显微镜不能和具有腐蚀性的物品或化学试剂如硫酸、盐酸等放在一起。 (5)防热：因温度升高 1℃，铁比玻璃多延伸约 3 倍，可引起镜片脱胶，故不能将显微镜 放在靠近火炉、暖气管和窗口，亦应避免在阳光下直晒。冬季将显微镜从寒冷处移到常 温房屋时，镜头玻璃及金属表面会产生水滴，以致引起发霉和生锈，应特别注意。 163．试述常用的天平及其用途。 普通天平：灵敏度差，根据载重量的不同，感量分为 0.1、0.2、0．5g 和 1．0g，四 种，适用于一般药物的称量。 分析天平：分摆动天平、双盘空气阻尼天平、双盘电光天平(半机械加码)、双盘全自动 电光天平(机械加码)和单盘电光分析天平等。此类天平灵敏度高，感量一般为 0．1mg， 适用于定量分析。 164．写出均数、标准差、标准误及变异系数的符号、公式及意义。 均数：符号为叉。均数代表一组观察值的集中趋势。如观察值较多，可用频数表计算法。 标准差：符号为 S。标准差代表一组观察值的离散程度。标准误：符号为或 SE。标准误是样本均数的标准差，即样本均数与总体均数的接近程度。12变异系数：又称离散系数，符号为 CV。变异系数是相对数，没有单位，因此更便于资 料之间的分析比较。CV 常用于比较均数相差悬殊的几组资料的变异度，或比较度量衡 单位不同的几组资料的变异度。165．如何计算抗体的平均滴度? 采用几何均数法：166．如何进行两均数的显著性检验? 进行显著性检验可用 t 检验法，不同类型的资料可用不同的方法。常用样本均数与 总体(理论)均数的比较、配对资料的比较、两样本均数的比较及两样本含量较大时的比 较。两个样本均数比较使用 t 检验时，如两样本方差相差太大，则应先检验两组方差的 差别是否有显著性；如差别有显著性，须用校正 t 检验，即 t′检验代替 t 检验。 167．何谓卡方检验? 检验两个或两个以上样本率或构成比之间差别的显著性，用卡方检验。基本数据只 有二行二列，则用四格表；如行数或列数大于 2，则用行?列表。 168．何谓真值、定值、准确度及精密度? 真值是用最可靠的决定性方法， 即没有偏差或只有已知偏差的最佳条件下定量测得 的数值。在生化检验时，真值在绝大多数情况下是不能确切测得的。 定值是指标定的质控材料的已知值。 准确度是指测定结果与真值接近的程度。 精密度是指对同一样品多次测定，每次测定结果和多次结果均值接近的程度，也就是对 同一样品重复分析的结果间的符合程度。 169．何谓决定性方法、参考方法、医学决定水平、允许误差? 决定性方法：这类方法的准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有发现 产生不准确性的原因和不明确的方面。测定结果为确定值，与真值最接近。 参考方法：指精密度与准确度稍微低于决定性方法，其各种轻度干扰因素为已知的分析 方法。 医学决定水平：是指某项待测成分的某一浓度，围绕该浓度的升高或降低，对确定疾病 的诊断或治疗起帮助甚至关键的作用。 允许误差有两种提法： (1)按照医学使用时有决定性作用的浓度为依据。 允许误差一般采 用 ±2SD。(2)根据参考值范围或生物学变异决定，Tonks 提出以参考值范围的 1／4 为允许误差， 后又提出以测定值的士 10％为允许误差。 170．什么是室内质量控制?其目的是什么? 室内质量控制系各实验室为了监测和评价本室工作质量， 以决定常规检验报告能否 发出所采取的一系列检查、控制手段，旨在检测和控制本室常规工作的精密度，并检测 其准确度的改变，提高本室常规工作中批间和日间标本检测的一致性。13171．什么是&OCV&和&RCV&? OCV(optimalconditionsvarianee)：即最佳条件下的变异。它是指在某一实验室内， 在最理想和最恒定的条件下，对同一质控物进行反复测定，能得出的最低变异。是在目 前条件下本室该项目检测所能达到的最好的精密度水平， 是本室工作水平的一个基础指 标。 RCV(routineconditionsvariance)：即常规条件下的变异。是指在某一实验室内，常规条件 下测定，质控物所得出的变异。它反映常规条件下该项目的精密度水平。它不仅可以用 于比较不同方法、仪器、操作者等在常规工作下的精密度，而且是室内质量控制中靶值 和允许误差范围确定的依据。 172．在质量控制中，如何判断失控? 对失控的判断标准有许多不同主张。目前，采用最广泛的原则是当质量控制血清的 检测结果超出 起结果超出 ±3SD 范围时，即判断为失控。因为按统计学的原理，由随机误差引 ±3SD 范围的可能性小于 0．3％。对于几十次测定而言，实际上是不可能发生的，一旦发生则提示可能存在非随机误差或特殊情况。 173．什么是室间质量评价?评分方法是什么? 室间质量评价即由实验室以外的某个机构对各实验室常规工作的质量进行监测和评 定，以评价各实验室工作质量，逐步提高常规检测的准确性和可比性。在我国，室间质 量评价由各级临床检验中心组织实施。 室间质量评价最常用的评分方法为 VIS 法。 174．何谓变异指数及变异指数得分? 变异指数(Variance Index 简写为 VI)： 室间评价通过测定控制血清， 可得到两个主要 指标：一是均数，二是变异指数。前者作为室间评价的参考靶值，后者是表示实验误差 的指标。按下式先计算每一个实验室某一项实验结果的变异百分数(V)： V＝(｜X｜/ )× 100X=某实验室测定某一项实验结果 X=同一实验项目的所有实验室测得结果的均数 然后计算变异指数(VI)： VI=V/CCV× 100 VI=变异指数(乘 100 是为了去掉小数)，表示实验室测定结果的变异百分数为选定的 CV 的倍数 CCV=选定的变异系数，一般是采用评价活动中前一时期所得较好的变异系数作为 CCV 变异指数得分(VIS)， 即用变异指数计分， 当 VI&400 时， VIS=VI； 当 VI≥400 时， VIS=400。 室间质量评价活动中，VIS≤80 为优秀；VIS≤150 为及格；VIS 最大值为 400。一般认 为 VIS&200，表明结果有临床上不允许的误差；VIS=400 的测定结果则会造成临床上的 严重失误，是绝对不许可的。 175．Westgard 多规则质控常用规则有哪些? 有：( ：平均数；s：标准差) ±2s，为违背此规则，提示警告。 ±2．5s，为违背此规则，提示存在随机误差。l2s：一个质控结果超过 l2.5s：一个质控结果超过14l3s:一个质控结果超过±3s，为违背此规则，提示存在随机误差。 +2s， 另一质控结果超过 -2s。R4s： 同批两个质控结果超过 4s， 即一个质控结果超过 也适用于超过 +2．5s 及-1．5s，为违背此规则，表示存在随机误差。 +2s 或 -2s，为违背此规则，表示存在系统误差。 +1s 或 -1s，两个质控品连续两次测定都22s：两个连续质控结果同时超过41s 一个质控品连续四次测定结果都超过 超过 10 +1s 或-1s，为违背此规则，表示存在系统误差。：十个连续的质控结果在平均数一侧，为违背此规则，表示存在系统误差。176．为什么要参加室间质量评价? 室间质量评价的目的是相互校正各参与实验室测定结果的准确性， 要求保持在临床 所能接受的误差范围内，从而使参加活动的实验室之间结果有可比性。故室间质评着重 考察检验操作的整体状态。 177．室内质量控制与室间质量评价有何关系? 由于室间质量评价活动是借助外部力量进行回顾性检查， 而不能控制实验室每天所 发出的报告质量，故不能代替室内质量控制。相反，只有首先搞好室内质量控制，保证 检验结果达到一定的精密度， 才能得到较好的室间质评成绩和达到室间质评结果可比性 的目的。 当室间质量评价中某一项目出现明显差异时， 又要从室内质量控制中寻找原因， 订出改进计划，确切地保证本实验室检验结果质量。 178．解释几个有关质量控制名词：参考物、校准物、质控物、质控方法、质控图。 (1)参考物(referencematerials)： 所含欲测物的量是用参考方法或用与参考方法可比的 其他方法测出来的，其所定的值应有高度准确性。参考物常由权威或官方机构所承认。 (2)校准物(calibrationmaterials)：含有已知量的欲测物，用以校准该测定方法的数值。商 品试剂盒中常带有校准物并有标示值，它与该方法及试剂相关联，由于有介质效应，所 标示的值可能与真值有偏差。 (3)质控物(controlmaterials)：用于和待测标本共同测定，以控制样品的测定误差。最理 想的质控物是用与待测标本相同的介质制备，而且要求保存期间十分稳定。 (4)质控方法(controlprocedures)：以统计学方法确定质控测定值是否不同于已知值的方 法，也称统计质量控制方法。 (5)控制图(controlcharts)：系评价测定结果是否处于统计控制状态的一种图表。控制限 (controllimits)是在控制图上作出需要行动信号的标准，或判断一组数据是否处于控制状 态之中的标准。控制限由上限和下限规定可接受的范围。 179．诊断灵敏度、诊断特异性、预期值和总有效率如何计算? 诊断灵敏度=TP/(TP+FN)?100％ 诊断特异性=TN/(TN+FP)?100％ 诊断特异性=(PV+)=TP/(TP+FP)?100％ 阳性结果的预期值(PV+)=TN/(TN+FN)?100％ 阴性结果的预期值(PV-)=TN/(TN+FN)?100％ 总有效率=(TP+TN)/(FP+FP+TN+FN)?100％ 注：TP 为真阳性；TN 为真阴性；FP 为假阳性；FN 为假阴性。 诊断灵敏度为所有病人(TP+FN)中获得阳性(TP)结果的百分数。诊断特异性为所有这类15疾病的人群(TN+FP)中获得阴性结果(TN)的可能性。 阳性结果的预期值(PV+)为所有阳性 结果中正确的阳性百分率。阴性结果的预期值(PV-)为所有阴性结果中正确阴性的百分 率。总有效率指所有检验结果中正确结果的百分率。在临床运用中，主要以阳性结果的 预期值观察检测结果的使用价值。 180．什么是分析范围、干扰和介质效应? 分析范围是指使用某法可以测定到准确结果的浓度范围，可以从标准曲线来估计， 但要注意介质效应。 干扰是指由于存在于标本或试剂中的其他物质干扰了该法的反应。 干扰带来的误差属于 恒定误差。 介质效应：分析标本中除了分析物以外的所有其他组分称为介质。它是指分析方法在分 析测定时，介质参与反应的影响。它可以是加强反应，也可以是抑制反应。从方法学讲 介质效应并不是干扰。 181．临床检验各项报告如何将惯用单位改为国际单位(SI)制? 一般有下面几种变换方法： (1)凡一价元素(如 K+、Na+、Cl-)原来以 mEq／L 报告者，改为 mmol／L，其值不变。 如多价者，即&mEq／L÷价数=mmol／L&。 (2)除蛋白质(包括血红蛋白)及酶以外，所有临床化学项目，均以&mol／L&(因数值不一， 可用&mmol／L&或&μ mol／L&)报告。其换算方法是： SI 制单位=惯用单位?换算系数* 惯用单位=SI 制单位÷换算系数* 换算系数=1/分子量?10 如葡萄糖分子量为 180，则葡萄糖换算系数为： 1/180?10＝0．0555 (3)蛋白质类使用&g／L&或&mg／L&报告方式。 (4)凡使用&％&者改为&0．??&。如白细胞分类中&N60％&改为&N0．60&；其他如 PSP、 蛋白电泳均改为&0．??&。 (5)血细胞和体液细胞计数过去报告为??／mm3(或μ L)，现改为 1 升(1L)中细胞数， 分子以?10χ 表示，如： WBC5600／mm3 改为 5．6?10＾9／L RBC520 万／mm3 改为 5．2?10＾12／L 血小板 20．5 万／mm3 改为 205?10＾9／L (6)酶活性单位很不统一，国际单位制规定用 Kat 表示，国际计量委员会尚未批准这个建 议，故暂用原来单位。 182．试述血液的一般物理性质。 血液是由血细胞和血浆两部分组成的红色粘稠混悬液， 血浆约占 55％， 血细胞约占 45％。血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。血浆是一种复杂的胶体溶液，组成非常恒 定，其中固体成分占 8％～9％，水分占 91％～92％。固体成分包括各种血浆蛋白、营 养成分、无机盐、维生素和代谢终产物等。 血液 pH 为 7．35～7．45，比重为 1．050～1．060，相对粘度为 4～5，血浆渗量(渗透 压)为 300mOsm／kgH2O，血液离体后数分钟即自行凝固。 183．简述枸橼酸钠、草酸盐及肝素的抗凝机制。 (1)枸橼酸钠与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。 (2)草酸盐可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。 (3)肝素是一种含硫酸基团的粘多糖，可以加强抗凝血酶Ⅲ(ATⅢ)灭活丝氨酸蛋白酶，因 而具有阻止凝血酶形成的作用。 184．什么抗凝剂最适宜于血液常规检验?试简述其原理。16乙二胺四乙酸(EDTA)盐最适宜于血液常规检验。其原理是 EDTA 与血中钙离子结 合形成螯合物，从而阻止血液凝固。EDTA 盐通常有二钠、二钾或三钾盐。 185．简述改良牛鲍(Neubauer)型计数盘的结构。 改良牛鲍型计数盘具有两个同样结构的计数室。加血盖片后其高度为 0．1mm。计 数室长宽均为 3mm，平分为 9 个大方格，每个大方格(又平分为 16 个中方格)长宽均为 1mm，故加盖充液后每大方格容积为 0．1mm3。为便于计数，中央大方格又用双线分 为 25 个中方格，每个中方格又再分为 16 个小方格。通常四角的四个大方格为计数白细 胞用；中央大方格内取五个中方格(四角四个及正中一个)为计数红细胞和血小板用。 186．血细胞计数时，常见的误差有哪些? (1)技术误差：①取血部位不当；②稀释倍数不准；③血液凝固；④充液不当；⑤稀释血 液后混合不匀；⑥计数红细胞时，白细胞过多的影响，或计数白细胞时，有核红细胞影 响；⑦计数红细胞时，血浆自身凝集素或球蛋白过高；⑧仪器误差。 (2)固有误差：即使技术熟练者，使用同一仪器，用同一稀释血液多次充池计数，结果也 常有一定差异。 187．测定血红蛋白的推荐方法是什么?简述其原理。 氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法是国际血液学标准化委员会推荐， 并经世界卫生组 织确认的测定血红蛋白的参考方法。 血液在血红蛋白转化液中溶血后，除硫化血红蛋白(SHb)以外的各种血红蛋白均可被高 铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白(Hi)，其与 CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白 (HiCN)。 188．氰化高铁血红蛋白法测定血红蛋白的主要优点是什么?有什么缺点? 主要优点是操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保存，能测定除 SHb 以外的所有 血红蛋白，并易于建立质量控制。主要缺点是血红蛋白转化液中，KCN 为剧毒试剂， 故严禁用口吸转化液，使用时应严加防范，比色废液应妥善处理。 189．氰化高铁血红蛋白法测定血红蛋白后的废液应如何处理? 比色废液可按每升加次氯酸钠液(安替福民)约 35mi。的比例混匀敞开过夜(使 CN－ 氧化成 CO2 和 N2 挥发，或水解成 和 )，再排入下水道。190．试解释氰化高铁血红蛋白法测定血红蛋白的计算公式。 计算公式为： 血红蛋白(g／L)=测定管吸光度??251=测定管吸光度?367．7 式中，64458 为目前国际公认的血红蛋白平均分子量。 44000 为 1965 年国际血液学标准化委员会公布的血红蛋白摩尔吸光系数。 251 为稀释倍数。 191．按计数细胞的原理，电子血细胞计数仪可分为多少型?目前通用的是什么型? 可分为光电型、电容型、电阻抗型和激光型。由于电阻变化容易检测，性能稳定， 因此应用最广。目前国产电子血细胞计数仪多为电阻抗型。 192．何谓库尔特原理 20 世纪 50 年代库尔特(W．H．Coulter)发明并申请了粒子计数技术的设计专利。其 原理是根据血细胞非传导的性质， 以电解质溶液中悬浮的白细胞在通过计数小孔时引起 的电阻变化进行检测为基础，进行血细胞计数和体积测定，此法被称为电阻抗法，亦被 称为库尔特原理。 193．显徽镜法校正血液分析仪用什么公式计算? 白细胞计数及分类有两种方法，一种是显微镜目视法，一种是血液分析仪法。前者 是基础，血细胞分析仪要根据显微镜法准确计数结果进行校正后方能使用。但这种计数 应根据统计学研究白细胞计数结果的总变异系数进行分析。总变异系数的公式为：17公式中以 nb 为所见细胞实际数目，nc 为用计算盘次数，np 为用吸管的次数。 194．使用自动血细胞分析仪对血标本有什么要求? (1)从采集部位上一般要求用静脉抗凝血， 因不同部位皮肤穿刺血的细胞成分和细胞 与血浆比例常不一致，与静脉血差别较大；毛细血管采血量少，对自动化仪器而言，不 易达到检测要求量，更不便于有疑问时复查；从病人角度，静脉穿刺更可防止因毛细管 采血消毒不严带来的交叉感染；从仪器设计上讲静脉抗凝血有利于对仪器的保护。 (2)一般而言．采用抗凝血在室温下，WBC、RBC、PLT 可稳定 24 小时(但 PLT 不宜在 低温下贮存)，白细胞分类可稳定 6～8 小时，Hb 可稳定数日。如作镜下白细胞分类，2 小时后粒细胞形态即有变化，故应及时推制血片。上述保存时间还需根据各仪器说明书 酌定，因各型仪器所用试剂各异。 195．病理因素对血细胞分析仪使用有何影响? ①某些疾病血中含有冷球蛋白或冷纤维蛋白(如骨髓瘤、血栓性疾病等)等，均可导 致血液中某些物质凝集，致使血细胞计数增高；②血液中白细胞显著增高而影响红细胞 计数或出现有核红细胞影响白细胞计数；③低色素性贫血或红细胞内含有大量 SHb 或 Hb-CO，或某些新生儿、某些肝病病人红细胞膜质异常，抵抗溶血剂作用，导致溶血不 完全；④多发性骨髓瘤的 M 蛋白增多时，在 pH 低的情况下，M 蛋白可与溶血剂发生反 应而使结果偏高；⑤各种病因引起的血栓前状态使血小板易于聚集而影响结果。 196．血细胞分析仪在白细胞分类上进展如何? 血细胞分析仪的改进主要体现在白细胞分类部分， 即由电阻抗法三分群发展为多项 技术联合同时检测一个细胞，综合分析实验数据，得出较为准确的白细胞分群结果。目 前主要有以下四种类型。 (1)容量、电导、光散射(VCS)白细胞分类法。VCS 技术可使血细胞未经任何处理，与体 内形态完全相同的自然状态下得出检测结果。 (2)阻抗与射频技术联合的白细胞分类法。 这类仪器通过四个不同白细胞的检测系统完成 分群。 (3)光散射与细胞化学技术联合应用于白细胞分类计数。 本仪器系联合应用激光散射和过 氧化物酶染色技术。 (4)多角度偏振光散射白细胞分类技术。 其原理是一定体积的全血标本用鞘流液按适当比 例稀释，其白细胞内部结构似乎自然状态。 197．血细胞计数仪进行白细胞分类计数可否代替显微镜涂片分类? 近年来血细胞计数仪已可进行五分类，使细胞分析更精确、更准确，但仍有不足之 处，如不能对单个细胞完全识别，特别是白血病细胞和正常单核细胞、异常的不典型的 淋巴细胞等的区别；而显微镜涂片染色除细胞大小外，还要根据细胞的染色反应，核的 形态、有无核仁及染色质着色情况，胞质的着色及颗粒等确定细胞类别，故血细胞分析 仪的白细胞分类计数不能完全代替显微镜法。 198．哪些病理情况可见红细胞增多或减少? 增多可见于：①真性红细胞增多症；②相对性增多，由于大量失水，使血浆减少， 血液浓缩，血中各种血细胞包括红细胞均相对增多，如连续呕吐、反复腹泻、出汗过多、 大面积烧伤等；③绝对性增多，如长期缺氧，可引起红细胞代偿性增生，如慢性肺心病。 减少可见于：①造血原料不足；②造血功能障碍；③红细胞丢失或破坏过多所致的各种 贫血。 199．哪些生理因素可引起红细胞和血红蛋白增加或减少? (1)年龄与性别： 新生儿期红细胞与血红蛋白均明显增高， 出生两周后逐渐下降到正常水18平；女性由于月经、内分泌等因素，21～35 岁者红细胞和血红蛋白均维持最低水平。 (2)精神因素：感情冲动、兴奋、恐惧、寒冷等刺激均可使肾上腺素过多分泌，导致红细 胞和血红蛋白增加。 (3)高山居民和登山运动员可因缺氧而导致红细胞和血红蛋白增高。 (4)长期多次献血者红细胞可代偿性增加。 (5)妊娠中后期、某些老年人及 6 个月至 2 岁婴儿均可出现生理性贫血。 200．为什么有时已知血红蛋白量，还要作红细胞计数? 如只需了解有无贫血和贫血恢复程度，可以只测血红蛋白；但在各种贫血时，由于 红细胞平均血红蛋白含量不同，红细胞和血红蛋白两者减少程度可不一致。因此必须同 时测定，以鉴别贫血类型。 201．什么是网织红细胞? 网织红细胞(reticulocyte)是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细 胞。因其胞质内尚存留多少不等的嗜碱性物质 RNA，经煌焦油蓝、新亚甲蓝等活体染 色后，嗜碱物质凝聚成颗粒，其颗粒又可联缀成线，而构成网织状，此种红细胞即网织 红细胞。 202．检测网织红细胞有些什么方法?如何评价? 常规采用玻片法，由于玻片法容易使混合血液中的水分蒸发，染色时间偏短，因此 结果偏低。试管法容易掌握，重复性较好，被列为手工法网织红细胞计数的参考方法。 近年来，国内使用米勒窥盘进行计数，规范了计算区域，减少了实验误差，使结果准确 性有所提高。 目前，国外逐步使用网织红细胞仪器法测定，可自动染色、自动分析，自动打印出各阶 段网织红细胞的分布图，结果准确。 最新血细胞分析仪的应用，为网织红细胞计数提供了更先进的测试手段，这类仪器采用 荧光染色和激光测量的原理，不但能客观地测量大量网织红细胞，而且还能根据荧光强 度，将其分为高荧光强度、中荧光强度和低荧光强度三类，这种分类法对估计化疗后骨 髓造血功能的恢复及骨髓移植效果有较重要的意义。 203．测定网织红细胞有何意义? 网织红细胞参考值： 成人为 0． 008～0． 02， 或(25～75)?10^9／L； 初生儿为 0． 02～ 0．06。 (1)网织红细胞计数可以判断骨髓红细胞系统造血功能，如溶血性贫血和急性失血后 5～ 10 天，网织红细胞增高。而典型再生障碍性贫血病例，则降低。 (2)可作为疗效观察指标，故网织红细胞计数为对贫血病人经常随访检查项目之一。 (3)有人认为仅用网织红细胞百分比或绝对值表达还不够确切， 为此提出在贫血时最好计 算网织红细胞生成指数(reticulocyte production index，RPI)。它代表网织红细胞的生成相 当于正常人的多少倍。 RPI=（网织红细胞比例?100/2）?（病人红细胞比积/正常人红细胞比积） &2&为网织红细胞成熟时间(天)，正常人红细胞比积，男性定为 0．45，女性为 0．40。 如红细胞比积正常时，网织红细胞成熟时间应为 1 天。网织红细胞比值即在油镜下选择 红细胞分布均匀、网织红细胞染色较好的部分计数 1000 个红细胞中的网织红细胞数， 除以 1000 即为网织红细胞比值。 也可用网织红细胞校正值(corrected reticulocyte count)报告(见下式)： 网织红细胞校正值=网织红细胞比值?（病人红细胞比积/正常人红细胞比积） 204．目视法计数白细胞的质量考核办法有哪些? 集体考核可用变异百分率评价法；个人考核可用两差比值法、双份计数标准差评价 法或常规考核标准(RoutineCheckingStandard，RCS)法。双份计数标准差评价法亦可用于 两个单位对口检查。19205．简述变异百分率评价法的评分方法。 变异百分率评价法采用下面公式：式中：V：变异百分率。 m：靶值，可用同一样品多人计算的均值代替。 ：被考核者报告值。 计分：质量得分=100-(V?2) 评价：90～100 分为 A 级(优) 80～89 分为 B 级(良) 70～79 分为 C 级(中) 60～69 分为 D 级(及格) &60 分为 E 级(不及格) 本法适用于人数较多(如 30 人以上)的技术考核，或市、区集体考核。 206．白细胞计数时，如有有核红细胞，如何扣除? 按下述公式计算： 白细胞／L=A?(100/100+B) A：校正前白细胞／L B：在血涂片上分类计数 100 个白细胞时遇到的有核红细胞数 207．简述白细胞计数增减的临床意义。 大部分化脓性细菌尤其是各种球菌所引起的感染，均可使白细胞升高；其次如中毒 (尿毒症、糖尿病酮症酸中毒、汞中毒、铅中毒)、急性出血、急性溶血、手术后、恶性 肿瘤、粒细胞性白血病等，白细胞亦可增加。 某些传染病包括病毒感染及某些血液病如再生障碍性贫血、少部分急性白血病、粒细胞 缺乏症、化学药品及放射损害，以及脾功能亢进等时，白细胞数均减少。 208．有哪些生理变化可影响白细胞计数? (1)年龄：新生儿期白细胞计数较高，可达 15?10^9～30?10^9／L，通常在 3～4 天后 降至 10?10^9／L。初生儿外周血以中性粒细胞为主，第 6～9 天逐渐下降至与淋巴细 胞大致相等。整个婴儿期淋巴细胞均较高，可达 0．70。 (2)日间变化：一般安静松弛时白细胞较低，活动和进食后较高；早晨较低，下午较高， 一日之内可相差一倍。 (3)运动、疼痛和情绪影响：剧烈运动、剧痛、极度恐惧等均可使白细胞短时增高。 (4)妊娠与分娩：妊娠期特别是最后一个月白细胞可增高，分娩时可高达 34?10^9／L， 产后 2～5 日内恢复正常。 由于生理因素，同一被检测对象白细胞计数甚至可波动 50％。 209．何谓中性粒细胞核左移、核右移?有什么临床意义? 核左移： 外周血中中性杆状核粒细胞增多， 甚至出现更幼稚细胞(包括原始粒细胞)， 称为核左移。核左移的粒细胞常伴有中毒颗粒、空泡变性、核变性等质的改变，常见于 各种感染，特别是急性化脓性感染和白血病，也可见于急性中毒和急性溶血。 核右移：正常中性粒细胞以三叶核者为主，若五叶核以上者超过 3％，则称核右移。核 右移为造血功能衰退或缺乏造血物质所致。 常见于营养性巨幼红细胞性贫血、 恶性贫血、 抗代谢药物应用后。在疾病进行期突然出现核右移，为预后不良之兆。但在疾病恢复期 亦可出现一过性核右移现象。20210．什么情况可引起淋巴细胞增减? 淋巴细胞增多可见于某些病毒或细菌所致的急性传染病，某些慢性感染，淋巴细胞 性白血病，再生障碍性贫血及粒细胞缺乏症(淋巴细胞相对增多)，肾移植术后(排异前 期)。淋巴细胞减少主要见于接触放射线及应用肾上腺皮质激素或促肾上腺皮质激素； 严重化脓性感染，由于中性粒细胞显著增多，淋巴细胞百分率减低，但绝对值仍在正常 范围。 211．异型淋巴细胞是如何产生的?按其形态特征可分为几型? 在传染性单核细胞增多症、病毒性肺炎、流行性出血热、湿疹、过敏性疾病等病毒 性感染或过敏原刺激下， 可使淋巴细胞增生， 并出现某些形态变化， 称为异型淋巴细胞。 近年来免疫学研究认为，异型淋巴细胞即 T 淋巴细胞。 Downey 按异型淋巴细胞的形态特征，将其分为三型：Ⅰ型为空泡型，最多见；Ⅱ型为 不规则型；Ⅲ型为幼稚型。 212．血小板计数有些什么方法? 血小板计数(blood platelet count，BPC)方法主要分为两类：血细胞分析仪法和目视 显微镜法。血细胞分析仪法重复性好，而且可发测锝血小板平均体积(MPV)和血小板体 积分布宽度(PDW)。一般均以全血标本检测；但由于仪器计数不能完全区分血小板与其 他类似大小的物质(如红细胞或白细胞碎片、灰尘等杂物)，因而有时仍需以显微镜计数 校正之，因而仍将显微镜(特别是相差显微镜计数)．法作为参考方法。显微镜法又可分 为普通光镜法和相差显微镜法，后者准确率高，血小板易于识别。在各种稀释液中，无 论血细胞分栎仪器法或显微镜法，多以草酸铵溶血法作为参考。国内亦将此稀释液定为 首选溶血剂。 213．用草酸铵溶血剂计数血小板有何优点? 对红细胞破坏力强，血小板形态清楚。 214．复方尿素法作血小板计数的稀释液中备成分有何作用? 稀释液中尿素破坏红细胞， 使其溶血； 枸橼酸钠起抗凝作用； 甲醛既可固定血小板， 又可防腐。但尿素易于分解，且有时不能使红细胞完全溶解，反使计数发生困难。 215．有些什么生理变化影响血小板数? (1)正常人每天血小板数有 6％～10％的波动，一般清晨较低，午后略高；春季较低，冬 季略高，静脉血平均值较毛细血管血约高 10％。 (2)新生儿较婴儿低。出生 3 个月才达到成人水平。 (3)妇女月经前较低，经期后逐渐上升，妊娠中晚期升高，分娩后降低。 (4)剧烈活动和饱餐后暂时升高。 216．简述血小板的病理性变化 (1)血小板减少； ①血小板生成减少， 妇急性白血病、 再生障碍性贫血、 某些药物影响等； ②血小板破坏过多，如免疫性或继发性血小板减少性紫癜、脾功能亢进等；③血小板消 耗过多，如弥散性血管内凝血、血栓性血小板减少性紫癜等。 (2)血小板增多： 常见于慢性粒细胞性白血病、 原发性血小板增多症、 真性红细胞增多症、 急性化脓性感染、急性出血后及脾切除手术后等。 217．嗜酸性粒细胞在什么病理情况下增多?嗜酸性粒细胞计数可动态观察哪些疾病? 嗜酸性粒细胞在变态反应、某些皮肤病、寄生虫病及血液病等时增多，其他如猩红 热、X 线照射、脾切除及传染病恢复期等因素均可使之增多。计算嗜酸性粒细胞还可用 于观察急性传染病和估计手术及烧伤病人的预后，以及测定肾上腺皮质功能。 218．为什么注射促肾上腺皮质激素(ACTH)后，嗜酸性粒细胞反而下降? ACTH 可促使肾上腺皮质分泌肾上腺皮质激素， 而该激素有阻止骨髓释放嗜酸性粒 细胞，并有促进血液中嗜酸性粒细胞进入组织的作用，故当肾上腺皮质功能正常时，注 射 ACTH 后，在一定时间内，血中嗜酸性粒细胞降低。21219．瑞特(Wright)染色法的原理是什么? 美蓝和伊红水溶液混合后， 产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀， 即瑞特染料。 瑞特染料溶于甲醇后，又重新解离为带正电的美蓝(M+)和带负电的伊红(E-)离子。各种 细胞和细胞的各种成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样，因而细胞或组织 用瑞特染料进行染色后， 可呈现不同的色彩。 例如血红蛋白和嗜酸性颗粒为碱性蛋白质， 与酸性染料伊红结合染成粉红色；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝 或天青结合染成蓝色或紫色；中性颗粒成等电状态，与伊红和美蓝均可结合，染成紫红 色。 220．血片用瑞特染色法时，pH 对其有何影响? 细胞主要成分均为蛋白质构成，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液 pH 而 定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏碱性环境中负电荷增 多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。 221．如何检查瑞特染液质量? 采用吸光度比值(ratio of absorption， rA)，即用 15～25μ L 染液加甲醇 10mL，稀释， 在 650nm 和 525nm 比色(美蓝、伊红吸收峰波长分别为 650 和 525，天青也是 650)。 rA=A650／A525。如 rA 下降到 1．3±0．1 时，即可使用。瑞特染液在储存过程中必须 塞严，以防甲醇挥发和被氧化成甲酸。 222．何谓红细胞沉降率(ESR)?其机制是什么? ESR 是红细胞在一定条件下沉降的速度。其机制尚未完全阐明，但 ESR 是多种因 素互相作用的结果。这些因素包括： (1)血浆因素(如血浆中纤维蛋白原或球蛋白增多可使血沉增快)； (2)红细胞因素(如红细胞总面积减少或其直径增大、厚度薄，血沉增快)； (3)血沉管的位置(如血沉管倾斜可使血沉增快)。 223．测定血沉的推荐方法是什么?对抗凝剂有什么要求? 国际血液学标准化委员会推荐魏氏(Westergren)法为测定血沉的标准法。要求用 109mmol／L 枸橼酸钠溶液，通过最大孔径为 O．22μ m 的无菌膜过滤，在无菌容器中 保存，不加防腐剂。如混浊则弃去不用。我国在 1983 年全国临床检验方法学学术会上 亦推荐魏氏法作为血沉的参考方法。 224．血沉测定有何临床意义? 妇女月经期和妊娠 3 个月以上，以及 60 岁以上老人血沉增高，此为生理性的。 病理性增高可见于①各种炎症；②恶性肿瘤；③高胆固醇血症；④组织损伤及坏死，如 较大手术创伤和心肌梗死； ⑤各种原因导致的高球蛋白血症， 如亚急性感染性心内膜炎、 系统性红斑狼疮等；⑥贫血，贫血系因红细胞数减少，下沉时受到摩擦阻力减少等原因 所致。 血沉减慢意义较小，可因红细胞数明显增多或纤维蛋白原严重减低，见于各种原因所致 的脱水血浓缩、真性红细胞增多症和弥散性血管内凝血等。 225．简述红细胞比积测定方法及临床意义。 红细胞比积(hematocrit， HCT)是将 EDTAK2 抗凝血在一定条件下离心沉淀， 由此而 测出其红细胞在全血中所占体积的百分比。 HCT 测定方法很多，有折射计法、粘度法、比重测定法、离心法、电阻抗法和放射核素 法等。 放射核素法为参考方法， 但非一般实验室所能开展。 离心法测定 HCT、 不够精确， 因无法完全排除红细胞之间的残留血浆，故温氏离心法已属淘汰之列，渐为微量高速离 心法替代。微量高速离心法用血量少、测定时间短、精度(CV)为 1％～2％，但对某些 血液病样品则血浆残留量仍较多。仪器法必须经参考方法校正后才能得出准确结果。目 前多用微量高速离心法。 参考值：微量法男 0．467±0．039，女 0．421±O．054；温氏法男 O．40～0．54，女220．37～0．47。 HCT 增高可见于各种脱水和大面积烧伤病人；测定 HCT 可了解血液浓缩情况，作为补 液计算的依据；HCT 常用作计算平均红细胞容积(MCV)和平均红细胞血红蛋白浓度 (MCHC)，有助于贫血的鉴别诊断；各种贫血时，红细胞减少，HCT 常随之减低，但因 不同性质贫血时红细胞大小不同，如此情况下，两者并不平行。 226．写出凝血因子及其名称。 因子Ⅰ(纤维蛋白原)、Ⅱ(凝血酶原)、Ⅲ(组织因子 TF)，Ⅳ(钙离子)、Ⅴ(易变因子)、 Ⅶ(稳定因子)、Ⅶ(抗血友病球蛋白)、Ⅸ(血浆凝血活酶成分)、Ⅹ(Stuart-Prower 因子)、 Ⅺ(血浆凝血活酶前质)、Ⅻ(接触因子)、 (纤维蛋白稳定因子)、PK(又称 Flether、激肽释放酶原)、HMWK(又称 Fitzgerald、高分子量激肽原)。 227．机体正常止血决定于哪些因素? 机体正常止血主要依赖于完整的血管壁结构和功能， 有效的血小板质量和数量以及正常 的血浆凝血因子活性。其中血小板和凝血因子的作用是主要的。 228．简述凝血过程。 在生理条件下，凝血因子一般处于无活性状态；当这些因子被激活后，即发生一系 列酶促反应。传统的&瀑布学说&将凝血过程分为下面几步反应。 (1)内源性凝血途径：指从因子Ⅻ激活，到Ⅸa-PF3-Ca2+-Ⅷa 复合物形成后激活因子Ⅹ的 过程。 (2)外源性凝血途径：指从因子Ⅶ被激活到形成Ⅶ或Ⅶa-Ca2+-TF 复合物后激活因子Ⅹ的 过程。 所谓内源性或外源性凝血并非绝对独立而是互相联系的，说明凝血机制的复杂性。 (3)凝血共同途径：指从因子Ⅹ的激活到纤维蛋白形成的过程，它是内、外凝血系统的共 同凝血阶段。 229．现代&组织因子途径学说&与传统&瀑布学说&有哪些不同之处? 主要有以下几个不同之处： (1)体内凝血由组织因子(TF)启动。 (2)活化的因子 X(Xa)和因子 V(Va)，使凝血酶原变为凝血酶。 (3)TF 被激活并与Ⅶ。形成复合物后，会被组织因子途径抑制物抑制。 (4)组织因子不仅存在于血管内皮及血管下纤维母细胞等组织细胞中， 而且存在于单核细 胞及肿瘤细胞中，当受到内毒素、抗原等刺激后，会被活化并启动凝血。 230．常规血栓止血筛选试验有哪些要求，包括哪些试验? 筛选试验要求快速、准确、实用，能够覆盖大部分出血原因。常规筛选试验一般有： 血小板计数、出血时间、血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维 蛋白降解产物(FDP)测定等。 231．机体抗凝系统分哪两类，各指什么? 抗凝系统分为细胞抗凝和体液抗凝。 细胞抗凝主要指正常血管内皮细胞的抗血栓功 能和网状内皮系统细胞通过清除血循环中的抗凝物质而完成的抗凝作用。 体液抗凝包括 抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)，蛋白 C 系统(PC－S)和组织因子途径抑制物(TFPI)。 232．什么是出血时间?简述出血时间的方法及临床意义。 将皮肤毛细血管刺破后，血液自然流出到自然停止所需的时间称为出血时间 (bleeding time，BT)。BT 的长短主要受血小板数量和功能以及血管壁的通透性和脆性的 影响，而血浆凝血因子影响较小。 BT 测定， 以前用 Duke 法已停止使用， 因其虽操作简单， 但穿刺深度、 宽度难以标准化， 且受穿刺部位毛细血管分布及血管收缩程度的影响，致使实验的敏感性很差；Ivy 法虽 较 Duke 法敏感；但操作繁琐，皮肤切口大，不仅难以标准化，且创伤性大，影响因素23也较多，因而难以推广。若临床怀疑血管异常所致出血性疾病(如血管性血友病、单纯 性紫癜、过敏性紫癜等)，应使用测定器法(tem－platebleedingtime，TBT)测定出血时间。 测定器法参考值为 6．9±2．1min。 BT 延长见于：①血小板明显减少，如原发性或继发性血小板减少性紫癜；②血小板功 能异常， 如血小板无力症和巨大血小板综合征； ③严重缺乏血浆某些凝血因子所致疾病， 如 vWD、DIC；④血管异常，如遗传性出血性毛细血管扩张症；⑤药物干扰，如服用乙 酰水杨酸、双嘧达莫等一。 233．什么是凝血时间；简述凝血时间的测定方法及临床意义。 凝血时间(clotting time，CT)测定是将静脉血放入玻璃试管中，观察自采血开始至血 液凝固所需的时间。本试验是反映内源凝血系统各凝血因子总的凝血状况的筛选试验。 以前曾使用的玻片法和毛细血管法的敏感性和特异性均差，故已停止使用，用活化部分 凝血活酶时间(APTT)或金血凝固时间(CT 试管法)替代。 CT 试管法参考值为 4～12 分钟。 前法较后法敏感。 CT 延长可见于较显著的凝血因子Ⅶ、Ⅸ减少的血友病甲、乙，凝血因子Ⅺ缺乏症；血 管性血友病；严重的凝血因子Ⅴ、Ⅹ、纤维蛋白原及凝血酶原缺乏；原发性或继发性纤 溶活力增强；循环血液中抗凝物质增加；等等。 CT 缩短可见于血栓前状态，DIC 高凝期等；血栓性疾病如心肌梗死、不稳定心绞痛、 肾病综合征及高血糖、高血脂等。 234．什么是活化部分凝血活酶时间(APTT)? 在受检血浆中加入 APTT 试剂(接触因子激活剂和部分磷脂)和 Ca2+后， 观察其凝固 时间。参考值：男 31．5～43．5 秒，女 32～43 秒。待测者的测定值较正常对照延长超 过 10 秒以上才有病理意义。 APTT 为检查内源凝血系统是否正常的筛选试验； 其长短可 反映血浆中内源凝血系统凝血因子(Ⅻ、Ⅺ、Ⅸ、Ⅷ)、共同途径中凝血酶原、纤维蛋白 原和凝血因子Ⅴ、Ⅹ的水平。 235．什么是血浆凝血酶原时间(PT) 在抗凝血浆中，加入足够量的组织凝血活酶(组织因子，TF)和适量的 Ca2+，即可 满足外源凝血的全部条件。从加入 Ca2+到血浆凝因所需的时间，即血浆凝血酶原时间。 PT 是反映外源性凝血系统各凝血因子总的凝血状况的筛选试验。 236．血浆凝血酶原时间参考值如何确定?有何临床意义? 参考值： (1)凝血酶原时间 11～13 秒。应测正常对照值。病人测定值超过正常对照值 3 秒以上为 异常。 (2)凝血酶原比值(prothrombin ration，PTR)即被检血浆的凝血酶原时间(s)／正常血浆的 凝血酶原时间(s)，参考值为 1．0±O．05。 (3)国际标准化比值(international normalized ratio， INR)即 PTR＾ISI。 参考值为 1． 0±0． 1。 ISI(international sensitivity index)为国敏感度指数，ISI 越小(小于 2．O)，组织凝血活酶 的敏感性越高。 临床意义： (1)PT 延长见于①先天性凝血因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅹ缺乏；②后天性凝血因子缺乏， 如严重肝病、维生素 K 缺乏、纤溶亢进、DIC、口服抗凝剂、异常凝血酶原增加等。 (2)PT 缩短见于血液高凝状态如 DIC 早期、心肌梗死、脑血栓形成、深静脉血栓形成 (DVT)、多发性骨髓瘤等。 (3)INR 是监测口服抗凝剂的首选指标，国人以 INR 为 2．0～3．0 为宜。 237．骨髓检查的适应证及禁忌证。 (1)适应证：①诊断造血系统疾病及疗效观察，如白血病诊断及化疗后的观察；②协助诊 断某些疾病，如缺铁性贫血、溶血性贫血、高雪氏病等；③诊断原发性或转移性癌肿，24如多发性骨髓瘤、肺癌、骨癌的骨髓转移；④诊断某些原虫病，如黑热病、疟疾等；⑤ 提高某些疾病的诊断率，如用骨髓进行细菌培养、干细胞培养及染色体培养等。 (2)禁忌证：对血友病患者禁止作骨髓穿刺。有明显出血倾向的病人及晚期孕妇应慎重。 238．略述血细胞从幼稚到成熟过程中的形态变化规律。 一般而言： (1)胞体：由大→小(但巨核细胞由小→大，粒系早幼比原粒大)。 (2)胞核：①大小，由大→小(巨核细胞胞核由小→大；成熟红细胞无核)；②形状，圆形 →(粒细胞)分叶；⑨染色质，细致、疏松一粗糙、紧密；④核膜，不显著→显著；⑤核 仁，有→无。 (3)细胞质：①量，少→多(淋巴细胞例外)；②颜色，深蓝→浅蓝或淡红(淋巴细胞．单核 细胞颜色不变)；③颗粒，无→少→多(红细胞系无颗粒)。 239．骨髓检查报告一般应包括哪些内容? (1)取材、涂片和染色情况。 (2)骨髓象所见：包括有核细胞增生情况，粒／红比例，粒系统、红系统、淋巴系统、单 核系统、巨核系统细胞等量和质的变化及其他异常细胞的情况，巨核细胞总数及血小板 情况，有无寄生虫。并应注意血涂片情况。 (3)提出诊断意见：根据骨髓象、血片所见并结合临床资料，可：①作出肯定诊断；②支 持临床诊断；③排除某些疾病；④不能支持临床诊断时可简述骨髓象的特点，提出复查 或作其他检查的建议。 240．列举几种常用的纲胞化学染色。 常用的细胞化学染色有过氧化物酶染色、 苏丹黑 B 染色、 中性粒细胞碱性磷酸酶染 色、酸性磷酸酶染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色、糖原染色、酯酶染色、铁染色、脱氧 核糖核酸(DNA)染色、核糖核酸(RNA)染色等。 241．简述尿液检验中常用的几种防腐剂的用途和用量。 (1)甲苯或二甲苯： 可用作化学检查如尿糖、 尿蛋白定量等， 每 100mL． 尿中加入甲苯 1～ 2mL。 (2)麝香草酚：用于尿浓缩检查结核杆菌，每 100mL 尿中加入 0.1g。 (3)福尔马林：用于检查尿中有形成分，每 100mL，尿中加 O．5mL。 (4)浓盐酸：用于检测尿 17－酮类固醇、17－羟皮质类固醇、儿茶酚胺、尿素、钙及磷 酸盐等，每 10flmL 尿中加 1mL。 242．尿量多少主要取决于什么?何谓多尿、少尿和无尿? 尿量主要取决于肾小球滤过率和肾小管重吸收以及浓缩与稀释功能。 24 小时内尿量超过 2． 5L 为多尿， 少于 0． 4L 或每小时尿量持续少于 17mL(儿童&0． 8mL ／kg)为少尿，少于 0．1L 或 12 小时内完全无尿称为无尿；排不出尿为尿闭。 243．正常尿液的 pH 值范圈是多少? 正常尿液为弱酸性，pH 约 6．0。pH 变动范围在 4．6～8．0 之间．与人的摄食和 活动有关。 244．什么是尿比密? 尿比密(specific gravity，SG)是指在 4℃时尿液与同体积纯水质量之比。因尿中含有 3％～5％的固体物质，故尿比密大于纯水。 245．正常尿液呈什么颜色?异常情况可出现什么颜色? 正常尿液呈淡黄到橘黄色。如服用带黄色药物可呈黄色甚至黄褐色；血尿可呈红色 混浊；血红蛋白尿症或溶血性输血反应可出现鲜红色的血红蛋白尿；丝虫病或尿中磷酸 盐增多可出现乳白色；恶性黑色素瘤或尿黑酸尿症时尿呈黑色。 246．测定尿比密有些什么方法? 有称量法、浮标法、液体落滴下法、超声波法、折射仪法和试带法等。其中称量法25最准确，常作为参考方法。浮标法(即尿比密计法)最普及，但标本用量多，实验影响因 素多，准确性差。试带法简便，近年来已用于尿液分析仪测定比密，但测定范围较窄， 实验影响因素亦多，精度差。总之尿比密测定可靠性不如尿渗量测定，易受非离子成分 如糖、蛋白、造影剂等干扰。近年来尿比密测定有被尿渗量测定取代的趋势。 247．何谓尿渗透量?有何特点? 尿渗透量(osmolality)简称尿渗量，是指经肾脏排泄到尿液内全部溶质微粒的总数 量。它反映溶质和水的相对排泄速度。电解质和尿素是起决定作用的溶质。测定尿渗量 比测定尿比密更能确切地反映肾脏浓缩能力，是反映肾脏髓质功能的重要指标。 248．尿比密测定有何临床意义? 比