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siRNA阻断PRKCι表达对人卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵袭的影响
&&&&&&&&&　　近期，苏州大学附属第一医院妇产科研究人员发表论文，旨在探讨PRKC在卵巢癌迁移和侵袭中的作用。研究指出，PRKC在卵巢癌中高表达，是参与卵巢癌转移的重要基因，可能作为抑制卵巢癌转移的新的靶向分子。该文发表在2015年第07期《现代妇产科进展》杂志上。 　　生物信息学分析PRKC在卵巢癌中的表达，Real-timePCR和Westernblot法检测卵巢癌细胞株中PRKC的表达情况，设计针对P
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　　近期，苏州大学附属第一医院妇产科研究人员发表论文，旨在探讨PRKC&在和中的作用。研究指出，PRKC&在卵巢癌中高表达，是参与卵巢癌转移的重要基因，可能作为抑制卵巢癌转移的新的靶向分子。该文发表在2015年第07期《现代妇产科进展》杂志上。
　　生物信息学分析PRKC&在卵巢癌中的表达，Real-time&PCR和Western&blot法检测卵巢癌细胞株中PRKC&的表达情况，设计针对PRKC&的siRNA并转染SKOV3卵巢癌细胞，观察转染后SKOV3细胞中PRKC&基因表达情况，以及SKOV3细胞的迁移、侵袭能力的变化，并检测PRKC&基因敲减后其下游转移相关效应分子的表达。
　　PRKC&在卵巢癌芯片（TCGA和GDS3592）中的表达与正常卵巢组织比较，表达差异&2倍（P&0.0001和P=0.0078）。与HOSE细胞相比，ES2、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、A2780卵巢癌细胞株中存在PRKC&mRNA和蛋白水平的高表达，其中SKOV3细胞中PRKC&表达水平最高。PRKC&特异性的siRNA-1和siRNA-2均能有效抑制SKOV3细胞中PRKC&mRNA和蛋白表达，mRNA水平抑制效率分别为（80.5&10.23）%、（74.6&12.48）%（P&0.01），在蛋白水平抑制效率分别为（71.37&11.34）%、（68.22&12.19）%（P&0.05）。细胞划痕实验显示，PRKC&siRNA明显降低了SKOV3细胞的迁移能力，抑制效率分别为（54.31&12.87）%、（45.25&14.02）%（P&0.05）；Transwell实验显示，PRKC&siRNA明显降低了SKOV3细胞的侵袭能力，分别降低了57.48%和38.38%（P&0.05）；PRKC&siRNA明显抑制了转移相关效应分子MMP10在mRNA和蛋白水平表达，mRNA水平分别下调（56.76&13.83）%、（52.99&14.38）%（P&0.05），蛋白水平分别下调（35.65&9.10）%、（37.14&14.26）%（P&0.05）。
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北京大学人民医院妇科,河南医科大学附属第一医院妇产科,
医药、卫生
目的 明确孤儿受体-雌激素受体相关受体ERR（estrogen receptor—related receptors，ERR）α、β、γ各亚型在子宫内膜癌细胞株，卵巢细胞株，乳腺癌细胞株中的表达情况。方法 采用定量PCR方法定性检测ERRs家族中各亚型的mRNA表达，采用Westston Blot印迹的方法检测雌激素受体相关受体ERR各亚型的表达。结果 实时荧光定量PCR分析及Western Blot蛋白印记检测显示子宫内膜癌细胞株、卵巢癌细胞株及乳腺癌细胞株中ERRα均有高水平表达；子宫内膜癌Hec11A、Hec-1B细胞和卵巢癌Mdah-2774、SKOV-3、OVCAR-3呈现ERRβ阳性表达；而ERRγ表达见于宫内膜癌Hec-1B、Ishikawa细胞，卵巢癌Mdah-2774、SKOV-3、OVCAR-3细胞和乳腺癌MCF-7细胞。结论ERRα和ERRγ在多种不同类型的恶性肿瘤细胞株中均有表达，而ERRβ的表达水平相对较低，本研究提供了ERR家族表达在细胞株中的表达模式。&OVCaR-3：人卵巢癌细胞
OVCaR-3：人卵巢癌细胞
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ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
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OVCaR-3：人卵巢癌细胞
细胞编号： C4419
细胞缩写： OVCAR-3细胞
细胞名称： OVCAR-3(人卵巢腺癌细胞)
详细背景： OVCAR-3细胞由T.C.Hamilton在1982年建系。 取材于患进行性卵巢腺癌病人的恶性腹水。与107细胞联合皮下接种５只裸鼠21天后全部成瘤。OVCAR-3是研究卵巢癌(/)抗性的一个合适的模型系统且由于存在激素受体，这对于激素治疗的评估或许是有用的。
细胞来源： 细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
&购买细胞注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，OVCaR-3：人卵巢癌细胞了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和(/company/)技术部沟通交流。& P4
(/sell/99/)规格： 复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
细胞规格： 1*10(5)/ml&&1*10（6）/ml
安全水平： 1
细胞种属： 人
组织来源： 卵巢腺癌
细胞形态： 上皮细胞样
细胞特性： 贴壁
细胞融合度： 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
细胞(/sell/76/)： 细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
&细胞培养三不要：
养科研细胞是生物医学研究的基本功。有三个小经验可以和大家分享一下：
1. 不要烧瓶口。大多数人都喜欢在酒精灯的火焰上关瓶子，觉得这样可以避免污染。不知道大家是不是有培养基怎么越用越发紫的困惑？知道为什么吗？烧瓶口烧的。培养基一般都是用碳酸/碳酸氢跟作缓冲体系。瓶口在火焰上的时候，炽热的空气进入瓶内。塞紧塞子放入冰箱后，空气变冷，压力骤降，培养基中的碳酸就会转化成二氧化碳，释放出来。培养基中的碳酸少了，当然会变碱。如果不烧瓶口的话，你会发现培养液变碱的速度会大大减慢。（当然多多少少还是会有一点越用越碱，因为室温还是比冰箱内的温度高）
其实烧瓶口防止污染纯粹是心理安慰。不妨试一下把手指在火上晃几下，你会发现根本就不会烧疼。如果有细菌的话，这么晃两下也烧不死多少。要想烧死全部细菌，除非把瓶口和塞子烧红。我在国内从来就不烧瓶口。来美国以后发现这里更彻底，超净台内根本就不点酒精灯。
2. 不要频繁看细胞。对于初学者而言，养细胞就像养孩子一样，有空就要去看看。细胞越是养不好，就越是经常去看。实际上看细胞对细胞的生长没有任何好处，OVCaR-3：人卵巢癌细胞特别是对原代细胞或是免疫磁珠分选后，密度特别低的细胞。培养基中的生长因子是非常有限的。细胞好不容易自分泌一点儿促生长的因子在其周围，形成有利于生长的局部环境。你跑去看细胞，培养瓶这么一晃，把因子都给晃散了。经常可以看到新手一天到晚都在看细胞，细胞老是长不好。老手细胞一扔好几天不管，细胞疯长。
3. 不要怕消化。在传代的时候，初学者往往生怕细胞消化过度，早早地终止消化。细胞没下来就使劲吹灯，吹得满瓶子都是气泡。在我看来，用力吹打对细胞的损伤比消化更大。我师兄在做血管平滑肌原代的时候，37度消化过夜，细胞也没事。我一般是等细胞完全变圆后才中止消化。细胞轻轻一晃就能下来。还有，动作要轻柔，尽量不要产生气泡。气泡在破裂时的(/sell/22/)应力相当大，对细胞的伤害也是很大的。& 详见细胞说明书
传代方法： 建议1:2-1:3 两天换液一次
冻存条件： 详见细胞说明书
主要文献： 请具体查阅相关发表文章
常见培养细胞预防污染的有效措施：
体外培养的细胞受到严重污染时，有时即使想尽各种办法也难以挽回。因此，防止污染，预防是关键。只有将预防措施贯穿于整个细胞培养的始终，才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手：
（1）添加抗生素：各种抗生素性质不同，对各种微生物的作用也不同，联合应用比单用效果好，预防性应用比污染后使用好（但迄今尚无对抗支原体特效抗生素）。但反复使用抗生素会使微生物产生耐药性，且对细胞本身也有一定影响，因此为避免诱导抗药细菌，应定期更换培养系统中的抗生素，或尽可能不用抗生素处理。
（2）从物品、用品消毒灭菌着手：细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在取样检菌一周后确认无菌才能使用。同时，在无菌过滤操作中，随着滤过体积的增大，滤膜破损的可能性增加，故应选择最后过滤的液体进行检测。定期对二氧化碳培养箱进行消毒。具体操作：75%的酒精搽拭培养箱后，使用可移动的紫外灯至少消毒30min，加入高压灭菌过的超纯水于培养箱水槽中保持湿度。也可配制300ml的饱和硫酸铜加3L 灭菌超纯水混(/article/8/)硫酸铜溶液加入水槽中。
（3）从操作者做起：①进无菌室前要彻底洗手，按规定穿隔离衣。开始操作前要用 75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。②操作者动作要轻，安装吸管帽、打开或封闭瓶口等操作应在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意，金属(/invest/253/)不能在火焰中长时间烧灼，以防退火；烧过的器械要冷却后才能使用；已吸过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管内的培养液成分如蛋白质等烧焦后会产生有害物质，吸管再用时会将其带到培养液中；胶塞、橡皮乳头及塑料的细胞培养用品过火焰是也不能时间太长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞，同时塑料细胞培养用品也会产生变形影响使用。③使用培养液前不宜过早开瓶，开瓶后的培养液应保持斜位，避免直立，以防止下落细菌的污染。不再使用的培养液应立即封闭瓶口，培养的细胞在处理之前勿过早暴露在空气中。④操作时尽量不要谈话，咳嗽以防止来自唾沫和呼出的气流所造成的污染。⑤吸取培养液、细胞悬液时，应专管专用，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去，以防止污染扩大或造成培养物之间的交叉污染。⑥操作完毕后应整理好工作台面，用消毒水浸泡的纱布擦拭台面。
（4）OVCaR-3：人卵巢癌细胞防止细胞交叉污染：所有从别处转来的或是自己所建的细胞系都要早期留有的充足的冻存储备，一旦怀疑发生交叉污染，可做细胞遗传学方面的鉴定，如发现原有的细胞遗传物发生改变，可以复苏早期冻存的细胞使用。重要细胞系的传代工作应由两人独立进行。
（5）无菌室的彻底消毒①新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室。使用前应稀释即配即用。新洁尔灭和酒精相比，最大的优点是便宜，而且可以稀释50倍用，而同样量的酒精价格可能是新洁尔灭的几十倍。②甲醛熏蒸法：甲醛是一种广谱灭菌剂菌，其水溶液和气体对各种细菌、芽孢及真菌等微生物均有杀灭作用。甲醛价廉，熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含37－40%的甲醛。C1901 SNG-M细胞株 ，公司提供背景资料、生物体、生长特性、来源、器官、类型、形态、培养条件、应用、系、疾病、组织、冻存条件等复苏及冻存说明书信息，我们拥有丰富的细胞系培养经验，能提供细胞培养全方位的技术支持，让您实验再无烦扰！
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中性鞘糖脂表达与卵巢癌细胞株SKOV3AarR多药耐药性关系的研究.pdf-综合论文-文档在线 55页
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一一山钟叶一一一一一~-~
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glycosphingolipid
neutralglycosphingolipid
中性鞘糖脂
glycosylceramide
葡萄糖酞基鞘氨醇
酞基鞘氨醇
ceramidemonohexoside
单己糖酞基鞘氨醇
dihexosylceramide
二己糖酞基鞘氨醇
trihexosylceramide
三己糖酞基鞘氨醇
人卵巢癌敏感细胞株
SKOV3/AdrR
人卵巢癌耐阿霉素细胞株
3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl) 四甲基偶氮哇盐
-2,5-diphenylterazolium
Dimethylsulfoxide
二甲基亚枫
Flowcytometry
流式细胞术
Fetalcalfserum
Highperformancethinlayer 高效薄层层析
chromatograp坷
multidrugresistance
多药耐药性
multidrugresistantgene
多药耐药基因
1一phenyl-2-palmitoylamino 苯基棕桐酞胺吗啡丙醇
-3-morpholino-l-propanol
glucosylceramidesynthase
葡萄糖酞基鞘氨醇合酶
RedBloodCell
Rhodamine123
P-glycoprotein
目的:本实验主要讨论中性鞘糖脂 (neutralglycosphingolipid,N-GSL)
表达与卵巢癌细胞株SKOV3/AdrR多药耐药性 (multidrugresistance，
MDR)的关系，探讨葡糖酞基鞘氨醇合酶抑制剂苯基棕桐酞胺吗啡丙醇
(1-phenyl-2-palmitoylamino-3一morpholino小propanol,PPMP)在MDR逆
转中的作用，了解PPMP抑制糖脂
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