提取蛋白提取残留怎么解决,DNA

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关于生物制品残余dna质量控制问题
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关于生物制品残余dna质量控制问题
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【求助】DNA 提取蛋白残留怎么解决?
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这个帖子发布于8年零287天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好,我手提鼠尾基因组DNA,但是蛋白残留好像挺严重,怎么去除呢?是哪一步需要改进?下面是我的提取方法:1 剪鼠尾5mm,尽量剪碎,加入500微升裂解液,2.5微升蛋白酶K(20mg/ml)。55度水浴过夜。2 加入200微升氯化钠溶液(6m/l),冰上20min。3 12000rpm离心20分钟,取上清。4 加入800微升无水乙醇,充分混匀,12000rpm离心10min,弃上清。5 加入200微升70%乙醇吹打冲洗,4000rpm离心5min。6 弃上清,倒置晾干,沉淀由白变透明。7 加入100微升Tris-Hcl(1M/l),65度加热1h。絮状沉淀不溶,取5微升电泳(95V30min),结果如下:
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你用氯化钠溶液抽提,改成加500 ul酚氯仿抽提,下面步骤一样,效果会好点。但是手抽本来就不需要质量很高,反正不影响做后续的检测如PCR等即可。
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呵呵,没有用氛-氯仿,提得还可以的,不过蛋白没去干净也会影响后续的试验的
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我也经常手提鼠尾基因组。2mm鼠尾可以用50mM NaOH200-300ul 95度十分钟,再用PH8.0 tris-hcl 中和。1200rpm离心6分钟后取1ul直接PCR,效果不错,可以试一下。
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我觉得是你用的消化液和蛋白酶K的量有一点少,因为在分子克隆上面介绍的是1cm的鼠尾要用4mL的消化液,并且蛋白酶K的终浓度尾400μg/mL,所以我的观点是,你的蛋白酶的量不够,你可以适当的加大酶的量
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