5核苷酸酶高代表什么接近30正常吗,需要处理吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-09-15 11:04 标签： 血清5 核苷酸酶测定
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5-核苷酸酶的检测和临床意义
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你可能喜欢为何我的5‘核苷酸酶活这么低？ - 实验交流 - 生物秀
标题: 为何我的5‘核苷酸酶活这么低？
摘要: [为何我的5‘核苷酸酶活这么低？] 我在测5‘核苷酸酶的活性，文献关于该酶活性的测定方法大同小异，均是用每毫克每分钟释放的磷的量表示。前期的处理中，我也加了激活剂，但是我测得的酶活性却比资料记载的低很多，我用的钼蓝法测定无机磷的生成，怀疑是标准曲线的问题（资料里没有该步骤的详细描述），请高手指教。标准曲线的制作如下：KH2PO4配成1ug ml的溶液,分别取0，0 2，0 4，0 6，0 8，1ml溶液补水至1ml,加1ml的抗坏血 关键词:[标准曲线 核苷酸酶 抗坏血酸 酶活性 试剂 激活剂 孵育]……
我在测5‘核苷酸酶的活性，文献关于该酶活性的测定方法大同小异，均是用每毫克每分钟释放的磷的量表示。前期的处理中，我也加了激活剂，但是我测得的酶活性却比资料记载的低很多，我用的钼蓝法测定无机磷的生成，怀疑是标准曲线的问题（资料里没有该步骤的详细描述），请高手指教。标准曲线的制作如下：KH2PO4配成1ug/ml的溶液,分别取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1ml溶液补水至1ml,加1ml的抗坏血酸试剂（0.33ml钼酸铵盐溶液,0.33ml抗坏血酸,0.33ml水），660nm比色。标准曲线做出来后，我每次取含0.01mg酶的样品加含0.05M底物和激活剂的缓冲液1ml,37度孵育30分钟，加1ml三氯乙酸终止反应，再加1ml的抗坏血酸试剂，室温下孵育30分钟后于660nm比色，由标准曲线查磷的释放量。可是折算成酶活性远远低于文献记载。不知道问题出在哪里？
测磷比色法的检测原理：5’-NT水解5’-磷酸腺苷，生成腺苷和磷酸，后者与钼酸铵作用生成磷钼酸，再被还原剂还原成钼蓝，颜色深浅与释放的磷酸成正比(反应原理为附件上图）。所以建议你用磷酸作标准曲线尝试一下现在用酶法测定5‘核苷酸酶比较多，具体原理为以次黄嘌呤核苷酸（5’-IMP）作底物，经5’-NT水解释放腺苷，在过量的腺苷磷酸化酶（PNP）和次黄嘌呤氧化酶（XOD）的存在下，被转化成尿酸，并产生过氧化氢，再经Trinder’s反应，在过氧化物酶（POD）作用下，氧EHSPT或THIBA（三碘3羟基苯磺酸及4-AA显色，以主/副波长505nm/660nm连续监测过氧化氢的生成速率，与标准液相比测定5’-NT的活性。）(反应原理为附件下图）。再者：请问你的含“0.01mg酶的样品”是什么样品？是血清吗？如果是血清，那么测定的5‘核苷酸酶的活性就是会很低，因为正常人血清中的5‘核苷酸酶为0-10U/l。
感谢LSD相助，我是从蛇毒中分离的该酶。其它蛇种该酶活性大都为100以上，我的却小于这个值。我用的底物是5’-AMP，你说的方法真的很好，但是我们没有这个条件开展，而且对于蛇毒中该酶的测试测无机磷生成是最普遍的方法。我用磷酸做标准曲线试试，谢谢！
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