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2012湖南省部分规模化猪场蓝耳病免疫抗体检测及防控措施.doc 7页
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2012年湖南省部分规模化猪场蓝耳病流行病学调查及防控措施
周望平 王慧
邱美珍 杨俊
（湖南省生猪产业技术体系、湖南省畜牧兽医研究所
长沙 410131）
摘要：于2012年1月-12月，对湖南部分地区的9个规模猪场进行了病学调查，采用ELISA和PCR对猪蓝耳进行抗体检测和病源检测。结果显示：经产母猪群的猪蓝耳抗体阳性率在89%以上，平均阳性率为94%，S/P值＞2.5的比例占17%；后备母猪群的猪蓝耳抗体阳性率在63%以上，平均阳性率为92%，S/P值＞2.5的比例占18%；公猪群的猪蓝耳抗体阳性率在88%以上，平均阳性率为93%，S/P值＞2.5的比例占17%；仔猪群的猪蓝耳抗体阳性率在67%以上，平均阳性率为76%，S/P值＞2.5的比例占15%；保育猪（30-70日龄）猪瘟抗体阳性率在38%以上，平均阳性率为70%，S/P值＞2.5的比例占15%。另外，在高致病性蓝耳病抗原检测中，共检出16份阳性样品，检出率为26%。数据表明：我省规模猪场的猪蓝耳抗体较高，但S/P值＞2.5的的猪只所占比例大，毒感染普遍存在。应做好蓝耳防控措施。
蓝耳病全称猪繁殖与呼吸系统综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS),是由猪繁殖与呼吸系统综合征病毒引起的急性高致死性传染病，主要引起妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状[1-2]。1987年首次在美国报道该病[3]，1990 年冬传入欧洲并迅速在欧洲各国暴发和流行，目前PRRS已在全世界范围内流行[4]。我国于1996年首次分离到猪繁殖与呼吸系统综合征病毒[5]，而后在我国部分省市出现了暴发流行。2006年夏季, 我国南方地区发生以体温升高、皮肤发红和呼吸急促为主要临床特征的“猪高热综合征”,很快波及全国大部分养猪地区[6-7]。2007年4月,Tian K等[8]初步确定此次疫病主要病原为高致病性PRRSV变异株。
近年来，虽然没有蓝耳病的大爆发流行，但仍是猪病防控的一大难题，已被政府列为强制免疫的疾病之一。本文通过调查湖南省部分地区规模猪场PRRS的血清抗体水平和病原情况，以期了解PRRS的流行病学情况，为规模化猪场PRRS防控提供数据参考。
1.1　样品采集时间
2012年1月-2012年12月。
1.2　血清、组织样品的采集地点和样本数
从湖南岳阳、郴州、益阳、常德等地区的9个规模猪场共采集2361份血清样品，其中经产母猪血样1048份，后备母猪429份，公猪294份，仔猪288份，保育猪302份。组织样品62份。具体情况见表1。
血清样品采集登记表
猪场编号 采样数
经产母猪 后备母猪 公猪 仔猪 保育猪
1 213 56 29 21 35
2 83 63 22 77 51
3 67 48 118 - 20
4 149 69 14 18 18
5 92 42 13 - -
6 85 48 28 83 74
7 108 33 15 33 40
8 101 30 20 13 32
9 150 40 35 43 32
1.3样品采集和处理
血清样品利用真空采血管于猪耳静脉（大猪）和前腔静脉（小猪）无菌采血1-2mL，于4℃下过夜，次日以4000转/分钟，离心15分钟，收集上清于1.5mL管中，-20℃保存备用。组织样品剖检猪后采集心肝脾肺肾淋巴结，组织匀浆后用于病毒RNA提取。
1.4试剂与仪器
猪蓝耳抗体检测试剂盒(PRRSV-X3)（购自IDEXX公司）；德国Eppendorf移液器；美国宝特公司ExL800酶标仪。反转录试剂盒（RevertAidTM first Strand cDNA Synthesis Kit）购自Fermentas公司。
根据高致病性蓝耳病病毒编码Nsp2蛋白的基因序列，设计一对引物，引物的扩增片段包括其基因整个缺失区。扩增片段的理论长度在480 bp左右。
2.1 猪蓝耳病抗体检测及判定标准
S/P=(样品OD值-标准阴性对照OD值)/(标准阳性对照OD值-标准阴性对照OD值)
蓝耳抗体ELISA试验成立条件：标准阳性OD值≧0.4，标准阴性OD值&0.2。判断标准：阳性值为S/P≥0.4；阴性值为S/P＜0.4。）
2.2 猪蓝耳病抗原检测
按常规法进行病毒RNA的提取，反转录合成cDNA。产物作为模板进行PCR，条件为：95℃，5分钟；95，30，65，30，72，30；72，735个循环。PCR产物在1.5%的凝胶上进行电泳分析。
3 试验结果
3.1各猪场种猪群蓝耳抗体检测
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猪场蓝耳病检测结果与案例分析
2014年，笔者实验室对305个猪场4637份血清和116份组织病料开展了蓝耳病（PRRS）相关检测。其中血清样本ELISA抗体阳性率85.7%（IDEXX试剂盒，下同），98.7%的猪场蓝耳病阳性。蓝耳病标准株RT-PCR阳性率12.9%，变异株阳性率35.3%。1.抗体检测1.1 抗体阳性 提示机体感染过蓝耳病野毒（疫苗毒）或者是母源抗体（仔猪）。一般情况下，机体感染强毒产生的抗体较高。对于同一阶段的猪群，如果抗体水平适中、离散度小，一般蓝耳病比较稳定。1.2 抗体阴性 提示机体未感染过野毒（或疫苗毒），或者刚刚感染野毒抗体尚未转阳（一般需要7～10天）；还有一种情况是机体感染康复较长时间后，抗体水平已经下降至阴性。 对于蓝耳病，血清抗体水平高低不代表保护力大小。我们不仅需要关注单个样本的抗体水平，更要看整体的抗体水平、走势、离散度，同时结合免疫背景、日龄大小、生产临床等综合分析才有意义。2.病原检测2.1 病原RT-PCR阳性 检测到的可能是野毒或者疫苗毒，但猪群不一定发病。对于大多数猪场，仔猪在50～90日龄阶段容易检到PCR阳性猪。在成年猪或者胎儿体内如果检测到病原PCR阳性（排除疫苗因素），多是感染发病。2.2 病原RT-PCR阴性 未检测到说明没有感染或者曾经感染过但已不排毒，也可能是样品中病原含量低、检测方法不敏感等。2.3 病原ORF5测序 可以作为猪场蓝耳病分子流行病学调查的方法。基因同源性大小不能代表毒株间的交叉保护力，不建议作为筛选疫苗的唯一标准。3.临床典型案例3.1 阳性稳定场 对于选址科学、布局合理、规模适中、生产管理水平较高和生物安全措施好的猪场，一般情况下蓝耳病比较稳定。血清学检测显示，母猪群阳性带毒但不活跃，一般抗体S/P值低于2.5；仔猪阶段抗体水平随日龄的增加呈逐渐下降趋势。在保育后期或育成前期会感染蓝耳病病毒，但毒力较弱，抗体水平会有所上升，S/P值一般不超过3.0（多数在2.5以下）。河南南阳某猪场（图1）采用两点式布局（母猪、育肥猪分开养），繁殖群闭群饲养（近2年未从外部引入后备猪），采用全进全出等生物安全措施，蓝耳病比较稳定，生产成绩良好。3.2 保育阶段或育肥前期发病场 由于猪舍全进全出和空舍消毒执行不到位、蓝耳病活疫苗使用不当、母猪群蓝耳病不稳定和转群应激等因素均可引起该阶段蓝耳病活跃、发病。多与伪狂犬、支原体、圆环病毒等混合感染，容易继发猪副嗜血杆菌、链球菌等细菌病。血清学检测显示，发病猪群蓝耳病抗体水平呈急剧上升趋势，一般抗体S/P值高于2.5（部分高于3.0）。河南许昌某猪场（图2）由于仔猪滥用蓝耳病疫苗，同时与伪狂犬混合感染，保育猪死淘率高达30%。采取暂停使用蓝耳病疫苗、伪狂犬疫苗强化免疫等综合防控措施后，保育猪群健康逐渐恢复。河南三门峡某猪场为种猪场（图3），由于育肥舍栏位紧张，做不到全进全出，再加上转群应激等因素，在育肥前期出现一过性（10天左右）的发热（个别表现喘气症状）。3.3 蓝耳病暴发场 疫情多是从外部传入，由于引种不谨慎，滥用蓝耳病疫苗，后备猪隔离驯化不到位，运猪车辆消毒不严格等因素，导致全场暴发蓝耳病。繁殖区一般需要1～2个月恢复稳定。血清学检测显示，各阶段发病猪群蓝耳病抗体处于较高水平，抗体S/P值高于2.5（部分高于3.0）。河南郑州某猪场（图4）从外部购入后备种猪后，由于没有做好隔离而散毒，造成本场猪群暴发蓝耳病，5个月后猪群完全恢复稳定。3.4 后备种猪隔离驯化场 目的是防止后备种猪传入新的病毒（毒株）；避免后备种猪进群后感染场内原有病毒而发病。一般至少需要隔离驯化2～3个月，等双方健康状况匹配后方可混群。国内猪场一般外购100日龄左右的后备种猪，然后进行隔离驯化。少数种猪场在保育阶段就选留后备种猪，选出的猪不进育肥场而直接进入后备场进行隔离驯化。图5为洛阳某种猪场，在60日龄左右选留后备种猪后，直接转至后备猪专用场饲养，在90日龄开始驯化，200日龄左右检测达标后才能进繁殖群。4.小结关于蓝耳病的防控，实验室检测只是其中一个重要环节，由于现有疫苗保护力有限，需要采取综合措施对蓝耳病进行管控。建议选择适合自己的养殖模式、适度规模、合理布局等生物安全配套措施；加强饲养管理，努力满足猪群的需求；同时防控好伪狂犬病、喘气病、圆环病毒病等重要疾病，控制继发感染，科学使用蓝耳病疫苗。（来源：百度文库）李元格主讲：后备母猪的挑选及管理细节学养猪公众号，分享猪场健康管理及猪病防控经验，帮你把养猪事业做大做强！
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猪场蓝耳病检测结果与案例分析
PIGS TODAY
March 2015
于2.5（部分高于3.0）。河南许昌某猪场（图2）由于仔猪滥用蓝耳病疫苗，同时与伪狂犬混合感染，保育猪死淘率高达30%。采取暂停使用蓝耳病疫苗、伪狂犬疫苗强化免疫等综合防控措施后，保育猪群健康逐渐恢复。河南三门峡某猪场为种猪场（图3），由于育肥舍栏位紧张，做不到全进全出，再加上转群应激等因素，在育肥前期出现一过性（10天左右）的发热（个别表现喘气症状）。
图1 河南南阳某猪场的蓝耳病抗体分布
3.3 蓝耳病暴发场
疫情多是从外部传入，由于引种不谨慎，滥用蓝耳病疫苗，后备猪隔离驯化不到位，运猪车辆消毒不严格等因素，导致全场暴发蓝耳病。繁殖区一般需要1～2个月恢复稳定。血清学检测显示，各阶段发病猪群蓝耳病抗体处于较高水平，抗体S/P值高于2.5（部分高于3.0）。
河南郑州某猪场（图4）从外部购入后备种猪后，由于没有做好隔离而散毒，造成本场猪群暴发蓝耳病，5个月后猪群完全恢复稳定。
图2 河南许昌某猪场的蓝耳病抗体分布
3.4 后备种猪隔离驯化场
目的是防止后备种猪传入新的病毒（毒株）；避免后备种猪进群后感染场内原有病毒而发病。一般至少需要隔离驯化2～3个月，等双方健康状况匹配后方可混群。国内猪场一般外购100日龄左右的后备种猪，然后进行隔离驯化。少数种猪场在保育阶段就选留后备种猪，选出的猪不进育肥场而直接进入后备场进行隔离驯化。图5为洛阳某种猪场，在60日龄左右选留后备种猪后，直接转至后备猪专用场饲养，在90日龄开始驯化，200日龄左右检测达标后才能进繁殖群。
图3 河南三门峡某猪场的蓝耳病抗体分布
关于蓝耳病的防控，实验室检测只是其中一个重要环节，由于现有疫苗保护力有限，需要采取综合措施对蓝耳病进行管控。建议选择适合自己的养殖模式、适度规模、合理布局等生物安全配套措施；加强饲养管理，努力满足猪群的需求；同时防控好伪狂犬病、喘气病、圆环病毒病等重要疾病，控制继发感染，科学使用蓝耳病疫苗。
基金项目：国家生猪产业技术体系（CARS-36）；河南
省生猪产业技术体系创新团队（S2012-06）
图4 河南郑州某猪场的蓝耳病抗体分布
图5 河南洛阳某猪场蓝耳病抗体分布
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