心肌梗死基因表达检测及心肌细胞分离平台的搭建
目的:&br&　　
心肌梗死诱发心力衰竭，严重时可导致死亡，本实验研究了急性心肌梗死相关基因的表达，揭示了一些重要分子在心梗过程中的作用机制;分析了Tween-80对心肌细胞ICa·L的影响;探讨PSEN1对小鼠心脑血管发育的影响，对临床研究和治疗具有重要的指导意义。&br&　　
方法:&br&　　
1、大鼠心肌梗死基因的表达&br&　　
(1)采用冠状动脉左前降支结扎法制备急性心肌梗死模型，分别取结扎后0h、2h、4h、12h、24h大鼠心肌组织;(2)分离心肌梗死模型组和假手术组大鼠心肌细胞，经Fluo-5N/AM染色后，利用激光扫描共聚焦显微镜检测心肌细胞肌浆网钙容量;(3)采用常规透射电镜技术制备和观察心肌梗死组和假手术组大鼠心肌超微结构;(4)按照常规方法抽提RNA，进行实时荧光定量PCR检测，以双标准曲线方法定量分析不同时间点心肌组织的基因表达。&br&　　
2、Tween-80对心肌细胞L-型钙电流的影响&br&　　
采用酶解法分离获得大鼠心肌细胞，在膜片钳全细胞模式下记录心肌细胞的ICa·L，检测0.05％、0.1％、0.2％ Tween-80对心肌细胞ICa·L的影响。对照组加入电极外液作为参照，分别取加药前20s和加药后150s数据做统计分析。&br&　　
3、PSEN1基因对心脏发育的影响以及小鼠心肌细胞分离平台的搭建&br&　　
(1)获得不同基因型的小鼠胚胎，光镜观察研究PSEN1对整胚发育的影响;(2)制作心脏石蜡切片标本，组织学分析PSEN1对心脏发育的影响;(3)通过PSEN1的loxp小鼠与Myh6-cre/Esr1小鼠杂交，得到PSEN1 loxP、Myh6-cre/Esr1双阳性小鼠。成年后给小鼠注射Tamoxifen，将PSEN1从心肌系统中特异性敲除，建立PSEN1心脏特异基因敲除小鼠品系;(4)根据小鼠心肌细胞分离的要求，自研搭建了一套小鼠心肌细胞分离系统，成功获得单个小鼠心肌细胞。&br&　　
结果:&br&　　
1、心肌梗死后，心肌基因表达改变的同时超微结构也发生了改变，肌丝溶解，线粒体异常。&br&　　
TNFα和d IL6在心肌缺血过程中的有着相同的表达趋势，它们在冠脉结扎2h后表达上调，在12h表达达到峰值，24h后回到基础水平。说明随着缺血时间的增加，心肌出现了炎症反应，24h后炎症逐渐消失。心肌新陈代谢转录因子C-Myc在急性心肌梗死早期迅速上调，并在整个心肌梗死过程中都维持在高表达水平，表明心肌缺血后，心肌细胞为了适应生理变化，新陈代谢异常活跃。心房钠尿肽(ANP)随时间的推移表达量升高，在24h时到达峰值，表明心肌梗死后ANP逐渐参与心肌的保护。超氧化物歧化酶(SOD)在冠脉结扎4h后开始下调，在24h时有所恢复，表明心肌缺血4h后出现氧化应激反应。FKBP12.6的表达无明显异常，表明发生AMI后，在最初的24h内未出现心肌细胞肌浆网钙释放异常。&br&　　
2、采用全细胞膜片钳技术分别记录各实验组ICa·L加药前后的变化，所采用数据分别为加药前20s和加药后150s，统计结果（单位:pA/pF）如下:对照组为8.40±0.21和7.4±0.26; n=3、0.05％组为9.35±0.30和8.22±0.48，n=3;0.1％组为5.32±0.37和2.50±0.20，n=3;0.2％组为6.35±0.29和2.54±0.23，n=3。经ANOVA分析显示对照组和0.05％组加药前后ICa·L变化不明显(P＞0.05)，0.1％组和0.2％组加药前后ICa·L变化明显(P＜0.05)，表明低浓度Tween-80对心肌细胞的ICa·L影响不大，高浓度Tween-80能够抑制ICa·L。ICa·L衰减幅度分别为，对照组11.2％±5％，n=3;0.05％组12.0％±3.2％，n=3;0.1％组52.7％±6.5％，n=3;0.2％组59.9％±4.5％，n=3，两两比对，对照组与0.05％组没有显著性差异(P＞0.05)，其余两组与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，说明0.1％和0.2％组电流衰减有统计学意义，0.1％和0.2％两组之间没有显著性差异(P＞0.05)，说明两组电流衰减没有统计学意义，提示Tween-80浓度达到0.1％时，电流衰减趋于峰值，随着Tween-80浓度增加，电流衰减幅度增加不明显。&br&　　
3、PSEN1基因敲除小鼠发育异常，整胚研究结果如下:血管发育异常、脑发育异常、生长发育迟缓、肢体发育不全;心脏组织学分析结果如下:心室扩张、室壁变薄、室间隔缺损与增厚、瓣膜肥大、肺动脉双出口、冠脉形成抑制。为了更深入的研究，我们构建了小鼠心肌细胞分离平台，分选获得单个小鼠心肌细胞，细胞状态良好，边缘光滑、Z线清晰，为后续研究工作打下良好的基础。&br&　　
结论:&br&　　
1、心肌梗死相关基因的表达水平在不同生理过程中出现波动性变化，本实验研究发现一些相关标志分子基因的表达具有时间依赖性，结合激光扫描共聚焦显微镜和电镜技术，从分子机制和形态学两方面研究了心肌梗死的病理、生理变化,为心肌梗死的临床研究和治疗提供了理论依据;&br&　　
2、在细胞水平研究了Tween-80对心肌细胞ICa·L的影响，低浓度Tween-80对心肌细胞的影响微弱，当浓度达到0.1％时，电流衰减幅度趋于峰值，因此0.1％Tween-80可被看作心肌细胞损伤的一个危险指标，为规范Tween-80的生物医疗应用提供一个新的标准;&br&　　
3、本实验从整胚水平研究了PSEN1对小鼠心脑血管发育的影响，发现PSEN1基因敲除小鼠生长发育迟缓、心脑血管发育缺陷，拓宽了我们对PSEN1基因功能的认识。利用自研的心肌细胞分离平台，成功分离了小鼠心肌细胞，为进一步研究PSEN1基因的功能奠定了基础。
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作者：佚名
来源：科学网
关键词：基因,因检,检测,测会,会引,引发,发未,未来,来医,医学,学革,革命,命吗,吗？,？
●&&基因检测的主要目的是帮助诊断疾病及预防疾病的发生，不久前开设的国内首个“基因门诊”主要侧重于诊断方面，而针对健康人的基因检测则是一项真正意义上的疾病预测技术。&&
●&&每个人大约有1万～2万个基因，目前检测一个人的全部基因需要200万元人民币左右，而一旦检测成本降到1000美元之内，将可能对医学产生革命性的影响。&&
●&&全世界任何一个国家都禁止改变人类基因，而基因检测的风险则在于你是否能够和怎样承受未来的健康风险。&&
●&&也许在不久的将来，每个出生的婴儿都能获得自己的全部基因结构，那时，医学将产生怎样的变化？&&
10月初，在杭州开设的国内首家“基因门诊”受到了社会上的广泛关注，很多人由此也对基因检测产生了好奇与疑问。其实早在今年4月，北京的华大基因研究中心医学事业部就已经开展了网上基因检测的服务项目，据了解，目前他们已经收到了2000张左右要求进行基因检测的申请表。与“基因门诊”不同的是，这里所做的基因检测主要是针对健康人群，华大基因研究中心医学事业部主任甄二真博士表示，基因检测是一项先进的医学检测技术，它可以使科学家们在还没有出现临床症状时发现某个人具有哪些疾病倾向，并分析其未来患这些疾病的风险性。&&
你的基因容易得心血管疾病吗？&&
不久前，华大基因研究中心医学事业部接到一例特殊病症的咨询，一对夫妇因为孩子患有先天性自闭症，因此希望能通过基因检测来确定是否可以继续生育。甄二真博士介绍说，像先天性自闭症这种比较特殊的遗传学方面的疾病与人体内的好几个基因相关，可以通过抽取16到21周孕妇的羊水来检测胎儿的基因，如果其相关的基因呈阳性，就说明胎儿出生后极有可能患这种疾病。&&
虽然基因检测对于特殊遗传学疾病的诊断起到了重要作用，但甄二真博士认为，对于健康人来说，基因检测所体现出的疾病预防作用具有更加重要的意义。目前，华大基因研究中心医学事业部已开展了针对健康人群的心绞痛、冠心病、、动脉粥样硬化、病、、骨质疏松症、、结肠癌和深静脉血栓形成等方面的疾病风险基因检测项目。通过这些检测，可以确定测试者是否携带对某种疾病敏感的基因型，如果携带，则通过采取相应的预防措施，从而推迟或延缓患病，以达到提高生活质量的目的。&&
从目前收到的几千例基因检测申请来看，要求进行心血管疾病方面检测的人数最多，其次为肿瘤，而检测人数最少的则是骨质疏松症，只有一人。可见，当前公众对于自身健康最为关心的还是以一些多发慢为主。那么，基因检测对于疾病的预测是如何实现的，又怎样来预防这些疾病呢？&&
甄二真博士介绍说，目前认为，除了外伤，人类所有的疾病都和自身的基因有关系。最明显的例子是，与相关的基因――AGT基因T/T型的人群对食品中的盐很敏感，携带有这种基因的人吃一般正常盐含量的食物就会得病，而通过检测如果这种基因呈阳性的测试者只要改吃低盐饮食，就很容易避免患病。再例如，乳腺癌的基因为BRCA1基因，这种基因阳性的人在65岁时有80%的人会得乳腺癌，按美国医学会的检查标准，携带这种基因的人应从18岁起就开始每年做定期的检查，这样就可以及时发现癌前病变，通过局部治疗就可以避免乳腺癌的发生。&&
基因检测必须符合相关条件&&
目前，基因检测的主要目的有两个，一是用于疾病的诊断，例如对于的诊断分类等都需要进行相关的基因检测；二是疾病的预防，就是检测健康人群的基因型，分析基因与疾病风险的关系，并向受检者提出生活上的指导，避免疾病的发生。甄二真博士指出，基因型是某个人特有的不同于其他人的基因密码，基因型本身不引起疾病，但是某些基因型对特定环境因素非常敏感，从而增加发生疾病的风险。&&
到目前为止，医学家已经发现了6000种左右与疾病相关的基因，但能够在临床实践中做出诊断和检测的只有1100种左右，而华大基因研究中心医学事业部现在所做的基因检测主要包括有五六十种疾病，涉及到40多个基因。甄二真博士解释说，目前对于很多种常见病还无法进行基因检测的原因是这种检测必须要具备一些基本的条件，这些条件主要包括基因与疾病的相关性、对环境的敏感性、可检测性和疾病的可预防性。也就是说，如果某些与疾病相关的基因检测技术不够成熟，或者被检测疾病还没有早期诊断的方法和预防措施，则不能进行相关的基因检测。例如，当前在我国比较多发的肺癌与肝癌，虽然与这两种癌症有关的基因已经发现了很多，但仍然缺乏足够的科学证据、临床实验以及相对成熟的诊断技术和预防措施，因此，即使能够进行相关的基因检测，但受检者无疑将面临很大的心理风险。&&
目前在美国，国家医学科学院（NIH）也只有乳腺癌和结肠癌这两种肿瘤可以进行肿瘤风险的基因检测。在美国，有些保险公司要求被保险的男性都要进行结肠癌基因检查，也仍然会为检查出基因阳性的携带者投保，并且保险公司还每年出钱为这些高风险的人群做定期结肠镜检查，由于结肠癌癌前病变的诊断技术已经非常成熟，在发现早期病变后只要将病变部分切除就可以避免癌症的发生，这样保险公司就省去了从诊断、治疗到死亡的全部费用，因此也减轻了个人、企业乃至整个社会的医疗负担，起到了很好的社会效果。&&
成本降低将会被全世界范围采用&&
在国外，用于健康人的基因检测大约已有5年的历史。在对人类基因图谱进行测绘的过程中，就有两位美国科学家预言将来的医学是建立在基因多态性的检测基础上。2000年，人类基因图谱完成后，美国政府对相关的公司、大学以及科研机构投入了大量资金，要求10年以内，将检测一个人完整基因的成本降至1万美元以内，不久前就有国外媒体报道，美国加州一个公司已经研发了可以将成本降到1000美元的技术。而这项技术一旦通过了FDA（美国食品药品管理局）的审核，则很有可能引发医学界的一次革命。&&
甄二真博士介绍说，目前国内如果完整检测一个人的全部基因大约需要200万元人民币，而一旦成本降至1000美元以内，基本上每个人都可以进行完整的基因检测，那么未来的医学将可能建立在人的基因结构基础上，从而改变整个医学的理论和实践。&&
目前，世界上只有美国、英国、比利时等几个少数国家在开展对健康人的基因检测，我国则是从2003年开始这一项目的，甄二真博士表示，一旦低成本的完整基因检测技术成熟，那么这项技术很快会被全世界范围采用，并引发新的医学革命，而我国在人类基因图谱的绘制及基因检测方面保持与发达国家的同步，就可以让国内的医生与公众早做准备，这也是他们开展基因检测的一个真正意义。&&
其实，对于基因检测现在不但公众感到陌生，很多医生也对其持有怀疑态度，对此，北京大学医学部医学史教研室主任张大庆教授表示，在人类基因图谱的测绘过程中，就有国外的医学家预测，人类基因图谱的完成将可以解决医学中所有的问题，但这个说法显然是有些太乐观了，因为人的基因是在动态变化中的，而且很多基因的功能还不清楚和确定，受到很多环境因素的制约。张大庆教授指出，基因检测可以使公众对于基因进行了解，从医学认识史上对人体的了解又进了一步，但当前还应避免一些商业目的的炒作。&&
基因检测可能导致的风险&&
基因检测作为一项新兴的疾病预测技术，在主动预防疾病的同时也具有一些自身的风险，主要体现在其心理风险比一般化验要大。首先，受检者对自己是否存在与某种严重疾病有关的基因，特别是家庭中有这种疾病患者的受检者，对检验结果有焦急的期待，甚至可能引起抑郁。科学家对做乳腺癌检测的受检者做了研究，发现携带乳腺癌基因的受检者，在知道检验结果后3到6周会出现持续的焦虑，或者抑郁，或者失眠。甚至有些检测后没有发现这种基因的妇女也会持续地对自己是否有患乳腺癌的风险表示怀疑。发现带有可能导致严重疾病的基因对受检者有可能造成严重的心理承受问题。因此，如何规避这种心理风险也是基因检测需要面对的问题。&&
甄二真博士表示，现在已经开展的检测项目都会为受检者提供相关的预防措施建议，从生活方式、对环境因素的干预以及早期检查诊断方法等，最大限度地降低受检者的心理负担。并且对每位受检者都建立档案以便及时跟踪，还可以为他们提供相关的心理咨询服务等。&&
此外，家庭关系也是风险之一。不同于其他的医学检测，基因检测的结果不仅涉及受检者自己，也涉及家庭其他亲属的个人信息。这样做是否检测的决定或结果是否公开都涉及其他家庭成员的个人隐私。例如，如果一个儿童镰状细胞性基因阳性，涉及父母的基因信息、心理问题，还包括改变家庭成员之间的关系，基因携带者产生愤怒或犯罪感等。决定做基因检测的家庭成员需要考虑这些风险和其他家庭成员的意见。应该考虑是否和其他成员分享检验结果，是否和他人组建家庭，是否生育等等许多问题。基因检测引起的问题是对家庭关系以及与其他人之间的关系方面的挑战，应该在检测之前有充分的了解和心理准备。&&
什么是基因检测？&&
基因检测是从血液或从其他体液和细胞检测一个人的DNA的技术。基因检测可以诊断疾病，也可以用于疾病风险的预测。疾病诊断是用基因检测技术检测引起遗传性疾病的突变基因。目前应用最广泛的基因检测是新生儿遗传性疾病的检测，遗传疾病的诊断和某些常见病的辅助诊断。目前有一千多种疾病可以通过基因技术做出诊断。&&
近年非常令人兴奋的是预测性基因检测的开展。利用基因检测技术在疾病发生前发现疾病发生的风险，提早预防。目前已经有20多种疾病可以用基因检测的方法预测。&&
检测的时候，先把受检者的基因从血液或其他细胞中提取出来。然后用可以识别可能存在突变的基因的引物和PCR技术将这部份基因复制许多倍。复制后，有许多方法可以判断这部分基因是否存在突变。方法有：有特殊标记物的突变基因探针方法、酶切方法和基因序列检测的方法等。&&
基因和癌症是什么样的关系？&&
癌症是基因失控造成的疾病，控制细胞有序再生更新的基因受到损伤，使细胞不受控制的生长，并且侵入邻近的组织，还向全身转移。所有癌症都与基因有关，由不正常的基因引起。然而只有一小部份癌症有遗传因素，也就是与癌症相关的基因通过父母传给后代所有的体细胞。&&
大多数癌症是因为环境因素造成基因的改变。一般说，癌症起源于单个从正常细胞变成失控生长的细胞，并且有转移的能力。从正常细胞变成失控生长的细胞，是一个或一系列基因对细胞生长的调控出现改变的结果，这些基因称作“致癌”基因。正常情况下，致癌基因促进细胞的生长，当致癌基因出现变化或突变，基因不断发出生长信号，致使细胞生长失去控制。另一组基因在正常情况下抑制细胞生长，称作肿瘤抑制基因。肿瘤抑制基因发生变化或突变，使细胞生长失去抑制，同样引起细胞失控性生长（预测乳腺癌、卵巢癌和家族性多发性息肉病的基因都属于这类基因）。DNA修复基因也与癌症发生有关。正常情况下，在前两种基因发生变化或突变的情况下，修复基因会指导细胞修复这些有问题的基因。修复基因发生突变，细胞修复能力出现问题，可以导致癌症的发生（预测结肠癌的基因属于这类基因）。&&
疾病风险的基因检测可以告诉我们什么？&&
准确的疾病风险的基因检测可以告诉受检者是否有与疾病有关的突变基因，如果受检者体内存在与疾病相关的突变基因，确定哪些因素可以影响突变基因实际上引起疾病。不同突变基因导致疾病的机会不同。例如，有家族性多发性腺瘤性息肉基因的人，100%在一生中的某个时候会发生结肠癌。在检测出携带这种基因后,&&受检者需要每半年到一年做一次结肠镜检查，发现有癌变可能的息肉，及早摘除，起到预防癌症的效果。又如，携带乳腺癌基因BRCA1基因的受检者有80%的机会在65岁的时候患乳腺癌。同样，这种基因的携带者需要从年轻的时候就做乳腺年检，发现可以转变成乳腺癌的病变及早切除，达到预防乳腺癌的效果。&&
当然，在携带癌症基因受检者的家族成员中，如果检测没有发现同样的突变基因，这些没有这种突变基因的成员，不会有同样的患癌风险。
(责任编辑：admin)
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> 都说测了成人易感基因检测惊呆了！
都说测了成人易感基因检测惊呆了！
发表于( 14:29) 本文标签：
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&&&&值班编辑QQ：
成人易感基因检测是我们耳熟能详的，不过很多人还是不知道，易感基因检测的巨大意义，它到底给我们带来了什么呢，为什么检测后的人们都惊呆了呢，下面了解一下。
基因与基因检测是什么
我们身上的基因遗传自父母，也会随着外界环境的影响而变化，比如辐射、病毒或者化学药品会打乱基因的碱基排列顺序，或是让某些碱基发生替换。通常情况下，人体能够修复大部分的基因突变。但无法修复的时候，就可能对人体正常生理机能产生影响，产生疾病，或者遗传给下一代，形成带有家族病史的遗传疾病。
而基因检测，就是通过分析对比基因四个碱基的排列顺序，了解哪个基因的序列出现了(或要出现)变化，与之对应造成了(或可能造成)哪些疾病。
基因检测：更安全、准确
基因检测以目前较为最为成熟的无创产前基因检测为例，可以准确检测给出婴儿患上唐氏综合征等染色体的数目异常唐氏综合症的准确概率数值。再比如癌症治疗，如果针只要对患者基因，肿瘤组织等进行针对性检测，就能根据每个人的特点个性化诊疗、有针对性地用药和治疗和监测，达到大大减少患者痛苦，有的放矢而提高治疗效果的目的，从而大幅度减轻患者痛苦和降低其经济负担。
早发现，早预防：常规体检往往是针对你现在的身体状况进行检测，并针对发现的问题进行治疗，对于患者来说，可能会延误病情。而且，医生对患者做出的诊疗方式，也是“对症治疗”，而那些特殊的个体可能因此而产生误诊可能。
基因检测除了对检测者现有身体状况进行检测外，还能对患病风险进行评估，并根据个人基因数据提供预防或治疗方案，“对人治疗”大大提高了诊疗的及时性和精确度。而个性化的饮食指导、生活预防能让有潜在患病风险的人避免或延缓患病。基因检测为此提供了重要的技术和手段，基因健康检测可以提高医疗卫生事业的效率，降低患病率和发病率，提高人民健康水平和生活质量，节约社会医疗资源，
形象的说，基因检测像你的一本“人体之书”，你能查阅到你的身体现在、未来的状况;因检测和基因导向下的预防保健及治疗是未来医学健康模式的必然选择，在人类社会进步中发挥重要作用。
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