急！有木有做过Tricine－SDS－PAGE小分子蛋白电泳的进！ - 实验交流 - 生物秀
标题: 急！有木有做过Tricine－SDS－PAGE小分子蛋白电泳的进！
摘要: [急！有木有做过Tricine－SDS－PAGE小分子蛋白电泳的进！] 我最近在纯化蛋白，估计纯化得到的蛋白分子量挺小的，低于10kD，想用tricine－sds-page电泳跑一下看看，但是查了资料这种电泳需配置阴极和阳极两种电泳缓冲液，我照着说明配好了，现在不知道如何使用，具体怎么加到电泳槽中。以前做sds-page的时候只需要加一种电泳缓冲液，所以糊涂了。注：文 关键词:[缓冲液 阴极 阳极 电泳 脱色 染色液 梯度胶]……
我最近在纯化蛋白，估计纯化得到的蛋白分子量挺小的，低于10kD，想用tricine－sds-page电泳跑一下看看，但是查了资料这种电泳需配置阴极和阳极两种电泳缓冲液，我照着说明配好了，现在不知道如何使用，具体怎么加到电泳槽中。以前做sds-page的时候只需要加一种电泳缓冲液，所以糊涂了。
注：文献中说是阳极电泳液加到底部，阴极的则加在上部。
亟待各位大虾的帮助和解决！回复:D，自己先顶一个，怎么木有人啊～，救命啊回复我觉得是不是那种中型胶板阿,上下各自装缓冲液的那种
另外,用TRICINE配的胶似乎也可以在一般的缓冲液里跑啊...回复貌似如果用一般的缓冲液电泳系统还是连续的，tricine好像就是不连续的电泳体系，所以好像必须得用阴阳极的缓冲液！回复我跑过Trcine-SDS-PAGE.我的蛋白3.5KD。其实你不一定需要配阴极阳极液，直接配3层梯度胶就可以，running buffer 加大离子强度，然后再冰上跑就没问题了！当然如果钱不是问题的话，更简单，买Invitrogen的4-16%梯度分离胶，效果也不错的！回复内槽为阴极缓冲液，外槽为阳极缓冲液回复就是一般的槽 上面装入阴极溶液 下面装入阳极溶液 电泳的时候阴极往阳极跑 我觉得是这样的回复楼主，请问你在配置3C/6C储备液的时候有没有遇到不溶现象，以及过滤速度极慢的问题？怎么解决的呢，求赐教回复
楼主，请问你在配置3C/6C储备液的时候有没有遇到不溶现象，以及过滤速度极慢的问题？怎么解决的呢，求赐教 我遇到过，一晚上都没有溶解，可以在稍微高一点的温度中水浴一下，立即就溶解了。我当时用的是40摄氏度，你可以低一点，而且要快，不会影响成胶。过滤慢的话只能勤换滤纸，没有别的办法了，看一下是不是没有溶解完全导致的过滤慢。回复
我跑过Trcine-SDS-PAGE.我的蛋白3.5KD。其实你不一定需要配阴极阳极液，直接配3层梯度胶就可以，running buffer 加大离子强度，然后再冰上跑就没问题了！当然如果钱不是问题的话，更简单，买Invitrogen的4-16%梯度分 ... 你好。我有点不明白，trcine的与普通的区别就是电极缓冲液不一样吗？回复建议用HPLC，tricine光跑胶就至少要跑6h以上，还不算染色脱色，非常的麻烦回复你好 我问一下 tricine SDS-PAGE的胶是梯度的吗回复二楼的方法我也用过，可以很好的分离4kD的小蛋白。其实10kD的蛋白不一定用tricine胶。可以自己做个12-21%的梯度胶，或者胶里加加6M尿素。至于什么阳极阴极缓冲液，你只要把阴极缓冲液加在上槽（和胶的样品孔相连），阳极缓冲液加在下槽即可。回复准备电泳时，在电泳槽底部加入正极缓冲液，将制好的胶连同其装置放入电泳槽内，在两块胶之间注入负极缓冲液。回复还是按照成功的先例来吧回复我最近在做Tricine胶，和普通胶的区别在于胶的配置方法不同，还有就是需要用阴阳两极缓冲液。可以先用低电压跑30min，然后再用正常电压跑完，注意控制温度，最好放在4℃的冷冻柜里面跑，效果会更好。
染色液和脱色液可以用普通胶的染色液和脱色液，染色和脱色时间不要过长了，染色之前一定要用固定液进行固定，以防小分子弥散了，染色液有很多中，我用的是乙酸铵，楼主可以试试，我跑出来了，条带很清晰回复
我最近在做Tricine胶，和普通胶的区别在于胶的配置方法不同，还有就是需要用阴阳两极缓冲液。可以先用低电压跑30min，然后再用正常电压跑完，注意控制温度，最好放在4℃的冷冻柜里面跑，效果会更好。
染色液和脱色 ... 我跑的Tricine胶10KD以下看不到东西，你的能看清楚吗？回复
二楼的方法我也用过，可以很好的分离4kD的小蛋白。其实10kD的蛋白不一定用tricine胶。可以自己做个12-21%的梯度胶，或者胶里加加6M尿素。至于什么阳极阴极缓冲液，你只要把阴极缓冲液加在上槽（和胶的样品孔相连）， ... 你好，我用文献查到的方法配制了tricine胶，也配制了阴阳极缓冲液，并且按照要求的方法跑的，只是染胶的时候直接考染的，然后煮大概20分钟脱色，结果是10KD以下没有蛋白，好奇怪，菌液也是都没有，能帮忙分析下原因吗？回复
我最近在做Tricine胶，和普通胶的区别在于胶的配置方法不同，还有就是需要用阴阳两极缓冲液。可以先用低电压跑30min，然后再用正常电压跑完，注意控制温度，最好放在4℃的冷冻柜里面跑，效果会更好。
染色液和脱色 ... 你好，是将胶直接泡在乙酸铵里吗？浓度多少？时间呢？我用文献查到的方法配制了tricine胶，并且按照要求的方法跑的，只是染胶的时候直接考染的，然后煮大概20分钟脱色，结果是10KD以下没有蛋白，好奇怪，菌液也是都没有，能帮忙分析下原因吗？回复
楼主，请问你在配置3C/6C储备液的时候有没有遇到不溶现象，以及过滤速度极慢的问题？怎么解决的呢，求赐教 请问3C/6C是什么呀，我今天配的Acr和Bis就一直不溶，超声波震荡仪也没效？急急急
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tricine胶注意事项和要点
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【求助】co-ip 后wb电泳后考染蛋白条带什么都没有，只有markei
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这个帖子发布于3年零265天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我的co-ip之后的样品电泳，考染后什么都没有条带
，怎么回事啊？谢谢
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【求助】WB跑胶完后考马斯亮蓝染色没有条带，什么原因？
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这个帖子发布于4年零337天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我刚开始做WB，转膜后没有蛋白条带。用考马斯亮蓝染色也没有条带，原因是？
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膜上没有，胶上也没有那就是转的时间长，转过头了
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用考马斯亮蓝染色也没有条带，考马斯亮蓝染色灵敏度低，可以使用银染。
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freecell edited on
westernblot转膜没条带（）的原因可能有很多，具体是哪种你自己详细看看吧，希望对你有帮助。
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那遇到这种问题，你首先要解决的就是提蛋白的问题，如果你确定考马斯亮蓝染色试剂和染色方法都没有问题的话，可能是蛋白没有提取出来。
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我一个月前让一个师姐帮忙带样，ECL显色能看到条带。最近我自己配试剂，再用同样的样品，就是胶的浓度和电压有些不同，跑完胶就用考马斯亮蓝染色。结果Mareker很清晰，蛋白孔干净的让我无语。哪位高手能指点一下是啥原因啊？我蛋白一直在-20度储存，会降解吗？有没有可能是上样缓冲液的问题？
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我的上样缓冲液有问题，郁闷啊！以后买东西可得咨询好了再买。
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上样缓冲液换过后，加样品时往上浮溢出孔，跑胶完考马斯染色很淡，是蛋白上样量不够？我上样8ug
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fangmin00 那遇到这种问题，你首先要解决的就是提蛋白的问题，如果你确定考马斯亮蓝染色试剂和染色方法都没有问题的话，可能是蛋白没有提取出来。 那蛋白定量，有浓度，是怎么回事？
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xhjggl用考马斯亮蓝染色也没有条带，考马斯亮蓝染色灵敏度低，可以使用银染。不敢相信这居然是隐形广告，版主怎么回事
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蛋白电泳条带为什么会变成这样？
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跑的是Tricine-SDS-PAGE
跑到下面就会变形
染色后也基本看不出条带了
求问原因和解决办法！
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小恒414 跑的是Tricine-SDS-PAGE
跑到下面就会变形
染色后也基本看不出条带了
求问原因和解决办法！要是胶用试剂盒配的就不是胶的问题，自己配的试剂可能是胶的问题。还有电泳槽玻璃板之间的电泳液要保持很满的状态，不要漏。你再试一下。
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dxy_iirry1oe 小恒414 跑的是Tricine-SDS-PAGE
跑到下面就会变形
染色后也基本看不出条带了
求问原因和解决办法！要是胶用试剂盒配的就不是胶的问题，自己配的试剂可能是胶的问题。还有电泳槽玻璃板之间的电泳液要保持很满的状态，不要漏。你再试一下。谢谢你的回复！胶是自己配的
但也应该没有问题
因为之前有跑成功过
电泳液也没有漏呀！
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小恒414 dxy_iirry1oe 小恒414 跑的是Tricine-SDS-PAGE
跑到下面就会变形
染色后也基本看不出条带了
求问原因和解决办法！要是胶用试剂盒配的就不是胶的问题，自己配的试剂可能是胶的问题。还有电泳槽玻璃板之间的电泳液要保持很满的状态，不要漏。你再试一下。谢谢你的回复！胶是自己配的
但也应该没有问题
因为之前有跑成功过
电泳液也没有漏呀！那很可能就是胶的问题，因为我一直用碧云天的试剂盒，从来没有过这样的问题。我看别的帖子又说PH影响的，也有可能你没调准。我以前只是板之间漏电泳液的时候会跑歪，倒没出现过心形。还有，配胶的时候一定要混匀。
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跑到下面就会变形
染色后也基本看不出条带了
求问原因和解决办法！要是胶用试剂盒配的就不是胶的问题，自己配的试剂可能是胶的问题。还有电泳槽玻璃板之间的电泳液要保持很满的状态，不要漏。你再试一下。谢谢你的回复！胶是自己配的
但也应该没有问题
因为之前有跑成功过
电泳液也没有漏呀！那很可能就是胶的问题，因为我一直用碧云天的试剂盒，从来没有过这样的问题。我看别的帖子又说PH影响的，也有可能你没调准。我以前只是板之间漏电泳液的时候会跑歪，倒没出现过心形。还有，配胶的时候一定要混匀。嗯好的！我再试试看！谢谢啦！
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胶没凝好吧
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青箬0717 胶没凝好吧应该不是
肯定是混匀了
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小恒414 青箬0717 胶没凝好吧应该不是
肯定是混匀了是凝胶时间短了吧
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很好看，还是心形，有创意哈
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小恒414 跑的是Tricine-SDS-PAGE
跑到下面就会变形
染色后也基本看不出条带了
求问原因和解决办法！是不是蛋白缓冲体系的问题？含有过高浓度的尿素或是一些分子会影响电泳的效果
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你的缓冲液和分离胶是匹配的吗？
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胶没配好吧，下面不均匀。会不会是乙醇加少了（胶太高），或者催化剂加太多凝得太快了。。。
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@小恒414，我之前也会跑得条带异常，后来我就把外围大槽也用缓冲液填满，后来跑得条带就正常了。
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xuda8 很好看，还是心形，有创意哈哈哈，赞一个，虽然不是想要的结果
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我爱大猫咪 @小恒414，我之前也会跑得条带异常，后来我就把外围大槽也用缓冲液填满，后来跑得条带就正常了。加大外槽缓冲液体积么
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xuda8 很好看，还是心形，有创意哈是呀
我师姐说我要有桃花运了哈哈哈
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@小恒414，恩，把外槽里的缓冲液加满。
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我师哥前几天也是这样，后来我发现了，原因是因为你加电缓内曹水位下降了，导致电压不稳，既跑不下也花了。你没关严实那个内壳子，患有就是外槽的旧电缓加的太少，要加到不能再加，你试试。肯定没问题了。
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dxy510-南 我师哥前几天也是这样，后来我发现了，原因是因为你加电缓内曹水位下降了，导致电压不稳，既跑不下也花了。你没关严实那个内壳子，患有就是外槽的旧电缓加的太少，要加到不能再加，你试试。肯定没问题了。谢谢你的回复~但这些办法我都试过了
还是不行…我也把缓冲液
上样缓冲液都重新配置了
所以怀疑可能是蛋白样品的问题
但是我的蛋白是透析复性后的
我也不知道该怎么办了
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你跑多大电压？
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dxy510-南 你跑多大电压？开始是90 后面进入分离胶是120
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