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3.物质的量浓度在化学实验中的应用
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分子实验常用试剂、缓冲液的配制方法
1、1M Tris-HCl 组份浓度 1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）
配制量 1L 配置方法 1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值 浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl
组份浓度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8） 配制量 1L 配置方法 1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer 组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）
配制量 1L  配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。4、3 M 醋酸钠 组份浓度 3 M 醋酸钠 （pH5.2） 配制量 100mL 配置方法 1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。5、PBS Buffer 组份浓度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 配制量 1L
配置方法 1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌
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常用实验试剂、缓冲液的配制方法
实验常用试剂、 实验常用试剂、缓冲液的配制方法1、1M Tris-HCl 、□组份浓度 1 M Tris-HClNa2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量 1L □配置方法 1. 称量下列试剂，置于 1L 烧杯中。 NaCl KCl Na2HPO4 KH2PO4 8g 0.2g 1.42 g 0.27g
（pH7.4，7.6，8.0） □配制量 1L □配置方法 1. 称量 121.1gTris 置于 1L 烧杯中。 2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的 pH 值。 pH 值 7.4 7.6 8.0 4. 将溶解定容至 1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差很大，温度每升高 1℃，溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位。 2、1.5 M Tris-HCl 、 （pH8.8） □组份浓度 1.5 M Tris-HCl □配制量 1L 2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调 pH 值至 8.8。 4. 将溶液定容至 1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值，因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大，温度每升高 1℃，溶液的 pH 值大约 降低 0.03 个单位。 3、10×TE Buffer 、 □组份浓度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0） □配制量 1L □配置方法 1. 量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL 500 mM EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向烧杯中加入约 800mL 的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至 1L 后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 4、3 M 醋酸钠 、 （pH5.2） □组份浓度 3 M 醋酸钠 □配制量 100mL 浓 HCl 约 70mL 约 60mL 约 42mL2. 向烧杯中加入约 800 mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加 HCl 将 pH 值调节至 7.4，然后加入去离子水将溶液定 容至 1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中 补充 1mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2。 6、10 M 醋酸铵 、 □组份浓度 10 M 醋酸铵 □配制量 100mL □配置方法 1. 称量 77.1g 醋酸铵置于 100～200 mL 烧杯中，加 入约 30 mL 的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至 100mL。 3.使用 0.22?m 滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl 平衡苯酚 、 □配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏 便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避 免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在 160℃对其 进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物， 这些氧化产物可引起磷酸二酯 键的断裂或导致 RNA 和 DNA 的交联等。 因此， 苯酚的质量对 DNA、 RNA 的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物 学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时 应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触 过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性 pH 条件下 DNA 分配于有机相，因 此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其 pH 值达到 7.8 以上，苯酚 平衡操作方法如下： ① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从 冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在 68℃ 水浴中使苯酚充分溶解。 ② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度 0.1％。该化合物 是一种还原剂、RNA 酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，□配置方法 1.称取 181.7gTris 置于 1L 烧杯中。□配置方法 1. 称取 40.8gNaOAc?3H2O 置于 100～200mL 烧杯 中，加入约 40mL 的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节 pH 值至 5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至 100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、 、 PBS Buffer □组份浓度 137 mM NaCl， 2.7mM KCl， mM 10同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 ③ 加入等体积的 1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅 拌 15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④ 重复操作步骤③。 ⑤ 加入等体积的 0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器 搅拌 15 分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。 ⑦ 使用 pH 试纸确认有机相的 pH 值大于 7.8。 ⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中 4℃避光保存。 8、苯酚/氯仿 异戊醇 □配置方法 、苯酚 氯仿 氯仿/异戊醇 1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯/酚/氯仿/异 戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 质变性并有 助于液相与有机相的分离， 而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现 的气泡。 2. 配置方法：将 Tris-HCl 平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇 （24：1）均匀混合后，移入棕色玻璃瓶中 4℃保存。 9、10％（ 、 ％（ ％（W/V）SDS □组份浓度 10％（W/V）SDS ） □配制量 100mL □配置方法 1.称量 10g 高纯度的 SDS 置于 100～200mL 烧杯中， 加入约 80mL 的去离子水，68℃加热溶解。 2. 滴加数滴浓盐酸调节 pH 值至 7.2。 3. 将溶液定容至 100mL 后，室温保存。 10、2 N NaOH 、 □组份浓度 2N NaOH □配制量 100mL □配置方法 1.量取 80mL 去离子水置于 100～200mL 塑料烧杯中（NaOH 溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。 2. 称取 8g NaOH 小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3. 待 NaOH 完全溶解后， 用去离子水将溶液体积定容至 100mL。 4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 11、2.5 N HCl 、 □组份浓度 2.5 N HCl □配制量 100mL □配置方法 1. 在 78.4mL 的去离子水中加入 21.6mL 的浓盐酸 （11.6N），均匀混合。 2. 室温保存。 12、5 M NaCl 、 □组份浓度 5 M NaCl □配制量 1L □配置方法 1. 称取 292.2g NaCl 置于 1L 烧杯中，加入约 800mL 的去离子水后搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至 1L 后，适量分成小份。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。 13、20％（ 、 ％（ ％（W/V）Glucose ） □组份浓度 20％（W/V）GlucoseEDTA，50mM Glucose （质粒提取用） □配制量 1L □配置方法 1. 量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。 1M Tris-HCl（pH8.0） 0.5 M EDTA（pH8.0） 20％Glucose（1.11M） dH2O 25mL 20mL 45mL 910mL2. 高温高压灭菌后，4℃保存。 3. 使用前每 50 mL 的 Soliution I 中加入 2mL 的 RNase A（20mg/mL）。 15、Solution II 、 （质粒提取用） □组份浓度 250mM NaOH，1％（W/V）SDS □配制量 500mL□配置方法 1. 量取下列溶液置于 500mL 烧杯中。 10％SDS 2N NaOH 2. 加灭菌水定容至 500mL，充分混匀。 3. 室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。 注意：SDS 易产生气泡，不要剧烈搅拌。 16、Solution III 、 （质粒提取用） 50mL 50mL□组份浓度 3M KOAc，5M CH3COOH □配制量 500mL□配置方法 1. 量取下列溶液置于 500mL 烧杯中。 KOAc CH3COOH 2. 加入 300mL 去离子水后搅拌溶解。 3. 加去离子水将溶液定容至 500mL。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 17、0.5M EDTA 、 (pH8.0) □组份浓度 0.5 M EDTA □配制量 1L 2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌。 3. 用 NaOH 调节 pH 值值 8.0（约 20g NaOH）。 注意：pH 值至 8.0 时，EDTA 才能完全溶解。 4. 加去离子水将溶液定容至 1L。 5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。 6. 室温保存。 18、1 M DTT 、 □组份浓度 1 M DTT □配制量 20mL □配置方法 1. 称取 3.09g DTT，加入到 50mL 塑料离心管内。 2. 加 20mL 的 0.01 M 的 NaOAc（pH5.2），溶解 后使用 0.22?m 滤器过滤除菌。 3. 适量分成小份后，-20℃保存。 19、10mM ATP 、 □组份浓度 10mM ATP □配制量 20mL □配置方法 1. 称取 121mg Na2ATP?3H2O，加入到 50mL 塑料离心 管内。 2. 加 20mL 的 25mM Tris-HCl（pH8.0），搅拌溶解。 3. 适量分成小份，-20℃保存。 分子生物学实验常用培养基的配制方法 分子生物学实验常用培养基的配制方法 147g 57.5mL□配置方法 1. 称取 186.1g Na2EDTA?2H2O，置于 1L 烧杯中。□配制量 100mL □配置方法 1. 称取 20g Glucose 置于 100～200mL 烧杯中， 加入约 80mL 的去离子水后，搅拌溶解。 2. 加去离子水将溶液定容至 100mL。 3. 高温高压灭菌后，4℃保存。 14、Solution I 、 □组份浓度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM1、Ampicillin 、 （100mg/ml）□组份浓度 100mg/ml Ampicillin □配制量 50mLK2HPO4）100mL。 2.称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 Tryptone Yeast Extract Glycerol 12g 24g 4mL□配置方法 1. 称量 5g Ampicillin 置于 50mL 离心管中。 2. 加入 40mL 灭菌水， 充分混合溶解后， 定容至 50mL。 3. 用 0.22?m 滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 2、IPTG 、 （24mg/mL） □组份浓度 24mg/mL IPTG □配制量 50mL3. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至 1L 后，高温高压灭菌。 5. 待溶液冷却至 60℃以下时，加入 100mL 的上述灭菌 磷酸盐缓冲液。 6. 4℃保存。 7、TB/Apm 培养基 、 □组份浓度 1.2％（W/V） 2.4％（W/V） 0.4％（V/V） 17mM 72mM 0.1mg/mL □配制量 1L □配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 溶解 2.31g KH2PO4 和 2.54g K2HPO4 于 90mL 的去离子水中，搅 拌溶解后，加去离子水定容至 100mL，高温高压灭菌。 2. 称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 10g 5g 10g Tryptone Yeast Extract Glycerol 3. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加去离子水将培养基定容至 1L 后，高温高压灭菌。 5. 待溶液冷却至 60℃以下时， 加入 100mL 的上述灭菌磷酸盐缓冲 液和 1mL Ampicillin（100mg/mL）。 6. 均匀混合后 4℃保存。 8、SOB 培养基 、 □组份浓度 2％（W/V） 0.5％（W/V） Tryptone Yeast Extract 12g 24g 4mL Tryptone配置方法 1. 称量 1.2g IPTG 置于 50mL 离心管中。 2. 加入 40mL 灭菌水， 充分混合溶解后， 定容至 50mL。 3. 用 0.22?m 滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 3、X- Gal 、 （20mg/mL） □组份浓度 20mg/mL X- Gal □配制量 50mL 2. 加入 40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合 溶解后，定容至 50mL。 3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 4、 培养基 、 LB □组份浓度 1％ （W/V） Tryptone， （W/V） 0.5％Yeast Extract Glycerol KH2PO4 K2HPO4 Ampicillin□配置方法 1. 称取 1g X-Gal 置于 50mL 离心管中。Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量 1L □配置方法 1. 称量下列试剂，置于 1L 烧杯中 Tryptone Yeast Extract NaCl2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加 5N NaOH（约 0.2mL），调节 pH 值至 7.0。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 5、LB/Amp 培养基 、 □组份浓度 1％（W/V） 0.5％（W/V） 1％（W/V） 0.1mg/mL □配制量 1L □配置方法 1. 称量下列试剂，置于 1L 烧杯中 Tryptone Yeast Extract NaCl 10g 5g 10g Tryptone Yeast Extract NaCl Ampicillin0.05％（W /V） NaCl 2.5mM 10mM □配制量 1L □配置方法 1. 配制 250mM KCl 溶液。 在 90mL 的去离子水中溶解 1.86g KCl 后，定容至 100mL。 2. 配制 2M MgCl2 溶液。在 90mL 的去离子水中溶解 19g MgCl2 后，定容至 100mL，高温高压灭菌。 3. 称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 Tryptone Tryptone Yeast Extract Glycerol KH2PO4 K2HPO4 Yeast Extract NaCl 4. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 5 量取 10mL 250 mM KCl 溶液，加入到烧杯中。 6. 滴加 5N NaOH 溶液（约 0.2mL），调节 pH 值至 7.0。 7. 加入去离子水将培养基定容至 1L。 8. 高温高压灭菌后，4℃保存。 20g 5g 0.5g KCl MgCl22. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加 5N NaOH（约 0.2mL），调节 pH 值至 7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至 1L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。 6. 加入 1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4℃保存。 6、TB 培养基 、 □组份浓度 1.2％（W/V）2.4％（W/V） 0.4％（V/V） 17mM 72mM □配制量 1L□配置方法 1. 配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M9. 使用前加入 5mL 灭菌的 2M MgCl2 溶液。 9、SOC 培养基 、 □组份浓度 2％（W/V） Tryptone Yeast Extract NaCl KCl MgCl2 葡萄糖4. .加水离子水将培养基定容至 1L。 5. 高温高压后，4℃保存。 13、 、 NZYM 培养基 □组份浓度 0.5％ （W/V） Yeast Extract NZ 胺 NaCl MgSO4?7H2O0.5％（W/V） 0.05％（W /V） 2.5mM 10mM 20mM □配制量 100mL □配置方法1％（W /V） 0.5％（W /V） 0.2％ （W /V） 外，其他成份与 NZCYM 培养基相同。 14、NZM 培养基 、 □组份浓度 1％（W /V）□配置方法 NZYM 培养基除不含 Casamino Acid（酪蛋白氨基酸） NZ 胺 NaCl MgSO4?7H2O1. 配制 1M 葡萄糖溶液。将 18g 葡萄糖溶于 90mL 去离子水中，充 分溶解后定容至 100mL，用 0.22?m 滤膜过滤除菌。 2. 向 100mL SOB 培养基中加入除菌的 1M 葡萄糖溶液 2mL，均匀 混合。 3. 4℃保存。 10、 、 2×YT 培养基 □组份浓度 1.6％ （W/V） Tryptone， 1％ （W/V）0.5％（W /V） 0.2％（W /V） 其他成份与 NZYM 培养基相同。□配置方法 NZM 培养基除不含 Yeast Extract（酵母提取物）外， 15、 、 一般固体培养基的 □配置方法 1. 按照液体培养基配方准备好 液体培养基，在高温高压灭菌前，加入下列试剂中的一种。 配制 Agar（琼脂：铺制平板用） Agar（琼脂：配制顶层琼脂用） Agarose（琼脂糖：铺制平板用） 15g/L 7g/L 15 g/LYeast Extract，0.5％（W/V）NaCl □配制量 1L □配置方法 1.称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 Tryptone Yeast Extract NaCl 3. 滴加 1N KOH，调节 pH 值至 7.0。 4. .加水离子水将培养基定容至 1L。 5. 高温高压后，4℃保存。 11、Φb×broth 培养基 □组份浓度 2％（W/V）Tryptone， 0.5％ 、 （W/V）Yeast Extract，0.5％（W/V）MgSO4?7H2O □配制量 1L □配置方法 1.称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 Tryptone Yeast Extract MgSO4?7H2O 3. 滴加 1N KOH，调节 pH 值至 7.5。 4. .加水离子水将培养基定容至 1L。 5. 高温高压后，4℃保存。 12、 、 NZCYM 培养基 □组份浓度 0.5％ （W/V） Yeast Extract Casamino Acid NZ 胺 NaCl MgSO4?7H2O 20g 5g 5g 16g 10g 5gAgarose（琼脂糖：配制顶层琼脂用） 7g/L 2. 高温高压灭菌后，带上手套取出培养基，摇动容器使 琼脂或琼脂糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。 3. 待培养基冷却至 50～60℃时，加入热不稳定物质（如 抗生素），摇动容器充分混匀。 4. .铺制平板（30～35mL 培养基/90mm 培养皿）。 16、LB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度 、 /V） Tryptone 0.5％（W/V） 1％（W/V） 0.1mg/mL 0.5％（W /V） 0.04mg/mL 1.5％（W /V） □配制量 1L □配置方法 1. 称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 Tryptone Yeast Extract NaCl 10g 5g 10g Yeast Extract NaCl Ampicillin IPTG X-Gal Agar 平板培养基 1％（W2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。2. 加入约 800mL 的去离子水， 充分搅拌溶解。0.1％（W/V） 1％（W /V） 0.5％（W /V） 0.2％（W /V） □配制量 1L2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加 5N NaOH 溶液 （约 0.2mL） 调节 pH 值至 7.0。 ， 4. 加水离子水将培养基定容至 1L 后，加入 15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至 60℃左右。 6. 加入 1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG （24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均匀混合。 7. 铺制平板（30～35mL 培养基/90mm 培养基）。 8. 4℃保存平板。 17、TB/Amp/X-Gal/IPTG □组份浓度 、 1.2％（W /V） 平板培养基 2.4％（W/V） 0.4％（W/V） 17mM Tryptone Yeast Extract Glycerol KH2PO4□配置方法 1.称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 Yeast Extract Casamino Acid NZ 胺 NaCl MgSO4?7H2O 5g 1g 10g 5g 2g2. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加 5N NaOH 溶液（约 0.2mL），调节 pH 值至 7.0。72mM 0.1mg/mL 0.024mg/mL 0.04mg/mL 1.5％（W /V） □配制量 1LK2HPO4 Ampicillin IPTG X-Gal Agar1.在 500mL 的磨口回流装置内加入钨酸钠?2 水 25.0359g， 钼酸钠?2 水 6.2526g，去离子水 175mL，85％磷酸 12.5mL， 浓盐酸 25mL，充分混合。 2.回流 10 小时，再加硫酸锂 37.5g，去离子水 12.5mL 及数滴溴。 3.然后开口沸腾 15min，以驱除过量的溴，冷却后定容到 250mL。 4.于棕色瓶中保存，可使用多年 注意： 上述制备地 Folin 试剂乙地贮备液浓度一般在 2mol/L 左 右， 几种操作方案都是把 Folin 试剂乙稀释至 1mol/L 的 浓度作为应用 液， 我们这时是把贮备液于使用前稀释 18 倍， 使之浓度为 0.1mol/L 12g 24g 4mL 略高。这种稀释 18 倍后的 Folin 试剂乙就是上文称之为的“应用 液”。Folin 试剂乙贮备 液浓度的标定，一般是以酚酞为指示剂。 用 Folin 试剂乙去滴定 1mol/L 左右的标准氢氧化钠溶液， 当溶液颜 色由红变为紫灰，再突然变成墨绿即为终点，如果用氢氧化钠去滴 定 Folin 试剂乙，终点不太好掌握，溶液地颜色是由浅黄变为浅绿， 再变为灰紫色为终点。 8、DNS 试剂 、 □配置方法 1.取 3，5-二硝基水杨酸 10g,加入 2mol/L 氢氧化钠溶液 200mL。 （3，5-二硝基水杨酸试剂） 2.将 3，5-二硝基水杨酸溶解，然后加入酒石酸钾钠 300g。 3. 待其完全溶解，用去离子水稀释至 2000mL，棕色瓶保存。 9、5％蔗糖溶液 、 ％ □组份浓度 5％ □配制量 1L □配置方法 称取蔗糖 50g，用去离子水溶解定容至 1L。 10、0.1mol/L 蔗糖溶液 、 蔗糖溶液 □组份浓度 0.1mol/L □配制量 1L □配置方法 称取蔗糖 34.230g，用去离 子水溶解并定容至 1L。 11、20％乙酸溶液 、 ％ □组份浓度 20％ □配制量 1.2L □配置方法 量取冰乙酸 300mL，用去离子水稀释至 1200mL。 12、30％（ 、 ％（ ％（W/V）Acrylamide ） □组份浓度 30％（W/V）Acrylamide 0.05％ □配制量 1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于 1L 烧杯中 Acrylamide BIS 290g 10g□配置方法 1.配制磷酸盐缓冲液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。 2. 称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 Tryptone Yeast Extract Glycerol3. 加入约 800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 4. 加水离子水将培养基定容至 1L 后，加入 15gAgar。 5. 高温高压灭菌后，冷却至 60℃左右。 6. 加入 100mL 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal （20mg/mL）后均匀混合。 7. 铺制平板（30～35mL 培养基/90mm 培养基）。 8. 4℃保存平板。 生物化学实验常用试剂的配制方法 1、0.5mol/L 氢氧化钠溶液 □组份浓度 0.5mol/L 、 □配制量 2L□配置方法 1.准确称取氢氧化钠 40g。 2.用去离子水溶解并稀释至 2L。 2、0.5mol/L 盐酸溶液 、 □组份浓度 □配制量 0.5mol/L 2L□配置方法 1.准确量取盐酸 83.4mL。 2.用去离子水稀释至 2L。 4、0.2％葡萄糖标准溶液 、 ％ □组份浓度 0.2％ □配制量 1L □配置方法 1.称取葡萄糖 2.5g 置于称量瓶中， 70℃干燥 2 小时。 在 2.干燥器中冷却至室温，重复干燥，冷却至恒重。 3.准确称取葡萄糖 2.000g。 4.用去离子水溶解并定容至 1L 5.于 4℃保存。 5、250?g/mL 牛血清 、 白蛋白标准液 □组份浓度 250?g/mL □配制量 2L 2.用 0.03mol/LpH7.8 的磷酸缓冲液溶解并定容至 1L。 3.4℃保存。 6、Folin 试剂甲 、 □配置方法 1.称取 10g 氢氧化钠溶于 400mL 去离子水中， 加入 50g 无水碳酸钠，溶解，待用。 2.称取 0.5g 酒石酸钾钠，溶于 80mL 去离子水中， 加入 0.25g 硫酸铜?5 水，溶解。 3.将 1：2：去离子水按 20：4：1 的比例混合即可。 4. 4℃保存，可用一周。 7、Folin 试剂乙 、 □配置方法2.向烧杯中加入约 600mL 的去离子水，充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至 1L， 0.45?m 滤膜滤去杂质。 用 4.于棕色瓶中 4℃保存。 注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒， 但也应谨慎操作， 因为有可能含有少量的未聚合成份。 13、40％（ 、 ％（ ％（W/V）Acrylamide ） □组份浓度 40％（W/V）Acrylamide 0.05％ □配制量 1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于 1L 烧杯中 Acrylamide BIS 380g 20g□配置方法 1.准确称取 250mg 标准牛血清白蛋白。2.向烧杯中加入约 600mL 的去离子水，充分搅拌溶解 3.加入去离子水将溶液定容至 1L，用 0.45?m 滤膜滤去杂质。 4.于棕色瓶中 4℃保存。 注意：丙稀铣胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收， 其作 用有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无 毒，但也应谨慎 操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。 14、10％（ 、 ％（ ％（W/V）过硫酸铵 ） □组份浓度 10％（W/V）过硫酸铵 □配制量 10mL 2.加入 10mL 的去离子水后搅拌溶解。 3.贮存于 4℃。 注意：10％过硫酸胺溶液在 4℃保存时间可使用 2 周左右， 超过期限会失去催化作用。 15、考马斯亮蓝 R-250 染色液 、 □组份浓度 0.1％（W/V）考马斯亮蓝 R-250，25%（V/V）异丙醇， 10％（V/V）冰醋酸 □配制量 1L □配置方法 1.称取 1g 过硫酸铵。□配置方法 1.量取下列试剂，加入 100～200mL 试剂瓶中。 20％硝酸银 2mL 浓氨水 1mL 4％氢氧化钠 1mL dH2O 96mL 2.均匀混合。 该溶液应为无色透明状。 如氨水浓度过低时溶液 会呈现混浊状，此时应补加浓氨水，直至透明。 3.本染色液应现用现配，不宜保存。 20、显影液 、 □组份浓度 0.005％（V/V）柠檬酸，0.02％（V/V）甲醛 (SDS-PAGE 银氨染色用) □配制量 1L 柠檬酸 50mg 甲醛 0.2mL 2.加入 1L 去离子水后，摇动混合后溶解。 3.室温保存。 21、45％乙醇溶液 、 ％ □组份浓度 45％ □配制量 1L □配置方法 量取无水乙醇 450mL，加入去离子水 550mL，混匀。 22、5％的十二烷基硫酸钠溶液 □组份浓度 5％ 、 ％ （W/V） 23、三氯甲烷-异戊醇混合试剂 、三氯甲烷 异 配置方法 取 500mL 三氯甲烷试剂， 加入 21mL 异戊醇试剂， 混匀。 24、1.6％乙醛溶液 、 ％ 醋酸 乙醇 dH2O □组份浓度 1.6％ □配制量 0.1L □配置方法 取 47％乙醛 3.4mL，用去离子水定容至 100mL。 25、二苯胺试剂 、 □配置方法 1.称取二苯胺试剂 0.8g，溶解于 180mL 冰乙酸中， 2.再加入 8mL 高氯酸混匀。 3. 临用前加入 0.8mL 1.6％乙醛溶液。 注意：配制完成后试剂应为无色。 26、15％三氯乙酸溶液 、 ％ □组份浓度 15％ □配制量 27、1％谷氨酸溶液 、 ％ 2L □配制量 0.1L 配置方法:称取 5.0g 十二烷基硫酸钠,溶于 100mL4％的乙醇溶液中。 □配置方法 1.称取下列试剂，置于 1L 试剂瓶中。□配置方法 1.称取 1g 考马斯亮蓝 R-250,置于 1L 烧杯中。 2.量取 250mL 的异丙醇加入上述烧杯中， 搅拌溶解。 3.加入 100mL 的冰乙醋酸，均匀搅拌。 4.加入 650mL 的去离子水，均匀搅拌。 5.用滤纸出去颗粒物质后，室温保存。 16、考马斯亮蓝染色脱色液 、 □组份浓度 10％（V/V）醋酸，5％（V/V）乙醇 □配制量 1L □配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。 100mL 50mL 850mL2.充分混合后使用。 17、凝胶固定液 、 □组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）醋酸 (SDS-PAGE 银氨染色用) 甲醇 □配制量 100L □配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。 500mL 醋酸 100mL dH2O 400mL 2.均匀混合后室温保存。 18、凝胶处理液 、 □组份浓度 50％（V/V）甲醇，10％（V/V）戊二醛 (SDS-PAGE 银氨染色用) 甲醇 戊二醛 dH2O 19、凝胶染色液 、 □组份浓度 0.4％（W/V）硝酸银，1％（V/V）浓氨水， (SDS-PAGE 银氨染色用) 0.04％（W/V）氢氧化钠 □配制量 100L □配制量 1L □配置方法 1.量取下列溶液，置于 1L 烧杯中。 50mL 10mL 40mL□配置方法 称取三氯乙酸 300g， 用去离子水溶解定容至 2000mL。 □组份浓度 1％ □配制量 0.5L□配置方法 1.称取 5g 谷氨酸，先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至 0.5L。 28、1％丙酮酸溶液 、 ％ □组份浓度 □配制量 1％ 0.5L□配置方法 1.称取 5g 丙氨酸， 先用适量得用去离子水溶解。 2. 再用氢氧化钾溶液中和至中性。 3. 最后用去离子水定容至 0.5L。 29、0.1％的碳酸氢钾溶液 、 ％ □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L2. 均匀混合后室温保存。□配置方法 称取碳酸氢钾 0.5g， 用去离子水溶解定容至 0.5L。30、0.05％的碘乙酸溶液 、 ％□组份浓度 0.05％ □配制量 0.25L（pH 6.0） ）□配制量 1L 2. 称取磷酸二氢钠?2 水 27.34g。 3. 用去离子水溶解并定容至 1L。室温保存。□配置方法 1. 称取磷酸氢二钠?12 水 8.82 g。□配置方法 称取 0.125g 碘乙酸， 用去离子水溶解定容至 0.25L。 31、Locke 氏溶液 、 □配制量 2L 2、洗脱液 、 配置方法 称取 18g 氯化钠,0.84g 氯化钾, 48g 氯化钙,0.3g 碳酸 氢钠，2g 葡萄糖，用去离子水溶解定容至 2000mL。 32、0.2mol/L 的丁酸溶液 、 □组份浓度 0.2mol/L □配制量 1L □配置方法 1.量取 18mL 正丁酸试剂。 2.用 1mol/L 的氢氧化钠中和。 3.再用去离子水定容至 1L。 33、0.1mol/L 的硫代硫酸钠溶液 □组份浓度 0.1mol/L 、 □配制量 34、0.1mol/L 的碘溶液 、 10L □配置方法 称 248.17g 硫代硫酸钠， 用去离子水溶解并定至 10L。 □组份浓度 0.1mol/L □配制量 1L □配置方法 1.称取碘 12.7g 和碘化钾 25g。 2.用去离子水溶解并定容至 1L。 3.用 0.1mol/L 的硫代硫酸钠标定。 35、10％氢氧化钠溶液 、 ％ □组份浓度 10％ □配制量 2L □配置方法 称取 200g 氢氧化钠， 用去离子水溶解并定容至 2L。 36、10％盐酸溶液 、 ％ □组份浓度 10％ □配制量 0.2L □配置方法 量取浓盐酸 49.3mL，用去离子水定至 0.2mL。 37、0.1％标准丙氨酸溶液 、 ％ □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L □配置方法 称取丙氨酸 0.5g， 用去离子水溶解并定容至 0.5mL。 38、0.1％标准谷氨酸溶液 、 ％ □组份浓度 0.1％ □配制量 0.5L 缓冲液注意：此为母液，使用时稀释 40 倍使用。 □组份浓度 0.15mol/L □配制量 10L 2. 用 0.2mol/L pH6.0 的 磷酸缓冲液 250mL 溶解。 3. 用去离子水稀释至 10 L。 室温保存。 3、0.3mol/L 磷酸缓冲液 、 （pH7.8） ） □组份浓度 0.3mol/L □配制量 0.5L （含 0.15mol/L 氯 化钠的 0.005mol/L pH 6.0 的磷酸缓冲液） 的磷酸缓冲液）□配置方法 1.称取氯化钠 87.66g。□配置方法 1.准确称取磷酸氢二钠?12 水 49.150g。 2.磷酸二氢钠?2 水 2.000g。 3. 用去离子水溶解并定容至 0.5L。 室温保存。 注意：此为母液，使用时稀释 10 倍使用。 4、0.2mol/L 乙酸缓冲液 、 （pH4.6） ） □组份浓度 0.2mol/L □配制量 2L□配置方法 1.准确称取乙酸钠?3 水 54.44g。 2. 加入 23mL 冰乙酸，溶解。 3. 用去离子水溶解并定容至 2L。 4℃保存。 5、0.2mol/L 磷酸 柠檬酸 、 磷酸-柠檬酸 （pH 2.6、4.6、6.6） 、 、 ） □配置方法 1. 母液 A（0.2mol/L 的 Na2HPO4 溶液）：称取 Na2HPO4?12 水 143.256g， 用去离子水定容至 2L。 2. 母液 B（0.1mol/L 的柠檬酸溶液）：称取柠檬酸?1 水 42.028g 用去离子水溶解定容至 2L。 3. pH2.6、4.6、6.6 的三种缓冲液如下表配制： pH 值 A（mL） B（mL） 2.6 4.6 6.6 6、20×SSC 缓冲液 、 （pH7.0） ） 109.0 467.5 727.5 891.0 532.5 272.5 □组份浓度 0.2mol/L □配制量 各 1L□配置方法 称取谷氨酸 0.5g， 用去离子水溶解并定容至 500mL。 39、0.1％水合茚三酮乙醇溶液 □组份浓度 0.1％ 、 ％ □配制量 40、酚溶液 、 □配置方法 在大烧杯中加入 80mL 去离子水，再加入 300g 苯酚， 在水 浴中加热搅拌、混合至苯酚完全溶解。将该溶液倒入盛有 200mL 去离子水的 1000mL 分液漏斗内，轻轻振荡混合，使其成为 乳状液。静止 7～10 小时，乳状液变成两层透明溶液，下层为被水 饱和的酚溶液，放出下层，贮存于棕色瓶中备用。 41、0.5％淀粉溶液 、 ％ □组份浓度 0.5％ □配制量 42、对羟基联苯试剂 、 配置方法 称取对羟基联苯 1.5g， 溶于 100mL0.5％氢氧化钠溶液中， 配制成 1.5％的溶液。若对羟基联苯颜色较深，应用丙酮 或 无水乙醇重结晶，放置时间较长后，会出项针状结晶， 应摇匀后使用。 生物化学实验常用缓冲液的配制方法 1、0.2 mol/L 磷酸缓冲液 、 □组份浓度 0.2mol/L 0.1L 1L □配置方法 称取 1g 水合茚三酮试剂， 溶于 1000mL 无水乙醇中。4. 按上表混匀后，4℃保存。 □配制量 1L □配置方法 1.准确称取 175.2g 氯化钠。 2.准确称取 88.2g 柠檬酸钠?2 水。 3.溶解于 800mL 去离子水中。 4.加入数滴 10mol/L 氢氧化钠溶液调节 pH 值至 7.0。 5.加去离子水定容至 1L。 注意：按实验需要可分装后高压灭菌。 10×SSC、5×SSC、1×SSC 可由 20×SSC 做相应稀释得到。 7、0.15mol/L 氯化钠 、 氯化钠乙二胺四乙酸二钠 缓冲液 （pH8.0） ） □组份浓度 □配制量 0.15mol/L 1L□配置方法 称取淀粉 0.5g，用去离子水溶解定容至 0.1L。□配置方法1.准确称取氯化钠 8.77g。 2. 称取乙二胺四乙酸二钠 37.2g。 3. 溶于 800mL 去离子水中。4.用固体的氢氧化钠调 pH 值为 8.0。 5.加去离子水定容至 1L。8、1/15mol/L 的磷酸盐 、 缓冲液 （pH7.6） ） □配置方法□组份浓度 0.15mol/L □配制量 1L（1）凝胶的特性要点 葡聚糖 G 后面的数字代表不同的交联度， 数值越大交联度越小， 吸 水量越大。其数值大致为吸水量 X 的 10 倍。Sephadex 对 碱和弱酸稳定（在 0.1mol/L 盐酸中可以浸泡 1～2 小时）。 在中性时可以高压灭菌。不同型号中又有颗粒粗细之分。 颗粒粗的分离效果差，流速快。颗粒越细分离效果越好， 但流速也越慢。 交联葡聚糖工作时的 pH 稳定在 2～11 的范 围内。 葡聚糖 G 型凝胶分离的分子量分级范围为 700～8× 105 。 SephadexG 型 葡 聚 糖 凝 胶 的 数 据 见 下 表 。1.溶液甲（1/15mol/L 的 KH2PO4 溶液）：称取 KH2PO4 9.078g，用 去离子水溶解定容至 1L。 2. 溶液乙(1/15mol/L 的 Na2HPO4 溶液):称取 Na2HPO4? 2 水 11.876g （或磷酸氢二钠?12 水 23.894g）用去离子水溶解定容至 1L。 3.pH7.6 磷酸盐缓冲液：将①和②按 1.4：8.6 比例混合即可。 9、5×Tris-GlycineBuffer 、 Glycine，0.5％（w/v）SDS 电泳缓冲液） （SDS-PAGE 电泳缓冲液） □配制量 1L □配置方法 1.称取下列试剂，置于 1L 烧杯中。 Tris Glycine SDS 2.加入约 800mL 的去离子水，搅拌溶解。 3.加去离子水将溶液定容至 1L 后，室温保存。 10、5×SDS-PAGE 、 Loading Buffer □组份浓度 250mM Tris-HCl（pH6.8） 10％（W/V） SDS 0.5％（W/V） BPB 50％（V/V） 甘油 5％（W/V） β-巯基乙醇 □配制量 5mL □配置方法 1.量取下列试剂，置于 10mL 塑料离心管中。 1M Tris-HCl 1.25mL SDS 0.5g BPB 25mg 甘油 2.5mL 2.加入去离子水溶解后定容至 5mL。 3.小份（500?l/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将 25?l 的 2-ME 加到每小份中。 5.加入 2-ME 的 Loading Buffer 可在室温下保存一个月左右 生物化学实验常用柱料数据及性质 1、DEAE 阴离子交换纤维素 （1）纤维素的处理 取纤维素干品用蒸馏水浸泡，充分溶涨并搅拌均匀， 过夜。 次日再搅匀， 静止 30min 留下沉集部分 （重复 3 次） ， 用真空泵抽干。然后用适量的 0.5mol/L 的氢氧化钠溶液浸 泡 30min，抽干，蒸馏水洗至中性；再用适量的 0.5mol/L 的盐酸溶液浸泡 30min，抽干，蒸馏水洗至中性；重复用 0.5mol/L 的氢氧化钠溶液浸泡 30min，抽干，蒸馏水洗至 中性。最后用 0.005mol/L pH6.0 的磷酸缓冲液浸泡待用。 （2）纤维素的重生 回收的纤维素先用 0.5mol/L 氯化钠-0.5mol/L 氢氧化钠 溶液浸泡，再按上述（1）操作处理，即可再次投入使用。 （3）纤维素的保存 回收后，用 0.5mol/L 氢氧化钠溶液浸泡 30min 后，蒸 馏水洗至中性，抽干，于鼓风干燥箱中 60℃烘干后，保存。 2、SephadexG 型葡聚糖凝胶 15.1g 94g 5.0g □组份浓度 0.125M Tris，1.25M*本表数值取自 Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。 30cm 层析柱在 25℃用蒸馏水测定之值。 D＝Darcy’s law (2)凝胶的溶胀***为 2.6×G 系交联葡聚糖凝胶亲水性强，只能在水中溶胀（仅有少量的有机 溶剂也可以使之溶胀），有机溶剂或含有有机溶剂较多的水溶液会 改变其孔隙，使之收缩失去或降低凝胶的分离能力。在水中溶胀时 如在室温则需要较长时间，才能达到充分溶胀的程度，但可煮沸到 100℃，以缩短其溶胀时间。见下表 Sephadex G 型葡聚糖凝胶溶胀所需时间 凝胶型号 G-10～ G-200 Sephadex G-10 G-1 5 G-2 3 1 3 1 所需最小溶胀时间* 20～22℃ （室 温） 3 100℃（沸水 浴） 15 G-5 0 G-7 5 G-1 00 G-1 50 G-2 00 *溶胀时要将凝胶浸泡在过量的水或缓冲液中。 在整个溶胀 过程中应避免剧烈地搅拌，尤其不能使用电磁搅拌，以免 破坏了它的颗粒结构， 以及产生许多碎末而影响洗脱时的 流速。 （3）凝胶的回收与保存 凝胶的再生最好不要在柱上进行（有些凝胶可以在 位清洗），可将凝胶在 0.5mol/L 氯化钠及 0.5mol/L 氢氧化 钠的混合溶液中浸泡；一般约需 30 分钟以上。然后用蒸馏 水洗至中性，最后用缓冲液平衡即可恢复使用。 经常使用的凝胶，一般加入一些抗菌剂放在普通 冰箱中，即可保存较长的时间。如确切在相当长的时间里不准备使 用时，则以保存干凝胶为好。处理时可先用较浓的氯化钠浸泡（如 0.5mol/L）,在用 0.5mol/L 的氢氧化钠处理并用蒸馏水洗至中性，然 后用递增百分比浓度的乙醇分多次作脱水处理。一般可从 30％的 乙醇开始；每次均应让凝胶在乙醇中多浸泡一些时间。在无水乙醇 处理后，最后再用乙醚处理一次以加速乙醇的挥发。处理后的凝胶 宜在 80℃以下的温度烘干。在进行凝胶的回收时，如在每一步操 作时，均使用布氏漏斗抽滤可大大地加快整个回收过程。 【注意】 a．凝胶在氢氧化钠溶液中浸泡的时间不要太长。 b．不要图快过早地使用百分浓度太大地乙醇，以免凝胶颗粒收缩 太快，破坏了它地结构，因而影响了它地分离能力。 c．在乙醚未充分挥发完以前，切不可将含有多量乙醚地凝胶放入 烘箱，以免发生危险。 d．溶胀了地凝胶不可放入低温冰箱中冻结，以免其球形结构被破 坏。 微生物学实验常用培养基的配制 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 琼脂 pH 水 121℃灭菌 20min。 2、高氏（Gause）1 号培养基（培养放线菌用） 、高氏（ ） 号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉 硝酸钾 20g 1g 72 5 72 5 72 5 24 3 3 1氯化钠 磷酸氢二钾 硫酸镁 硫酸亚铁 琼脂 水 pH0.5g 0.5g 0.5g 0.01g 20g 1000mL 7.2～7.4配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在 火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至 1000mL。 121℃灭菌 20min。 3、查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 、查氏（ ）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠 磷酸氢二钾 氯化钾 硫酸镁 硫酸亚铁 蔗糖 琼脂 水 pH 121℃灭菌 20min。 4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 、马丁氏（ ）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖 蛋白胨 磷酸二氢钾 七水合硫酸镁 1/3000 孟加拉红（rose bengal，玫瑰红水溶液） 琼脂 pH 蒸馏水 112℃灭菌 30min。 临用前加入 0.03%链霉素稀释液 100mL，使每毫升培养基中含 链霉素 30?g。 5、马铃薯培养基（简称 PDA）（培养真菌用） 、马铃薯培养基（ ）（培养真菌用 ）（培养真菌用） 马铃薯 蔗糖（或葡萄糖） 琼脂 pH 200g 20g 15―20g 自然 15―20g 自然 800mL 10g 5g 1g 0.5g 100mL 2g 1g 0.5g 0.5g 0.01g 30g 15~20g 1000mL 自然培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸 30min，然后用纱布 3g 5g 10g 15~20g 7.0~7.2 1000mL 过滤， 再加糖及琼脂， 熔化后补足水至 1000mL。 121℃灭菌 30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 、 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水 6―12 小时，至 15℃ 阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸 长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、 将干麦芽磨碎， 一份麦芽加四份水， 65℃水浴中糖化 3―4 在 小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约 20mL，调匀至生泡沫时为 止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用 4―6 层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约 20mL，调匀至生泡沫时为止， 然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到 5―6 波美度，pH 约 6.4，加入 2%琼脂即成。 121℃灭菌 30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌） 、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌） 甘露醇（或葡萄糖） 磷酸二氢钾 七水合硫酸镁 氯化钠 二水合硫酸钙 碳酸钙 蒸馏水 pH 113℃灭菌 30min。 8、半固体肉膏蛋白胨培养基 、 肉膏蛋白胨液体培养基 琼脂 pH 121℃灭菌 20min。 9、合成培养基 、 偏磷酸铵 氯化钾 七水合硫酸镁 豆芽汁 琼脂 蒸馏水 pH 示剂）。121℃灭菌 20min。 10、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖）培养基 、豆芽汁蔗糖（或葡萄糖） 黄豆芽 蔗糖（或葡萄糖） 水 pH 100g 50g 1000mL 自然 1g 0.2g 0.2g 10mL 20g 1000mL 7.0 100mL 0.35―0.4g 7.6 10g 0.2g 0.2g 0.2g 0.2g 5g 1000mL 7.0―7.2(3)、调好 pH 值后，再加入中性红。 (4)、分装时，需不断搅拌，使油均匀分布于培养基中。 12、淀粉培养基 、 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 可溶性淀粉 蒸馏水 琼脂 121℃灭菌 20min 13、明胶培养基 、 牛肉膏蛋白胨液 明胶 pH 100mL 12―18g 7.6 10g 5g 5g 2g 1000mL 15―20g在水浴锅中将上述成分溶化， 不断搅拌。 溶化后调 pH7.2―7.4。 121℃灭菌 30min。 14、蛋白胨水培养基 、 蛋白胨 氯化钠 蒸馏水 pH 121℃灭菌 20min。 15、糖发酵培养基 、 蛋白胨水培养基 1.6%溴钾酚紫乙醇溶液 pH 培养基的配制： (1)、将上述含指示剂的蛋白胨水培养基（pH7.6）分装于试管 中，在每管内放一倒置的小玻璃管（Durham tube），使之充满培 养液。 (2)、将已分装好的蛋白胨水和 20%的各种糖溶液分别灭菌， 蛋白胨水 121℃灭菌 20min；糖溶液 112℃灭菌 30min。 (3)、 灭菌后， 每管以无菌操作分别加入 20%无菌糖溶液 0.5 mL （按每 10mL 培养基中加入 20%的糖液 0.5mL，则成 1%的浓度）。 配制用的试管必须洗干净，避免结果混乱。 16、葡萄糖蛋白胨水培养基 、 蛋白胨 10g 5g 5g 10g 1mL 15―20g 1000mL 7.2 葡糖糖 磷酸氢二钾 蒸馏水 试管，每管 10mL，112℃灭菌 30min。 17、麦氏（Meclary）琼脂（酵母菌） 、麦氏（ ）琼脂（酵母菌） 葡萄糖 氯化钾 酵母浸膏 醋酸钠 琼脂 蒸馏水 1g 1.8g 2.5g 8.2g 15―20g 1000mL 5g 5g 2g 1000mL 1000mL 1―2mL 7.6 10g 5g 1000mL 7.6另配制 20%糖溶液（葡萄糖、乳糖、蔗糖等）各 10mL。加 12 mL0.04%的溴钾酚紫（pH5.2―6.8，颜色由黄变紫，作指培养基的配制： 称新鲜豆芽 100g， 放入烧杯中， 加入水 1000mL， 煮沸约 30min，用纱布过滤。用水补足原量，再加入蔗糖（或葡萄 糖）50g，煮沸熔化。121℃灭菌 20min 。 11、油脂培养基 、 蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 香油或花生油 1.6%中性红水溶液 琼脂 蒸馏水 pH 121℃灭菌 20min 注：(1)、不能使用变质油。 (2)、油和琼脂及水先加热。将上述各成分溶于 1000mL 水中，调 pH7.0―7.2，过滤。分装113℃灭菌 20min。 18、柠檬酸盐培养基 、 磷酸二氢铵 磷酸氢二钾 氯化钠 硫酸镁 柠檬酸钠 琼脂 蒸馏水 1%溴麝香草酚蓝乙醇液 1g 1g 5g 0.2g 2g 15―20g 1000 mL 10 mL蒸馏水 5%碱性复红乙醇溶液1000 mL 20 mL培养基的配制：先将琼脂加入 900 mL 蒸馏水中，加热溶解， 再加入磷酸氢二钾及蛋白胨，使溶解，补足蒸馏水至 1000 mL，调 pH 至 7.2―7.4。加入乳糖，混匀溶解后，115℃灭菌 20min。称取 亚硫酸钠置一无菌空试管中，加入无菌水少许使溶解，再在水浴中 煮沸 10min 后。立刻滴加于 20 mL 5%碱性复红乙醇溶液中，直至 深红色褪成淡粉红色为止。 将此亚硫酸钠与碱性复红的混合液全部 加至上述已灭菌的并仍保持熔化状态的培养基中，充分混匀，倒平 板，放冰箱中备用，贮存时间不宜超过 2 周。 26、伊红美蓝培养基（EMB 培养基） 、伊红美蓝培养基（ 培养基） 蛋白胨水培养基 20%乳糖溶液 2%伊红水溶液 0.5%美蓝水溶液 100 mL 2 mL 2 mL 1 mL培养基的配制：将上述各成分加热溶解后，调 pH6.8，然后加 入指示剂， 摇匀， 用脱脂棉过滤。 制成后为黄绿色， 分装试管， 121℃ 灭菌 20min 后制成斜面，注意配制时控制好 pH，不要过碱，以黄 绿色为准。 19、醋酸铅培养基 、 pH7.4 的牛肉膏蛋白胨琼脂 硫代硫酸钠 10%醋酸铅水溶液 100 mL 0.25g 1 mL培养基的配制： 将已灭菌的蛋白胨水培养基 （pH7.6） 加热熔化， 冷却至 60℃左右时，再把已灭菌的乳糖溶液，伊红水溶液及美蓝 水溶液按上述量以无菌操作加入。摇匀后，立即倒平板。乳糖在高 温灭菌易被破坏必须严格控制灭菌温度，115℃灭菌 20min。 27、乳糖蛋白胨培养液（“水的细菌学检查 用） 、乳糖蛋白胨培养液（ 水的细菌学检查 水的细菌学检查”用 蛋白胨 牛肉膏 乳糖 氯化钠 100 mL 10 mL 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 蒸馏水 10g 3g 5g 5g 1 mL 1000 mL培养基的配制：将牛肉膏蛋白胨琼脂 100 mL 加热溶解，待冷 却至 60℃时加入硫代硫酸钠 0.25g，调至 pH7.2，分装于三角瓶中， 115℃灭菌 15min。取出后待冷却至 55―60℃，加入 10%醋酸铅水 溶液（无菌的）1mL，混匀后倒入灭菌试管或平板中。 20、血琼脂培养基 、 pH7.6 的牛肉膏蛋白胨琼脂 脱纤维羊血（或兔血）培养基的配制：将牛肉膏蛋白胨琼脂加热熔化，待冷却至 50℃ 时， 加入无菌脱纤维羊血 （或兔血） 摇匀后倒平板或制成斜面。 37℃ 过夜检查无菌生长即可使用。 21、玉米粉蔗糖培养基 、 玉米粉 磷酸二氢钾 维生素 B1 蔗糖 七水合硫酸镁 水 22、酵母膏麦芽汁琼脂 、 麦芽粉 酵母浸膏 水 121℃灭菌 30min。 24、棉籽壳培养基 培养基的配制：棉籽壳 50%，石灰粉 1%，过 、 磷酸钙 1%，水 65%―70%，按比例称好料，充分搅拌均匀后装瓶， 较薄地平摊盘上。 25、复红亚硫酸钠培养基（远藤氏培养基） 、复红亚硫酸钠培养基（远藤氏培养基） 蛋白胨 乳糖 磷酸氢二钾 琼脂 10g 10g 3.5g 20―30g 3g 0.1g 1000 mL 60g 3g 100mg 10g 1.5g 1000 mL培养基的配制：将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠加热溶解于 1000 mL 蒸馏水中，调 pH 至 7.2―7.4。加入 1.6%溴甲酚紫乙醇溶 液 1 mL，充分混匀，分装于有小倒管的试管中。115℃灭菌 20min。 28、石蕊牛奶培养基 、 牛奶粉 石蕊 水 pH 121℃灭菌 15min。 29、LB（Luria-Bertani）培养基 、 （ ） 蛋白胨 酵母膏 氯化钠 蒸馏水 pH 121℃灭菌 20min。 30、基本培养基 、 磷酸氢二钾 磷酸二氢钾 硫酸铵 二水合柠檬酸钠 蒸馏水 121℃灭菌 20min。 需要时灭菌后加入： 10.5g 4.5 1g 0.5g 1000 mL 10g 5g 10g 1000 mL 7.0 100g 0.075g 1000 mL 6.8121℃灭菌 30min，维生素 B1 单独灭菌 15min 后另加。糖（20%） 维生素 B1（硫胺素）（1%） 七水合硫酸镁（20%）10 mL 0.5 mL 1 mL浓盐酸 95％乙醇 2、中性红指示剂 、 中性红 95％乙醇 蒸馏水 3、淀粉水解试验用碘液（卢戈氏碘液） 、淀粉水解试验用碘液（卢戈氏碘液） 碘片 碘化钾 蒸馏水 待碘全溶后，加足水分即可。 4、溴甲酚紫指示剂 、 溴甲酚紫 0.01mol/LNaOH 蒸馏水 5、溴麝香草酚蓝指示剂 、 溴麝香草酚蓝 0.01mol/LNaOH 蒸馏水 6、甲基红试剂 、 甲基红（Methyl red） 95％乙醇 蒸馏水 7、VqPqY 试剂 、 q q (1)．5％α－萘酚无水乙醇溶液 α－萘酚 无水乙醇 (2)．40％KOH 溶液3mL 97mL链霉素（50mg/ mL）4 mL，终浓度 200?g/ mL 氨基酸（10mg/ mL）4 mL，终浓度 40?g/ mL pH 自然（―7.0） 31、庖肉培养基 、 培养基的配制： (1)、取已去肌膜、脂肪之牛肉 500g，切成小方块，置 1000 mL 蒸馏水中，以弱火煮 1 小时，用纱布过滤，挤干肉汁，将肉汁保留 备用。将肉渣用绞肉机绞碎，或用刀切成细粒。 (2)、将保留的肉汁加蒸馏水，使总体积为 2000 mL，加入蛋白 胨 20g，葡萄糖 2g，氯化钠 5g，及绞碎的肉渣，置烧瓶摇匀，加 热使蛋白胨溶化。 (3)、取上层溶液测量 pH，并调整其达到 8.0，在烧瓶壁上用记 号笔标示瓶内液体高度，121℃灭菌 15min 后补足蒸发的水分，重 新调整 pH 值 8.0，再煮沸 10―20min，补足水量后调整 pH7.4。 (4)、将烧瓶内容物摇匀，将溶液和肉渣分装于试管中，肉渣约 占培养基的 1/4 左右。经 121℃灭菌 15min 后备用，如当日不用， 应以无菌操作加入已灭菌的石蜡凡士林，以隔绝氧气。 32、乳糖牛肉膏蛋白胨培养基 、 乳糖 牛肉膏 酵母膏 蛋白胨 葡萄糖 氯化钠 琼脂粉 pH 水 33、马铃薯牛乳培养基 、 培养基的配制： 200g 马铃薯 （去皮） 煮出汁， 脱脂鲜乳 100mL， 酵母膏 5g，琼脂粉 15g，加水 1000mLpH7.0。制平板培养基时，牛 乳与其他成分分开灭菌，倒平板前再混合。 34、尿素琼脂培养基 、 尿素 琼脂 氯化钠 磷酸二氢钾 蛋白胨 酚红 蒸馏水 pH 20g 15g 5g 2g 1g 0.012g 1000mL 6.8±0.2 5g 5g 5g 10g 10g 5g 15g 6.8 1000mL0.04g 28mL 72mL中性 pH6.8～8 颜色由红变黄，常用浓度为 0.04％。1g 2g 300mL先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，0.04g 7.4g 92.6mL溴甲酚紫 pH5.2～5.6，颜色由黄变紫，常用浓度为 0.04％。0.04g 6.4mL 93.6mL溴麝香草酚蓝 pH6.0～7.6，颜色由黄变蓝，常用浓度为 0.04％。0.04g 60mL 40mL先将甲基红溶于 95％乙醇中，然后加入蒸馏水即可。5g 100mLKOH 40g 用蒸馏水定容至 100mL 即可。 8、吲哚试剂 、 对二甲基氨基苯甲醛 95％乙醇 浓盐酸 2g 190mL 40mL 玻璃仪器的洗涤及各种洗涤液的配制 实验中所使用的玻璃器皿清洁与否直接影响实验结果。 由于器 皿的不清洁或被污染，往往造成较大的实验误差，甚至会出现相反 的实验结果。因此，玻璃器皿的洗涤清洁工作是非常重要的。 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、 量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸溜 水冲洗。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来不及蒸馏水冲 洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干备用。 ? 1. 初用玻璃器皿的清洗 ? 新购买的玻璃器皿表面常附着有游离的碱性物质，先用肥皂 水（或去污粉）洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在 1%~2%盐酸培养基的配制：在蒸馏水或去离子水 100mL 中，加入上述所有 成分（除琼脂外）。混合均匀。过滤灭菌。将琼脂加入 900mL 蒸 馏水或去离子水中，加热煮沸腾。在 15 磅 121℃灭菌 15min。冷却 至 50℃，加入灭菌好的基本培养基，混匀后，分装于灭菌的试管 中，放在倾斜位置上使其凝固。 微生物学实验常用试剂的配制 1、3%酸性乙醇溶液 、 酸性乙醇溶液溶液中过夜（不少于 4h），再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗 2~3 次，在 100~130℃烘箱内烘干备用。 ? 2. 使用过的玻璃器皿的清洗 ? （1）一般玻璃器皿 ? 如试管、烧杯、锥形瓶等（包括量筒）。先用自来水洗 刷至无污物，再选用大小合适的毛刷蘸取去污粉（掺入肥皂粉）刷 洗或浸入肥皂水内。将器皿内外，特别是内壁，细心刷洗，用自来 水冲洗干净后再用蒸馏水洗 2~3 次，热的肥皂水去污能力更强，可 有效地洗去器皿上的油污。 洗衣粉与去污粉较难冲洗干净而常在器 壁上附有一层微小粒子，故要用水多次甚至 10 次以上充分冲洗， 或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。烘干或倒置在清洁处备用。 凡洗净的玻璃器皿， 不应在器壁上带有水珠， 否则表示尚未洗干净， 应再按上述方法重新洗涤。若发现内壁有难以去掉的污迹，应分别 使用下述的各种洗涤剂予以清除，再重新冲洗。用过的载玻片与盖 玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次， 使油垢溶解。再在肥皂水中煮 5~10min，用软布或脱脂棉擦拭，立 即用自来水冲洗，然后在稀洗涤液中浸泡 0.5~2h,自来水冲去洗涤 液,最后用蒸馏水换洗数次,待干后,浸于 95%乙醇中保存备用.使用 时在火焰上烧去乙醇。用此法洗涤和保存的载玻片和盖 玻片清洁 透亮，没有水珠。检查过活菌的载玻片或盖玻片应先在 2%新洁尔 灭溶液中浸泡 24h，然后上述方法洗涤方法洗涤与保存。玻璃器皿 经洗涤后，若内壁的水均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若 挂有水珠， 则还需要用洗涤液浸泡数小时， 然后用自来水充分冲洗， 最后用蒸馏水洗 2~3 次后备用。 ? （2）量器 ? 如吸量管、滴定管、量瓶等。使用后应立即浸泡于凉水中， 勿使物质干涸。工作完毕后用流水冲洗，以除去附着的试剂、蛋白 质等物质，晾干后浸泡在铬酸洗液中 4~6h（或过夜），再用自来 水充分冲洗，最后用蒸馏水冲洗 2~4 次，风干备用。 ? （3）其他 ? 具有传染性样品的容器（如分子克隆、病毒玷污过的容器） 常规先进行高压灭菌或其他形势的消毒，再进行清洗。盛过各种毒 品 （特别是剧毒药品和放射性核素物质的容器） 必须经过专门处理， 确知没有残余毒物存在时方可进行清洗。否则使用一次性容器。装 有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。带菌的器皿在洗涤 前先浸在 2%煤酸皂溶液 （来苏水） 0.25%新洁尔灭消毒液内 24h 或 或煮沸 0.5h,再用上述方法洗涤。 ? 3. 洗涤液的种类和配制方法 ? （1）铬酸洗液 ? （重铬酸钾一硫酸洗液，简称洗液或清洁液）广泛用于玻璃 器皿的洗涤，常用的配制方法有 4 种 ? ① 取 100mL 工业浓硫酸置于烧杯内，小心加热，然后慢慢地 加入重铬酸钾粉末，边加边搅拌，待全部溶解后冷却，贮于带玻璃 塞的细口瓶内。 ? ② 称取 5g 重铬酸钾粉末置于 250mL 烧杯中，加水 5mL，尽量 使其溶解。慢慢加入 100mL 浓硫酸，边加边搅拌，冷却后贮存备 用。 ? ③ 称取 80g 重铬酸钾，溶于 1000mL 自来水中，慢慢加入工业 浓硫酸 1000mL，边加边搅拌。? ④ 称取 200g 重铬酸钾，溶于 500mL 自来水中，慢慢加入工业 浓硫酸 500mL，边加边搅拌。 ? （2）浓盐酸（工业用） ? 可洗去水垢或某些无机盐沉淀。 ? （3）5%草酸溶液 ? 可洗去高锰酸钾的痕迹。 ? （4）5%~10%磷酸三钠（Na3PO4?12H2O）溶液 ? 可洗涤油污物。 ? （5）30%硝酸溶液 ? 洗涤 CO2 测定仪器及微量滴管。 ? （6）5%~10%乙二铵四乙酸二钠（EDTA）溶液 ? 加热煮沸可洗去玻璃器皿内壁的白色沉淀物。 ? （7）尿素洗涤液 ? 为蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤盛蛋白质制剂及血样的容 器。 ? （8）酒精与浓硝酸混合液 ? 最适合于洗净滴定管，在滴定管中加入 3mL 酒精，然后沿 管壁慢慢加入 4mL 浓硝酸（相对密度 1.4），盖住滴定管管口。利 用所产生的氧化氮洗净滴定管。 ? （9）有机溶液 ? 如丙酮、乙醇、乙醚等可用于洗脱油脂、脂溶性染料等污痕。 二甲苯可洗去油漆污垢。 ? （10）氢氧化钾-乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液 ? ? 它是两种强碱性的洗涤液，对玻璃器皿的侵蚀性很强，清除 上述洗涤液可多次使用， 但使用前必须将待洗涤的玻璃器皿 容器内壁污垢，洗涤时间不宜过长。使用时应小心谨慎。 先用水冲洗多次，除去肥皂液、去污粉或各种废液。若仪器上有凡 士林或羊毛脂时，应先用软纸擦去，然后再用乙醇或乙醚擦净。否 则会使洗涤液迅速失效。例如肥皂水、有机溶剂（乙醇、甲醛等） 及少量油污物均会使重铬酸钾-硫酸液变绿，降低洗涤能力。 ? 4. 细胞培养级玻璃器皿的洗涤处理 ? （1）按上述方法对玻璃器皿进行初洗，晾干。 ? （2）将玻璃器皿浸泡入洗液中，24~48h。注意玻璃器皿内应 全部充满洗液，操作时小心勿将洗液不溅到衣服及身体各部。 ? （3）取出，沥去多余的洗液。 ? （4）自来水充分冲洗。 ? （5）排列 6 桶水，前 3 桶为去离子水，后 3 桶为去离子双蒸 水。 ? （6）将玻璃器皿依次过 6 桶水，玻璃器皿在每桶中过 6~8 次。 ? （7）倒置，60℃烘干。 ? （8）用硫酸纸包扎，160℃干烤 3h。