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2015药典微生物限度 2015版本药典微生物限度计数之耐胆盐革兰氏阴性菌
耐胆盐革兰氏阴性菌计数方法 1.培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验1.1菌种及菌液制备菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC（B）26003〕铜绿假单胞菌(Pseudomo…2015版药典微生物限度检查法 目录 一、 2015版药典微生物学检验体系的发展 二、 2015年版微生物学检验中的重大修订及意义 三、 2015版限度标准的特点及展望 四、 2015版药典纯化水标准公示内容 五、 2015版药典注射用水标准公示内容…林彪反革命集团以林彪为首，其手下悍将包括黄永胜、吴法宪、李作鹏、邱会作、江腾蛟、周宇驰、于新野、陈励耘、王维国及周建平。日林彪叛逃后，这10人中除大家熟悉的黄、吴、李、邱四大金刚被分别判处16-18年不等的有期徒刑外，其他6人有着怎…
耐胆盐革兰氏阴性菌计数方法1.培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验1.1菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC（B）26003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)〔CMCC（B）10104〕大肠埃希菌(Escherichiacoli)〔CMCC（B）44102〕1.2菌液制备将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用1.3阴性对照为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。2培养基适用性检查液体培养基促生长能力检查分别接种不大于100cfu的试验菌（见表1）于被检培养基和对照培养基中↓相应控制菌检查规定的培养温度及不长于规定的最短培养时间下培养↓与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好固体培养基促生长能力检查用涂布法分别接种不大于100cfu的试验菌（见表1）于被检培养基和对照培养基平板上↓在相应控制菌检查规定的培养温度及不长于规定的最短培养时间下培养↓被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致液体培养基促生长能力检查固体培养基促生长能力检查培养基抑制能力检查培养基指示特性检查肠道菌增菌液体培养基30～35℃培养24小时—30～35℃培养48小时30～35℃培养24小时—紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基—30～35℃培养18小时30～35℃培养18小时3控制菌检查方法适用性试验3.1试验菌根据各品种项下微生物限度标准中规定检查的控制菌选择相应试验菌株，确认耐胆盐革兰阴性菌检查方法时,采用大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为试验菌。3.2适用性试验按控制菌检查法取规定量供试液及不大于100cfu的试验菌接入规定的培养基中↓依相应的控制菌检查方法，在规定的温度及最短时间下培养↓应能检出所加试验菌相应的反应特征。↓结果判断上述试验若检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查方法进行供试品检查3.3供试品检查阳性对照试验阳性对照试验方法同供试品的控制菌检查,对照菌的加量应不大于100cfu。阳性对照试验应检出相应的控制菌。阴性对照试验以稀释剂代替供试液照相应控制菌检查法检查，阴性对照试验应无菌生长。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。4耐胆盐革兰阴性菌(Bile-TolerantGram-NegativeBacteria)检查方法4.1供试液制备和预培养取供试品，用胰酪大豆胨液体作为稀释剂照“非无菌产品微生物限度检查微生物计数法”（通则1105）制成1：10供试液↓，混匀，在20～25℃培养↓培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不增殖（约2小时）4.2未检出试验除另有规定外，取相当于1g或1mL供试品的上述预培养物接种至肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时后↓划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24小时↓如果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌4.3定量试验选择和分离培养取相当于0.1g、0.01g和0.001g（或0.1mL、0.01mL和0.001mL）供试品的预培养物或其稀释液↓分别接种至肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时。↓上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24小时。↓结果判断若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴性。↓根据各培养管检查结果，从表2查对1g或1ml供试品中含有耐胆盐革兰阴性菌的最大可能数。表2耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数注：⑴＋代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长；－代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上无菌落生长。⑵若供试品量减少10倍（如0.01g或0.01ml，0.001g或0.001ml，0.0001g或0.0001ml），则每1g(或1mL)供试品中可能的菌数（N）应相应增加10倍。
耐胆盐革兰氏阴性菌计数方法 1.培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验1.1菌种及菌液制备菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC（B）26003〕铜绿假单胞菌(Pseudomo…耐胆盐革兰氏阴性菌计数方法 1.培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验1.1菌种及菌液制备菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC（B）26003〕铜绿假单胞菌(Pseudomo…耐胆盐革兰氏阴性菌计数方法 1.培养基适用性检查和控制菌检查方法适用性试验1.1菌种及菌液制备菌种 试验用菌株的传代次数不得超过5代 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC（B）26003〕铜绿假单胞菌(Pseudomo…百度搜索“就爱阅读”,专业资料,生活学习,尽在就爱阅读网,您的在线图书馆
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推荐： 　　　1目的；建立非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法，保证；适用非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法的标准；3内容；3.1制定依据；《中华人民共和国药典》2015年版四部第145页；3.2简述；控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检斯┦云罚3.3培养基适用性检查和控制菌检查方法；3.3.1适用性试验；供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检耍3.
建立非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法，保证在检验中有章可循。 2
适用非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法的标准操作。
3.1制定依据
《中华人民共和国药典》2015年版四部 第145页
控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检斯┦云分惺欠翊嬖谔囟ǖ奈⑸铩 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下列规定进行检验，包括样品取样量和结果判断等。供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时，若使用了中和剂或灭活剂，应确认有效性及对微生物无毒性。供试液制备时如果使用了表面活性剂，应确认其对微生物无毒性以及与所使用中和剂或灭活剂的相容性。
3.3 培养基适用性检查和控制菌检查方法
3.3.1 适用性试验
供试品控制菌检查中所使用的培养基应进行适用性检恕９┦云返目刂凭觳榉椒ㄓ蟹椒ㄊ视眯允匝椋匀啡纤捎玫姆椒ㄊ屎嫌诟貌返目刂凭觳椤Ｈ艏煅槌绦蚧虿贩⑸浠赡苡跋旒煅榻峁保刂凭觳榉椒ㄓχ匦陆惺视眯允匝椤
3.3.1.1菌种及菌液制备
试验用菌株的传代次数不得超过5 代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。 金黄色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus ) [CMCC (B)26 003]
铜绿假单服菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10 104]
大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44 102]
乙型副伤寒伤沙门菌（Salmonella paratyphi B）[CMCC(B)50 094]
白色念珠菌（Clostidium albicans）[CMCC(B)98 001]
生孢梭菌（Clostridium sporgenes）[CMCC(B)64 941]
b 菌液制备
将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时；将白色 念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20～25℃培养2～3 天；将生孢梭菌接种于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30～35℃培养24～48小时或接种于硫乙醇酸盐流体培养基中30～35℃培养18～24小时。上述培养物用pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。生孢梭菌孢子悬液可替代新鲜的菌悬液，孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
c 阴性对照
为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
3.3.1.2培养基适用性检查
控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基的适用性检查。控制菌检擞门嘌氖视眯约觳橄钅堪ù偕つ芰Α⒁种颇芰爸甘咎匦缘募觳椤８髋嘌募觳橄钅考八玫木旨1。
3.3.1.3 液体培养基促生长能力检
分别接种不大于lOOcfu的试验菌(表1 )于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
3.3.1.4固体培养基促生长能力检
用涂布法分别接种不大于lOOcfu的试验菌（表1 )于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检斯娑ǖ呐嘌露燃安淮笥诠娑ǖ淖疃膛嘌奔湎屡嘌患炫嘌攵哉张嘌仙さ木浯笮　⑿翁卣饔σ恢隆
3.3.1.5培养基抑制能力检
接种不少于lOOcfu的试验菌（表1)于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检斯娑ǖ呐嘌露燃安恍∮诠娑ǖ淖畛づ嘌奔湎屡嘌匝榫Σ坏蒙ぁ
3.3.1.6培养基指示特性检
用涂布法分别接种不大于lOOcfu的试验菌（表1 )于被检培养基和对照培养基平板上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养，被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
3.3.2控制菌检查方法适用性试验
3.3.2.1供试液制备
按下列“供试品检恕 中的规定制备供试液。
3.3.2.2试验菌
根据各品种项下微生物限度标准中规定检查的控制菌选择相应试验菌株，确认耐胆盐革兰阴性菌检查方法时，采用大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为试验菌。
3.3.2.3适用性试验
按控制菌检朔ㄈ」娑抗┦砸杭安淮笥lOOcfu的试验菌接入规定的培养基中；采用薄膜过滤法时，取规定量供试液，过滤，冲洗，在最后一次冲洗液中加人试
验菌，过滤后，注人规定的培养基或取出滤膜接人规定的培养基中。依相应的控制菌检朔椒ǎ诠娑ǖ奈露群妥疃淌奔湎屡嘌δ芗斐鏊邮匝榫嘤Φ姆从μ卣鳌
3.3.2.4结果判断
上述试验若检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查方法进行供试品检查；若未检出试验菌，应消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法适用性试验。如果经过试验确证供试品对试验菌的抗菌作用无法消除，可认为受抑制的微生物不易存在于该供试品中，选择抑菌成分消除相对彻底的方法进行供试品的检查。
3.4 供试品检
供试品的控制菌检查应按经方法适用性试验确认的方法进行。
3.4.1阳性对照试验
阳性对照试验方法同供试品的控制菌检查，对照菌的加量应不大于lOOcfu。阳性对照试验应检出相应的控制菌。
3.4.2阴性对照试验
以稀释剂代替供试液照相应控制菌检查法检查，阴性对照试验应无菌生长。如果阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。
3.4.3耐胆盐革兰阴性菌(Bile－Tolerant Gram-Negative Bacteria)
3.4.3.1供试液制备和预培养
取供试品，用胰酪大豆胨液体培养基作为稀释剂制成1: 10供试液，混匀，在20～25℃培养，培养时间应使供试品中的细菌充分恢复但不增殖(约2小时)。
3.4.3.2定性试验
除另有规定外，取相当于l g 或lml供试品的上述预培养物接种至适宜体积(经方法适用性试验确定）肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时后，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24小时。如果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰阴性菌。
3.4.3.3 定最试验
a 选择和分离培养
取相当于0.1g 、O.Olg和O.OOlg(或0.1ml、0.01ml和0.OOlml) 供试品的预培养物或其稀释液分别接种至适宜体积(经方法适用性试验确定）肠道菌增菌液体培养基中，30～35℃培养24～48小时。上述每一培养物分别划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～24小时。
若紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上有菌落生长，则对应培养管为阳性，否则为阴性。根据各培养管检查结果，从表2查1g 或lml供试品中含有耐胆盐革兰阴性菌的可能菌数。
注：（1 )+代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上有菌落生长；-代表紫红胆盐葡萄糖琼脂平板上无菌落生长。
(2 )若供试品量减少10倍（如O.Olg或0_01ml，0. OOlg或0.001ml，0，0001g或0.0001ml)，则每lg (或lml)供试品中可能的菌数(N)应相应增加10倍。
3.4.4大肠埃希菌(Escherichia coli)
3.4.4.1供试液制备和增菌培养
取供试品，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或pH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基溶解或稀释制成1: 10供试液。取相当于lg 或lml供试品的供试液，接种至适宜体积(经方法适用性试验确定）的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18～24小时。
3.4.4.2选择和分离培养
取上述培养物lml接种至100 ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时。
3.4.4.3结果判断
若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。
三亿文库包含各类专业文献、外语学习资料、专业论文、高等教育、行业资料、应用写作文书、各类资格考试、中学教育、35SOP?ZL?09?QC?101?01 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法等内容。　
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