实验用培养基适用性检查标准操作规程_图文-五星文库
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实验用培养基适用性检查标准操作规程_图文
导读：本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作，分析员：严格按照本操作规程执行，主管：监督本操作规程的执行，检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基，试验用菌种及培养基2.1，2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌，2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤RappaportVassiliadisSalmo，微生物计数培养基
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目的 Purpose
为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。
范围 Scope
本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。
职责 Responsibility
分析员：严格按照本操作规程执行。及时完成各类相关记录。在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。 主管：监督本操作规程的执行。对检验员进行必要的培训。指导任何可能的OOS和偏差调查。
内容procedure
检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。 试验用菌种及培养基 2.1
2.1.1 培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。 2.1.2 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC .3 大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739]
2.1.4 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC .5 白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 1.6 黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 1.7 伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028]
2.1.8 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC
2.2.1 按照培养基说明书进行配制灭菌。
2.2.2 大豆酪蛋白消化肉汤 Soybean-Casein Digest Broth 2.2.3 大豆酪蛋白消化琼脂 Soybean-Casein Digest Agar 2.2.4 沙氏葡萄糖琼脂 Sabouraud Dextrose Agar
2.2.5 肠道菌增菌肉汤 Enterobacteria Enrichment Broth Mossel
2.2.6 紫红色胆汁葡萄糖琼脂 Violet Red Bile Glucose Agar 2.2.7 麦康凯肉汤 MacConkey Broth 2.2.8 麦康凯琼脂 MacConkey Agar
2.2.9 RV沙门氏菌富集肉汤 Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth 2.2.10 木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂 Xylose Lysine Deoxycholate Agar 2.2.11 甘露醇氯化钠琼脂培养基 Mannitol Salt Agar 2.3
微生物计数培养基的适用性检查
2.3.1 微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。 2.3.2 菌悬液的制备
2.3.3 上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬
液，制备黑曲霉孢子悬浮液时，添加3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成每1ml含孢子数不大于100cfu的孢子悬液。菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2～8℃可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2-8℃，在验证过的贮存期内使用。
大豆酪蛋白消化肉汤促生长试验
2.4.1 取以上前3种菌悬液各0.1ml(不大于100cfu)，分别注入灭过菌的含有10ml大豆酪蛋白消化肉汤的
试管中，于30℃-35℃培养不超过3天。同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培养基进行上述试验。培养结束后进行观察，如果肉眼能清晰看到的微生物的生长与上一批通过促生长试验的培养基的生长情形基本一致，则判定此培养基通过促生长试验。反之则判定此培养基不符合规定，未通过促生长试验。
2.5 大豆酪蛋白消化琼脂和沙氏葡萄糖琼脂促生长试验
2.5.1 取以上5种菌悬液各1ml（不大于于100cfu），分别注入无菌平皿中，立即倾注大豆酪蛋白消化琼
脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置30℃-35℃培养不超过3天，计数，后2种菌悬液不超过5天，计数。再取后2种菌悬液各少于100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀、凝固，置20℃-25℃培养不超过5天，计数。同时用相应的上一批通过促生长试验的培养基替代被检培养基进行上述试验。进行促生长试验的培养基平皿上，微生物生长情况必须与已通过促生长试验的培养基平皿上的微生物生长情况一致或者更好，同时将待测定的培养基上的菌落数与已通过促生长试验的培养基上的菌落数对比，两者之间的比值应处于70%-200%之间,则判定此培养基通过促生长试验；反之则判定该培养基不符合规定，未通过促生长试验。
2.6 控制菌测试所用培养基的适用性检查
2.6.1 控制菌检查用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。 2.6.2 菌悬液的制备
2.6.3 上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.2磷酸盐缓冲液制成适宜浓度的菌悬液。菌悬液在室温下
放置应在2小时内使用，若保存在
2～8℃可在24小时内使用。
2.6.4 控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括培养基的促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。各
培养基的检查测试项目及所用菌株见下表
包含总结汇报、外语学习、党团工作、旅游景点、资格考试、行业论文以及实验用培养基适用性检查标准操作规程_图文等内容。本文共2页
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2015版中国药典培养基
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10版GMP中关于配制的培养基应当进行适用性检查是每次配制时都做适用性检查还是用的培养基做过了,就行.
evPB00CG02
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10版GMP第二百二十六条中规定：配制的培养基应当进行适用性检查2010版药典附录药品微生物实验室规范指导原则中规定：除药典附录另有规定外,在实验室中,若采用已验证的配制和灭菌程序制备培养基且过程受控,同一批脱水培养基的适用性检查试验可只进行一次.如果培养基的制备过程未经验证,则每一批培养基均要进行适用性检查试验.按2010版药典上规定：培养基的配制和灭菌程序经过验证且过程受控,那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可只进行一次,不用每次都做.按10版GMP,应该是每次配制时都要做适用性检查.两者取更严格的,也就是每个配制批次都要做适用性检查.
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R2A琼脂培养基适用性检查方案文件编号：VP-QC-2015-05起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1概述12验证目的及范围13验证小组人员组成及职责14验证依据25验证前准备26验证的实施27偏差处理58验证数据及评估59验证报告及评审510再验证及周期511验证文件及归档512附件51验证目的及范围2015版《中华人民共和国药典》中规定纯化水的微生物限度检查采用的培养基为R2A琼脂培养基。为了保证纯化水微生物限度检查的准确性和可靠性，需对该R2A琼脂培养基进行适用性检查实验。2验证方法照2015版药典非无菌产品产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。3.2验证小组组成及职责列表组成职责QC1.负责起草验证方案的起草2.负责本方案的培训3.仪器仪表校验确认4.负责验证的实施5.负责数据的收集和整理6.负责数据分析7.负责完成验证报告质量部负责验证方案、验证报告的审核与批准负责验证现场的监督审查生产部1.负责保障设备、器具的完好2.负责动力系统的保障4验证接受标准4.1被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；4.2被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。?5.验证前准备?5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。?5.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。?5.3确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。5.4相关文件序号相关文件文件编号1DHG型电热恒温鼓风干燥箱操作规程WI-1002BSC-100-II-B2生物安全柜操作和维护保养规程WI-1013WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器使用和维护保养规程WI-1034DK型电热恒温水浴锅操作规程WI-1045HWS型恒温恒湿箱操作规程WI-N电子天平操作及维护保养规程WI-1067PHS-3C型PH计操作及维护保养规程WI-1088SHP-3C型低温生化培养箱操作及维护保养规程WI-1099YJ-875SDB型净化操作台的操作及维护保养规程WI-11310《培养基管理规程》WI-766.验证的实施6.1实验材料6.1.1培养基类别培养基名称厂家批号验证培养基A2R琼脂培养基对照培养基胰酪大豆胨琼脂培养基6.1.2仪器设备DHG型电热恒温鼓风干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器、DK型电热恒温水浴锅、HWS型恒温恒湿箱（30～35℃）、JA2003N电子天平、PHS-3C型PH计、SHP-3C型低温生化培养箱（20～25℃）、YJ-875SDB型净化操作台。6.1.3稀释剂：PH无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液6.1.4计数用培养基胰酪大豆胨琼脂培养基6.1.5验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104]枯草芽孢杆菌[CMCC(B).6灭菌前调节PH溶液：10%碳酸钠溶液或1mol/L氢氧化钠溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L盐酸溶液。6.2验证内容6.2.1培养基的配制灭菌过程将分装包装好的培养基分别放入灭菌器中121℃灭菌15分钟后取出。取1管已灭菌的培养基，放冷至25℃测定pH值，应在7.20.2范围内。6.2.1.4外观性状灭菌后的培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、浑浊、橡胶塞被培养基沾染等，均应挑出弃去。将制备好的培养基保存在2～25℃、避光的环境中，在存放2周后，培养基外观应色泽正常，澄清透明。6.2.2菌液制备接种铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时。6.2.3菌液计数（每种菌液接种2个）6.2.3.1分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌（50～100cfu/ml）各1ml加入无菌培养皿，立即注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时，计数每株试验菌平行制备2个平皿。6.2.4培养基适用性检查6.2.4.1分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，立即注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时；分别计数。同时取相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。6.2.4.2取每管装量为9ml的胰酪大豆胨
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