化学发光法elsia标准曲线法的优缺点怎么做

怎样正确溶解与稀释ELISA标准品?
ELISA标准曲线是结果计算的尺子,标准品是成功与否的关键点。怎样正确溶解、稀释标准品呢?
粉末标准品短暂离心,让因运输沾到管盖、管壁的标准品沉到管底。
2. 根据瓶标签加入一定体积的蒸馏水,加水后轻柔涡旋震荡,室温静置溶解 10-30min,让粉末完全溶解。
&&注意:加水后暂不用移液枪吹吸,避免蛋白未溶解,枪头带出部分蛋白,待完全溶解后可吹吸或涡旋振荡混匀。
3. 标准品梯度稀释:
(1)标准品稀释液的选择:
若血清、血浆、组织匀浆样本,用试剂盒中的标准品稀释液,梯度稀释标准品。
若细胞上清样本,建议用细胞培养基梯度稀释标准品。
(2)耗材准备:准备8个1.5Ml离心管,写上S1-S7、空白。
(3)梯度稀释:根据说明书,每管加入等体积的标准品稀释液(培养基)。吸取同体积溶解好的标准品到S1管中,吹打10次混匀,涡旋5S。从S1管中吸取同体积溶液到
S2管,吹打10次混匀,涡旋5s。同法稀释S3-S7浓度。
(4)空白:&标准品稀释液(培养基)作为空白即零浓度。
注意:梯度稀释标准品时,涡旋震荡混匀后可短暂离心,让到盖子、壁上的液体到管底,再开始稀释下个浓度。
标准品溶解、梯度稀释是ELISA实验关键点,按以上方法梯度稀释就可,以下是我们的ELISA标准操作视频,可供大家参考。
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以上网友发言只代表其个人观点,不代表新浪网的观点或立场。堑望鱼壅坌堑量堕盎!!!!至!旦墨!!耋墨!塑;18l;ECLIA法与传统ELISA法检测TNF一仅比较;李琦,王东琳,张赘,陈立杰;(第四军医大学免疫学教研室,陕西西安710032;化学发光酶联免疫检测法(EcLIA)是将酶免疫系;材料和方法;1材料;重组人TNF-a夹心ELISA检测试剂盒由本室研;为珀金埃尔默公司产品,酶联免疫检测仪为BLo;RAD公司
堑望鱼壅坌堑量堕盎!!!!至!旦墨!!耋墨!塑
ECLIA法与传统ELISA法检测TNF一仅比较
李琦,王东琳,张赘,陈立杰。王春艳,徐竹蔚,金伯泉
(第四军医大学免疫学教研室,陕西西安710032)
化学发光酶联免疫检测法(EcLIA)是将酶免疫系统与化学发光系统结合起来,通过发光强度(RLU)反映检测样品含量的一种免疫学检测技术…。本实验建立了EcLIA法,并将其与传统EuSA法在其敏感性上进行对比,结果表明,EcLIA法较ELIsA法敏感性提高4倍,报道如下。
材料和方法
重组人TNF-a夹心ELISA检测试剂盒由本室研制‘引,ELIsA板为Nunc公司产品,EcLIA板
为珀金埃尔默公司产品,酶联免疫检测仪为BLo
RAD公司产品,GENios型化学发光免疫分析仪为瑞士TEcAN公司产品。LumjgenAPS-5发光剂为美国Lumigen公司产品,单磷酸酚酞显色剂(PMP),显色终止液,为北京倍爱康生物技术有限公司产品。
EcLlA检测重组人TNFr8方法的建立,按常规方法用包被缓冲液将抗TNF-口mAbF6(10”g/mL)包被ELIsA板,100“L/孔,4℃过夜;洗涤液(PBs)洗涤4次,将TNF―a标准品(10ng/mL)用抗体稀释液(19/LBsA/PBs)倍比稀释后每孔加100“L。室温孵育1h,洗涤4次。标记AP的抗TNF-口另一株mAbD2按1;】000稀释后,按100“L/孔加入板中,室温孵育1h,洗涤4次,每孔加入50“LAP孓5发光剂后,直接用发光仪测定发光强度(RLu)。夹心ELIsA检测重组人TNF-a按常规方法。
EcLIA与ELIsA方法检测TNF―n比较,以TNF-a标准品浓度为横坐标,检测TNF_a相应4孔平均A550(ELIsA)或4孔平均相对发光单位
收稿日期:200702一05;修回日期:2007一03―29
方数据RLU(ECLIA)为纵坐标绘制回归曲线,见图l、2。
TNF―o浓度(Ⅱg/L)
图lEcLIA检测TNpa标准曲线
V寸制枢采
TNF―q浓度(pg/L)图z
ELIsA检测TNF-a标准曲线
各标准点计算浓度与实际浓度之比(回收率)在90%~110%之间,且达到了线性关系最佳,并拟合为回归方程。用EcuA或ELIsA法测量20孔阴性对照获得相应A。或发光强度值(RLU),计算其平均值(j)和标准差(s),以i+2s值相对应浓度为检测灵敏度。EcLIA法15pg/mL较ELIsA法62pg/mL检测敏感性提高4倍。
利用本室研制的重组人TNF―a夹心ELISA
检测试剂盒,将EcLlA法与ELISA法进行了对比,表明Ecl。IA法敏感性高,实验系统稳定,由于加入发光剂后元需孵育从而缩短了检测时间(即o.5h),整个实验均可在室温下进行。避免了因反应
温度及时问的影响而造成的误差。
垡!!!盟!望里!堕!!!!壁垒垡也丛盟!量P:!!!!!!!!:!!!堕!:!
EcLIA原理是,化学发光物质在酶的催化作
用和氧化剂的作用下,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时发射出光子,光信号强度可以用仪器测量,在一定浓度范围内,光信号强度与酶的含量成正比[“。目前EcLIA最常用的AP底物有两种,一种为(金钢烷)一1,2一二氧乙烷及其衍生物。另一种为二氧杂环丁烷类化合物“],本文的LumigenAPs_5就属于后者,这种发光底物特点是:①极高的灵敏度,能够检测到少于10-1。摩尔的AP分子l②在极短时问内发光强度即达到峰值并长时间保持稳定;③线性范围宽大;④在20~35℃内温度对发光反应无明显影响,基于以上优点,EcLIA技术值得推广应用。
[1]HaI蚴nM,velanBt
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T.Ra州identl6catjon蛐d
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ofsmaUnumberBofmicroorganisⅡFby
Enciron
chemila力mlne妒
immunorfactIon[J].ApplMicrobiol,1977.34
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[z]刘雪橙,金伯泉,许辉,等.抗重组^肿瘤坏死因子一a单克隆抗
体的研制及其初步应用[J].单克隆抗体通讯,1995,11(2),8一
[3]韩佩珍.化学发光免疫分析[J].国外医学一放射医学检医学分
册,2002,z4(5)一196―200.
[4]尹东光,贺佑年,刘兵.等.几种主要化学发光物质的发光性能
及基化学发光免疫分析体系口]’标记免疫分析与l陆床t2002,
9(4):225―230.
(李宁、陈泮藻编辑)
(上接第180页)
当改变cAl25的检测临界值。动态观察血清cAl25的变化及与其它肿瘤标志物联合应用,可以避免假阴性的发生,及时了解病情。此外,CAl9―9含量>100U/mL的占总例数的22.4%(13/58),cAl9―9在I期、Ⅱ期随着分期的增加阳性率也增加,但后期却没有,考虑卵巢癌例数太少,尚需进一步积累。也不排除CAl9―9是消化道肿瘤的指标,对卵巢癌的指导意义不大。cEA在本组中有两组升高,分别为直肠癌卵巢转移和1例浆液性腺癌直肠转移。
在恶性卵巢肿瘤诊断中,肿瘤标志物cAl9-9、CEA的灵敏度都不高,但它们的特异性较高,CAl9―9、cEA和CAl25联合检测,对于诊断卵巢癌起互补作用,增加灵敏度。在恶性卵巢肿瘤随访中,患者经手术治疗和定期化疗,肿瘤标志物呈显著下降趋势,除个别晚期患者外,多数在第四个月
[1]TholanderB,TaubeA,LLndgren
到六个月肿瘤标志物水平恢复正常,说明可以使用肿瘤标志物下降的幅度和时间来判断肿瘤治疗效果。
a1.Pre”eatment
umlevelsofCA125,carclnoembryoicantlgen’tls3uepolyp。p―tideantigen,andplacentalalka【【ne
with口va一8ncarci㈣;influ目1cc
differentianon.andclinicalcoI,1990,39(3,:26―35.
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di咄e[J].Gynec0Ion―
[2]PratikK,MadanMR,LalitK。cta1.TumormarkercA一125
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ovarl…ancef;hs
quantitative
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volume[J].Med
Monlt,
2005.1l(2)。CR84一CR89.
(李凌编辑)
万方数据 
三亿文库包含各类专业文献、外语学习资料、各类资格考试、应用写作文书、生活休闲娱乐、34ECLIA法与传统ELISA法检测TNF-α比较_图文等内容。 
 几种HBsAg检测方法的比较与分析_医药卫生_专业资料。几种 HBsAg 检测方法的比较与分析 【摘要】 目的 分析电化学发光法(ECLIA) 、酶联免疫法(ELISA)和胶 体金免...  试剂及配制(1) 包被缓冲液: A. P 间接ELISA 法检测血清抗体 1. 仪器耗材(...加一抗:每孔加入 100ul 稀释好的待检血清,室温孵育 1h,用同样方法洗板。 加...  ELISA 检测方法操作要点 检测方法操作要点 1 标本的采取和保存 可用作 ELISA 测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便) 等均可作...  ELISA(双抗体夹心法)―检测 HBsAg 摘要: 以已知抗体(抗 HBs)包被载体,然后将含有抗原的待检标本加入,共同孵育 后,抗原结合于包被抗体上,再加入酶标记特异抗体(...  ELISA 直接法与间接法的区别_文学_高等教育_教育专区...用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有 RF,它可...  ELISA 法与免疫荧光(IFA)和放射免疫(RIA)的各自优缺点的比较近二十几年来,免疫学分析方法发展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后,使原来许多经典...  它可以促进多种细胞增殖和活化,对免疫应答有重要的调节作 实验三 双抗夹心 ELISA 法检测 IL-1 白细胞介素-1(IL-1)是一种单核因子,主要由单核细胞-巨噬...  化学发光法与ELISA法对乙肝两对半少见模式测定对比_临床医学_医药卫生_专业资料。化学发光法与 ELISA 法对乙肝两对半少见模式测定对比 【摘要】目的观察对比化学发光法...您现在的位置是: &
化学发光微粒子免疫分析法与酶联免疫法测定乙肝标志物的比较
摘 要:目的:比较化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)与酶联免疫(ELISA)两种方法检测乙肝病毒免疫标志物的优缺点。方法:用上述两种方法的检测试剂及仪器对200例临床血清标本分别进行检测,然后进行结果分析。结果:ELISA法和CMIA法对乙肝表面抗原的检测灵敏度均能达到0.1IU/ml。HBsAg,HBsAb,HBeAg及HBeAb的检测相互符合率均在95%以上,但对核心抗体的检测,两者符合率为87.5%。结论:两种方法的检测性能相差不大,但CMIA法检测血清乙肝标志物的自动化程度比ELISA法高,并能定量检测HBsAg和HBsAb,可动态观察疗效和监测病情。
作者单位:武汉市一医院,湖北
430022【摘要】&
  目的: 比较化学发光微粒子免疫分析法(cmia)与酶联免疫(elisa)两种方法检测乙肝病毒免疫标志物的优缺点。方法: 用上述两种方法的检测试剂及仪器对200例临床血清标本分别进行检测,然后进行结果分析。结果: elisa法和cmia法对乙肝表面抗原的检测灵敏度均能达到0.1iu/ml。hbsag,hbsab,hbeag及hbeab的检测相互符合率均在95 %以上,但对核心抗体的检测,两者符合率为87.5 %。结论:两种方法的检测性能相差不大,但cmia法检测血清乙肝标志物的自动化程度比elisa法高,并能定量检测hbsag和hbsab,可动态观察疗效和监测病情。
【关键词】& 化学发光微粒子免疫分析法 酶联免疫 乙型病毒性肝炎标志物
  abstract: objective to compare two deferent assays to see their abilities in detecting hepatitis b markers. methods by using chemiluminescence microparticle immuno assay (cmia) and& elisa ,200 serum samples were tested for hepatitis b markers, then the results were analyzed. results the two assays both can detect as low as 0.1iu/ml of hbsag. the coincidences of the two methods in detecting hbsag, hbsab, hbeag, and hbeab are normally above 95 %, but for hbcab, the coincidence was 87.5% . conclusion there were not much difference among these two methods regarding their abilities in detecting hepatitis b markers. the degree of automation determined by cmia are higher than that of elisa,at the same time the curative effect of patients is be easily dynamic observed and the state of illness is also be easily in-spected by the method of cmia.
  key words: chemiluminescence microp hepatitis b markers
  中国是乙型病毒肝炎的高发国家,根据流行病学调查,人群发生率较高,表面抗原携带率约为15%[1],乙肝的实验诊断对于其治疗及预防有重要参考意义。 自二十世纪七十年代以来,许多高灵敏度的测定方法应用于临床免疫学检测,其中酶联免疫法应用最广。近年来发展起来的化学发光微粒子免疫分析法(cmia)是灵敏度非常高的方法,解决了低浓度hbsag的检测问题,现将两种方法对乙肝标志物的检测作一比较。
  1&& 材料与方法
  1.1 材料及主要仪器&&&
  收集200例检测乙肝标志物的静脉血样离心,分离出血清待测;elisa法测定乙肝&两对半&试剂盒由上海实业科华生物技术有限公司生产,使用美国bio-rad550型酶标仪和1575型洗板机。化学发光微粒子免疫分析法(cmia)采用美国雅培全自动酶免分析仪architect-i2000及其配套试剂产品;乙肝五项标志物的定值质控血清购自中国卫生部临床检验中心。
  1.2 方法&&
  elisa法按产品说明书进行 主要步骤有:加样、孵育、洗板、加酶或底物、显色、比色。其中hbcab测定的样本经1:30稀释。cmia 法为全自动系统,设计好标本位置、检测项目,按开始键即可。
  1.3结果判断&&&
  elisa法以标本od值与临界od值的比值(s/co)&1.00为阳性,hbeab与hbcab测定则相反,以&1.00为阳性。cmia法中hbsag与hbsab为定量法,用标本相对光强度(relative light units& rlu)与标准曲线比较计算出浓度。hbeag、hbcab以标本rlu与临界值rlu的比值(s/co)&1.00为阳性,hbeab测定则相反,以&1.00为阳性。
  2& 结果
  2.1 elisa与cmia法检测低浓度hbsag的结果(见表1)。表1& 两种方法对低浓度hbsag的测定(略)注:elisa 法为定性方法。s/co为标本od值与临界值od值的比值。
  2.2 elisa与cmia法检测乙肝标志物的结果(见表2)。表2& elisa与cmia法检测乙肝标志物的结果(略)
  2.3卫生部定值血清hbsag室内质控cv值:elisa法批内3 %~5 %,批间5 %~10 %,而cmia法批内小于3 %,批间小于5 %。
  3&& 讨论
  3.1& 从灵敏度上来看,两种方法的差别不大,都可以测出0.1 iu/ml的低浓度hbsag。
  3.2& elisa与cmia法检测乙肝五项指标的结果中,hbsag、hbsab、hbeag、hbeab四项标志物的检出符合率较高,而hbcab的检出符合率则相对较低。从方法学角度看,cmia法用顺磁性微粒作为固相载体,由于颗粒体积小,表面积大,扩大了反应面积,大大提高了检测灵敏度,所以可检出人群中低浓度和自然感染获得的乙肝核心抗体。
  3.3& cmia法由于使用全自动仪器及配套试剂,使人为因素减至最低,提高了方法的稳定性和结果的重复性,使批内差异与批间差异都较小。而手工elisa法由于手工加样、孵育时间、洗板等因素影响则容易导致非特异性反应的发生,造成结果的误差。
  3.4 在hbsag、hbsab的检测上,cmia法为定量结果。定量的hbsab结果能够对机体是否真正具有抵抗乙肝病毒的免疫力做出正确评价,避免误导。hbsab定量在10 iu/l~100iu/l之间的标本,elisa结果为阳性,但此时抗体对hbv并无中和作用,仍有感染hbv的危险.只有&定量&在100 iu/l以上时才具有抵抗hbv入侵的作用[2],因此对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义。
  3.5& elisa法的优点在于它操作简单、适合于大批量标本的测定,且成本低廉。其灵敏度也很好。但由于它的灵敏度较高,各个标本的操作间隔小,容易互相影响(污染)。所以,对于阳性标本,应以适宜的方法复查,以减少误报。 ......(未完,请点击下方“在线阅读”)
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化学发光法与酶联免疫吸附试验检测艾滋病HIV的比较来源:  日期:目的 比较化学发光法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测人类免疫缺陷病毒抗体(抗一HIV)的一致性。方法 收集45份室间质评样本,分别用两种方法进行检测。结果 化学发光法检测样本的吸光度/临界值比值明显高于ELISA法,两种方法对抗HIV检出率差异有统计学意义(Y2—25.002,P&o.01)。结论 化学发光法检测抗一HIV较ELISA法敏感性高、假阳性少,可以推广应用。艾滋病即获得性免疫缺陷综合征,是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的严重疾病,迄今仍无法有效治疗,除了行为干预等社会学手段外,阻断输血传播,及时发现HIV感染者并采取针对性措施,是目前疫情控制的重要技术手段。由于HIV进入人体后需要经过一段时间才会产生HIV抗体(抗一HIV),这一时间医学上称为“窗口期”。艾滋病研究的重点领域之一就是尽可能缩短“窗口期”,而达到这一目的最重要的手段就是高质量的艾滋病诊断试剂盒和敏感性高的检测方法。化学发光标记方法是近年来发展起来的一种新的非放射性免疫分析技术。为比较化学发光法与酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗一HIV的一致性,本文对同一份标本采取两种方法进行检测,现将结果报道如下。1材料与方法1.1标本来源所有标本均来自贵州省临床检验中心年全省室间质评样本,一20℃以下保存。1.2仪器化学发光仪KPS-KM(北京科美东雅生物技术有限公司生产);酶标仪MuhiskanMK3(芬兰);洗板机(芬兰雷勃WwllwashPlus)。1.3试剂ELISA法检测试剂由北京万泰生物药业股份有限公司提供,批号;化学发光法试剂为北京科美东雅生物技术有限公司生产,批号.4方法随机抽取室间质评10份阳性标本分别以1:5稀释作为待测标本,与另外35份标本,共计45份标本分别用两种方法进行检测,均严格按照各自的试剂盒说明书操作。1.5统计学方法用SPSSl2.0统计软件进行数据处理,数据资料比较采用Y2检验。2结果在45份标本中,化学发光法和ELISA法均为阳性29份,其样本吸光度/临界值(OD/CO)范围分别为2.379~179.100和1.633~28.375;两种方法均为阴性的标本12例,其OD/CO值范围分别为0.077~0.525和0.053~0.617;在化学发光法为阳性而ELISA法为阴性的3例标本中,ELISA法的样本OD/CO值范围为0.607~0.849,而化学发光法的OD/CO值范围为1.230~1.787。结果见表1。表1两种方法对45份样本抗一HIV检测结果(”)由表1可以看出,化学发光法的敏感性高于ELISA法,两种方法抗HIV检出率差异有统计学意义(Y2—25.002,P&0.01)。3讨论艾滋病是由HIV感染所引起的一种获得性免疫缺陷性疾病,可通过性传播、血液传播和母婴传播途径感染人类,检出抗一HIV是艾滋病诊断的重要条件,而诊断HIV感染是艾滋病预防控制工作的重要组成部分。因此,建立敏感、实用的检测方法,对于监测、诊断或血液筛查以及控制艾滋病的流行显得尤为重要。目前艾滋病诊断技术主要包括病毒检测和病毒特异性抗体检测等。由于HIV病毒分离、病毒载量测定、病毒核酸测定以及病毒抗原检测等方法难度大、费用高,因而抗体检测是常规检测方法,包括ELISA、聚丙烯酰胺凝胶电泳、间接免疫荧光试验和斑点印迹在内的检测技术用于筛选实验,免疫印迹试验用于确认实验。由此可见,提高敏感性、特异性,缩短窗El期和方法简便、快速,是HIV检测试剂未来发展的主要趋势。白1985年第1代抗HIV检测试剂问世至今,HIV血清学检测试剂已经发展到第4代。但使用第4代试剂对艾滋病病毒抗体进行检测,仍然有2~3周的窗口期。此外,由于把抗宣石曲瓞一荟士浊包的击田休全原和抗体同时包被在反应板上存在着相互干扰的可能,影响了免疫反应的特异性。另外,从方法学上来讲,这种基于ELISA的分析方法,灵敏度终归是有限的[1]。
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别沉这么快
关于艾滋病试纸准确度的官方数据:2008年国家疾控中心对国内使用的艾滋病检测试纸的抽检报告,采取了真阳性血样126份,真阴性血检203份。对试纸进行检验,抽查结果如下:表:2008年全国HIV抗体快速诊断试剂临床质量评估结果试剂简称真阳性(份)假阳性(份)真阴性(份)假阴性(份)敏感性(%)特异性(%)功效率(%)北京金豪1261203298.4499.5199.10北京金伟凯1282202010099.0299.40北京万泰1282202010099.0299.40广州万孚1284200010098.0498.80韩国SD1281203010099.5199.70杭州艾康12802040100100100日本PA1282202010099.0299.40日本雅培Determine12802040100100100上海科华1270204199.2210099.70天津中新科炬12802040100100100厦门英科新创1250204397.6610099.10郑州安图绿科11202041687.5010095.18数据来源:中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心
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不懂金标的恐友,下面给您解释
艾滋病试纸检测为什么称为“金标检测”作者:
发布于: 16:47:05
文字:【大】【中】【小】艾滋病试纸检测为什么称为“金标检测”
在艾滋病检测领域,目前有很多检测技术,有先进的核酸检测,也有用于疾控做确诊试验的酶联检测法,同时也可以用于做确诊试验的罗氏发光法,医院在做急性手术前也会用免疫印迹法来判断病人是否有感染艾滋病毒,那么对于上面的检测技术大家应该都不是特别陌生,目前由于检测技术的发达和便捷,很多艾滋病自测者,都会通过艾滋病试纸来检测和判断自己是否感染艾滋病毒,下面是疾控艾草针对“金标检测法”的简单略说
所谓金标检测法是艾滋病快速检测法中的一个,其中因为检测快速,准确率高,有便捷,被广泛运用在临床和血站艾滋病检测,给不少艾滋病恐艾者带来了福音。金标检测是临床针对“胶体金法”的学名。与金标法齐名的有下面几种检测法,均属于快速检测试剂中的,其准确率都是旗鼓相当。 1:胶体金法2:乳胶法3:乳胶层析法4:胶体硒法
不管是用什么快速检测法,都是属于艾滋病检测试剂中的三代试剂,使用的均是抗原夹心的原理,都可以作为艾滋病初筛试验中的检测试剂!“金标检测”不断被我们大家认可和使用,希望艾滋病自测试纸在未来能广泛运用在各个层面的体检中。
有化学发光法么
雅培化学发光窗口期是多久
我两个月内测了三次 HIV化学发光
值都是0.02,我觉得很奇怪。请问楼主知道这情况正常吗?
顶 鄙视恐怖分子 有的人就是专门酶连假阳特殊体质而已,
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楼主是不是非常了解化学发光法啊?我现在就是纠结这个在我梅毒检测化学发光法阳,TPPA法是阴,不知道哪种方法准确了,到现在都还确诊不了
发光也包括1+2抗体吗
我发光0.16不碍事吧?这么敏感算高的了吧。
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