请教一个关于目的基因与pmd19t simple载体连接转化的问题

(8分)回答有关基因工程的问题:(1)构建基因工程表达载体时,用不同类型的限制酶切割DNA后,可能产生黏性末端,也可能产生______末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接,则应选择能使二者产生______(相同、不同)黏性末端的限制酶。(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时,构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等,其中启动子的作用是提供特异性识别结合位点驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时,常用______处理大肠杆菌,以利于表达载体进入;为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA,可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交,该杂交技术称为_____。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成______,常用抗原—抗体杂交技术。(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞,先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的  中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的_上。 - 跟谁学
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跟谁学学生版:genshuixue_student精品好课等你领在线咨询下载客户端关注微信公众号&&&分类: (8分)回答有关基因工程的问题:(1)构建基因工程表达载体时,用不同类型的限制酶切割DNA后,可能产生黏性末端,也可能产生______末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接,则应选择能使二者产生______(相同、不同)黏性末端的限制酶。(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时,构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等,其中启动子的作用是提供特异性识别结合位点驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时,常用______处理大肠杆菌,以利于表达载体进入;为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA,可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交,该杂交技术称为_____。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成______,常用抗原—抗体杂交技术。(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞,先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的  中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的_上。 (8分)回答有关基因工程的问题:(1)构建基因工程表达载体时,用不同类型的限制酶切割DNA后,可能产生黏性末端,也可能产生______末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接,则应选择能使二者产生______(相同、不同)黏性末端的限制酶。(2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时,构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等,其中启动子的作用是提供&&&&&&&&&&&&&&特异性识别结合位点驱动基因转录。在用表达载体转化大肠杆菌时,常用______处理大肠杆菌,以利于表达载体进入;为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA,可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交,该杂交技术称为__&&&&&&&&___。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成___&&&___,常用抗原—抗体杂交技术。(3)如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞,先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的  中,然后用该农杆菌感染植物细胞,通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的&&&&_上。科目:难易度:教材: 高中生物中图版最佳答案(1)平 相同 (2) RNA聚合酶 Ca2+ DNA-RNA分子杂交技术 胰岛素(蛋白质) (3)T-DNA 染色体解析略知识点:&&&&&&基础试题拔高试题热门知识点最新试题
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蓖麻毒素的原核表达研究和抗虫植物表达载体P-En的构建
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本人做表达,将目的片段与pMD19-T连接后成功克隆到大肠杆菌DH5a感受态中,测序正确,然后将目的片段切下,与pET-32a表达载体相连,转到BL21感受态中,菌液pcr鉴定为弱阳性,条带浅,质粒...
我的目的片段长度815bp左右,采用自己设计的加BamHI、SalI酶切位点的引物扩增,PCR使用TAKARA公司的Ex-Taq酶(扩增后带有A尾),pcr产物凝胶回收后再与PMD19T载体(2692bp)连接,转化至...
克隆载体为TaKaRa的T-VectorpMD19(Simple),载体长度为2692bp。2.将目的产物连接到克隆载体后,转化大肠杆菌(DH5α),蓝白斑筛选,挑取白色单个菌落后过夜培养,提取质粒。3.对菌液和...
之前计划目的基因(3.6Kb)与pMD-19T进行TA克隆连接,目的...后来用Taq酶PCR扩增后直接与pMD-19T载体链接,最后发现还是自连的·发现这都不行后就进行一步克隆(ClonExpressTM快速克隆技术),...
很弱的目的片段都能很好的连接到pMD19-T上,阳性率很高,后来实验室改用goldenview,结果很亮的目的条带都不能连接上载体,...影响与T连接,而PCR产物产量极高条件下,部分产物未被插入而...
连接pMD19T载体后挑取5个单克隆送的华大测序,结果每个克隆的序列都不一样。并且与文献中的标准序列相比有5-6个...我的目的片段长度为987bp,我是双向测序后软件拼接的,应该不会有什么问题。...
用PMD-19T载体与我的目的基因片段(3.3kb)链接,之前用高保真酶进行PCR扩增后通过加A试剂盒进行加A尾,之后热击转化,涂布后长出...后来用一步克隆试剂盒进行连接,但涂布后没有菌落,一直不...
第一次做分子实验,选择了PMD-19T载体,连接目的片段后,再亚克隆到PET-28a上,现在遇到了个问题,就是当时在设计引物加酶切位点时,只考虑到了PET-28a和目的片段,设计出的酶切位点在PMD-...
使用阳性的cDNA进行PCR后,得到的条带也与目的条带相符。最近想通过TA克隆的方法对各引物进行验证,但是克隆及测序均...3.然后切胶回收,并连接至PMD19T载体上,之后便是转化至感受态DH5ɑ中...
我用的表达载体是pMAL-c5X,选的酶切位点是NdeⅠ与NotⅠ,T载体用的是pMD19-T,目的基因片段2200左右,T载体与目的基因连上了,...3:实验室的连接酶其他同学成功连接过,也可以排除连接酶的...
本人要用到的目的基因被保存在PMD19-T质粒。现今要将该目的基因连接到表达载体上,要怎么操作呢?是直接...当时目的基因片段与T载体通过的时T-A配对连接上去的,如今要怎么将目的基因切回下来
最近一直在构建一个原核表达载体,目的片段大小1700+,表达载体4900+,目的片段PCR后连接T载体之后双酶切回收,取了5ul跑了一下,亮度还可以,...PS:soultionI来自于TAKARA的pMD-19T试剂盒...
载体为PMD-19T目的条带大小1926bp引物两条均有酶切位点跟保护碱基PCR体系跟条件与在基因组上...如图:按道理如果连接上了目的片段,再对其进行PCR,只会出现一条条带,为嘛我P出了数条?...
我的目的片段在3.4左右,LA扩增后,割胶回收目的片段,电泳...问题就出在下面:我分别用fermentasT4连接酶,pEASY-T和pMD19连接系统,载体与插入片段的比例1:3,1:1都试过,平板上也能长出...
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