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【求助】做软琼脂克隆形成试验的大侠帮帮忙吧！
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这个帖子发布于7年零190天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我也在做贴壁细胞的克隆形成试验。 我还有几个问题：1.接种细胞的时候需要精确接种100，500 或者1000个细胞。您是怎么控制细胞数的呢？
2.在软琼脂里会同时有活细胞跟死细胞，怎么鉴别？（细胞形态）
3.试验需要加药，看药物对细胞的放疗增敏效应，怎么加的药啊？
不知道邀请谁？试试他们
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1、你可以把消化下来的细胞，制成单细胞悬浮液。然后计数，稀释成你想要的工作浓度。2、活细胞增殖后会形成肉眼可见的克隆，死细胞应看不到克隆。3、可以把药物溶液滤过后，加到培养基中。有帮助的话，请投一票
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怎么投票啊？谢谢大侠，很有帮助！
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麻烦再问一下啊！我用的是双层软琼脂培养。上层用的是0.7%琼脂、DMEM x2和细胞的混合液。再加药的时候可以把药液滤过后直接加在上层琼脂的表面么？ 我的药只要作用24小时就可以了。
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一般是加到培养基中，算好工作浓度。你加到DMEM中就可以了。很少把药物涂在表面的。至少我们筛选稳定克隆（对抗生素有抗性）时，抗生素是加在培养基中的。
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可是有个问题啊，放在DMEM中，等琼脂一凝固就没有办法将药物去除了啊！那药物作用时间就延长了啊
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可是有个问题啊，放在DMEM中，等琼脂一凝固就没有办法将药物去除了啊！那药物作用时间就延长了啊
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关于丁香园细胞库/细胞培养
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软琼脂克隆形成实验
软琼脂克隆形成实验
来源：互联网
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原理： 细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。并且克隆形成率与接种密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液，直接接种在碟皿中，持续一周，随时检查，到细胞形成克隆时终止培养。 基本步骤： (1)取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作活细胞计数，用含20%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。 (2)用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。 (3)按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2×DMEM培养基(含有2×抗生素和20%的小牛血清)混合后，取3mL混合液注入直径6cm平皿中(10cm平皿加7～10mL)，冷却凝固，可作底层琼脂置CO2温箱中备用。 (4)按1:1比例让0.7%的琼脂糖和2×DMEM培养基在无菌试管中相混以后，再向管中加入0.2mL的细胞悬液，充分混匀，注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中，逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后，置入37℃ 5%CO2温箱中培养10～14天。 (5)把平皿放置在倒置显微镜下，观察细胞克隆数。计算形成率。 软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过40℃。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖，不适用于软琼脂克隆形成试验。
wangminchao
相关实验方法
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谁在关注这个实验
谁能提供实验帮助？
谁做这个实验？
温度和时间的控制很重要
觉得很简单
时间周期长 而且操作不注意会污染
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软琼脂克隆形成实验
&软琼脂克隆形成实验&原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形 成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍 体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。并且克隆形成率与接种密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成 单细胞悬液，直接接种在碟皿中，持续一周，随时检查，到细胞形成克隆时终止培养。基本步骤：（1）取对数生长期细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打，使之成为单细胞，作活细胞计数，用含20%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1&106细胞/L。然后根据实验要求作梯度倍数稀释。（2）用蒸馏水分别制备出1.2%和0.7%两个浓度的低溶点琼脂糖液，高压灭菌后，维持在40℃中不会凝固。（3）按1:1比例使1.2%的琼脂糖和2&DMEM培养基（含有2&抗生素和20%的小牛血清）混合后，取3mL混合液注入直径6cm平皿中（10cm平皿加7～10mL），冷却凝固，可作底层琼脂置CO2温箱中备用。（4）按1:1比例让0.7%的琼脂糖和2&DMEM培养基在无菌试管中相混以后，再向管中加入0.2mL的细胞悬液，充分混匀，注入铺有1.2%琼脂糖底层平皿中，逐形成双琼脂层。待上层琼脂凝固后，置入37℃ 5%CO2温箱中培养10～14天。（5）把平皿放置在倒置显微镜下，观察细胞克隆数。计算形成率。软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过40℃。接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm的平皿接种1000个细胞。正常细胞在悬浮状态下不能增殖，不适用于软琼脂克隆形成试验。是一家生物高新技术企业，主要从事免疫学、分子生物学和常规生化试剂的研发、销售。并代理销售Amresco、Omega、Sigma、R&D、TCC、HYCLONE、Spectrum等二十多家国外知名品牌，致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供一流的科研试剂和完善的技术服务，满足生物化学、分子生物学 、细胞生物学、免疫学等生物科技实验需求。上海恒远生物科技有限公司先后与河南中医学院、复旦大学、同济大学、上海交通大学、华东师范大学、第二军医大学、仁济医院、曙光医院、华山医院、瑞金医院、上海有机研究所、中科院上海分院等多家单位建立了良好的合作关系。本公司可为您提供科研生物试剂，，大鼠ELISA试剂盒，小鼠ELISA试剂盒，微生物培养基，进口抗体等，备有大量库存。将为客户提供一流的商品和服务，质量可佳，价格合理。
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软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成率；
Cloning efficiency was measured by counting clone number growing in soft agar.
本实验的永生化间充质干细胞系可在软琼脂内形成克隆，克隆形成率只有2.1%，但不在裸鼠体内致瘤。
In this study, immortalized mesenchymal stem cell lines can be formed in soft agar cloning, cloning rate was only 2.1%, but not tumorigenicity in nude mice.
体外软琼脂克隆和SCID小鼠体内成瘤实验，检测CD34+和CD34-细胞的克隆形成和致瘤能力；
Clonogenesis ability of the CD34+ and CD34- cells were tested by soft agarose assay and in vivo tumorigenesis abilities were tested in severe combined immunodeficient (SCID) mice.
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