二喹啉甲酸
...，对照组每鼠给予等量生理盐水。感染后5个月，颈椎脱臼法处死沙鼠，取出肝脏，以差速离心法制备肝微粒体悬液和细胞液。采用二喹啉甲酸（BCA）蛋白定量分析试剂盒测定细胞液和微粒体悬液的蛋白浓度。用差示光谱法测定肝微粒体中细胞色素P450（CYP450）和细胞色素b5（Cyt b5...
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Bicinchoninic acid disodium
...组织匀浆，4℃下轻柔旋转，混匀，离心（r/min×10 min），收集匀浆上清液，二喹啉甲酸（Bicinchoninic acid disodium，BCA）法测定蛋白浓度（BCA试剂，美国Sigma公司），按试剂盒（南京建成生物工程研究所）说明用紫外分光光...
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bicinchoninic acid
二喹啉甲酸
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xanthurenic acid
Bicinchoninic Acid disodium
bicinchoninic acid(BCA)
Quinoline dicarboxylic acid
Quinolined
Quinoline dicarboxylic acid
Quinolined
Hydroxyquinoline-2-carboxylic acid
4-hydroxyquinoline-2-carboxylic acid, hydrate
2,3-Quinoline dicarboxylic acid
Diethyl 2,3-quinolinedicarboxylate
Dimethyl 2,3-quinolinedicarboxylate
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建立了用二喹啉甲酸（ BCA）法测定蜜蜂变应原中蛋白含量的方法。
The determination method of protein content in bee extract by bicinchoninic acid method was set up.
采用离体黏附模型及二喹啉甲酸（BCA）法测定黏附微丸的黏附性及溶出度。
The BCA method and in vitro adhesive analogue were adopted to determine release behavior of the adhesive pellets and their adhesiveness.
在含硫酸铜的酸性水溶液中，用氯酸钠作氧化剂，氧化喹啉得到2，3-吡啶二甲酸，产率为56·4%；
In the acidic aqueous solution of copper sulfate, pyridine-2,3-dicarboxylic acid was synthesized by oxidizing quinoline with sodium chlorate, and the yield of the product could reach 56.4%.
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桃红四物汤对光老化小鼠皮肤组织中_省略__2_AP_1蛋白表达水平的影响_张宇_
辽宁中医杂志2015年第42卷第11期
protein in skin tissue of model control group were significantly lower （P ＜0．05）and expressions of AP －1protein in skin tissue of model control group were significantly higher （P ＜0．05）．Compared with model control group ，expressions of Smad －3，TIMP －1and TIMP －2protein in skin tissue of high ，medium and low dose groups were significantly higher （P ＜0．05）and expres-sions of AP －1protein in skin tissue of high ，medium and low dose groups were significantly lower （P ＜0．05）．Conclusion ：Tao-hong Siwu Decoction has a protective effect on the skin photoaging．
Key words ：Taohong Siwu Decoction ；photoaging ；Smad －3；TIMP －1；TIMP －2；AP －1
随着气候环境的恶劣变化，大气中臭氧层近年来，的破坏，更多的紫外线辐射到地球上。人类皮肤方面的疾病也在增加。其中，由于长期受紫外线中中长波（UA 和UB ）光线照射引起的皮肤粗糙、松弛、结节增厚，出现皱纹等表现的皮肤外源性损坏，称为皮肤光老［1］
化。皮肤受紫外线照射后，引起一系列的氧化应激，进而引发一系列的酶促反应是皮肤光老化的主要发病
机制。在皮肤光老化发生发展的过程中，调控蛋白酶（MMPs ）表达增加，促使皮肤细胞外基质的降解，起到了最为核心的作用。已被证实的，基质金属蛋白酶抑制剂（TIMP ）可以与MMP 结合，使得MMP 无法与自
身反应的底物相结合，从而抑制其活性。AP －1蛋白与其他蛋白一起形成转录因子AP －1复合物，可以促进MMP 的表达。在治疗皮肤光老化方面，在使用西医西药手段治疗的同时出现许多不良反应。近年
来，很多研究发现多种中草药有抗氧化功能。因此越来越多的研究者开始研究，利用中草药防治皮肤光老化。本研究的目的是采用动物实验的方法，探索中草药桃红四物汤在防治皮肤光老化方面的疗效和作用机制。11. 1
材料与方法实验对象及分组
厚、色暗红或有瘀斑等表现。
光老化模型制备过程：将小鼠放到照射箱中，同时对小鼠照射UVA 和UVB 光源，照射频率为3次/周，每次照射时间为2h ，照射时间为14周。根据有关文献报道，达到引发小鼠皮肤光老化的UV 辐照强度为：UVA 和UVB 光源的累计辐照强度分别为261. 79J /cm 2和6. 54J /cm 2［5］。1. 5给药处理
桃红四物汤的配置：事先确定中药低、中、高组的药液浓度比例为1：3：9。然后根据小鼠与人的等效剂量比值，将中剂量组桃红四物汤浓度设定为人体用药浓度的9. 1倍。
给药量和方法：对中药各组小鼠分别给予0. 5mL （每只小鼠）相应浓度的桃红四物汤；阳性对照组（VE 组）小鼠给予0. 5mL （每只小鼠）的维生素E 滴剂。空白对照组和模型对照组小鼠给予0. 5mL （每只小鼠）的生理盐水。给药方式为灌胃，给药时间为在进行造模前30min ，频率为1次/d ，疗程为14周。1. 6达1. 6. 1
应用Western －blot 方法检测皮肤组织中蛋白表
皮肤组织总蛋白的提取及BCA 法检测其浓度将2μL 蛋白酶抑制剂和500μL 的Buffer 溶液混匀
实验动物采用的是同种系健康小鼠，部分皮肤去
40日龄，毛，体重18
20g ，雌雄比例为1：1，数量30只，常规喂养。随机将30只小鼠分配到6个实验组，
每组数量为5只。6个实验组分别为阳性对照组（VE 组）、中药（桃红四物汤）低、中、高剂量组、模型对照组（光老化组）和空白对照组（正常组）。1. 2
BCA 试剂盒、SDS －组织总蛋白提取试剂盒、
PAGE 凝胶制备试剂盒、小鼠β－actin 单克隆抗体（BOSTEＲ）、中药材红花、熟地、当归、白芍、桃仁、川芎。制备桃红四物汤：将上述6中药材上药煎煮浓缩成膏，制成极细粉末，以双蒸水溶解成汤。1. 3仪器
照射箱；UVA +UVB 光源（功率为20W ），南京华强电子有限公司；低温高速离心机；－80? 超低温冰箱（三洋，日本）；凝胶成像分析系统（美国Alphainno-tech Chemi Imager 公司的Chemi Imager 5500型）；酶标仪；垂直板电泳装置（Mini －Protein Ⅲ型），购自美国BIOＲAD公司；以下实验耗材由辽宁中医药大学生物技术实验室提供：一次性塑料试管；1. 5mL EP 管；200μL 吸头；1000μL 吸头；载玻片；盖玻片。1. 4模型制备（小鼠皮肤光老化模型）
小鼠皮肤光老化模型标准：小鼠出现活动倦怠、蜷缩、活动减少，皮肤出现枯萎干燥、纹理粗大、粗糙肥
（Buffer 溶液为预冷），制备成裂解液，放置于冰上备
用。在组织匀浆器中加入事先配制好的裂解液，然后将50mg 实验动物组织用手术剪剪碎后，加入到组织匀浆器中，匀浆至无肉眼可见组织固体。在4? ，离心转速为10000r /min 条件下，吸入已匀浆好的组织液置于另一新的离心管中（事先预冷），离心5min 。吸取离心上清液置于另一新的离心管中（事先预冷），得到总蛋白。根据样品数量，配制适量BCA 工作液，并充分混匀。配制比例：BCA 试剂A 与BCA 试剂B 的
1、比例为50：1。将事先已经稀释好的标准蛋白按0、2、4、8、12、16、20μL 加入96孔板，每个孔为20μL ，不
够用去离子水补齐。在37? 条件下，将溶液充分振荡混匀后，放置30min 。把酶标仪设定于562nm 波长处，然后对样品进行光吸收值测定，空白对照组以不含BSA 的光吸收值。然后在37? 条件下，吸取待测样品20μL 用去离子水稀释待测到适当浓度的蛋白样品，再加入到200mL BCA 工作液，充分混匀后放置30min 。在上述设定好的酶标仪中测定光吸收值（A562）。利用标准曲线法，根据测得的光吸收值，查得样品的蛋白含量，然后再乘于相应稀释倍数得到样品蛋白浓度。1. 6. 2
聚丙烯酰胺凝胶的制备及电泳
首先配制分
离胶。根据所要分离蛋白质的分子量配制不同浓度的分离胶。然后是灌注分离胶，在室温下，将配制好的分
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组织匀浆中能用BCA法直接测蛋白浓度吗？还是要把蛋白提取出来再测？
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各位大神帮帮忙，谢谢
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BCA法的干扰物质太多，肯定要把蛋白提取出来，起码是粗纯化后。
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