T-SPOT必备小贴士
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T-SPOT必备小贴士
相信在临床工作的各位医生，对“T-SPOT”这个名称都不陌生，或者至少有所耳闻。随着T-SPOT技术的推广和在临床工作中的逐渐普及，很多医生已经掌握了T-SPOT检查的指征。然而，不同种类的标本如何留取和送检，以及如何解读报告，依然是让很多临床工作者感到棘手的问题。那今天就让我们来一起了解一下如何在临床工作中更加游刃有余地面对T-SPOT的一些小贴士！　　Q1、“T-SPOT”是什么？　　“T-SPOT”实际上是检测试剂盒T-SPOT.TB的简称。T-SPOT.TB是γ干扰素释放试验（interferon gamma release assay，IGRA）的一种，是利用结核特异抗原（ESAT-6，CFP 10），通过酶联免疫斑点技术（enzyme-linked immunospot ，ELISPOT）检测受试者体内是否存在结核效应T淋巴细胞，从而判断受试者是否感染结核分枝杆菌（现症感染）的新方法。因此，T代表效应T细胞，SPOT即斑点，TB代表结核。　　Q2、这位患者需要查T-SPOT.TB吗？　　临床工作中遇到的主诉、临床表现、个人病史各不相同的患者，为什么有些患者需要进行T-SPOT.TB检测，有些患者不需要接受T-SPOT.TB检测？T-SPOT.TB检测的适应证到底是哪些呢？　　T-SPOT.TB的适应证主要包括结核分枝杆菌潜伏感染（latent tuberculosis infection, LTBI）的诊断和活动性结核病的辅助诊断。　　1、在活动性结核病辅助诊断中的应用：　　a. 缺少细菌学诊断依据（如痰菌阴性）的活动性结核病的患者，可起到补充或辅助诊断的作用　　b. 出现腹水或胸水的患者，可采用体液或组织标本来补充或辅助诊断结核性胸膜炎或结核性腹膜炎　　c.辅助诊断儿童结核病　　T-SPOT.TB并不能作为诊断活动性结核病的金标准。　　2、在LBTI诊断中的应用：　　a. 活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断　　b. 排查儿童结核分枝杆菌（M.tuberculosis，MTB）感染　　c. 对HIV感染人群进行LTBI筛查　　d. 需要接受糖皮质激素或肿瘤坏死因子拮抗剂等免疫抑制治疗，或需要接受化疗，或器官移植的患者排查LTBI　　Q3、怎么留取送检标本？　　知道了哪些患者需要检测T-SPOT.TB后，就要留取患者血液或体液标本送检了。　　外周血、体液或浆膜腔积液都是可以送检的标本种类，临床医生可根据患者的实际情况考虑送检的标本种类。　　①外周血送检须知　　a. 采集外周血无需空腹，需用肝素/肝素锂/肝素钠抗凝（推荐绿帽管），不得用EDTA抗凝；　　b. 采血量要求：2岁以下儿童2-3ml，其他患者4-6ml，免疫低下/受抑制者6-8ml；　　c. 样本室温（15-25℃）运输与保存，不得冷冻/冷藏；　　d. 样本采集后6小时内送到实验室，以便完成检测；　　e. 一周内有输血史或做过PET-CT的患者，会影响血液中淋巴细胞的分类，建议两周后再行检测；　　f. 运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果；　　② 非血标本送检须知：　　结核感染时，有活性的效应T淋巴细胞主要集中在炎症反应的部位以对抗感染，如胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、腹水、脑脊液、关节液等。血液中的效应T淋巴细胞只占所有效应T淋巴细胞的20-30%，因此，检测炎症部位体液的效应T淋巴细胞有利于区别结核感染和其他原因导致的炎症反应，对确诊结核病有重要的临床意义。　　a. 采集量及抗凝剂的添加量：　　胸水、腹水、心包积液：无菌密闭容器留取50ml以上，每100毫升加2500IU肝素（0.4ml）抗凝并立即混匀（推荐用盐水瓶（氯化钠注射液）留取，不能用饮料瓶、塑料酒精瓶等留取标本）；　　关节液、脑脊液：无菌小瓶留取4ml以上，每毫升加125IU肝素（0.02ml）抗凝并立即混匀（因所能得到的体积比较小，可以用无菌带盖采集管留取）。　　（注：抗凝剂肝素可以是“肝素钠注射液”2ml：1.25万单位，虽添加的肝素量不一定准确，但仍建议要添加。凝块会严重影响淋巴细胞的数量，如果发现有凝块不建议继续操作）；　　b. 因检测需足够的淋巴细胞（T细胞），为提高实验效率或成功率，操作之前可以先查一下“体液常规”数据中有无淋巴细胞。（如果标本量不足导致试验失败，那么就需要再次留取标本，增加了医生的负担也增加了患者的痛苦，所以一定要记住哦！）　　c. 建议同时送检病人血样；　　d. 样本采集后4小时内必须送至实验室，常温保存（15-25℃），不可冷冻或冷藏；　　e. 与外周血检测相比，浆膜腔积液T-SPOT.TB诊断结核性浆膜炎更有价值，但目前没有统一的正常界值，故暂不报阴阳性结果只报斑点数。　　Q4、T-SPOT.TB的结果出来了，怎么理解这些数字呢？　　T-SPOT.TB报告的内容包含：阳性对照情况；抗原孔结果（A孔或B空斑点数-空白对照孔的点数）；阴性对照情况。会出现下面几种情况：　　图左：T-SPOT.TB阳性与阴性结果的对比度。图片来源：/about-the-test/； 图右：T-SPOT.TB强阳性的结果图，肉眼计数情况下，目前我院报告中均会体现A孔和B孔的具体数目。
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你好：我今天拿到报告单1:T-SPOT....
病情描述（发病时间、主要症状、症状变化等）：你好：我今天拿到报告单1:T-SPOT.TB是阳性（+）2:ESAT-6(抗原A)结果值293：CFP-10(抗原B)结果值>50这是肺结核吗？怀孕一个月了这个结果会不会因为怀孕有所影响？检查的痰和血都没问题？想得到怎样的帮助：是不是肺结核呢？很急呀 谢谢麻烦告诉我下
共1条医生回复
因不能面诊，医生的建议仅供参考
职称：医生会员
专长：中医科
&&已帮助用户：220603
指导意见：你好，这样的情况考虑可能是存在肺部炎症感染的问题，可能是肺结核的表现，需要就医进行针对性的药物消炎治理
问T-SPOT怎么看是阳性/强阳性？
化验结果...
职称：主治医师
专长：急慢性鼻炎,梅妮埃病,变应性鼻炎,流鼻血,急慢性鼻窦炎,急慢性咽炎,急慢性扁桃体炎,急性腺样体炎,急慢性喉炎,萎缩性鼻炎
&&已帮助用户：4167
关于T-SPOT怎么看是阳性/强阳性？
化问题如下：问题分析：T-SPOT检查主要是看有无结核杆菌感染，但诊断敏感性不强，目前结核感染的诊断有一定困难，主要依靠临床症状、肺部影像学检查、痰抗酸染色综合判断意见建议：不知道症状有哪些，建议行肺部影像学检查、痰抗酸染色，目前您的T-SPOT检查是阴性，若影像学、痰中均没有找到结核证据应该可排除结核感染可能性
问你好我做过PPD检查强阳性T-SPOT检查抗原A和B均为阳性能...
专长：器官移植、性功能障碍、心血管外科
&&已帮助用户：220741
病情分析：从您的化验结果考虑结核可能性大但是仅凭化验结果还无法完全确定结核病意见建议：诊断结核病需从临床表现、影像学检查、辅助化验等几方面综合判断最常见的结核病为原发性肺结核即结核分枝杆菌经呼吸道传播并在肺部定植临床表现分2方面：局部表现主要是开放性的肺结核可有咳嗽、咳痰、胸痛及咯血等症状；全身表现主要为结核中毒症状可有午后低热（提问38度左右）、盗汗、乏力、身体消瘦等影像学检查可行胸片检查如为原发性肺结核可发现肺部原发综合症表现辅助化验除上述您已做过的检查还需要反复痰检找结核杆菌痰检找到致病菌是诊断结核的确诊证据另外除原发性肺结核外结核杆菌还可在其他部位定植发生其他一些继发性结核病如结核性胸膜炎、结核性腹膜炎、肠结核等根据您的初步症状需要进一步检查
问痰液检查肺结核需要几次咳嗽干咳。少痰胸闷？痰液检查...
职称：医生会员
专长：高血压、糖尿病、心血管疾病
&&已帮助用户：101147
病情分析： 一般肺结核通过x线或肺部ct就可以确诊。痰液检查只是除外活动传染的情况。意见建议：建议你做肺部的x线检查，必要时做ct检查，以明确是否为肺结核。肺结核的主要症状有咳嗽、咳痰、咯血、午后低热、体重减轻等。
问肺结核检查痰是不是要前天的
职称：副主任医师
专长：内科、消化内科
&&已帮助用户：247948
问题分析：你好～！肺结核病的痰液检查可以随机的，如早上漱口后的第一口痰和夜间的痰液，及随机的痰液，需要做3此以上 ，当天早上的和夜间及随机的都可以的意见建议：肺结核病的主要检查项目是肺部影像学检查如CT，DR片等，痰液检查只是检查是否有痰菌排出 ， 一旦确诊需要坚持和积极规范治疗，不要擅自停药或改药等，避免结核病治疗不彻底难以治愈
问无肺结核描述的症状痰涂片检查阴性怎
专长：乙肝、传染科综合
&&已帮助用户：215824
您好您的这种情况一般肺结核通过胸片和痰检来确诊的痰检阴性只能说明结核不在活动期建议您可与做个痰培养看下吧这样最准确
问根据医院检查结果判断是否得了肺结核
职称：医生会员
专长：高血压，糖尿病
&&已帮助用户：652
病情分析： 肺结核是由结核分枝杆菌引发的肺部感染性疾病。是严重威胁人类健康的疾病。
一、病原学检查
　　包括直接镜检法，分离培养法，分子生物学检测和药物敏感试验等。
二、组织学病理检查
　　其重要性仅次于细菌学检查，详见本文的【病理】部分。
三、影像学检查
1、X线胸片检查：是诊断肺结核最传统、方便而快速的必备检查，对了解病变的部位、范围、性质并了解病情的演变有重要价值。不同类型的肺结核均有其X线影像特征。
2、胸部CT扫描：对X线胸片有补充性诊断价值。肺结核的胸部CT表现可归纳为“三多三少”，即多形态、多部位、多钙化和少肿块、少堆聚、少增强。胸部CT扫描可发现胸内隐匿部位病变，包括气管、支气管内的病变；早期发现肺内粟粒阴影；诊断有困难的肿块阴影、空洞、孤立结节和浸润阴影和鉴别诊断；了解肺门、纵隔淋巴结肿大情况，鉴别纵隔淋巴结结核与肿瘤；少量胸腔积液、包裹积液、叶间积液和其它胸膜病变的检出；囊肿与实体肿块的鉴别等。
3、其他影像学检查：胸部MRI扫描对肺结核的诊断价值不如胸部CT，但可作为X线和胸部CT扫描的补充，例如用于观察合并支气管结核时气管狭窄的范围和程度。此外，有报道称放射性核素扫描对诊断肺结核有一定的价值，但由于目前缺乏对结核病灶特异性的显像剂，此法诊断结核准确性并不高，需和其它诊断技术联合应用。
意见建议：肺结核的治疗以化学治疗为主，其原则为：早期、规律、全程，适量、联合。
　　（一）早期：肺结核病早期，肺内病灶血液供应好，有利于药物的渗透和分布，同时巨噬细胞活跃，可吞噬大量结核菌，有利于促进组织的修复和有效地杀灭结核菌，所以应尽可能早地发现和治疗肺结核。
　　（二）规律：按照化疗方案，规律投药可保持相对稳定的血药浓度，以达到持续的杀菌作用。反之，血药浓度不稳定，在低浓度时达不到最低抑菌浓度，反而会诱导细菌的耐药性。
　　（三）全程：肺结核患者服用抗结核药物后，短期内症状会显著改善，2个月左右大部分敏感菌被消灭，但部分非敏感菌和细胞内的结核菌仍然存活，只有坚持用药才能最终杀灭这部分细菌，达到减少复发的目的。
　　（四）适量：过量使用抗结核药物，会增加药物的不良反应，用量不足则可诱导耐药产生，因此在化疗过程中必须根据患者的年龄、体重，给予适当的药物剂量。
　　（五）联合：联合不同机制的抗结核药物，可以利用多种药物的交叉杀菌作用，不仅能提高杀菌灭菌效果，还能防止产生耐药性。
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　　今天就让我们来一起了解一下如何在临床工作中更加游刃有余地面对T-SPOT的一些小贴士！
　　来源：华山感染
　　相信在临床工作的各位医生，对“T-SPOT”这个名称都不陌生，或者至少有所耳闻。随着T-SPOT技术的推广和在临床工作中的逐渐普及，很多医生已经掌握了T-SPOT检查的指征。然而，不同种类的标本如何留取和送检，以及如何解读报告，依然是让很多临床工作者感到棘手的问题。那今天就让我们来一起了解一下如何在临床工作中更加游刃有余地面对T-SPOT的一些小贴士！
　　Q1、“T-SPOT”是什么？
　　“T-SPOT”实际上是检测试剂盒T-SPOT.TB?的简称。T-SPOT.TB是γ干扰素释放试验（interferon gamma release assay，IGRA）的一种，是利用结核特异抗原（ESAT-6，CFP 10），通过酶联免疫斑点技术（enzyme-linked immunospot ，ELISPOT）检测受试者体内是否存在结核效应T淋巴细胞，从而判断受试者是否感染结核分枝杆菌（现症感染）的新方法。因此，T代表效应T细胞，SPOT即斑点，TB代表结核。
　　Q2、这位患者需要查T-SPOT.TB吗？
　　临床工作中遇到的主诉、临床表现、个人病史各不相同的患者，为什么有些患者需要进行T-SPOT.TB检测，有些患者不需要接受T-SPOT.TB检测？T-SPOT.TB检测的适应证到底是哪些呢？
　　T-SPOT.TB的适应证主要包括结核分枝杆菌潜伏感染（latent tuberculosis infection, LTBI）的诊断和活动性结核病的辅助诊断。
　　1、在活动性结核病辅助诊断中的应用：
　　a. 缺少细菌学诊断依据（如痰菌阴性）的活动性结核病的患者，可起到补充或辅助诊断的作用
　　b. 出现腹水或胸水的患者，可采用体液或组织标本来补充或辅助诊断结核性胸膜炎或结核性腹膜炎
　　c.辅助诊断儿童结核病
　　T-SPOT.TB并不能作为诊断活动性结核病的金标准。
　　2、在LBTI诊断中的应用：
　　a. 活动性肺结核患者密切接触者和医务工作者中LTBI的诊断
　　b. 排查儿童结核分枝杆菌（M.tuberculosis，MTB）感染
　　c. 对HIV感染人群进行LTBI筛查
　　d. 需要接受糖皮质激素或肿瘤坏死因子拮抗剂等免疫抑制治疗，或需要接受化疗，或器官移植的患者排查LTBI
　　Q3、怎么留取送检标本？
　　知道了哪些患者需要检测T-SPOT.TB后，就要留取患者血液或体液标本送检了。
　　外周血、体液或浆膜腔积液都是可以送检的标本种类，临床医生可根据患者的实际情况考虑送检的标本种类。
　　①外周血送检须知
　　a. 采集外周血无需空腹，需用肝素/肝素锂/肝素钠抗凝（推荐绿帽管），不得用EDTA抗凝；
　　b. 采血量要求：2岁以下儿童2-3ml，其他患者4-6ml，免疫低下/受抑制者6-8ml；
　　c. 样本室温（15-25℃）运输与保存，不得冷冻/冷藏；
　　d. 样本采集后6小时内送到实验室，以便完成检测；
　　e. 一周内有输血史或做过PET-CT的患者，会影响血液中淋巴细胞的分类，建议两周后再行检测；
　　f. 运输过程中防止颠簸，避免样本溶血影响结果；
　　② 非血标本送检须知：
　　结核感染时，有活性的效应T淋巴细胞主要集中在炎症反应的部位以对抗感染，如胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、腹水、脑脊液、关节液等。血液中的效应T淋巴细胞只占所有效应T淋巴细胞的20-30%，因此，检测炎症部位体液的效应T淋巴细胞有利于区别结核感染和其他原因导致的炎症反应，对确诊结核病有重要的临床意义。
　　a. 采集量及抗凝剂的添加量：
　　胸水、腹水、心包积液：无菌密闭容器留取50ml以上，每100毫升加2500IU肝素（0.4ml）抗凝并立即混匀（推荐用盐水瓶（氯化钠注射液）留取，不能用饮料瓶、塑料酒精瓶等留取标本）；
　　关节液、脑脊液：无菌小瓶留取4ml以上，每毫升加125IU肝素（0.02ml）抗凝并立即混匀（因所能得到的体积比较小，可以用无菌带盖采集管留取）。
　　（注：抗凝剂肝素可以是“肝素钠注射液”2ml：1.25万单位，虽添加的肝素量不一定准确，但仍建议要添加。凝块会严重影响淋巴细胞的数量，如果发现有凝块不建议继续操作）；
　　b. 因检测需足够的淋巴细胞（T细胞），为提高实验效率或成功率，操作之前可以先查一下“体液常规”数据中有无淋巴细胞。（如果标本量不足导致试验失败，那么就需要再次留取标本，增加了医生的负担也增加了患者的痛苦，所以一定要记住哦！）
　　c. 建议同时送检病人血样；
　　d. 样本采集后4小时内必须送至实验室，常温保存（15-25℃），不可冷冻或冷藏；
　　e. 与外周血检测相比，浆膜腔积液T-SPOT.TB诊断结核性浆膜炎更有价值，但目前没有统一的正常界值，故暂不报阴阳性结果只报斑点数。
　　Q4、T-SPOT.TB的结果出来了，怎么理解这些数字呢？
　　T-SPOT.TB报告的内容包含：阳性对照情况；抗原孔结果（A孔或B空斑点数-空白对照孔的点数）；阴性对照情况。会出现下面几种情况：
　　图左：T-SPOT.TB阳性与阴性结果的对比度。图片来源：/about-the-test/； 图右：T-SPOT.TB强阳性的结果图，肉眼计数情况下，目前我院报告中均会体现A孔和B孔的具体数目。
　　图片来源于复旦大学附属华山医院感染科实验室，国内最早开展T-SPOT.TB检测的实验室之一 。
　　T-SPOT TB方法检测浆膜腔液中的T淋巴细胞，可以作为结核性浆膜腔炎诊断的新方法，其最佳临界值为14（A孔或B孔），当浆膜腔积液T-SPOT.TB与外周血T-SPOT.TB二者的斑点形成细胞数之比大于1时，更倾向于诊断结核性浆膜炎。
　　（参考文献：PLOSONE: Utility of T-Cell Interferon-c Release Assays for Diagnosing TuberculousSerositis: A Prospective Study in Beijing, China）
　　Q5、怎么解释T-SPOT.TB 阳性或阴性结果代表的含义？
　　拿到检验报告，知道了患者的检测结果是阳性还是阴性后，怎么解读这个结果呢？如何应用到实际的临床工作中？
　　①阳性结果
　　1.提示患者体内存在结核分枝杆菌特异性效应T细胞，患者存在结核感染。T-SPOT.TB不能作为诊断活动性结核的金标准，必须结合患者的临床症状和其他的相关检查结果共同作出临床判断。
　　2.可能是其他分枝杆菌的感染引起，如M.kansasii（堪萨斯）、M.szulgai（苏氏）、M.marinum（海）、M.gordonae（戈登）分枝杆菌（这些分枝杆菌可致HIV患者机会感染）。
　　3.皮下注射PPD也许会造成T-SPOT.TB假阳性结果，因此需同时检测T-SPOT.TB和TST时，T-SPOT.TB的血样最好在TST实验前或者实验后3天内采取。
　　②阴性结果
　　提示患者体内未检测到结核分枝杆菌特异性效应T细胞。但若出现以下情况，阴性结果不能排除结核分枝杆菌感染可能：
　　1.因感染阶段不同引起的假阴性结果，如标本是在细胞免疫发生前获取的；
　　2.免疫系统功能不全情况，如HIV感染者，肿瘤患者，儿童等；
　　3.其他免疫学或实验非正常操作的差异。
　　T-SPOT.TB并不能区分活动性结核病和LTBI，也不能准确预测LTBI发展为活动性结核病的风险。从T-SPOT.TB检测原理来看，T-SPOT.TB检测的是人体对结核分枝杆菌特异性抗原的免疫反应（而非结核分枝杆菌本身），阳性结果提示患者体内存在被结核分枝杆菌（以及少数非结核分枝杆菌）致敏的T淋巴细胞。因此，T-SPOT.TB阳性的患者可能是活动性结核病患者或者是潜伏性感染的状态，是潜伏性还是活动性需要结合临床症状、影像学结果、诊断性抗结核疗效等。
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