新生大鼠少突胶质前体细胞的培养和分离纯化--《第六届江浙沪儿科学术会议暨儿科学基础与临床研究进展学术班论文汇编》2009年
新生大鼠少突胶质前体细胞的培养和分离纯化
【摘要】：目的在体外培养条件下探索少突胶质细胞生长条件及分离方法,获得较高纯度的少突胶质前体细胞。方法取新生大鼠大脑原代混合胶质细胞培养7～10 d,利用振荡分离及差速贴壁法纯化少突胶质前体细胞,再用添加了N2 supplement、血小板衍生生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的无血清培养基进行培养。用免疫荧光法对细胞表面抗原进行鉴定。结果原代培养48h后细胞出现分层,02A祖细胞(oligodeedrocyte-type 2 astreo-eprogenitor)分散位于星形胶质细胞单层上。混合胶质细胞培养时细胞完全分层的出现是振荡分离0A祖细胞的适宜条件。分离纯化的02A祖细胞经无血清化学条件培养基培养后分化为少突胶质细胞。其他胶质细胞不再生长。结论本实验建立的少突胶质细胞培养方法,可获得纯化的少突胶质细胞,能满足进一步的实验需要,为阐明早产儿PVL发病机制提供丰富的实验资源。
【作者单位】：
【分类号】：R329【正文快照】：
新生大鼠少突胶质前体细胞的培养和分离纯化@谢利娟$上海交通大学医学院附属新华医院儿内科!200092
@史婧奕$上海交通大学医学院附属新华医院儿内科!200092
@朱建幸$上海交通大学医学院附属新华医院儿内科!200092目的在体外培养条件下探索少突胶质细胞生长条件及分离
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大鼠少突胶质细胞的纯化培养与鉴定
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&&目​的​探​讨​新​生d​S​p​r​a​g​u​e​―​D​a​w​l​e​y​(​S​D​)​大​鼠​脑​少​突​胶​质​细​胞​的​分​离​方​法​和​生​长​条​件​,​为​少​突​胶​质​细​胞​损​伤​后​髓​鞘​形​成​障​碍​或​脱​髓​鞘​疾​病​的​研​究​奠​定​基​础​。​方​法​根​据​星​形​胶​质​细​胞​和​少​突​胶​质​细​胞​的​生​长​时​间​差​异​、​细​胞​生​长​方​式​及​细​胞​对​培​养​层​粘​附​等​特​性​的​不​同​,​采​用​两​次​恒​温​摇​床​振​荡​分​离​纯​化​法​和​条​件​限​定​培​养​基​培​养​获​取​并​鉴​定​高​纯​度​的​大​鼠​少​突​胶​质​细​胞​。​结​果​培​养​出​突​起​有​如​蜘​蛛​网​状​的​成​熟​少​突
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你可能喜欢少突胶质细胞体外培养、纯化、鉴定及缺氧模型建立--《四川解剖学杂志》2009年04期
少突胶质细胞体外培养、纯化、鉴定及缺氧模型建立
【摘要】：目的观察体外培养少突胶质细胞的增殖、分化及其生物学特性;探讨获得细胞纯度较高的实验方法及如何建立少突胶质细胞的缺氧培养模型。方法1.取新生SD大鼠脑皮质进行体外培养,采用两次恒温摇床振荡分离纯化法和条件限定培养基培养,倒置显微镜结合免疫荧光染色法鉴定细胞种类并分析纯度。2.缺氧联合低糖培养建立细胞体外缺氧培养模型,相差显微镜观察细胞的形态学变化。结果1.获取高纯度的大鼠少突胶质细胞。少突胶质前体细胞祖细胞A2B5荧光标记阳性,成熟少突胶质细胞半乳糖脑苷脂阳性。2.缺氧培养2小时细胞变化不明显,但缺氧培养6小时,细胞存活率明显下降,并且随着缺氧时间延长存活细胞更少,凋亡细胞更多,至缺氧培养10小时,大多数细胞破碎。结论1.两次恒温摇床振荡分离纯化法和条件限定培养基培养可获取高纯度的大鼠少突胶质细胞。2.低糖联合缺氧培养模型可以建立可行的少突胶质细胞体外缺氧模型。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R329【正文快照】：
视神经损伤后,出现髓鞘脱失、少突胶质细胞死亡和髓鞘再生、基因表达变化等病理改变,产生的髓鞘碎片能抑制视神经轴索再生。通过体外培养研究可以了解少突胶质细胞系的存活、增殖、分化以及发育过程中细胞的生物学变化,同时加深理解生长因子、转录因子对细胞系的调节以及基因
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大鼠少突胶质细胞的纯化培养与鉴定
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构建糖氧剥夺模型大鼠少突胶质细胞体外培养与分离纯化
目的:对原有少突胶质细胞祖细胞培养与分离纯化方法进行改进,以简单、高效获得少突胶质细胞并建立少突胶质细胞糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型.方法:取SD乳鼠脑皮质,采用两种不同的细胞增殖法和两种不同的分离纯化法分四组培养,分别为细胞因子增殖联合摇床震荡分离纯化法组,B104CM增殖联合摇床震荡分离纯化法组,细胞因子增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组,B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法组.倒置显微镜下观察神经细胞形态学变化并进行细胞计数.A2B5和髓鞘碱性蛋白鉴定少突胶质细胞并分析其纯度.纯化后的少突胶质细胞祖细胞分化培养3d后分四组培养,正常组正常培养,低氧组分三组,换无糖DMEM培养基,OGD 1、2、3h.然后采用MTT比色法检测细胞活力;流式细胞术分析细胞的凋亡率.结果:(1) B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化法较其他3种培养方法收获的少突胶质细胞祖细胞数量多(P＜0.05).(2) A2B5和MBP特异性标记,细胞纯度可达到95％.(3) MTT结果显示:OGD 1 h少突胶质细胞的细胞活力即降低(P＜0.05),随着缺氧时间延长细胞活力呈降低的趋势更加明显(P＜0.05).(4)流式细胞测细胞凋亡的结果显示:OGD 1 h、2h、3h,细胞的凋亡率分别为14.43％±0.20％,21.99％±0.42％和44.71％ ±0.20％,均高于正常对照组(6.86％±0.05％,P＜0.05).结论:(1)B104CM增殖联合EDTA消化机械吹打分离纯化培养法与其他三种方法比较实验操作简单,收获的少突胶质细胞祖细胞数量最多,可用于少突胶质细胞的培养.(2) OGD可致少突胶质细胞损伤,且与OGD持续时间密切相关,实验成功的建立OGD损伤模型.
作者单位：
乐山职业技术学院人体解剖学与组织胚胎学教研室,重庆,400016
重庆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室,干细胞与组织工程研究室,重庆400016
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