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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-01-13 20:14 标签： 魔兽争霸3 1.27
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γ-PGA酸水测定法的改进及发酵产γ-PGA过程分子量分布和水解酶基因克隆的研究.pdf70页
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γ-PGA酸水测定法的改进及发酵产γ-PGA过程分子量分布和水解酶基因克隆的研究.pdf
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Llll II 11111I 1IIIIIIII IIII Y1958321 y-PGA酸水解测定法的改进及发酵产y-PGA过程 分子量分布和水解酶基因克隆的研究 摘要 y-PGA 丫．聚谷氨酸 是一种有极大开发价值和前景的多功能性生
物制品，近年来被作为增稠剂，保湿剂，药物载体等而一直被广泛应
用于工业领域。它是一种水溶性和可生物降解的新型生物高分子材料，
是一种通过微生物合成，．由谷氨酸单体以1，．羧基与氨基相缩合而成的
均聚氨基酸化合物。 以实验室从纳豆中自行分离出来的丫．聚谷氨酸 Y．PGA 高产菌株
Bacillussubtilis subtilisZJUTZY ZJUTZY为研究对象，进行了Bacillus
发酵产物y-PGA检测方法的修正；考察了培养时间和不同碳源对 subtil&
y-PGA产量以及其分子量分布变化情况；最后考察了Bacillus
ZJUTZY对y-PGA的降解，并进行了水解酶基因ywtD的克隆。 测定7-PGA最常利用的方法是酸水解法，但酸水解法测定y-PGA
周期长且步骤多，本实验室发现醇沉过程和水解液的pH中和步骤会导
致实验结果错误。本论文通过增测醇沉物水溶指标，消除了醇沉步骤 中谷氨酸晶体沉淀析出带来的影响；通过控制水解液中和步骤中NaOH
的添加量，减小了y-PGA的水解定量检测方法的实验误差。另外通过 比较生物传感仪SBA与高效液相色谱测得的y-PGA产量数据，发现
Bacillussubtilis ZJUTZY合成的Y．PGA主要是由L．谷氨酸组成的，因
此可以利用生物传感仪 酶电极只测L．谷氨酸 来代替HPLC测定 浙江工业大学学位硕士论文
1,-PGA产量。 subtilis 然后利用SBA检测了Bacillus subtilis 曲线，发现Bacillus h开始 ZJUTZY发酵产T-PGA的产量在30 出现下降。同时用SDS．
分布也有相应变化，具体原因有待考察；检测了不同碳源对Bacillus
对 ,-PGA产量和"t-PGA分子量
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小鼠巨噬细胞集刺激因子的克隆及在真核细胞表达.pdf 47页
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小鼠巨噬细胞集刺激因子的克隆及在真核细胞表达
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山西医科大学硕士学位论文 小鼠巨噬细胞集落刺激因子 的克隆及在真核细胞表达 摘要 目的克隆小鼠M―CSF基因开放阅读框全长序列552个氨基酸，并在真核
细胞中表达。
Easy质粒连接，转化后酶切鉴定，DNA序列分析。 2 将M―CSF基因重
组体亚克隆入真核表达载体pEGFP．N3，转化后酶切鉴定。 3 将重组体
绿色荧光产生情况。收获转染后细胞，提取总RNA，进行RT―PCR，荧光定
量PCR检测，用Excel软件对荧光定量PCR结果进行相关性分析。
结果 1 电泳结果显示RT―PCR产物的长度为1690bp，与预期结果相符。产
物纯化、连接、转化后酶切结果提示获取了小鼠M．CSF基因重组质粒
pGEM―TEasy―M．CSFa。为了测通插入片段的全序列，采用亚克隆的方法，
得到五个阳性重组体EH、EB、SB、SH、SG，测序发现在重组体pGEM―T
位发生了碱基颠换，由A变成G，其编码的氨基酸由苏氨酸变成丙氨酸。
为了修复突变位点，从L929细胞中克隆x、D片段，经测序正确后，与
pGEM．TEasy．M．CSFb有突变的片段置换，得到阳性重组体pGEM―T
转染结果表明，转染成功的细胞在荧光显微镜下观察到了绿色荧光，而未经
转染的细胞则不发荧光。约30％的细胞呈现绿色荧光，荧光强弱不等，位
于胞核及胞浆内。转染后36h不同比例组均有M．CSF基因的复制表达，4：
1 脂质体：质粒DNAv／w 组的表达量明显高于3：1和10：1组。然后 以4：1转染细胞，发现转染后从5h开始到72h，各个时相均有表达。从转
染后5h到48h表达量逐渐升高，在48h左右表达量最高，然后再逐渐下降。
结论克隆了小鼠M―CSF基因开放阅读框全长序列，并通过基因改造成功
地进行了小鼠M．CSF基因不同突变的纠错，获得了正确的M．CSF基因重 山西医科大学硕士学位论文
组体。建立真核表达体系pEGFP-N3一M―CSF，并在CHO细胞中表达，为进
一步研究M―CSF基因的功能和应用提供基础。
关键词：巨噬细胞集落刺激因子，基因克隆，转染，基因表达 山西医科大学硕士学位论文 and of Cloning murineM―CSF expression in mammaliancells Abstract and clone the ofmurine
Objective：Toexpressencoding region macrophage inmammalian cells．Methods：Extract
colony-stimulatingfactor M―CSF gene total
the theL929 was RNAfrom cells．ThecDNA M―CSF encoding amplified RT―PCRmethod．ThePCR wasclonedintovector
by product pGEM―TEasy
and M―CSF wasinsertedinto sequenced．Further，theregion encodinggene
manmTalianvector constructedrecombinant expression pEGFP-N3。Fina／ly,the transfectedinto
cellline．The was CHO pEGFP―N3一M―CSF
plasmid expression
ofEGFPand M―CSF wasdeterminedfluorescent gene by microscope，RT-PCR realtime was
and PCR，Results：Thesizeof M―CSF amplified 1690bp．The
correct wasisolatedand recombinant plasmidpGEM?-TEasy?-M?-CSFa
confirmedrestriction EH、EB、SB、SH、SG by analysis．Recombinantplasmid
wasconstructed for subclonewas bysubcloningsequencing．Thepositive withthestandard a／lG
was found base
sequenced，compared sequences，we
lackedin9 Abase was site，the
in1093site theGbase．These
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Rg1联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响研究.pdf70页
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遵义医学院坝十学位论文 Rgl联合人脐JnL十细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造J『【【功能恢复的影响
中图法分类号 密级 硕士学位论文 中文题目： on functionrecoveryin transplantationhematopoiesis r垒亟i垒鱼Q坠堕垒堡垒g宝堕苎￡!坠理i￡篁 论文提交日期
2Q12年上月卫日 论文答辩日期
2Q12年上月旦日 B
遵义医学院硕士学位论文R91联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响 遵义医学院硕士研究生 学位论文独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作
及取得的研究成果。学位论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不
包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研
究的启发和所做的贡献均已在学位论文中作了明确的说明并表示了谢 此
学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 遵义医学院学位论文版权使用授权书 本人完全了解遵义医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：遵
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学位论文作者签名： 导师签名：
签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日
遵义医学院硕士学位论文 Rgl联合人脐血干细胞移植治疗对放射损伤SCID小鼠造血功能恢复的影响 目
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