助骨打骨拆怎样培尝

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-19 22:09 标签： 烟台人力资源助理培训
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正常人骨膜内成骨细胞原代培养
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实验材料：
1. 骨组织来源：手术切除之骨组织；
2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100&g/ml链霉素，pH7.2；
3. 消化液：0.25%胰蛋白酶溶液，1mg/mlⅠ型胶原酶溶液；
4. 培养液：RPMI 1640培养基，配制培养液时加入15%的小牛血清，并用5.6% NaHCO3 调节至pH 7.2.
实验方法：
1. 取人手术切除之骨膜，放入盛有缓冲液的培养皿中，去除附于骨膜上的结缔组织；
2. 将骨膜剪碎成1—2mm2大小的组织块（膜片）；
3. 加入0.1%EDTA与0.25%胰蛋白酶（1：1，V/V）混合消化液，在37℃下消化20—30min。以1000r/min离心1—2min，沉淀骨膜组织块，除去上清液；
4. 用缓冲液洗沉淀骨膜组织块2—3次，重复上述离心过程；
5. 在37℃下再用1mg/mlⅠ型胶原酶消化骨膜组织块约90min。离心（1000r/min，5—10min）以沉淀细胞，弃去消化液。再用培养液洗1—2次，离心收集细胞；
6. 加培养液于离心管中分散细胞，调成细胞密度1×106 —5×106 个/ml的悬液。将细胞悬液种植于培养瓶中。也可不使用消化酶而行植块培养法种植培养，培养条件同前；
7. 待细胞长满培养瓶壁后进行传代培养.
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DXY All Rights Reserved.西班牙一裁判被打得肋骨骨折 施暴球员竟是警察
来源：网络转载
责任编辑：张俊
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本报讯 本周西班牙媒体《国家报》报道了一则丑闻，在上周日瓦伦西亚大区进行的一场西班牙业余比赛中，一位名叫赫克托?吉内尔的17岁裁判惨遭球员殴打，结果这位年轻的裁判多根肋骨骨折，脾脏破裂，随后在送到医院抢救后不得不接受脾脏摘除手术。
令人愤怒的是，殴打裁判的还是一位警察。警察知法犯法，这让西班牙人尤其无法接受。现在，西班牙警察总署已经将这位警察停职，并对其展开了调查。据悉，他将被以故意伤害罪被提起诉讼。
事件发生在瓦伦西亚大区第二级别的业余联赛中，对阵的双方是洛斯西洛队和米斯拉塔队。比赛看上去一切正常，双方打成2比2平，然而比赛第88分钟，场上突然发生了暴力事件。裁判吉内尔判罚一位警察身份的球员犯规(西班牙媒体不愿透露这位警察的全名)，这令警察勃然大怒，他立即辱骂吉内尔，吉内尔出红牌想将其罚下，后者变得更加疯狂，立即拳脚相加。吉内尔多根肋骨被打断。20分钟后，他被送到当地的医院，医生检查后发现他的脾脏也已经破裂，为此做了脾脏摘除手术。
在出事之后，比赛组织方立即关闭了球场各个通道，防止伤人者逃走，随后，打人的警察在球场内被逮捕。米斯拉塔队宣布将打人的球员驱逐出队，而据吉内尔的家人透露，吉内尔已经对当裁判失去了所有的兴趣，而且也不想谈任何发生的事情。
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热点排行榜小鼠的原代成骨细胞培养实验急(成骨细胞培养,小鼠,成骨细胞,头盖骨) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 小鼠的原代成骨细胞培养实验急(成骨细胞培养,小鼠,成骨细胞,头盖骨)
摘要: [小鼠的原代成骨细胞培养实验急(成骨细胞培养,小鼠,成骨细胞,头盖骨)] 我最近在做小鼠的原代成骨细胞培养（从头盖骨），培养以后我用抗体（骨钙素和骨桥蛋白）鉴定成骨细胞的纯度，但是计算以后一般只有65-70%的细胞是成骨细胞，我不知道这样的纯度对于做后续的分子生物学实验是否够了？另外我看了很多文献和别人的帖子，很多根本就没有提及成骨细胞的纯度，就直接做后续工作了。另外，是否有朋友做成骨细胞培养，且纯度已经达到了90%或者以上的。如果有，希望能提供一下你的方案，本人将十分 关键词:[成骨细胞培养 小鼠 成骨细胞 头盖骨 骨桥蛋白 分子生物学实验 抗体]……
我最近在做小鼠的原代成骨细胞培养（从头盖骨），培养以后我用抗体（骨钙素和骨桥蛋白）鉴定成骨细胞的纯度，但是计算以后一般只有65-70%的细胞是成骨细胞，我不知道这样的纯度对于做后续的分子学实验是否够了？另外我看了很多文献和别人的帖子，很多根本就没有提及成骨细胞的纯度，就直接做后续工作了。另外，是否有朋友做成骨，且纯度已经达到了90%或者以上的。如果有，希望能提供一下你的方案，本人将十分感激，并愿意以5分相赠！
回复博士期间我做过，给你一点建议：１．胰酶消化置块培养法，可采用多次消化、差速贴壁法纯化细胞。胰酶消化后传代，成纤维细胞贴壁要早于成骨细胞，所以在15-30分钟后换用另外一个，至4-5代细胞纯度能达到90%以上。2．尽量去除骨膜、肌肉组织，减少其它细胞的来源。3．如果有条件可以选择FCM纯化细胞可达100%。选择FITC-骨钙素（成骨细胞特异性荧光，经纯化后筛选出成骨细胞。
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