求助，高质量DNA的dna提取方法法

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-04 13:00 标签： 提取dna的方法
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高质量甘蔗基因组dna的简便快速提取方法研究
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高质量甘蔗基因组DNA的简便快速提取方法研究
摘 要：甘蔗是世界上重要的糖料作物和能源作物。目前，甘蔗分子生物学研究已成为甘蔗研究的热点之一。基因组DNA的提取是进行甘蔗分子生物学研究的基础。本研究设计含一系列SDS浓度的提取液，同时设加液氮和不加液氮研
【题　名】高质量甘蔗基因组DNA的简便快速提取方法研究
【作　者】黄东亮 覃肖良 廖青 高轶静 方锋学
【机　构】广西甘蔗研究所 南宁530007 中国农业大学 北京100083 广西农业科学院农业资源与环境研究所 南宁530007
【刊　名】《生物技术通报》2010年 第5期 101-106页　共6页
【关键词】甘蔗 基因组DNA 提取
【文　摘】甘蔗是世界上重要的糖料作物和能源作物。目前，甘蔗分子生物学研究已成为甘蔗研究的热点之一。基因组DNA的提取是进行甘蔗分子生物学研究的基础。本研究设计含一系列SDS浓度的提取液，同时设加液氮和不加液氮研磨的对比试验，提取甘蔗不同部位叶片的基因组DNA并进行产量和纯度检测以及分子生物学分析。结果表明，所有提取液提取的甘蔗基因组DNA纯度均很高，A260／A280在1．8―2．0之间，A260／A230大于2，但提取液I（0．75％SDS）提取的甘蔗基因组DNA产量较低；加液氮与否对甘蔗基因组DNA的提取产量和纯度没有影响；以提取的甘蔗基因组DNA为模板，分别用一对扩增SPS（蔗糖磷酸合成酶）基因部分片段的引物和一对ISSR引物进行PCR扩增，所有DNA均能扩增出预期的务带；用不同的限制性内切酶对所提取的甘蔗基因组DNA进行酶切，所有DNA样品均能完全酶切。本研究得出最佳甘蔗基因组DNA提取方法如下：磨碎甘蔗叶片后，加DNA提取液（SDS：1．5％；Tris：100mM；EDTA：20mM；NaCl：500mM）于65℃裂解30min，经酚：氯仿和氯仿各抽提一次，可获得高产量高质量的甘蔗基因组DNA，能满足后续分子生物学研究的要求。
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甘蔗,基因组DNA,提取
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有谁使用过简便 快速的提取植物DNA的方法吗?用于PCR, 常规的SDS和CTAB耗时长,我有很多植株需要鉴定,急需最简便的方法,请大侠们帮忙啊!谢谢啦!CTAB快速提DNA法溶剂:2*CTAB,酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),3M的醋酸钠,无水乙醇方法:取植物材料少量,可用液氮冷冻,没有的话不冻也可以,材料粉碎后快速加入CTAB 100微升,65度3-5min,加入相同体积的酚氯仿,混匀,12000转10分钟,取上清至另一管中(注意,一定不要带入酚氯仿,否则残留的酚会使TAQ酶失活而导致PCR结果假阴性),加入十分之一体积的醋酸钠,再加入两倍体积的无水乙醇,冰上沉淀10分钟,离心,去上清,晾干或DNA干燥仪干燥,加入水10-20微升,取1-3微升做PCR.这种方法提取DNA比较稳定可靠,还有一个更快速的方法是碱提取法,直接用氢氧化钠,但是我们试过不是很稳定,所以还用这个方法,也很快的.一次可以提几十个样没问题.确实有点麻烦哦！我也没有好办法，都是传统方法，无助！如果你有好的方法告诉我啊！嫩叶子，在1.5ml离心管中直接磨碎，加水，70度左右煮10min左右，吸1-2微升便可用于PCR，适用于比较好P的片段。三叶虫 wrote:CTAB快速提DNA法溶剂:2*CTAB,酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),3M的醋酸钠,无水乙醇方法:取植物材料少量,可用液氮冷冻,没有的话不冻也可以,材料粉碎后快速加入CTAB 100微升,65度3-5min,加入相同体积的酚氯仿,混匀,12000转10分钟,取上清至另一管中(注意,一定不要带入酚氯仿,否则残留的酚会使TAQ酶失活而导致PCR结果假阴性),加入十分之一体积的醋酸钠,再加入两倍体积的无水乙醇,冰上沉淀10分钟,离心,去上清,晾干或DNA干燥仪干燥,加入水10-20微升,取1-3微升做PCR.这种方法提取DNA比较稳定可靠,还有一个更快速的方法是碱提取法,直接用氢氧化钠,但是我们试过不是很稳定,所以还用这个方法,也很快的.一次可以提几十个样没问题.可以不加醋酸钠的新生组织10mg左右，粗提液可直接用于PCR检测。由于新生组织蛋白质，多糖，色素及酚类等杂质含量都很低，省去苯酚，氯仿抽提步骤，可在室温下进行，不使用液氮，对DNA质量要求不高时可使用此方法。提取液成分：
200mmol Tris-Hcl（PH 8.0）
250mmol Nacl
EDTA（1）&&称取10mg新生组织，置1.5ml Eppendorf管中，室温下用自制塑料小杆迅速研磨成匀浆（2）&&加入提取夜400ul，混匀后，12000rpm，离心5min（3）&&取上清300ul，转移置另一EP管中（4）&&加入等体积异丙醇，室温静置2min，12000rpm，离心5min （5）&&室温下开盖放置15min，异丙醇挥发（6）&&加入20-100ul重蒸水，使沉淀溶解，即得DNA粗提液我这个方法只适合于新生组织,不知道在哪本书上看见的，我自己又改建了一下，如果是新生组织,或是蛋白比较少的话，可以试一下，很简单大家好，我想问一下哪里可以给代做issr，具体情况请pm我
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