求助，ELISA包被液：0.1M的碳酸盐缓冲液，PH9.6的配方

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-11-18 01:06 标签： 书包网花液摩擦 教室
关于ELISA中包被缓冲液的配置(包被,缓冲液,碳酸盐,一致性) - 免疫实验 - 生物秀
标题: 关于ELISA中包被缓冲液的配置(包被,缓冲液,碳酸盐,一致性)
摘要: [关于ELISA中包被缓冲液的配置(包被,缓冲液,碳酸盐,一致性)] 我用的是最常用的pH为9 6的碳酸盐包被缓冲液，但是觉得效果一般，而且一次包多了，就不能保存很久，一致性很不好。请问各位有没有好点儿的配方，既能提高包被效果，又能降低非特异性吸附，还能增加包被板的稳定性。。。。。谢谢！ 关键词:[包被 缓冲液 碳酸盐 一致性 稳定性 吸附 非特异性]……
我用的是最常用的pH为9.6的碳酸盐包被缓冲液，但是觉得效果一般，而且一次包多了，就不能保存很久，一致性很不好。请问各位有没有好点儿的配方，既能提高包被效果，又能降低非特异性吸附，还能增加包被板的稳定性。。。。。谢谢！
回复我用的就是一般的碳酸盐的缓冲液啊，效果还不错的啊，而且都没有调PH值呢。回复我用的就是一般的碳酸盐的缓冲液啊，效果还不错的啊，而且都没有调PH值呢。回复用10mM 或PB都可以回复pH为9.6的碳酸盐包被效果很不错，想要效果好，可以把ＥＬＩＳＡ板在使用前放在紫外灯下照射十分钟，增加吸附能力，封闭结束后，和干燥剂一起包好，放４度冰箱，板子最少可以保存半年．所以说，并不是主要的问题回复你多换几种缓冲体系试一试！醋酸盐，磷酸盐都可以试试。比较看哪个对你的反应体系更好。而不是固定的就碳酸盐一定最好，不同反应体系有不同的适应性。
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电话：021-ELISA包被时我们通常使用PH9.6的缓冲液的原因是什么呀，为什么不用中性或酸性的包被液呢。
包被缓冲液的选择要依靠你所包被的物质而定,没有绝对的选择,但有一个原则就是要尽可能的保持包被物的活性不被损失.目前常用的包被缓冲液有PBS,CBS,tris盐缓冲液,咪脞缓冲液等,一般来说,缓冲液的pH要大于蛋白质的pI,以保持其活性.
碱性包被液如碳缓用的较多，尤其是在小分子和载体蛋白的偶联物的包被，其主要的优势在于碱性环境可以使蛋白更容易的与板子结合。也有用PBS和柠檬酸缓的，但是比较少见，碳缓效果很好，又易于配置，所以CC用的最多啊！
为什么缓冲液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢，跟蛋白的带电荷情况有没有关系，
g324 wrote:为什么缓冲液的PH大于蛋白的PI包被效果好呢，跟蛋白的带电荷情况有没有关系，
蛋白和聚苯乙烯板子结合的详细过程目前上不是很明了，目前认为是通过静电吸附在板子上的，而聚苯乙烯板子一般在出厂前也要经过强电厂处理以提高吸附能力！肯定和蛋白的带电情况有关，包被缓冲液并不一定都是PH9.6 的CB，不同的蛋白选用不同的包被缓冲液可以得最佳的包被效果，从上面可以看出和蛋白的带电情况有明显的相关性！
为什么缓冲液的PH要大于包被蛋白的PI，原因有两点：一是因为蛋白质与酶标板的结合主要是靠疏水作用的物理吸附。而缓冲液的PH略大于包被蛋白的PI，有利于蛋白质疏水键的适当暴露。二是因为酶标板聚苯乙烯表面暴露的主要是C－H键，而缓冲液的PH略大于包被蛋白的PI，可以使蛋白质带上负电荷，有利于蛋白质与酶标板的牢固结合，提高包被效率。所以我们常用的包被液体多位PH9.6的碳酸氢钠缓冲液，当然对PI低的蛋白质也有使用PH7.4的包被液的情况。（蛋白质等电点的英文缩写是PI。 　　蛋白质在溶液中有两性电离现象。假设某一溶液中含有一种蛋白质。当PI=PH时该蛋白质极性基团解离的正负离子数相等，净电荷为0，此时的该溶液的是PH值是该蛋白质的PI值。某一蛋白质的PI大小是特定的,与该蛋白质结构有关，而与环境PH无关。　　在某一PH溶液中当PH＞PI时该蛋白质带负电荷。反之PH＜PI时该蛋白质带正电荷。PH=PI时该蛋白质不带电荷　　人体内PH=7.4；而体内大部分蛋白质的 PI＜6； 所以人体内大部分蛋白质带负电荷）
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ELISA包被缓冲液(10×)
||文档简介
北京雷根生物是一家集研发与生产的高新技术...|
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&&E​L​I​S​A​包​被​缓​冲​液​(0​×​)​主​要​由​碳​酸​钠​、​碳​酸​氢​钠​、​防​腐​剂​等​组​成​,​p​H​值​为.,​主​要​用​于​E​L​I​S​A​实​验​中​包​被6​孔​板​的​孔​。​该​试​剂​为0​×​工​作​液​,​稀​释​至×​后​使​用​。
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