食品中菌落总数和大肠菌群的检测
食品中菌落总数和大肠菌群的检测
&&& (一〕实验目的
&&& (1)了解和学习食品中菌落总数和大肠菌群检测的意义。
&&& (2)学习和掌握食品中菌落总数和大肠菌群的检测方法。
&&& （二)实验原理
&&& 食品的微生物学指标主要包括菌落总数、大肠菌群和致病菌等三个项目。其中菌落总数和大肠菌群是最重要、最常检的检验项目。
&&& 检测食品中的菌落总数，可以了解食品在生产中，从原料加工到成品包装受外界污染的情况．从而反映食品的卫生质量。一般来说、菌落总数越多，说明食品的卫生质量越差，遭受病原菌污染的可能性越大。而菌落总数仅少量存在时，病原菌污染的可能性就会降低或者几乎不存在。但上述规则也有例外，有些食品成品的菌落总数并不高，但由于已有细菌繁殖并已产生了毒素，且毒素性状稳定，仍存留于食品中；再有一些食品如酸泡菜和酸乳等，本身就是通过微生物的作用而制成的，且是活菌制品。因此，菌落总数的测定对评价食品的新鲜度和卫生质量有着一定的卫生指标的作用，但本能单凭此一项指标来判定食品的卫生质量，还必须配合大肠菌群和致病菌等检验，才能作出比较全面、准确的评价。
&&& 大肠菌群是水源污染的指示菌，当饮用水中检查出大肠菌群时，即证实水已被粪便污染，对人是有害的，是不卫生的。同样，食品中若有大肠菌群存在，也会影响人的健康。
&&& 本实验主要介绍食品中菌落总数和大肠菌群的检测方法。
(三)实验器材
(1) 菌落总数的检测：
1)培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
2)试剂：75％乙醇，无菌生理盐水等。
&&& 3)器材；直径为9cm的平皿，18mm
x 200mm试管，1mL和10mL吸管，500mL三角瓶，500mL广口瓶，均质器或乳钵，培养箱、恒温水浴锅等。
&&& (2)大肠菌群的检测：
&&& 1)培养基；乳糖胆盐发酵管，乳糖发酵管，伊红美蓝琼脂培养基(EMB)(见实验103)。
&&& 2)试剂：革兰氏染色液等。
&&& 3)器材：平皿，试管，发酵管，吸管，三角瓶，广口瓶，均质器或乳钵，培养箱，恒温水浴锅等。
（四)实验方法
&&&&(1)菌落总数的检测
&&&&&&&1)检样稀释及培养：
&①以无菌操作法，将检样25g(或25mL)剪碎以后，放于装有225mL无菌水的三角版(瓶内预先放适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成l：10的均匀稀释液。
&&& 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌容器中以r／min的速度离心1min，做成1：10的均匀稀释液。
&&& ②将上述样品进行10倍系列稀释，稀释度视食品性质和污染状况而定。
&&& ③根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2—3个适宜稀释度，分别吸取1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作3个重复。
&&& ④迅速将熔化后保温在45℃的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基15—20mL注入平皿，并转动平皿使混合均匀，同时将培养基倾入加有1mL空白稀释剂(即不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
&&& ⑤待琼脂凝固后，倒置平板，于36±1℃恒温箱内培养48±2h取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得lg(1mL)样品所含菌落总数。
&&& 2)菌落计算方法和报告：
同实验一0七水中菌落总数测定方法中的菌落计数报告方式。
(2)大肠菌群的检测：
1)检验程序：
食品中大肠菌群检测程序见图l08—1所示。
2)操作步骤：
①采样及稀释：
&&& a． 按无菌操作法将检样25g(或25mL)放于含有225mL无菌水的三角瓶中(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用无菌均质器，以r/min的速度离心1min，做成1：10的稀释液。
&&& b．用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1Ml，注入含有9mL无菌水的试管内，振摇混匀，做成1：100的稀释液，换用1支lmL灭菌吸管，按上述操作依次作l0倍系列稀释液。
&&& c. 根据食品的卫生要求或对检验样品污染情况的估计，选择三个稀释度，
图1 食品中大肠菌群的检测程序每个稀释度接种3管。也可直接用样品接种。&&& ②乳糖初发酵试验：&&& 即通常所说的假定试验。其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌。．& 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双倍乳糖胆盐发酵管；lmL及1mL以下者，用单倍乳糖胆盐发酵管。每一个稀释度接种3管，置36±1℃温箱内，培养24±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。③分离培养：&&& 将产气的发酵管分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板，置36±1℃温箱内培养18-24h，然后观察菌落形态并作革兰氏染色、镜检并作复发酵试验。&&& ④乳糖复发酵试验：&&& 即通常所说的证实试验，其目的在于证明经乳糖初发酵试验呈阳性反应的试管内分离到的革兰氏阴性无芽胞杆菌，确能发酵乳糖产生气体。&&& 在上述选择性EMB培养基上，挑取可疑的大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±l℃温箱内培养24±2h，观察产气情况。&&& 凡乳搪发酵管产气，革兰氏染色为阴性反应的无芽胞杆菌，即报告为大肠菌群阳性；凡乳糖发酵管不产气或革兰氏染色为阳性，则报告为大肠菌群阴性。&【国家食品质量安全监督检验中心】仪器设备-前沿Lab-分析测试百科网
国家食品质量安全监督检验中心
美国安捷伦1100
&&&&& 可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。广泛应用于生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域
&&&&& 食品添加剂，如防腐剂（苯甲酸、山梨酸 ）、甜味剂（糖精钠、安赛蜜）、着色剂（柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮兰）、咖啡因；苏丹红、孔雀石绿、糠氨酸等；营养物质，如维生素B1、B2、B6& 以及蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖等
美国安捷伦XCT-1100
&&&&& 可完成对复杂基体的定性及定量。LC/MSD适于分析食品、小分子量药物、药物代谢产物、农药、除草剂等样品
检测项目：苏丹红及其它多种有毒有害物质残留分析
日本岛津CS-9301pc
&&&&& 薄层色谱扫描仪是以薄层色谱法为基础发展起来的薄层色谱记录仪器，适用于化学、化工、医药、临床、农业、食品、毒理等领域内的各种化合物的分离、精制、定性鉴别、杂质检查和含量测定
检测项目：展青霉素；黄曲霉素M1、B1 ；玉米赤霉烯酮
日本日立8800
&&&&&& 该系统用于多种食品的氨基酸分析。如未加工和加工过的肉制品水解物、果汁和蔬菜汁、啤酒和红酒、茶叶、乳制品、蜂产品；营养保健品、保健药品、口服液等；此外，可用于护肤护发用品，肽类、蛋白质类等产品的检测
&&&&&& 可定性、定量分析21种氨基酸：牛磺酸、天冬酸 、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、色氨酸、r-氨基丁酸（其中包括人体必须的8种氨基酸）；此外还可检测乳制品中的糠氨酸含量
&&&&& HPCE适合于从无机离子到有机大分子，从荷电粒子到中性分子的分离分析。可用于分析氨基酸、手性药物、维生素、杀虫剂、无机离子、有机酸、染料、表面活性剂、肽和蛋白质、糖类、低聚核苷酸等等多种化合物的分析测定
&&&&& 水溶性维生素、无机离子、有机酸（柠檬酸、苹果酸、酒石酸、琥珀酸、草酸） 、食品添加剂如防腐剂（山梨酸、苯甲酸）、甜味剂（甜蜜素、甜味素）、咖啡因、色素、红酒中的酚类化合物、奶油中的脂肪酸分析等
美国安捷伦6890
主要用途：对样品中的微量和痕量物质进行定性和定量分析
&&&&& 分析食品中的各种农药残留，如六六六、滴滴涕、菊酯类农药，有机磷农药、有机氯农药和氨基甲酸酯类农药；食品添加剂，如抗氧化剂BHA、BHT、TBHQ，甜味剂甜蜜素，营养成份亚油酸、DHA、EPA；分析食品中的有毒有害物质，如多氯联苯；酒类中的有害物质甲醇，杂醇油，香味成份乙酸乙酯、丁酸乙酯、乳酸乙酯，己酸乙酯，面包中的丙酸等，面粉中的增白剂过氧化苯甲酰，酱腌菜中的对羟基苯甲酸酯类，化妆品中的对苯二胺，食品中的碘，肌醇
美国安捷伦5973N
&&&&& 主要用于对样品中的未知组分进行定性分析，对样品中的各种组分进行确证分析
&&&&&& 食品包装材料中的增塑剂，可挥发性有毒有害物质，纺织品中的偶氮染料，食品中的N-亚硝胺类，肉中的瘦肉精
美国安捷伦
主要用途: 用于气相色谱分析可挥发性物质前的样品前处理
&&&&& 分析水中的三氯甲烷、四氯化碳，食用油中的溶剂残留，食品包装材料中的可挥发性有毒有害物质
美国CEM Mars5
&&&&& 为原子吸收、ICP/ICP-MS进行微波样品消解设备；适用于食品、油、奶粉、茶叶、化妆品以及一些电子产品、塑料外壳的消解等
检测项目：无机元素分析的前处理设备
美国PE Analyst800
&&&&& 可在190-860nm波长范围内测定食品、水质、地质、土壤、环境、化妆品等各类样品中金属元素的含量；与离子色谱联用可进行元素价态分析
检测项目：食品及饮用水中的铅、铬、铜、铁、锌、钠、钾、镁、钙、银、钡等无机元素
中国吉天 AFS-930
&&&&& 可用于测定食品、农产品、地质、冶金、环境、水质等各类样品中的重金属元素；与离子色谱联用可进行元素价态分析
检测项目：食品及饮用水中砷、汞、硒、锡等元素
美国PE Optima 2000DV
&&&&& 可对无机矿物、金属 土壤、粮食、植物、食品饮料和其他转变为溶液的试样中的金属和部分非金属元素，进行微量、痕量分析。可同时测定很高浓度的元素含量和较痕量元素含量
检测项目：主要检测项目为铁、铜、锌、锰、钙、铝等无机元素
美国安捷伦7500A
&&&&&& 一种最有效的多种痕量元素同时检测的分析仪器，具有半定量、定量、同位素稀释法和同位素比值的快速测定能力
&&&&&& 元素周期表上几乎所有的元素都能检测，能实现所有元素的同时检测
美国戴安 ICS-1500
&&&&& 主要应用于环境、食品、化工领域，例如环境分析与评价，无机化工产品纯度分析；食品中有机酸分析，饮用水分析等。可对常见无机阴阳离子的分离与定量&
&&& 饮用水中常规阴离子的检测、面粉中溴酸钾的检测、还可以进行氨基酸的分析和蛋白质的分析
西班牙IUL公司
&&&&&& 用于接种（传统倾注式或螺旋式接种）并培养在平板上的菌& 落进行计数；可对K-B纸片法药& 敏试验中的抑菌圈进行自动测量
检测项目：菌落总数、乳酸菌等
主要用途：用于细菌鉴定，可以同时做196个样品，代替了常规生化鉴定并且缩短了试验时间，重复性好，减少了人为污染以及人员之间的差异
检测项目：沙门氏菌、志贺氏菌、& 金黄色葡萄球菌等病性微生物的鉴定
西班牙IUL公司
&&&&& 用于细胞学、微生物学的自动细胞染色，可设置程序。含盛放不同反应剂的4个反应池，一个冲洗池和暖气流干燥池。可用于批量的革兰氏染色
检测项目：大肠菌群及致病菌等镜检前的染色
西班牙IUL公司
&&&&& 用于食品、化妆品等样品的称量稀释。仪器可自动称量样本重量，只要设置好稀释比例，即可自动按比例加入一定的稀释液
检测项目：微生物检测试验前处理准备工作
西班牙IUL公司
主要用途：用于食品、化妆品等固体、半固体状、糊状和粉状等样品制备成液体状的样本，以利于接种和分析。
检测项目：微生物检测试验前处理准备工作
西班牙IUL公司
主要用途：用于食品、水、化妆品以及消毒液等样品的微生物平板接种。
检测项目：样品中菌落总数、霉菌酵母菌、乳酸菌等
西班牙IUL公司
主要用途：采用图像放大的测量方法并在不接触被测物的情况下进行测量，读数可精确到0.1mm；可代替传统的手工用游标卡尺测量抑菌圈
检测项目：抑菌圈的测量（致病菌中抑菌试验、蜂蜜中抗生素残留量的测定
&&&&& 用于检测样品中具有中等危险的当地生物因子（存在于本区并引起不同程序的人类疾病）的实验室。提供二级防护水平，使试验人员可以在安全环境下进行试验
检测项：致病菌
瑞士万通787K
主要用途：广泛应用于石油、化工、电力、制药、食品等领域对样品中微量（ppm级）至常量（％级）水分的测定
检测项目：农药中水分的检测
日本岛津 UV－2450
&&&&& 广泛应用用于对有机物结构的鉴定、空间立体结构的构型、分子量的测定和未知物剖析以及试样中微量组分的含量的测定等方面
检测项目：食品中亚硝酸盐、甲醛、二氧化硫，氨基酸含量的测定
美国PE LS45
&&&&& 可用于具有荧光发射性能的无机、有机、医学、生物学、药学等各类样品的定性定量分析
检测项目：乳粉中维生素B1、B2等
主要用途：主要用于色谱分析前的样品前处理
检测项目：茶叶、蔬菜和粮食中的农药残留，油中的抗氧化剂等
美国 戴安 ASV200
主要用途：适用于食品、保健食品、化妆品、水及涉水产品、消毒产品中碱性\中性\酸性物质、固体半固体样品的萃取浓缩
检测项目：固体、半固体样品的萃取浓缩
瑞士 万通809
&&&&& 适用于各种无机、有机滴定分析，可进行酸碱滴定、氧化还原电位滴定、络合滴定、非水溶液滴定、光度滴定、沉淀滴定等
检测项目：面粉中溴酸钾的滴定，常规酸碱滴定，味精中谷氨酸的滴定等
德国FOSS 2300K
&&&&& 谷物食品、饲料、水、土壤、淤泥、沉降物及化学样品中的氨,蛋白质的含量，酚,挥发 性脂肪酸，氰化物，二氧化硫，乙醇等样品的含量
检测项目：样品中的氮、蛋白质含量
主要用途：食品中常规微生物检验
检测项目：菌落总数、大肠菌群等
美国CFR 48D F2U
主要用途：车用汽油检测
检测项目：马达法辛烷值、研究法辛烷值检测
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08:55成分分析 15:04请问您们这能化验粮食的微量元素吗？我社检验硒元素。 13:20贵实验室能否进行粉末物料的比表面积 14:08围巾欧标检测 14:06需出口检测 20:02你好！我想检测橡胶颗粒 19:46我从云南取回样品和多穂柯相似，能否测试此植物就是多穂石柯，而微元素是多少 13:00请问可以检测正己烷吗？出具的检测证明权威吗？ 13:35请问我可以拿自己的护肤品去检测是否符合标准的吗？因为这个护肤品牌子是不出名的牌子，效果挺好的，怕激素过多。 15:41你们的电话是多少 15:19想检测橡胶产品 07:36有司法鉴定许可证吗 13:48请问，椰壳活性炭贵单位是否可检测，指标碘值、比表面积、强度、灰分。一个样费用是多少？ 16:35请问下你们可以测熊果苷的旋光度吗？可以的话，费用大概多少？请务必及时回复。万分感谢。 17:35能否做食品包装纸（原纸）中添加剂的检测？如乙二醛、蛋白酶、果胶酶、抗坏血酸等等 15:29油脂型式检测检测周期是几天？ 12:19化妆品中氟利昂怎么检测 08:47请问检测果蔬中农药残留及重金属含量的最新标准是什么？需要哪些仪器，药品？谢谢！ 16:53你好，我是南理工化院研二学生，明年毕业。我在课题研究中也经常使用气相，液相，红外等仪器，请问能否去贵公司实习？或者我可以提供一下我的简历 11:08尊敬的业务主管：你好！能以专利持有人的名义做空气净化机的净化臭气、灭菌率的效果检测吗？要求实验室容积50和500立方米。谢谢！ 11:43您好：我们是专业从事实验室设备的。冒昧问下您有没考虑更新下实验室设备呢？望请回复！谢谢！！ 09:42外形看是矿物质，能否化验出它的成分，以做处罚依据 11:35欲检测面包食品中香兰素..麦芽酚香精含量！ 11:35麻烦能帮忙查一下：舒友阁甘草舒缓精华是否含激素
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-90型产品特点：
该箱适用于各级食品质量监督管理部门、卫生防疫部门等，可检验食品中菌落总数、大肠菌群、肠道致病菌(沙门氏菌属和志贺氏菌属)、葡萄球菌和嗜盐性弧菌的检验。菌落总数的测定采用试管斜面计数法，操作方法简单方便，不易受污染，结果与国家标准平板计数法一致。大肠杆菌的测定，采用新研究的发酵盒检验法，用一个小发酵盒就可以代替常规MPN法用9支玻璃试管，而且所有加样操作一次完成，不必进行样品溶液的稀释，检验结果与国家标准法一致。肠道致病菌(沙门氏菌属和志贺氏菌属)的检验，改进后的方法是采用一种沙门氏菌属和志贺氏菌属通用增菌培养基，代替原来的多种增菌培养基，并制成干粉，便于携带和保存。同时采用改进的SS选择性琼脂进行分离培养，比常用SS琼脂有更好的检出效果，这样不仅大大简化了检验方法和步骤，而且提高了对肠道致病菌的检出效果。葡萄球菌的检验，采用新研制的干燥粉状培养基用于细菌培养，并且采用新研制的血浆凝固酶试剂，便于基层单位对食品中的葡萄球菌的检验。该箱箱体为铝合金材质，掀开提箱式，箱体体积为49.5CM&38CM&14.5CM，重量为8公斤。随箱配有操作使用演示光盘和使用说明书。
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