实时荧光定量PCR法检测RNA干扰后的GES-1细胞中MYCT-1基因的表达--《分子诊断与治疗杂志》2011年02期
实时荧光定量PCR法检测RNA干扰后的GES-1细胞中MYCT-1基因的表达
【摘要】：目的建立MYCT-1基因的实时荧光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测方法,检测RNA干扰(RNA interference,RNAi)后GES-1细胞中MYCT-1mRNA的表达水平,探讨不同剂量siRNA对MYCT-1基因的沉默效果。方法取5×104对数生长期GES-1细胞,分别转染1μg、2μg、4μg siRNA。转染第4天分别收集细胞提取总RNA,合成cDNA并进行RFQ-PCR检测,以未转染组作为对照。结果加入1μg、2μg组MYCT-1表达量分别降低19.4%和55.2%,加入4μg siRNA组细胞死亡。结论成功建立了MYCT-1基因的RFQ-PCR检测方法。加入2μg siRNA,脂质体与siRNA比例为4:1时,可使GES-1细胞中MYCT-1表达降低55.2%,为最佳实验条件。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：R346【正文快照】：
MYCT-1(myc target1)是我室克隆的新候选抑癌基因,GenBank登录号NM_025107,曾命名MTLC(myc target from laryngeal cancer cells)[1]。研究表明MYCT-1在多种组织中有表达,并可明显抑制胃癌细胞生长、促进细胞凋亡[2],提示该基因可能对维持细胞的正常生理功能方面发挥重要作用
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血标本在室温条件下保存对PCR检测HBV-DNA的影响
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【作者单位】：
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乙型肝炎病毒(HBV)在慢性乙型肝炎的发生及发展过程中发挥着举足轻重的作用[1]。聚合酶链反应(PCR)技术是一种分子生物学诊断技术,以高度敏感这一优势,广泛用于检测乙肝病毒(HBV-DNA),成为一种临床辅助诊断的可靠工具[2]。但PCR检测乙肝病毒(HBV-DNA)的结果受多种因素的影响,
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历史上的今天
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blogTitle:'PCR污染及如何提高特异性',
blogAbstract:'&PCR污染与对策& &&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。&&&&&&&&&&&&&&&&& 污染原因&&&&&&&&&&&&&&&&& 　(一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。&&&&&&&&&&&&&&&&& 　(二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.&&&&&&&&&&&',
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