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遗传学习题解答
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花粉管伸进子房要多长时间？
植物的传粉并不等于受精。每一个花粉粒是一个能产生精子的构造，外面包着两层具有保护作用的壁，里面有浓厚的原生质和核（生殖核和管核）。当花粉粒落到柱头上，被柱头
卜的粘液激发，便吸收柱头上的水分和营养，从花粉壁上的小孔里长出花粉管来。这时，管核进入花粉管，紧接着生殖核也进入。生殖核经过变化，最后形成两个精子。花粉管破坏柱头和花柱的组织，一直伸进子房，在胚珠里破裂，放出精子，跟卵细胞结合受精。因此，从传粉到受精都要经过一段或长或短的时间。
为了确定不同植物花粉管伸进予房里的时间，可以进行下列的实验。
在花冠开放的早晨，选择一批花朵，分为几个相等的组。例如可以选择60朵刚开的花，分为6组，每组10朵，扣上纸牌作为记号，然后每隔一定时间用锋利的刀片削去柱头和花柱。例如隔2小时削去第一组，隔4小时削去第二组，隔6、8、10、12小时依次分别削去第三、第四、第五、第六各组，并在每个纸牌上写上处理的时间。如果在削去柱头和花柱以前花粉管还没有伸进子房，那么这组花虽然传粉了，但它们是不能受精，也不能结出果实来的，留下的子房以后便萎缩脱落了。如果在削去柱头和花柱以前，花粉管已经伸进子房，那么这朵花虽然被削去柱头和花柱，却仍然能完成受精，留下的子房以后会发育长大结出果实来。根据各组结实的情况，我们就可以大致确定花粉管伸进子房所需的时间。如果用来实验的花比较大，还可以用毫米尺精细地测量出从柱头到花柱基部的长度，这样就可以计算出花粉管每小时伸长的长度。当然，这只是很粗略的计算罢了。
人们研究过棉花花粉管穿过柱头花柱到达子房的时间：在10小时以前削去柱头和花柱的各组，全部不能形成棉铃；经过10小时的形成68%的棉铃，每铃平均只有18粒种子；而经过12小时的全部予房都发育长大了，每铃中的种子也较多。由此可见，在通常的条件下，棉花的花粉管伸进子房约需10～12小时。用毫米尺测出岱字棉的柱头长约10毫米，花柱长约12毫米，从柱头顶部到花柱基部的全长约22毫米，那么棉花花粉管每小时伸长的长度约为1.8～2.2毫米。
各种植物花粉管伸进子房所需的时间是不同的，外界条件也起着加快或延缓的作用。你如果想知道在某种条件下某种植物的花粉管伸进子房要多少时间，可以用实验的方法来求得答案。
知道花粉管伸进子房所需的时间，对研究植物的受精有很大意义。例如有些严格的异花传粉植物，花粉落在自己的柱头上是不能受精的。有人曾经在甘蓝上进行人工的自花传粉，三天以后仍旧不能长出花粉管。但是如果同时混进少量的冬油菜花粉，由于不同种花粉间的相互作用就可以促进甘蓝的花粉迅速长出花粉管，在12～18小时内伸进雌蕊的组织，4～5天后即完成了受精过程，以后终于结出有生活力的种子。现在，用混和少量别种植物的花粉来提高自交后代生活力的方法，已经在玉米、向日葵等许多植物上应用了。
又如番茄的花粉管在花粉落到柱头上10多小时以后，就可以伸进子房完成受精。但是，如果在番茄完成传粉后24小时、48小时再重复授予不同品种番茄的花粉，则所得后代会出现显著的杂种性状。这就证明，即使是已经完成受精的卵细胞，还可以接受重复授粉的影响。拿番茄的品种内杂交来讲，由于番茄是自花传粉的（就是花粉粒由花粉囊中出来，传到同一朵花的柱头上），过去人们总认为自花传粉之后，就无法进行品种内杂交，所以往往先把母本花（就是接受花粉的花）上的雄蕊去掉，然后再把父本花（就是另一植株供给花粉的花）上雄蕊中的花粉传过去。现在懂得了前面所讲的番茄可以重复授粉的道理以后，就可以简化杂交的手续，不必事先把母本的雄蕊去掉，而直接用父本的花粉去给不去雄的母本花授粉，也能达到杂交的目的，这就大大提高了杂交工作的效率。用根繁殖
无性繁殖是利用植物的营养体——根、茎、叶——的再生能力来繁殖，所以又叫“营养繁殖”。虽然在植物界中，有性繁殖是主要的繁殖方式，但是在农业生产实践上，无性繁殖也有很大的价值。
无性繁殖的方法有扦插和压条等。这里介绍一下用根繁殖的方法。
经常可以看到，枣树的附近常会长出小枣树来。你不妨把小枣树周围的土壤刨开来看看，只见小树都是从母树的根上长出来的。原来枣树的根部能长出根芽，根芽出土就形成为一棵小枣树。你如果把小枣树跟母树相连的根切断以后，这小枣树就是棵独立的植株了。这时，你就可以将它移栽到别处去，再隔上一年就可以结枣子了。
你如果要在较短时间内繁殖大量小枣树，最好在春季把大枣树周围60厘米的地面挖松，砍断这个周围以外的根。这样，由于在砍断根处营养物质集中，再浇上大量的人粪尿，断根处容易发芽抽枝，当年就可以从枣树的根芽长出很多小枣树。等夏天到临，小枣树长得稍为大些，斩断与母根的连泵，使它长成一一棵独立的小树，到来年春天就可以进行移栽。
你也许会问：这样用枣树的根芽来繁殖枣树究竟有什么好处？
枣树当然也可用枣子来播种繁殖。由于种子是通过两性细胞结合产生的，因此，在这样的种子中就带有父本和母本两方的遗传物质。由于遗传物质的变更，在成长的后代中往往会产生了某些性状的变异。例如，有些品种很好的枣树和某些坏的品种杂交后，后代的某些经济性状就变差了，其原因就是由于后代的遗传物质发生了变更的关系。如果我们对好品种的枣树用无性繁殖法（根芽繁殖也是无性繁殖之一）进行繁殖，那么，它们的后代就能保存原有的遗传物质，因而也能保存原有的经济性状。当然，在另一种情况下，有些植物如玉米、番茄等，如果原来品质不够完美，可以通过杂交来改善它们的品质。总之，究竟是采用根芽繁殖等方法来保持本身的优点，还是采用杂交来改良它们的品质，必须根据具体情况来决定。但是，不论采用哪种方法，目的只是一个，那就是获得品质优良的作物。
除了枣树可以用根芽繁殖外，象杨树、槐树、胡桃、牡丹、芍药等果木花卉也都可用根芽来繁殖。所用方法和上面讲的差不多。
田间有很多杂草也是用根芽繁殖的，象分布广、危害庄稼严重的小蓟（刺儿菜）、苣贳菜等都是进行根芽繁殖的。我们把它们锄了不久，它们又冒出来了，原来它们的根长在土壤深处（小蓟的根能伸入地里3～4米深），因此，可以不断地从土壤深处长出芽来。俗语说：“斩草不除根，逢春芽又生”，也就是指那些用根来繁殖的杂草来说的。
跟这些用根繁殖的杂草作斗争最有效的办法，就是连续除草。只要一发现这些杂草从地下刚刚冒出头来，就立刻把它们锄掉。这样连续多锄，直到它们根里贮藏的有机养料消耗完了的时候，它们就再没有繁殖的能力了。
你还不是该群组正式成员，不能参与讨论。高中生物知识点总结(选修部分)
高中生物知识点总结(选修部分)
高中生物知识点总结(选修部分)
选修要点总结
90、稳态：神经系统和体液调节下，内环境的相对稳定
温度、PH、渗透压，水、无机盐、血糖等化学物质含量
血浆7.357.45缓冲对NaHCO3/H2CO3Na2HPO4/NaH2PO42/3细胞内液组织液
91、65%体液1/3细胞外液血浆淋巴
（内环境）不是血液血液>血浆>血清食物排尿
92、体内水来源饮水水排出途径出汗皮肤代谢水（有氧呼吸）面虫、骆驼呼气肺
（氨基酸脱水缩合）排遗消化道
93、K不吃也排不经过出汗排
肾上腺分泌醛固酮（固醇）保Na排K高温工作、重体力劳动、呕吐、腹泻→→应特别注意补充足够的水、Na（食盐）细胞外液渗透压下降，出现四肢发冷、血压下降、心率加快
K对细胞内液细胞渗透压起决定作用，维持心肌紧张、心肌正常兴奋性K心94、血糖三来源（食物、分解、转化）三去向糖的主要功能：供能
胰岛素唯一降血糖激素；增加糖的去路，减少糖的来源胰高血糖素、肾上腺素升血糖
胰高血糖素促进胰岛素分泌，胰岛素却抑制胰高血糖素分泌血糖升高↓↑↑
下丘脑某区域→胰岛B细胞胰高血糖素↑肾上腺素↑
胰岛素↑胰岛A细胞肾上腺髓质↓↑↑下丘脑另一区域血糖降低160-180糖尿
一次性摄糖过多，暂时尿糖持续糖尿不一定糖尿病，如肾炎重吸收不行糖尿病血糖高且有糖尿验尿验血三多一少症状？不吃少吃多吃含膳食纤维多的粗粮和蔬菜95、营养物质：
蛋白质不足：婴幼儿、儿童、少年生长发育迟缓、体重过轻成年人浮肿提供能量
营养物质功能提供构建和修复机体组织的物质提供调节机体生理功能的物质
维生素：维持机体新陈代谢、某些特殊生理功能
生物高考复习要点记忆手册第1页
VA：夜盲症维生素VB：脚气病VC：坏血病
VD：佝偻病、骨软化病、骨质疏松症
96、温度感受器分为冷觉感受器和温觉感受器（分布皮肤、粘膜、内脏器官）
体温来自代谢释放热量（不是ATP提供），体温恒定是产热量，散热量动态平衡结果
皮肤冷觉感受器温觉感受器血管
↓传入神经↓立毛肌
下丘脑体温调节中枢下丘脑骨骼肌传出神经↓汗皮肤血管收缩骨骼肌战粟（产能特多）血管舒张
皮肤立毛肌收缩皮肤立毛肌收缩汗液分泌增多↓鸡皮疙瘩肾上腺素↑缩小汗毛孔甲状泉激素↑
减少散热增加产热散热量增加不能减少产热
调节水分、血糖、体温
97、下丘脑分泌激素：促激素释放激素抗利尿激素感受刺激：下丘脑渗透压感受器传导兴奋：产生渴觉
第一道防线：皮肤、粘膜等
非特异性免疫（先天免疫）第二道防线：体液中杀菌物质、吞噬细胞
98、免疫特异性免疫（获得性免疫）第三道防线：体液免疫和细胞免疫在特异性免疫中发挥免疫作用的主要是淋巴细胞淋巴细胞的起源和分化：胸腺─T骨髓─B免疫细胞：B、T
免疫系统的物质基础免疫器官：扁桃体、淋巴结、脾
免疫物质：抗体、淋巴因子（白介素、干扰素）
99、抗原特点：①一般异物性但也有例外：如癌细胞、损伤或衰老的细胞
②大分子性
③特异性抗原决定簇（病毒的衣壳）
100、体液免疫：记忆细胞
↓↓再次受相同抗原刺激抗原→→吞噬细胞→→T细胞→→B细胞→→→效应B细胞→→→抗体↑（摄取处理）（呈递）（识别）感应阶段反应阶段效应阶段
效应B细胞产生：抗体(免疫球蛋白)、抗毒素、凝集素效应T细胞产生：淋巴因子、干扰素、白细胞介素识别抗原：B细胞、效应T细胞、记忆B/T
效应B细胞获得有三途径（直接、间接、记忆）
生物高考复习要点记忆手册第2页记忆细胞受相同抗原再次刺激后引起的二次免疫反应：更迅速、更强再次接受过敏原（概念）过敏反应抗体分布细胞表面组织胺：体液调节
101、免疫失调引起的疾病自身免疫疾病：风湿类风湿系统性红斑狼疮先天性：先天性胸腺发育不全免疫缺陷病获得性：艾滋病、肺炎、气管炎（人类免疫缺陷病毒）HIV↓攻击T细胞（AIDS）获得性免疫缺陷综合症102、色素吸收、传递、转换光能色素不能储存光能
蛋白质、氨基酸也不能储存少数特殊状态叶绿素a最终电子供体：水高能量、易失电子光能→电能最终电子受体:NADP+103、C4植物：玉米、高梁、甘庶、苋菜
既C3又C4CO2固定能力强先CO2+C3→C4C3、C4叶肉细胞都含正常叶绿体选修C3维管束鞘细胞无叶绿体
图C4维管束鞘细胞含无基粒的叶绿体不进行光反应
(P29)C4植物花环型结构里圈：维管束鞘细胞外圈：部分叶肉细胞降低呼吸消耗增加净光合量
104、提高产量延长光合作用时间光：光质、强度、长短提高农作物对增大光合作用面积温度：影响酶的活性光能利用率提高光合作用效率水
矿质元素N、P、K、MgCO2农家肥、CO2发生器105、生物固氮：N2→NH3
根瘤菌的特异性：蚕豆根瘤菌侵入蚕豆、菜豆、豇豆；大豆根瘤菌侵入大豆。N素
根瘤菌有机物豆科植物异养需氧共生固氮菌根瘤薄壁细胞愈伤组织
固氮菌自生≠自养根瘤菌拌种豆科植物绿肥自生固氮菌：圆褐固氮菌（固氮+激素）
生物固氮（主：根瘤菌）工业固氮高能固氮106、N循环硝化、反硝化、氨化作用
-反硝化：氧气不足NO3→N2
自生固氮菌的分离原理：无氮培养基对固氮菌的选择生长物质基础：线粒体、叶绿体中的DNA（质基因）线粒体
107、细胞质遗传典型代表叶绿体花斑植株→三种特点母系遗传（受精卵中的细胞质几乎全来自卵细胞）．．后代性状不出现一定分离比
生物高考复习要点记忆手册第3页（形成配子时，质基因不均等分配）
编码区：编码蛋白质连续的
原核细胞非编码区编码区上游：RNA聚合酶结合位点基因结构调控编码区下游
108、基因的结构真核细胞非编码区
基因结构编码区内含子：非编码序列外显子：能编码蛋白质内含子>外显子原核基因无外显子内含子之说
主要分布于微生物
剪刀：限制性内切酶特异性（专一性）（200多种）获得粘性末端
109、基因的操作工具针线：DNA连接酶：扶手（磷酸二脂键）不是踏板（氢键）
条件①复制保存②多切点③标记基因种类：质粒、病毒
运输工具：运载体①染色体外小型环状DNA②存在于细菌、酵母菌质粒特点③质粒是常用的运载体
④最常用：大肠杆菌
⑤对宿主细胞的生存无
基因工程(基因拼接技术、DNA重组技术、转基因技术)决定性作用
直接分离常用鸟枪法提取目的基因人工合成（反转录法、根据已知AA序列合成DNA）目的基因与运载体结合同一种限制酶．．．110、基因操作步骤将目的基因导入受体细胞→细菌、酵母菌、动植物．．．．CaCl2处理细胞壁（受精卵好繁殖速度快）
目的基因的检测和表达：标记基因、目的基因是否表达？逆转录碱基互补配对
mRNA单链DNA双链DNA推测推测合成
氨基酸序列mRNA序列DNA碱基序列目的基因药（胰岛素、干扰素、白细胞介素、乙肝疫苗）111、基因工程的成果治病：基因诊断与基因治疗（基因替换）新品种（转基因）食品工业（食物）环境监测（DNA分子杂交探针）
生物固氮、基因诊断、基因治疗、单细胞蛋白（微生物菌体本身）、
单克隆抗体、生物导弹（单抗+抗癌药物）
112、间接联系核心核膜
高尔基体内质网细胞膜线粒体膜
间接（具膜小泡）（内吞外排说明双向）分泌蛋白：抗体、蛋白质类激素、胞外酶（消化酶）等分泌到细胞外
粗面内质网上的核糖体内质网运输加工高尔基体加工成熟蛋白质胞外
生物高考复习要点记忆手册第4页113、生物膜系统（不等于生物膜）：细胞膜、核膜及由膜围绕而成的细胞器离体→营养物质+激素适宜温度+无菌
植物组织培养离体→愈伤组织→根芽（胚状体）→植物体选无病毒尖（生长点）紫草素114、植物细胞工程两种不同→杂种细胞→新植物体
植物体细胞去掉细胞壁→原生质体→杂种细胞→新植物体杂交种间存在生殖隔离不能有性杂交
好处：克服远源杂交不亲和障碍培育新品种是其它动物细胞工程技术的基础动物细胞培养液体培养基：动物血清
115、动取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织物用胰蛋白酶处理细原代培养→传代培养（细胞株→细胞系遗传物质发生改变）胞灭活的病毒做诱导剂+物理、化学方法
工动物细胞融合最重要用途：制备单克隆抗体程理论基础：细胞膜的流动性
单克隆抗体→指单个B淋巴细胞经克隆形成的细胞群产生的化学性质单一、
特异性强的抗体（优点：特异性强、灵敏度高）。每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体（共百万种）*杂交瘤细胞*生物导弹
116、微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物
质粒（小型环状DNA）控制抗药性、固氮、抗生素生成
核区（大型环状DNA）控制主要遗传性状有的细菌有荚膜、芽孢、鞭毛碳源：无机/有机碳源自养/异养117、微生物生长氮源：加不加额外的氮源所需的营养物质生长因子：（维生素、氨基酸、碱基→构成酶和核酸）水：无机盐：
固体培养基：分离、鉴定、计数物理性质半固体培养基：运动、保藏菌种液体培养基：工业生产
118、培养基天然培养基：工业生产
化学性质合成培养基：分类鉴定
选择培养基青霉素→选出酵母菌、霉菌等真菌
用途NaCl：金黄色葡萄球菌
鉴定培养基：伊红美蓝→大肠杆菌→深紫色和金属光泽
自己设计实验：把混合在一起的圆褐固氮菌、硝化细菌、大肠杆菌区分开，并筛选纯种。
酶合成的调节诱导酶：基因和诱导物控制119、微生物代谢调节酶活性的调节结构改变可逆快速准确
必需物质，一直产生氨基酸、核苷酸、维生素初级代谢产物无种的特异性多糖、脂类120、代谢产物非必需物质，一定阶段抗生素、毒素
生物高考复习要点记忆手册第5页次级代谢产物有种的特异性四素色素、激素
121、微生物群体生长曲线：3241
（1）调整期：代谢活跃，开始合成诱导酶初级代谢产物收获的最佳时期（2）对数期：形态和生理特性稳定，代谢旺盛；科研用菌种，接种最佳时期（3）稳定期：次级代谢产物收获最佳时期，芽孢生成（种内斗争最剧烈）及时补充营养物质，可以延长稳定期
（4）衰亡期：多种形态，出现畸形，释放次级代谢产物生存环境恶劣与无机环境斗争最激烈的是4衰亡期。
营养物质消耗有害代谢产物积累PH不适宜导致3.4时期的出现。注意：前三个时期类似“S”型增长曲线，但是多了衰亡期122、影响微生物生活的环境因素
PH值：影响酶的活性、细胞膜的稳定性，从而影响微生物对营养物质的吸收
温度：影响酶和蛋白质的活性O2浓度：产甲烷杆菌
123、高压蒸汽灭菌法：1/5、1/2、2/3、75%由里向外、细密、不重复溶化后分装前必须要调节pH细菌培养的过程：培养基的配制→灭菌→搁置斜面→接种→培养观察实例：谷氨酸发酵（黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌）概念：
菌种选育：诱变育种、基因工程、细胞工程培养基的配制：成分、比例，pH适宜124、发酵工程内容灭菌：去除杂菌
扩大培养和接种：菌种多次培养达到一定数量
发酵过程：（中心阶段）控制各种条件，生产发酵产品分离提纯菌体：过滤、沉淀（单细胞蛋白即微生物菌体本身）代谢产物：蒸馏、萃取、离子交换应用医药工业：生产药品和基因工程药品
食品工业：传统发酵产品、食品添加剂、单细胞蛋白等125、C/N=4/1菌体大量繁殖但产生的谷氨酸少(P79)
记住C/N=3/1菌体繁殖受抑制，但谷氨酸的合成量大增溶氧不足：产生乳酸或琥珀酸
pH呈酸性：产生乙酰谷氨酰胺（P95）
生物高考复习要点记忆手册第6页
扩展阅读：高中生物选修一知识点总结(2013最新修改版)
高中生物选修一生物技术实践知识点总结
专题一传统发酵技术的应用课题一果酒和果醋的制作
1、发酵：通过微生物技术的培养来生产大量代谢产物的过程。
2、有氧发酵：醋酸发酵谷氨酸发酵无氧发酵：酒精发酵乳酸发酵
3、酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)分裂生殖孢子生殖4、在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O5、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O6→2C2H5OH＋2CO26、20℃左右最适宜酵母菌繁殖酒精发酵时一般将温度控制在18℃-25℃
7、在葡萄酒自然发酵的过程中,起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在发酵过程中,随着酒精浓度的提高,红葡萄皮的色素也进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色.在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。8、醋酸菌是单细胞细菌(原核生物),代谢类型是异养需氧型,生殖方式为二分裂
9、当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。2C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O10、控制发酵条件的作用①醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。③有两条途径生成醋酸：直接氧化和以酒精为底物的氧化。
11、实验流程：挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）
12、酒精检验：果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。先在试管中加入发酵液2ｍL，再滴入物质的量浓度为3mol/L的H2SO43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色
13、充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应该充气口连接气泵，输入氧气。
（1）你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？
应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。（2）你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？
如：要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。
（3）制葡萄酒时，为什么要将温度控制在18～25℃？制葡萄醋时，为什么要将温度控制在30～35℃？
温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。20℃左右最适合酵母菌的繁殖。因此需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为30～35℃，因此要将温度控制在30～35℃。
课题二腐乳的制作
1、多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一种丝状真菌。代谢类型是异养需氧型。生殖方式是孢子生殖。营腐生生活。
2、原理：毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
3、实验流程：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制4、酿造腐乳的主要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵。
前期发酵的主要作用：1.创造条件让毛霉生长。2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期发酵主要是酶与微生物协同参与生化反应的过程。通过各种辅料与酶的缓解作用，生成腐乳的香气。
5、将豆腐切成3cm×3cm×1cm的若干块。所用豆腐的含水量为70％左右，水分过多则腐乳不易成形。*水分测定方法如下：精确称取经研钵研磨成糊状的样品5～10g(精确到0.02mg)，置于已知重量的蒸发皿中，均匀摊平后，在100～105℃电热干燥箱内干燥4h，取出后置于干燥器内冷却至室温后称重，然后再烘30min，直至所称重量不变为止。样品水分含量（%）计算公式如下：
(烘干前容器和样品质量-烘干后容器和样品质量)/烘干前样品质量
毛霉的生长：条件：将豆腐块平放在笼屉内，将笼屉中的控制在15～18℃，并保持一定的温度。
来源：1.来自空气中的毛霉孢子，2.直接接种优良毛霉菌种时间：5天
加盐腌制：将长满毛霉的豆腐块分层整齐地摆放在瓶中，同时逐层加盐，随着层数的加高而增加盐量，接近瓶口表面的盐要铺厚一些。加盐腌制的时间约为8天左右。
用盐腌制时，注意控制盐的用量：盐的浓度过低，不足以抑制微生物的生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味
食盐的作用：1.抑制微生物的生长，避免腐败变质2.析出水分，是豆腐变硬，在后期制作过程中不易酥烂3.调味作用，给腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶菌丝上的蛋白酶。
配制卤汤：卤汤直接关系到腐乳的色、香、味。卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的。卤汤中酒的含量一般控制在12%左右。
酒的作用：1.防止杂菌污染以防腐2.与有机酸结合形成酯，赋予腐乳风味3.酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系，酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。
香辛料的作用：1.调味作用2.杀菌防腐作用3.参与并促进发酵过程
防止杂菌污染：①用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。②装瓶时，操作要迅速小心。整齐地摆放好豆腐、加入卤汤后，要用胶条将瓶口密封。封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。疑难解答
（1）利用所学的生物学知识，解释豆腐长白毛是怎么一回事？豆腐生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有匍匐菌丝。（2）为什么要撒许多盐，将长毛的豆腐腌起来？盐能防止杂菌污染，避免豆腐腐败。
（3）我们平常吃的豆腐，哪种适合用来做腐乳？
含水量为70%左右的豆腐适于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。
（4）吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”。这层“皮”是怎样形成的呢？它对人体有害吗？它的作用是什么？
“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（匍匐菌丝），对人体无害。它能形成腐乳的“体”，使腐乳成形。
课题三制作泡菜
制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下，降糖分解为乳
2C3H6O3+能量含抗生素牛奶不能生产酸奶酸。分裂方式是二分裂。反应式为：C6H12O6的原因是抗生素杀死乳酸菌。常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。乳酸杆菌常用于生产酸奶。亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产中用作食品添加剂。
膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，国家规定肉制品中不超过30mg/kg，酱腌菜中不超过20mg/kg，婴儿奶粉中不超过2mg/kg。亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外，但在适宜pH、温度和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。亚硝酸盐含量发酵时间（d）
专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养
培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
一般在腌制10天后亚硝酸盐含量开始降低，故在10天之后食用最好
*测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐含量。
酶按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。
氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3、NH4（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。
培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件
无菌技术获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：
①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒与灭菌的区别
消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。
灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灭菌方法：
比较项理化因素的作用强度消毒灭菌较为温和强烈消灭微生物的数量部分生活状态的微生物全部微生物芽孢和孢子能否被消灭不能能①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；
②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
-+③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。
制作牛肉膏蛋白胨固体培养基
（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）倒平板操作的步骤：
①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。
③用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约10～20mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。
④等待平板冷却凝固，大约需5～10min。然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上。
倒平板操作的讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。纯化大肠杆菌
（1）微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。（5）平板划线法操作步骤：
①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。②在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞。③将试管口通过火焰。④将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液。
⑤将试管通过火焰，并塞上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养皿。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。⑧将平板倒置放入培养箱中培养。平板划线操作的讨论
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。（6）涂布平板操作的步骤：
①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。②取少量菌液，滴加到培养基表面。③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布平板操作的讨论
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？
提示：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。菌种的保存
（1）对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
①临时保藏方法
将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。
②缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。（2）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
在3mL的甘油瓶中，装入1mL甘油后灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20℃的冷冻箱中保存。疑难解答（1）生物的营养
营养是指生物摄取、利用营养物质的过程。营养物质是指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。
人及动物的营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。植物的营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类。
微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。（2）确定培养基制作是否合格的方法
将未接种的培养基在恒温箱中保温1～2天，无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
课题二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数尿素是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶
尿素最初是从人的尿液中发现的
人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
（2）选择性培养基
在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。（3）配制选择培养基的依据
根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。例如，培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。统计菌落数目
（1）测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
采用此方法的注意事项：1.一般选取菌落数在30~300之间的平板进行计数2.为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入TTC3.本法仅限于形成菌落的微生物设置对照
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照试验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起相应的结果。实验设计
实验设计包括实验方案，所需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。
（1）土壤取样：同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。从富含有机物、潮湿、pH≈7的土壤中取样。铲去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。
（2）样品的稀释：样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30~300之间、适于计数的平板。测定土壤中细菌的数量，一般选用测定放线菌的数量，一般选用1010
34（1）实验室中微生物的筛选应用的原理
105测定真菌的数量，一般选用）微生物的培养与观察
不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌30~37℃1~2天放线菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天
每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目。一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、唯独及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。形状、大小、隆起程度、颜色疑难解答
（1）如何从平板上的菌落数推测出每克样品中的菌落数？
统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计3个平板，计算出平板菌落数的平均值每克样品中的菌落数=（C/V）*M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（ml），M代表稀释倍数
课题三分解纤维素的微生物的分离
纤维素，一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。纤维素与纤维素酶
（1）棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，木材、作物秸秆等也富含纤维素。
（2）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。纤维素分解菌的筛选
（1）筛选方法：刚果红染色法。能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。（2）刚果红染色法筛选纤维素分解菌的原理
刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红－纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
分离分解纤维素的微生物的实验流程
土壤取样→选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）→梯度稀释→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生透明圈的菌落（1）土壤采集选择富含纤维素的环境。
（2）刚果红染色法分离纤维素分解菌的步骤倒平板操作、制备菌悬液、涂布平板（3）刚果红染色法种类
一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。课题延伸
对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选后，只是分离纯化的第一步，为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。疑难解答
（1）为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？
由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。
（2）将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？
将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将纸埋于深约10cm左右腐殖土壤中。（3）两种刚果红染色法的比较
方法一是传统的方法，缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；其优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用。方法二的优点是操作简便，不存在菌落混杂问题，缺点是由于纤维素和琼脂、土豆汁中都含有淀粉类物质，可以使能够产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应。但这种只产生淀粉酶的微生物产生的透明圈较为模糊，因为培养基中纤维素占主要地位，因此可以与纤维素酶产生的透明圈相区分。方法二的另一缺点是：有些微生物具有降解色素的能力，它们在长时间培养过程中会降解刚果红形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分。（4）为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？
在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用。
专题三植物的组织培养技术课题一菊花的组织培养
植物组织培养的基本过程
细胞分化：在生物个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。植物细胞工程
具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。
植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。
细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？
使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。比较根尖分生组织和愈伤组织的异同细胞来源细胞形态细胞结构细胞排列细胞去向组织类型根尖分化成多种受精卵正方形无液泡紧密分生组织细胞组织愈伤组织高度分化细胞无定形高度液泡化疏松再分化成新个体相同点都通过有丝分裂进行细胞增殖影响植物组织培养的条件材料：不同的植物组织，培养的难易程度差别很大。植物材料的选择直接关系到试验的成败。植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。
营养：离体的植物组织和细胞，对营养、环境等条件的要求相对特殊，需要配制适宜的培养基。常用的培养基是MS培养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。
激素：植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强趋势。在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。
使用顺序先生长素，后细胞分裂素先细胞分裂素，后生长素同时使用
环境条件：PH、温度、光等环境条件。
不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养，一般将pH控制在5.8左右，温度控制在18~22℃，并且每日用日光灯照射12h.4、操作流程
配制MS固体培养基：配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液（培养基母液）。使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸馏水稀释。
配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并用蒸馏水定容到1000毫升。
在菊花组织培养中，可以不添加植物激素
原因是菊花茎段组织培养比较容易。灭菌：采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。MS培养基中各种营养物质的作用是什么？与肉汤培养基相比，MS培养基有哪些特点？
大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养。
外植体的消毒外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段。选取菊花茎段时，要取生长旺盛的嫩枝。菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70%的酒精中摇动2~3次，持续6~7s，
实验结果生长素／细胞分裂素比值与结果
促根分化，比值高时有利于分裂但不分化抑芽形成
细胞既分裂也分化分化频率提高+
比值低时比值适中促芽分化，抑根形成促进愈伤组织生长立即将外植体取出，在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中1~2min。取出后，在无菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。注意：对外植体进行表面消毒时，就要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力。接种：接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种7～8个外植体。外植体接种与细菌接种相似，操作步骤相同，而且都要求无菌操作。
培养：应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的温度（18~22℃）和光照（12h）移栽：栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。栽培
外植体在培养过程中可能会被污染，原因有外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。
专题二月季的花药培养
被子植物的花粉发育被子植物的雄蕊通常包含花丝、花药两部分。花药为囊状结构，内部含有许多花粉。花粉是由花粉母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。被子植物花粉的发育要经历小孢子四分体时期、单核期和双核期等阶段。在小孢子四分体时期，4个单倍体细胞连在一起，进入单核期时，四分体的4个单倍体细胞彼此分离，形成4个具有单细胞核的花粉粒。这时的细胞含浓厚的原生质，核位于细胞的中央（单核居中期）。随着细胞不断长大，细胞核由中央移向细胞一侧（单核靠边期），并分裂成1个生殖细胞核和1个花粉管细胞核，进而形成两个细胞，一个是生殖细胞，一个是营养细胞。生殖细胞将在分裂一次，形成两个精子。
注意：①成熟的花粉粒有两类，一类是二核花粉粒，其花粉粒中只含花粉管细胞核和生殖细胞核，二核花粉粒的精子是在花粉管中形成的；另一类是三核花粉粒，花粉在成熟前，生殖细胞就进行一次有丝分裂，形成两个精子，此花粉粒中含有两个精子核和一个花粉管核（营养核）②花粉发育过程中的四分体和动物细胞减数分裂的四分体不同。花粉发育过程中的四分体是花粉母细胞经减数分裂形成的4个连在一起的单倍体细胞；而动物细胞减数分裂过程中的四分体是联会配对后的一对同源染色体，由于含有四条染色单体而称为四分体。③同一生殖细胞形成的两个精子，其基因组成完全相同。
产生花粉植株的两种途径通过花药培养产生花粉植株（即单倍体植株）一般有两种途径，一种是花粉通过胚状体阶段发育为植物，另一种是花粉在诱导培养基上先形成愈伤组织，再将其诱导分化成植株。这两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度配比。注意：①无论哪种产生方式，都要先诱导生芽，再诱导生根②胚状体：植物体细胞组织培养过程中，诱导产生的形态与受精卵发育成的胚非常类似的结构，其发育也与受精卵发育成的胚类似，有胚芽、胚根、胚轴等完整结构，就像一粒种子，又称为细胞胚。
影响花药培养的因素诱导花粉能否成功及诱导成功率的高低，受多种因素影响，其中材料的选择与培养基的组成是主要的影响因素
亲本的生理状况：花粉早期是的花药比后期的更容易产生花粉植株，选择月季的初花期。合适的花粉发育时期：一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高
花蕾：选择完全未开放的花蕾
亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等对诱导成功率都有一定影响材料的选取：选择花药时，一般要通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。确定花粉发育时期的最常用的方法是醋酸洋红法。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色材料的消毒
接种和培养：灭菌后的花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。在剥离花药时，要尽量不损伤花药（否则接种后容易从受伤部位长生愈伤组织），同时还要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成，通常每瓶接种花药7～10个,培养温度控制在25℃左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一般经过20～30天培养后,会发现花药开裂,长出愈伤组织或形成胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。还需要对培养出来的植株做进一步的鉴定和筛选。
植物组织培养技术与花药培养技术的相同之处是：培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。两者的不同之处在于：花药培养的选材非常重要，需事先摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花药培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药培养的难度大为增加。
专题五ＤＮＡ和蛋白质技术课题一ＤＮＡ的粗提取与鉴定
提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，又需要使用什么浓度？
在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。
在溶解细胞中的DNA时，人们通常选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。酒精是一种常用有机溶剂，但DNA却不能溶于酒精（特别是95％冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。
从理论上分析，预冷的乙醇溶液具有以下优点。一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子运动，易于形成沉淀析出；三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂。采用DNA不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？
将DNA和蛋白质进一步分离。
提取DNA还可以利用DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？
蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对DNA产生影响。温度值为60～80℃，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。
补充：DNA的变性是指DNA分子在高温下解螺旋，其温度在80℃以上，如在PCR技术中DNA变性温度在95℃。洗涤剂在提取DNA中有何作用？
洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。
当鉴定提取出的物质是否是DNA时，需要使用什么指示剂进行鉴定？
在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色。
原理总结：通过利用不同浓度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以从细胞中提取和提纯DNA；再利用酒精进一步将DNA与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是DNA。实验材料的选取
不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。
本实验用鸡血细胞做实验材料有两个原因。一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求较高，操作繁琐，历时较长。
鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液。破碎细胞，获取含DNA的滤液
若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含DNA的滤液？
在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。在以上实验中，加入蒸馏水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（滤纸、尼龙布）。血细胞在蒸馏水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解DNA物质；选用尼龙布进行过滤。
在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？研磨不充分产生什么结果？
破碎细胞壁，使核物质容易溶解在NaCl溶液中；研磨不充分会使DNA的提取量减少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。
。具体做法。10mL鸡血＋20mL蒸馏水→同方向搅拌→3层尼龙布过滤→滤液去除滤液中的杂质
为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？
用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。
最初获得的DNA滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯DNA。
方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋白质和DNA的变性温度不同。
方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。析出与鉴定
在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的DNA呈何颜色？
滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置2～3分钟，析出的白色丝状物就是DNA。DNA呈白色。
怎样鉴定析出的白色丝状物就是DNA呢？
具体做法。试管2支，编号甲乙→各加等量5mLNaCl溶液→甲中放入少量白色丝状物，使之溶解→各加4mL二苯胺，混合均匀→沸水浴5min→观察颜色变化实验操作
制备鸡血细胞液加柠檬酸钠，静置或离心↓
破碎细胞，释放DNA加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌↓→过滤，除去细胞壁、细胞膜等。
溶解核内DNA加入NaCl至2mol/L，同一方向缓慢搅拌↓
DNA析出加蒸馏水至0.14mol/L，过滤，在溶解到2mol/L溶液中↓→除去细胞质中的大部分物质。
DNA初步纯化与等体积95％冷却酒精混合，析出白色丝状物↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。
DNA鉴定二苯胺，沸水浴，呈现蓝色
注意事项：在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝固；鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向搅拌；玻棒搅拌要缓慢（细胞破裂快速搅拌）；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂要现用现配等。友情提示：本文中关于《高中生物知识点总结(选修部分)》给出的范例仅供您参考拓展思维使用，高中生物知识点总结(选修部分)：该篇文章建议您自主创作。
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