欢迎大家提出建议和来稿！投稿请将Word文档发送至，点击上方蓝色字体关注文献大大。转自：解螺旋 你的细胞是养在哪儿呀？......不就是塑料的细胞培养皿中吗？圆的，方的，长的随你选俺都有！ 那你的组织实验和细胞实验结果都能一致吗？嗯嗯，大部分还是能的，那另一部分呢？我也不知道嘞！做了好多遍的！ 其实呢，我们在细胞水平的研究大部分呢还是在2D水平的，然而细胞在体内生活的环境远远复杂的多。3D细胞培养相比2D,优势就很明显，更接近细胞的体内状态，能够提高细胞因子、抗体和其他分子的产量，测试剂盒已经到了ρg级细胞因子测不到心酸再也不会有了！在3D体系内干细胞能够有效的分化，基因表达、细胞活动与体内过程更接近。 建立3D细胞体系，听上去很复杂的样子；现在就用模拟肺环境为例，介绍一下肺部3D体系建立。 Immunocompetent 3D Model ofHuman Upper Airway for Disease Modeling and In Vitro Drug Evaluation 建立上皮细胞&纤维原细胞共培养体系 ES支架切割成2cm2每小块，放置距离紫外光源8cm处灭菌15min,每一面都需要这样操作灭菌哦。切割好的支架移入12孔板中（无菌操作），将一个钢圈放置在支架上,加抗生素再进一步灭菌，放入恒温孵箱过夜。吸去抗生素，用PBS清洗，后加细胞培养液浸没支架。在支架支撑物里上皮细胞支架放在纤维原单层细胞支架上形成2D共培养模型。
图：钢圈圈定细胞接种的面积；支架支撑物放在2D气-液界面（白色圆柱）里，支架在类似肺组织在适当的条件（ECM）下培养（上皮细胞在上层和成纤维细胞浸没）,模仿体外肺组织环境。以防在培养过程中下拨分离或移动，支架固定在特有的支撑物上。细胞在培养基（目标细胞所用培养基）中孵育。 建立上皮&树突&纤维原细胞3D共培养
上皮细胞&纤维原细胞共培养体系在孵箱中孵育14天后插入树突细胞支架，培养基仍为混合培养基。上皮&树突&纤维细胞3D体系培养14天，使其形成更似生理环境的细胞间联系。 接下来你想研究肺部哪个病，哪个药，哪种细胞就放进去相互作用吧！长按识别下方二维码关注文献大大文献大大(litrature_pkuddc)　
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[求助]在12孔或24孔板中细胞生长不均匀
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这个帖子发布于10年零203天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
进本每次都是周围的少，中央的很多，用了很多办法都不行，例如，先把细胞加入培养液中混匀再加入12或24孔板中也不行，有什么好办法吗？
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不知道你养的是什么细胞，个人建议:1.调整细胞接种密度，参考司版细胞培养，12孔和24孔大约在2.5×106/cm2左右，个人喜欢3.0×106/cm2接种，过高容易产生你所说的那种现象；也可以根据你自己所养的细胞摸索下。2.铺板要均匀3.注意操作，接种时建议枪头靠壁，不要正中悬空接种；补加液时枪头可悬空，自己掌握。接种后建议横向摇匀，不要旋转摇匀。
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把细胞调整到要接种的密度，直接加入培养孔中，这样的效果会好很多。比如，12孔板加入1ml吹打的细胞悬液，而不是先加细胞再补充液体。接种过程中要把你的细胞始终的吹打均匀，接种后也不用再混匀了。
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四周围很少，中间很多只有可能是一个原因就是你把细胞放进去之后试图摇匀了越摇细胞就会越往中间聚集……最简单的方法就是：不要摇把细胞放进去之后往前后两个方向稍微摆动一下，然后静置就可以了
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leecolin edited on
细胞体外培养时，有趋化生长现象，这很正常。增加一些血清浓度，可减弱这种现象。
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谢谢大家，我是先把细胞调整到要接种的密度再加到培养孔中的，由于已经混匀，我不再摇晃的，密度也是参照说明做的。下次试试上面朋友的建议，增加血清浓度试试。
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加入细胞后，手拿培养板，置于头顶上的日光灯下，轻轻震动手腕，肉眼可见到细胞呈细沙粒状混合均匀，可以前后左右各震动若干下，然后轻轻置于培养箱内。我用这种方法培养过多种细胞，细胞在培养孔内分布非常均匀。注意是轻轻快速震动手腕（频率较高），不是摇动。
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视黄酸联合视网膜细胞共培养对胚胎干细胞体外分化的诱导作用
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【求助】G418筛选时细胞用不用计数啊在24孔板中怎么样才能把细胞加的均匀啊？
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这个帖子发布于8年零307天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本人想做质粒的转染并筛选转染的细胞，现在正在确定胃癌细胞G418的最佳筛选浓度，请问细胞是计数，然后稀释到1000个/ml吗？然后加到24孔板上，100微升/孔吗？那怎么样才可以加的较均匀啊？
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每孔100微升的细胞悬液加到24孔板中，前提是24孔板的每孔中已经含有400微升的正常培养基，因为对24孔板而言，每孔的培养基体积为500微升。加入后呈十字交叉轻轻晃匀（注意力度均匀），再放入培养箱，一般来讲就铺匀了。至于每孔的细胞数，并不一定是100个，因为这个与细胞种类、生长快慢等相关，所以还需根据楼主对该种细胞的熟知程度而定。多多交流！
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谢谢楼上的大哥，我明白了许多。但我还有问题不懂， 还请指点。我的细胞是胃癌823 和7901细胞株，前者长的的很快，有时需要一天一换液，后者稍慢些，但总体上说两者均是生长较快的细胞系。这样生长速度的细胞在筛选之前还需要计数吗？（我曾经计数过，有过10的6次方和5次方。然后，而且不均匀）如果需要计数的话是每孔多少？不需要的计数的话在镜下观察每个视野大概的细胞数怎么样?
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G418筛选浓度的预试验通常要进行2周，即在2周使细胞全部死亡的最小G418浓度，比此高一个浓度的作为筛选浓度。这样就决定了在24孔板体系中，细胞数不可能过多。一般来讲，在预试验中，G418在作用细胞2~4天后，细胞开始大量死亡（这个具体因细胞而异），在一周左右，开始有抗性克隆出现。而在正式的稳定转染中筛选目标克隆时也需要有一个时间周期，这两者是匹配的。所以综上而言，在预试验中是需要对细胞进行计数的，具体每孔多少细胞因细胞而异，也就是说，在这段时间内既不能让细胞因生长太密而“挤死”，也不能太少而对G418的耐受性减少。多多交流！
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G418咋配？一定要用HEPES配吗？
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不一定用HEPES，我用的是PBS缓冲液配的
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我明白了，但是确定最佳筛选浓度和正式转染后筛选的时候的细胞数不同怎么办，这种差异可以忽略不计吗？还有一个问题就是每个孔中的100微升的细胞都能保证细胞数差不多吗？如果G418浓度小的细胞多，高的孔中细胞反而少怎么办？这样筛选需要时间很慢怎么办 而且很不准吧！相反也是啊！还请指点啊还一个问题是你计数后稀释了吗我稀释了可是稀释后加到每孔中的细胞数寥寥无几，而且很不均匀！谢谢谢谢了！！！
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