以上内容摘取自《一株稀有放线菌的系统发育及其发酵产抗生素的分析.pdf》，若想查看原文格式，请如果您觉得不放心或未尽人意，请复制链接到电脑端访问（同时支持支付宝和微信支付）。正确教育旗下网站
题号：3933773试题类型：单选题 知识点：微生物的实验室培养&&更新日期：
下列关于微生物分离和培养的有关叙述,不正确的是( & )A.酵母菌发酵过程产生的酒精,对其他微生物生长有一定的抑制作用B.测定土壤样品中的活菌数目,常用显微镜直接计数法C.提纯和分离严格厌氧型微生物,一般不用稀释涂布平板法D.不同微生物需要的营养条件不同,培养细菌时需要将PH调为中性或微碱性
难易度：较易
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微生物的实验室培养：1．培养基的概念、种类及营养构成 (1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出的供其生长繁殖的营养基质。 (3)营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。2．无菌技术 (1)关键：防止外来杂菌的入侵。(2)具体操作 ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。(3)消毒和灭菌
3、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。4、接种方法：平板划线法和稀释涂布法。（1）平板划线操作：①挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。②划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁,左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯（这时皿盖朝上，仍留在煤气灯旁)，右手拿接种环先在A区划3—4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定）。划完A区后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。在烧接种环时，左手持皿底并将其覆盖在皿盖上方(不要放入皿盖内)，以防止杂菌的污染。③划其他区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转到上方，接种环通过A区（菌源区）将菌带到B区，随即划数条致密的平行线。再从B区作C区的划线。最后经C区作D区的划线，D区的线条应与A区平行，但划D区时切勿重新接触A、B区，以免极该两区中浓密的菌液带到D区，影响单菌落的形成。随即将皿底放入皿盖中。烧去接种环上的残菌。④等平板凝固后，将平板倒置。（2）稀释涂布法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法。
纯化大肠杆菌的无菌操作和菌种保存： 1．大肠杆菌 (1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 (2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。 2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 (1)计算：依据是培养基配方的比例。 (2)称量：牛肉膏比较黏稠，可同称量纸一块称取。牛肉膏和蛋白胨易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。 (3)溶化：牛肉膏和称量纸+水加热取出称量纸→加蛋白胨和氯化钠→加琼脂（注意：要不断用玻璃棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂）→补加蒸馏水至100mL。 3.纯化大肠杆菌（1）方法 ①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。 ②稀释涂布平板法：将骏业进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。（2）鉴定：将接种后的培养基和一个未接种的培养基（对照组）都放入到37℃恒温箱中，培养12h和24h后，分别观察并记录结果。 （3）菌种保存
知识点拨：1、无菌技术操作原则：（1）操作前准备：①操作环境应清洁、宽敞、定期消毒；物品布局合理；无菌操作前半小时应停止清扫工作、减少走动、避免尘土飞扬。②工作人员应做好个人准备，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要时穿无菌衣、带无菌手套。（2）操作中保持无菌①工作人员应面向无菌区，手臂应保持在腰部或操作台台面以上，不可跨越无菌区避免面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。②用无菌持物镊取用物品；无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回无菌容器内；一套无菌物品仅供一位患者使用，避免交叉感染。 ③无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，应予更换并重新灭菌。（3）无菌物品保管：①无菌物品必须与非无菌物品分开放置。②无菌物品不可暴露于空气中，应存放于无菌包或无菌容器中，无菌包外须标明物品名称、灭菌日期，并按失效期先后顺序排放。③定期检查无菌物品的灭菌日期及保存情况。无菌包在未被污染的情况下保存期一般为7天，过期或受潮应重新灭菌。2、划线分离操作中的有关问题：（1）在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。
②在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。 ③在进行第二次以及其后的划线操作时'要从上一次划线的末端开始划线。每次划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 (2)进行恒温培养时，要将培养皿倒置的原因如果正放培养皿，则皿盖上形成的水滴会落入培 养基表面并且扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则茵落中的细菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。因此恒温培养时，培养皿必须倒置。 (3)培养后判断是否有杂菌污染的方法 ①从菌落的形态看，是否湿润、透明、黏稠，呈何种颜色等等，是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标。 ②用显微镜镜检观察其形态、大小，看是否有菌丝、孢子、芽孢等，这也是区别细菌、酵母菌、放线菌和霉菌的关键指标。
知识拓展：1、对异养微生物来说，含C、N的化合物既是碳源，也是氮源，即有些化合物作为营养要素成分时并不是起单一方面的作用。2、并不是所有微生物都需添加特殊营养物质，有些微生物需添加，原因是它们自身缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。3、含抗生素的牛奶不能发酵为酸奶的原因：牛奶发酵成酸奶是利用乳酸菌来完成的，乳酸菌属于细菌， 4、化学药剂的消毒方法，其作用原理是使细菌体内蛋白质变性，但是化学物质很难透过孢子或芽孢的坚硬外层进入细胞内，因此化学方法难以消灭孢子和芽孢。5、体积分数为70%的乙醇杀菌效果最强，浓度过低，杀菌力弱，浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固形，成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其内，因此杀菌效果受影响。 6、倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管（瓶）塞（也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中）。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15mL，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。7、在斜面培养基上接种时，其正确的操作顺序： ①用左手大拇指、食指和无名指夹住菌种试管和待接种的斜面试管，管口并齐，使斜面向上成水平状态 ②右手拧松棉塞，但不取下③右手拿接种环，在火焰上灼烧灭菌 ④在火焰边用右手无名指和小指夹两个棉塞，将它们取下，同时左腕转动，灼烧管口一周 ⑤将接种环伸入管内，让环先接触培养基上未长菌的部位，使环冷却，然后轻轻挑取少量菌体⑥在火焰旁边迅速将沾有菌体的接种环伸到培养基的底部，由里向外轻轻画蛇形细线 ⑦抽出接种环，再用火焰灼烧管口，并在火焰上方将棉塞塞上 8、自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别在于碳源。9、平菇培养的操作程序：配制棉籽壳培养基，高压蒸汽灭菌，接种，培养。10、菌种的保存：对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法；临时保藏的菌种一般是接种到试管的固体斜面培养基上；临时保藏的菌种容易被污染或产生变异；在临时保藏过程中，每3～6个月都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上；
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8、 回答下列Ⅰ、Ⅱ小题Ⅰ、玉米和小麦在适宜条件下光照一段时间后，将叶横切片用碘液染色，在显微镜下观察这两种植物的维管束鞘细胞和叶肉细胞，结果发现玉米叶片的维管束鞘细胞被染色，小麦叶片的____ ___被染成 ，被染色的原因是___ ___。由此可知，玉米属于____ ___植物，小麦属于___ __植物。当用碘液对某一植物照光后的叶横切片染色时，却发现被染色的叶片同时出现上述玉米和小麦叶片的染色结果。据这个实验现象可推知：从光合作用角度来说，该植物具有_ __ ___ __植物的特点，其光合作用固定CO2形成的最初化合物有_
__种，即____ ______。Ⅱ、为了确定生长素类似物促进扦插枝条生根的适宜浓度，某同学用两种浓度的生长素类似物分别处理扦插枝条作为两个实验组，用蒸馏水处理作为对照组进行实验，结果发现三组扦插枝条生根无差异。回答下列问题：（1）参考该同学的实验，在下一步实验中你应该如何改进，才能达到本实验的目的？请说明理论依据。（2）在进行扦插枝条生根实验时，一般需要剪去扦插枝条上的一部分叶片。其制药目的是为了减少____ ___，同时还应使扦插环境保持较高的________，避免扦插枝条干枯。
9、 (8分)　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（1）右图表示A、B两种植物的光照等其他条件适宜的情况下，光合作用强度对环境中CO2浓度变化的响应特性。据图判断在CO2浓度为300μL·L-1（接近大气CO2浓度）时，光合作用强度较高的植物是_______________。　　（2）若将上述两种植物幼苗置于同一密闭的玻璃罩中，在光照等其他条件适宜的情况下，一段时间内，生长首先受影响的植物是____________，原因是____________。　　(3)当植物净固定CO2量为0时，表明植物____________________。　　
10、 A．均使感染者发烧，因此两者抗原相同B．感染不同的人后所引起的患病程度可能不同C．感染正常人体后均能引发特异性免疫反应D．均可能发生基因突变而改变传染性
11、 A．无丝分裂过程核膜不消失B．动物细胞仅以有丝分裂方式进行增值C．动物细胞有丝分裂末期不形成细胞板D．无丝分裂仅出现于高等生物的衰老细胞
12、 A．提出了适者生存，不适者被淘汰的观点B．提出了用进废退的理论C．认为种群是生物进化的基本单位D．认识到变异广泛存在并能遗传给后代
13、 A．DNA分子由4种脱氧核苷酸组成B．DNA单链上相邻碱基以氢键连接C．碱基与磷基相连接D．磷酸与脱核糖交替连接构成DNA链的基本骨架
14、 A．降低呼吸强度B．降低水分吸收C．促进果实成熟D．促进光合作用
15、 A．酵母细胞B．原核细胞C．动物细胞D．植物细胞
16、 A．没有载体参与B．为自由扩散C．为协助扩散D．为主动运输
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共有&11&人回复了该问答耐热菌是什么？
耐热菌是什么啊？食品原辅料中例如什么大蒜粉,辣椒粉之类的要做这个耐热菌的检测吗？然后，检测方法是怎么样的啊？对生化培养条件有什么要求啊？
回复于： 9:20:49所谓耐热菌是指在实验型巴氏杀菌温度下可以存活的菌体，乳微细菌、芽孢菌通常可100 ％存活，一些微球菌的耐热性差，产碱杆菌仅有1％～10％存活，链球菌（即粪肠球菌）、乳杆菌和一些棒状杆菌是耐热菌，可在60 ℃ 下耐受20min ，但仅有1 ％左右的菌株可耐受到63 ℃ 30min ，常见的耐热菌如下。3.2.1 芽孢菌属芽孢菌属是乳中污染的主要的耐热菌种，常见于乳中的芽孢杆菌有：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌等，该类菌种为革兰氏阳性杆菌，需氧、内生芽孢，能运动、有周身鞭毛，可陈化牛乳，大多数菌落呈扩散性生长，菌落较大，表面呈灰白色，有的菌落成蜡样质颜色，一般不分解乳糖，不利用甘露醇，在乳品中重要的芽孢菌是蜡样芽孢杆菌。不同菌株的最低生长温度不同，一般在5～6 ℃ 下仍可生长，最佳生长温度为30～37 ℃ ，最高生长温度为37～48 ℃ 。最低生长PH为4.3～4.9 ，最高为9.3 。尽管该菌在有氧条件下生长良好，但也可在厌氧条件下通过发酵葡萄糖和还原硝酸盐呼吸而生长，在其他适宜条件下，可在含7 % NaCI 的基质中生长，最小生长的水分活性为0.92～0.95 。需氧条件下生长于各种培养基上的菌体在饥饿状态下均可生成芽孢。形成芽孢是一个复杂和需时较长的过程。一般发生在对数生长后期和稳定早期。即使在理想状态下形成芽孢仍需6～4h ，在冷藏条件下不会形成芽抱，但当菌体生长耗尽营养时也可形成芽孢。即在乳品设备管道上残留的稀释乳成分形成薄膜并产生芽抱。芽孢的出芽要快于成孢，发芽率依赖于环境温度，在适宜温度下发芽不需要lh 即可完成。在乳品加工中高温短时的巴氏消毒热处理可激活芽孢发芽。芽孢被激活后，又因加热处理而在乳中形成刺激出芽的物质，提高芽孢出芽率。该菌的芽孢耐热性因菌株不同而有差异，尽管芽孢不被HTST 杀死，但UHT则可杀灭。其典型Dl00℃ 为0.3～10min ，而嗜热脂肪芽孢杆菌的Dl00℃为3000 min，但芽孢杆菌的滋养体或繁殖体却较易被巴氏消毒灭活。蜡样芽孢杆菌是许多食品的污染菌种，可引起人的食物中毒，当人体摄入含有大量活菌的食品时即可能引起呕吐、腹泻、肠绞痛等为主要症状的食物中毒，一般在食品中含有105～108 个／g 活菌时就可能引起食物中毒。该菌株还可产生三种肠毒素和一种致吐毒素，其中肠毒素为蛋白型毒素，不耐热和酸性条件，在60 ℃ 5 min 即可灭活，在胃内和回肠中因胃酶和酸的作用而使大多数毒素被灭活。然而致吐毒素的毒性比上述腹泻毒素的毒性大，甚至可引起死亡。这种毒素极耐热，甚至可耐受121 ℃ 、1h 的加热处理。年轻人群和老年人群是主要的易感人群，但由于乳品大多在冷藏中，或者因菌体的生长会导致乳品风味的改变，人们易于识别，因而由乳品引起的中毒较少，在UHT 乳品中偶尔可见到由芽孢菌及其酶作用而产生的甜凝固。蜡样芽孢杆菌在乳中较少。在巴氏消毒乳和奶油中因低温储藏不易发生变化，在酸乳和其他发酵乳制品中因发酵产酸而使芽孢杆菌繁殖体很快被灭活或其生长受到抑制。但在乳粉中，特别是婴儿乳粉中不应检出蜡样芽孢杆菌，因为在乳的蒸发浓缩过程中会使芽孢发芽并有一定繁殖，而在后期杀菌和喷雾干燥中不被杀死，而致终产品中含有芽孢杆菌及其芽孢。
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回复于： 17:14:29
耐热菌是指在实验型巴氏杀菌温度下可以存活的菌体，乳微细菌、芽孢菌，链球菌（即粪肠球菌）、乳杆菌和一些棒状杆菌都是。怎么这帖子和某论坛上2009年发的一贴完全一致？？话题都是直接从那边copy来的？
回复于： 18:20:36
这个是哪些啊，还没见识过，能说说嘛？
回复于： 18:21:14
其他的都还行，做实验应该是 可以找到根据的，一般国标就成了吧。
回复于： 18:39:37
学下知识了。。
回复于： 21:47:17
看来09年的问题至今还没解决
回复于： 10:05:50
耐热菌有很多种的，就食品原料来说，多见为耐热细菌和耐热霉菌，通常都能经受巴氏灭菌还能存活的微生物。至于大蒜粉,辣椒粉之类的原料是否要做这个检测，现在的国标里应该就没有要求。检测的方法多数为国外的一些方法，检测的关键技术在于高温处理样品大概80度10分钟吧，培训的温度为45度。希望能对你有所帮助吧。
回复于： 9:20:49
所谓耐热菌是指在实验型巴氏杀菌温度下可以存活的菌体，乳微细菌、芽孢菌通常可100 ％存活，一些微球菌的耐热性差，产碱杆菌仅有1％～10％存活，链球菌（即粪肠球菌）、乳杆菌和一些棒状杆菌是耐热菌，可在60 ℃ 下耐受20min ，但仅有1 ％左右的菌株可耐受到63 ℃ 30min ，常见的耐热菌如下。3.2.1 芽孢菌属芽孢菌属是乳中污染的主要的耐热菌种，常见于乳中的芽孢杆菌有：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌等，该类菌种为革兰氏阳性杆菌，需氧、内生芽孢，能运动、有周身鞭毛，可陈化牛乳，大多数菌落呈扩散性生长，菌落较大，表面呈灰白色，有的菌落成蜡样质颜色，一般不分解乳糖，不利用甘露醇，在乳品中重要的芽孢菌是蜡样芽孢杆菌。不同菌株的最低生长温度不同，一般在5～6 ℃ 下仍可生长，最佳生长温度为30～37 ℃ ，最高生长温度为37～48 ℃ 。最低生长PH为4.3～4.9 ，最高为9.3 。尽管该菌在有氧条件下生长良好，但也可在厌氧条件下通过发酵葡萄糖和还原硝酸盐呼吸而生长，在其他适宜条件下，可在含7 % NaCI 的基质中生长，最小生长的水分活性为0.92～0.95 。需氧条件下生长于各种培养基上的菌体在饥饿状态下均可生成芽孢。形成芽孢是一个复杂和需时较长的过程。一般发生在对数生长后期和稳定早期。即使在理想状态下形成芽孢仍需6～4h ，在冷藏条件下不会形成芽抱，但当菌体生长耗尽营养时也可形成芽孢。即在乳品设备管道上残留的稀释乳成分形成薄膜并产生芽抱。芽孢的出芽要快于成孢，发芽率依赖于环境温度，在适宜温度下发芽不需要lh 即可完成。在乳品加工中高温短时的巴氏消毒热处理可激活芽孢发芽。芽孢被激活后，又因加热处理而在乳中形成刺激出芽的物质，提高芽孢出芽率。该菌的芽孢耐热性因菌株不同而有差异，尽管芽孢不被HTST 杀死，但UHT则可杀灭。其典型Dl00℃ 为0.3～10min ，而嗜热脂肪芽孢杆菌的Dl00℃为3000 min，但芽孢杆菌的滋养体或繁殖体却较易被巴氏消毒灭活。蜡样芽孢杆菌是许多食品的污染菌种，可引起人的食物中毒，当人体摄入含有大量活菌的食品时即可能引起呕吐、腹泻、肠绞痛等为主要症状的食物中毒，一般在食品中含有105～108 个／g 活菌时就可能引起食物中毒。该菌株还可产生三种肠毒素和一种致吐毒素，其中肠毒素为蛋白型毒素，不耐热和酸性条件，在60 ℃ 5 min 即可灭活，在胃内和回肠中因胃酶和酸的作用而使大多数毒素被灭活。然而致吐毒素的毒性比上述腹泻毒素的毒性大，甚至可引起死亡。这种毒素极耐热，甚至可耐受121 ℃ 、1h 的加热处理。年轻人群和老年人群是主要的易感人群，但由于乳品大多在冷藏中，或者因菌体的生长会导致乳品风味的改变，人们易于识别，因而由乳品引起的中毒较少，在UHT 乳品中偶尔可见到由芽孢菌及其酶作用而产生的甜凝固。蜡样芽孢杆菌在乳中较少。在巴氏消毒乳和奶油中因低温储藏不易发生变化，在酸乳和其他发酵乳制品中因发酵产酸而使芽孢杆菌繁殖体很快被灭活或其生长受到抑制。但在乳粉中，特别是婴儿乳粉中不应检出蜡样芽孢杆菌，因为在乳的蒸发浓缩过程中会使芽孢发芽并有一定繁殖，而在后期杀菌和喷雾干燥中不被杀死，而致终产品中含有芽孢杆菌及其芽孢。
回复于： 23:28:10
蜡样芽孢杆菌
回复于： 17:10:43
原文由 czcdczg(czcdczg) 发表:蜡样芽孢杆菌你的意思是 芽孢 耐热？
回复于： 17:28:29
原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 czcdczg(czcdczg) 发表:蜡样芽孢杆菌你的意思是 芽孢 耐热？可以这么说
回复于： 8:34:24
原文由 czcdczg(czcdczg) 发表:原文由 会师楼(hjx1988) 发表:原文由 czcdczg(czcdczg) 发表:蜡样芽孢杆菌你的意思是 芽孢 耐热？可以这么说芽孢是耐热，但是 应该不是 耐热菌 里面的吧
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