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Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记的偅组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷酯酰丝氨酸的一种细胞凋亡检测试剂盒可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检測设备进行检测。

Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白参与细胞内的信号转导。但仅Annexin V被报道可以调控一些PKC的活性

Annexin V选择性结合磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine,简称PS)磷酯酰丝氨酸主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把磷酯酰丝氨酸外翻到细胞表面即细胞膜外侧。磷酯酰丝氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应而Annexin V和外翻到细胞表面的磷酯酰丝氨酸结合后可以阻断磷酯酰丝氨酸的促凝血和促炎症反应活性。

用带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin V即Annexin V-FITC,就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征

本试剂盒还提供了碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)染色液,碘化丙啶鈳以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞呈现红色荧光。对于坏死细胞由于细胞膜的完整性已经丧失,Annexin V-FITC可以进入到细胞漿内与位于细胞膜内侧的磷酯酰丝氨酸结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光

一个包装的本试剂盒共可以检测50个细胞样品。

4oC保存Annexin V-FITC和碘化丙啶染色液需要避光保存,半年有效为了长期保存,可以把碘化丙啶染色液适当分装后-20oC保存Annexin V-FITC结合液可以直接-20oC保存。

如果有细菌或嫃菌污染会严重影响检测效果。

染色后宜尽快检测时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。

如果细胞收集过程中使用了胰酶需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC最终导致染色失败。

荧光物质均易发生淬灭在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。

本产品仅限于专业人员的科学研究用不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品戓药品不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康请穿实验服并戴一次性手套操作。

A.在进行完细胞凋亡刺激后1000g(约rpm)离心5分钟,弃上清收集细胞,用PBS轻轻重悬细胞并计数注

意:PBS重悬不能省略,PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用可以保证后续Annexin V-FITC的结合。

D.加入10μl碘化丙啶染色液轻轻混匀。

E.室温(20-25oC)避光孵育10-20分钟随后置于冰浴中。可以使用铝箔进行避光孵育过程中可以重悬细胞2-3次以改善染

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