氨基酸薄层层析实验报告

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-12-07 05:56 标签：

聚酰胺薄膜层析是60年代以后发展起来的一种新的层析方法特别适用于氨基酸及其衍生物的分析。具有灵敏度高、分辨率强、操作方便快捷等特点

聚酰胺是一类化学纤維素原料，即锦纶（尼龙）由乙二酸和乙二胺聚合而成的，称锦纶66

由于分子中含有大量的酰胺基团，故称聚酰胺聚酰胺薄膜是在涤綸片基上涂上一层锦纶制成的。聚酰胺对许多极性物质有吸附作用这是由于聚酰胺的-C=O和-NH-

能与被分离物质的一定基团形成H键。如酚类（黄酮类、鞣质）和酸类（氨基酸、核苷酸）能以其羟基与酰胺键的羰基形成H键在层析过程中，当样品随流动相通过聚酰胺薄膜时由于聚酰胺与各极性分子产生H键吸附能力的强弱不同，从而可将样品中各成分分离

物质分离后，层析点在图谱上的位置即在滤纸上的移动速率，用Rf来表示

在一定条件下，每个物质都有特定的Rf值因此，用Rf可鉴定不同的物质

无色物质的层析图谱可用光谱法（紫外照射）或显銫法鉴定。氨基酸层析图谱常用茚三酮作显色剂本实验利用单向上行层析法鉴定氨基酸。

1. 氨基酸标准液(10mg/ml)：三种氨基酸是赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸分别配成上述浓度的溶液。

2. 氨基酸混合液（每种氨基酸5mg/ml）

4. 0.1%茚三酮－正丁醇液

聚酰胺薄膜，毛细管层析装置，电吹风机喷霧器， 塑料手套等

取薄膜（7cm×10cm）一张，在纸的一端距边缘2cm处用铅笔轻轻划一直线在此直线上每隔1厘米作一记号为点样处（外侧两点距邊缘2cm）。

氨基酸的点样量以5ul为宜点样时，用毛细管吸取氨基酸样品与薄膜垂直方向轻轻碰点样处，每点在纸上扩散的直径最大不超过2mm点样过程中，必须在第一点样品干后再点第二滴为加快样品干燥，可用吹风机吹干注意温度不宜过高，以免损坏氨基酸

在层析缸Φ放一个小培养皿，培养皿中倒入适量展层剂将点好样品的薄膜斜立于培养皿中（注意点样的一端在下），展层剂的液面需低于点样线１厘米当溶剂前沿距上边缘１厘米处时，取出膜片立即用笔标出溶剂前沿的位置，自然干燥或用吹风机吹干

用0.1％茚三酮－正丁醇液茬薄膜的一面均匀喷雾。晾干后用一直尺测量每一显色斑点中心与原点的距离和原点到溶剂前沿的距离，求其比值即得各种氨基酸的Rf徝。

在层析图谱上对比标准氨基酸的位置（Rf值），确定氨基酸混合样中氨基酸的种

1. 选用合适、洁净的薄膜勿用手直接接触薄膜。

2. 点样斑点不能太大（其直径应小于2mm）吹风机温度不宜过高，否则斑点变黄

3. 根据一定目的、要求，选择合适的溶剂系统

学习纤维素薄层层析的操作方法掌握分配层析的原理。

以纤维素作为支持物把它均匀地涂布在玻璃板上成一薄层，然后在此薄层上进行层析即为纤维素薄层层

析纤維素是一种惰性支持物，它与水有较强的亲和力而与有机溶剂亲和力较弱层析时吸着在纤维素上

的水是固定相，而展层溶剂是流动相當欲被分离的各种物质在固定相和流动相中的分配系数不同时，它

三、实验材料、仪器和试剂

；层析缸；毛细管；喷雾器；研钵

标准氨基酸溶液：丝氨酸、色氨酸、亮氨酸，分别以

纤维素粉（层析用）或微晶型纤维素（层析用）；羧甲基纤维素钠（

）层析溶剂系统：正丁醇（分

析纯）﹕冰醋酸（分析纯）﹕水＝

成匀浆后，倒入离心管中离心

上清液即为氨基酸提取液，用滴管小心吸入点样瓶中

水研磨匀漿把纤维素匀浆倒在洗净烘干的玻璃板上，轻轻震动使纤维素均匀分布在玻璃板上，水平放

此处羧甲基纤维素钠是起粘合剂作用

较牢固地粘附于玻璃板上，加入量过多会破坏纤维素薄层的毛细作用而使层析速度延缓加的量过少则粘

合不牢固，因此需要注意加量控制

用刀片将薄层板上薄层的左右各边刮削掉

。在纤维素薄板上距一端

用铅笔轻轻划出点样记号样点之间距离

。用毛细管吸取样品在记號处点样，样品斑点直径控制

将薄板有样品的一端浸入已存放展层溶剂的层析缸中层析溶剂液面不能高于样品线。待展层溶剂走到距

）用铅笔在前沿处作一记号后用电吹风吹干。

将茚三酮显色剂喷雾在板上用热吹风吹数分钟，

℃烘箱中烘干）即可观察到紫红色的氨

基酸斑点脯氨酸例外，为黄色斑点用铅笔圈出氨基酸斑点，量出溶剂前沿的距离及各斑点中心与起点

之间的距离并计算各氨基酸的

），在恒定条件下每种氨基酸

值，与小麦（或绿豆芽）提取液中氨基酸的

值比较确定提取液中含有哪些

．在操作过程中，手必须洗净呮能接触薄板上层边角；不能对着薄板说话，以防唾液掉在板上

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