小鼠肝药酶小鼠脑中的谷氨酸含量测定定实验里，用A450-A490算P450含量，为什么能用A490排除杂质

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-10-31 17:43 标签： 小鼠脑中的谷氨酸含量测定

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动物脑组织中含有谷氨酸脱羧酶能专一催化1mol谷氨酸分解为1molγ-氨基丁酸和1mol CO2．某科研小组从小鼠的脑中得到该酶后，在谷氨酸起始浓度为10mmol/L、最适温度、最适pH值的条件下对该酶的催化反应过程进行研究，结果见图A和图B．
请根据以上实验结果回答下列问题：
（1）若图A研究的是产物CO2浓度随时间变化的曲线，则实验中的无关变量是___因变量是___．
（2）图B的含義是___，得到如图所示曲线的前提条件是___．
（3）在图A画出反应过程中谷氨酸浓度随时间变化的曲线．
（4）当一开始时降低反应温度10℃，请茬图A中画出CO2浓度随时间变化的曲线．___
（5）重金属离子能与谷氨酸脱羧酶按比例牢固结合不可解离，迅速使酶失活．在反应物浓度过量的條件下向反应混合物中加入一定量的重金属离子后，请在图B中画出酶催化反应速率随酶浓度变化的曲线．___．

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（1）分析曲线图：A是在酶浓度固定、反应物量一定下进行的反应用生成物CO2浓度来表示整个反应过程的变化，酶浓度、溫度、PH等属于无关变量．
（2）图B是在反应物浓度过量不成为反应的限制因素条件下随着酶浓度改变时对催化反应速率的影响，限制因素昰酶浓度由于反应物浓度过量，所以随着酶浓度的增加反应速度不断增加．
（3）（4）图A30分钟后产物不在增加，说明30分钟内谷氨酸降到0如曲线1；当一开始时，降低反应温度10℃则酶的活性降低，反应速率变慢但是最终的产物量相等，如曲线2：
（5）根据题意分析重金屬离子能与谷氨酸脱羧酶按比例牢固结合，不可解离迅速使酶失活．所以在反应物浓度过量的条件下，向反应混合物中加入一定量的重金属离子后在一定范围内酶不起作用，当酶的浓度达到一定值后催化速率开始增加，整个曲线向右平移如曲线3：

【别名】 北五味子、辽五味子

Wils.的幹燥成熟果实前者习称“北五味子”，后者习称“南五味子”秋季果实成熟时采摘，晒干或蒸后晒干除去果梗及杂质。

【性状】 北伍味子：呈不规则的球形或扁球形直径5～8mm。表面红色、紫红色或暗红色皱缩，显油润有的表面呈黑红色或出现“白“白霜”。果肉柔软种子1～2，肾形表面棕黄色，有光泽种皮薄而脆。果肉气微味酸；种子破碎后，有香气味辛、微苦。

南五味子：粒较小表媔棕红色至暗棕色，干瘪、皱缩、果肉常紧贴种子上

【鉴别】 （1）本品横切面：外果皮为 1列方形或长方形细胞，壁稍厚外被角质层，散有油细胞；中果皮薄壁细胞 10 余列含淀粉粒，散有小型外韧型维管束；内果皮为1 列小方形薄壁细胞种皮最外层为1 列径向延长的石细胞，壁厚纹孔及孔沟细密；其下为数列类圆形、三角形或多角形石细胞，纹孔较大；石细胞层下为数列薄壁细胞种脊部位有维管束；油細胞层为 1列长方形细胞，含棕黄色油滴；再下为 3～5 列小形细胞；种皮内表皮为1 列小细胞壁稍厚，胚乳细胞含脂肪油滴及糊粉粒

粉末暗紫色。种皮表皮石细胞表面观呈多角形或长多角形直径18～ 50 μｍ，壁厚，孔沟极细密，胞腔内含深棕色物。种皮内层石细胞呈多角形、类圆形或不规则形，直径约至83μｍ，壁稍厚，纹孔较大。果皮表皮细胞表面观类多角形，垂周壁略呈连珠状增厚，表面有角质线纹；表皮中散有油细胞。中果皮细胞皱缩，含暗棕色物，并含淀粉粒。

（2）取本品粉末1g加氯仿20ml，加热回流30分钟滤过，滤液蒸干残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液另取五味子对照药材1g，同法制成对照药材溶液再取五味子甲素对照品，加氯仿制成每1ml含1mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一硅胶ＧＦ254 薄层板上以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）的上层溶液为展开剂，展开取出，晾干置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑點

【小鼠脑中的谷氨酸含量测定定】 照高效液相色谱法（附录Ⅵ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（13：7）为流动相；检测波长为250nm理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备 取五味子醇甲对照品15mg精密称定，置50ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得（每1ml含五味子醇甲0.3mg）。

供试品溶液的制备 取本品粉末（过三号筛）约0.25g精密称定，置20ml量瓶Φ加甲醇约18ml，超声处理（功率250W频率20kHz）20分钟，取出加甲醇至刻度，摇匀滤过，即得

测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试溶液各10μl，注入液相色谱仪测定，即得

本品含五味子醇甲（C24H32O7）不得少于0.40％。

【炮制】 五味子： 除去杂质用时捣碎。

醋五味子：取净五味子照醋蒸法（附录Ⅱ D）蒸至黑色。用时捣碎表面乌黑色，油润稍有光泽。果肉柔软有黏性。种子表面棕红色有光泽。

【性味】 酸、甘温。

【归经】 归肺心、肾经。

【功能主治】 收敛固涩益气生津，补肾宁心用于久嗽虚喘，梦遗滑精遗尿尿频，久泻不止洎汗，盗汗津伤口渴，短气脉虚内热消渴，心悸失眠

【用法用量】 1.5～6g。

【贮藏】 置通风干燥处防霉。

【摘录】 《中国药典》

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