荧光素酶活性降低说明什么检测96孔白色微孔板哪里有

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-10-07 03:46 标签： 荧光素酶活性降低说明什么

你是否发现非编码RNA（Non-coding RNA）的研究越來越火热当一个新发现的miRNA是否对相关疾病有较显著的调控作用，这就需要我们先对它和靶基因的调控关系做一验证接下来我们就介绍朂常用的靶向关系验证方法：双荧光素酶活性降低说明什么报告基因检测。

由于miRNA主要通过作用于靶基因的3’UTR起作用可以将目的基因3’UTR区域构建至载体中报告基因luciferase的后面， 通过比较过表达或者干扰miRNA后报告基因表达的改变（监测萤光素酶的活性变化）可以定量反映miRNA对目的基洇的抑制作用；结合定点突变等方法进一步确定miRNA与靶基因3’UTR的作用位点。

双荧光素酶活性降低说明什么报告基因检测系统示意图

仪器设备：荧光显微镜、CO2培养箱、生物安全柜、低速离心机、 血球计数板 、水浴锅、酶标仪；

主要分为：质粒转染细胞→双报告基因检测→统计学汾析

1、细胞铺板：将细胞按70%的汇合度接种到96孔板。

2、转染：16小时后转染萤光素酶报告基因质粒和RNA每个样品设置6个复孔。

2) 配制RNA和转染试劑稀释液RNA的终浓度为100nM，转染试 剂每孔0.25μL；

3) 稀释好的DNA和RNA及转染试剂常温孵育5min；

4) 将稀释好的DNA和RNA分别和转染试剂混匀，常温孵育20min；

5) 每孔弃去50ul培养基将25μL DNA转染混合液和25uL RNA转 染混合液分别添加到每孔细胞样品中；

6) 转染6小时后，换新鲜完全培养基

1、质粒共转染48小时后，弃去培养基用100μl 1XPBS洗1遍；

2、 倾斜96孔板，吸干剩余的PBS；

3、去离子水将5XPLB稀释成1XPLB使用前放到常温；

4、每孔加50μl稀释好的 1X PLB，摇床常温条件下摇15min进行裂 解；

5、白色不透光的96孔酶标板中每孔加步骤4的上清液10μl， 加入100 μl预先混好的LAR II2s后测数据；

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