振荡洗涤制作好的细胞爬片
.洳果检测的目的蛋白为
或预冷的固定液替代常温的
固定液固定过程置于摇床上进行
目的:防止蛋白降解,避免
蛋白降解导致荧光弥散
如果做组织切片免疫荧光,
组织样品离体后请尽快置于预冷的
进行清洗和后续的固定工作且
固定液固定过程置于摇床上进行
,目的:防止疍白降解
蛋白降解,导致荧光弥散
℃孵育过夜(可选步骤:第二天
如果实验结果荧光信号较弱
可以尝试以较低的一抗浓度
可以提高荧咣信号强度,降低荧光背景
荧光基团标记的二抗以合适浓度稀释于
如果实验结果荧光信号较弱,
应该优先调整一抗的孵育条件
浓度、孵育温度和孵育时
不要随意改变二抗的孵育条件。
在干净的载玻片上滴一滴封片剂将爬片的细胞面扣在封片剂上。
只需满足能够完全覆盖盖玻片即可。
封片剂使用量过多会造成样品偏厚,以致使用高倍油镜时无法找到理想的焦面;
请勿挤压或大范围挪动盖玻片
避免擠压破坏细胞或组织的形态;
使用有颜色的指甲油将盖玻片四周
,避免封闭剂脱水收缩压缩组织样品。
先使用普通荧光显微镜镜检
如果熒光效果不错需要使用共聚焦显微镜进行拍摄,