absin买的试剂盒怎么用，怎么用呀

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-06-13 12:55 标签： 试剂盒怎么用

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储存/保存方法: 4℃保存6个月；避免反复凍融。

在正常细胞中磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡最早期膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，這一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象Annexin V是一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料, 它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V 与PI 匹配使用就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

操作步骤: 贴壁细胞需用 0.25%的胰酶消化注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加 2％嘚BSA可防止消化过度如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用 1×PBS或 1×binding buffer洗涤清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2+螯合影响Annexin V的结合。（1） 鼡去离子水将 10×Binding Buffer 稀释成 1×Binding Buffer；（2） 细胞收集：悬浮细胞收集：离心 5 分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（ 注：胰酶消化时间不宜过长否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC 的结合），在室温中2000rpm 离心 5～10 分钟，收集细胞；（3）

操作说明: （1） 使用前低速离心以免液体积存管盖和管壁；（2） 本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；（3） PI（propidium iodide溴化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；（4） Annexin V-FITC 和 PI 是光敏物质在操作时请注意避光。在处理和标记时尽可能在暗处进行。在孵育阶段用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞标记后在暗室内用显微镜观察；（5） 整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞尽量在 4℃下操作，以免影响细胞状态（6） 在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净以免 PBS 残留，有可能会影响实验结果（7） 为防止荧光衰变，宜在 1 小时内进行流式检测（8） PI 染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC 染色最短可在上机前 5 分钟再加入 PI 染色。

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