间充质干细胞填充面部凹陷能治疗尿道口凹陷和慢性损伤吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-01-17 05:07 标签： 干细胞填充面部凹陷

Tracking,DTT)对动物模型和治疗方法进行评估,創立核磁共振介导的大鼠创伤性脊髓空洞内定位移植的方法,进而探索骨髓间充质干细胞填充面部凹陷(Bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)移植修复慢性期脊髓损伤的疗效、最佳剂量及其作用机制方法1.动物模型制作以PSI-IH Impactor制作大鼠脊髓T10挫裂伤模型,连续6w每周对实验动物行BBB评分、核磁共振常规扫描、弥散张量成像和弥散纤维束示踪成像检测。2.脊髓空洞内定位移植以慢性期SCI大鼠为对象,以Fe_3O_4磁性纳米粒子为移植物,通过大鼠的体表定位,在MRI介导下分别行2次独立的8μl磁性纳米粒子脊髓空洞内定位移植3.BMSCs分离培养采用全骨髓分离法分离培养BMSCs,应用流式细胞仪和光镜下观察对细胞进行鉴定。4.BMSCs移植修复慢性期SCI以脊髓空洞内定位移植的方法,分别将DMEM、4×10~5、8×10~5和1×10~6的BMSCs移植到慢性期SCI动物模型的损伤区域移植后连续观察8周,分别采用BBB评分和旋转测试评估SCI大鼠功能恢复情况,采用样品的肉眼观察、MRI常规T2扫描、DTT和DTI分析、免疫荧光、HE染色的方法分析大鼠局部损伤区域变化,通过对脊髓组织切片的MAP2、Nestin、Tublin、GFAP、VEGF和BDNF的免疫荧光染色,探讨分析不同浓度BMSCs对慢性期脊髓损伤后神经细胞修复、胶质瘢痕清除、血管重塑及营养因子旁分泌的作用。结果1.成功建立大鼠慢性期SCI动物模型,本实验中动物无死亡及感染迹象,SCI后1w、2w、3w、4w、5w、6w的大鼠BBB评分为4.21±0.35、5.08±0.72、5.79±0.88、6.12±0.69、6.39±0.55、6.44±0.62,MRI常规扫描可见损伤区域胶质瘢痕清晰和髓内高信号液腔空洞,该空洞可分为3类即:中央型、分裂型、弥散型sci后局部损伤区域和液腔空洞于sci后1w、2w、3w、4w、5w、6w的体积分別为0mm~3、(0.21±0.35)mm~3、(2.21±0.44)mm~3、(3.18±0.82)mm~3、(3.27±0.79)mm~3和(3.31±0.73)mm~3。dti分析提示,sci后1w、2w、3w、4w、5w、6w损伤区域的adc值分别为(0.73)×10~(-6)mm~2/s、(0.11)×10~(-6)mm~2/s、(0.31)×10~(-6)mm~2/s、(0.51)×10~(-6)mm~2/s、(6.11)×10~(-6)mm~2/s和(0.73)×10~(-6)mm~2/s,fa值分别为0.30±0.06、0.31±0.07、0.32±0.07、0.33±0.09、0.34±0.08和0.34±0.082.mri介導下完成损伤空洞内定位移植,sci空洞体积由(5.71±0.21)mm~3降低至(3.23±0.36)mm~3,经过二次重复操作验证后,脊髓空洞的体积由(3.23±0.36)mm~3降低至(1.48±0.72)mm~3,移植操作成功,并且该方法具有鈳重复性。3.经流式细胞仪筛查分析,bmscs的免疫表型为:cd10~5、cd90和cd44阳性,cd45和cd34阴性,符合间充质干细胞填充面部凹陷的表型特征,并且提示细胞样品中不存在造血系统的细胞污染4.顺利完成细胞定位移植,移植后即刻进行mri扫描可见移植物位于损伤中心。实验动物无死亡、感染或致瘤迹象大鼠功能恢复评估结果提示,相较dmem组,细胞移植组均有不同程度的改善(p0.05),1×10~6细胞组改善最为明显。通过肉眼观察、mri常规扫描、dtt和dti分析、免疫荧光和he染色分析对大鼠局部损伤区域的变化分析,结果提示,相较dmem组,细胞移植组均有不同程度的改善(p0.05),1×10~6细胞组改善最为明显脊髓组织切片的map2、nestin、gfap、tublin、vegf和bdnf的免疫荧光染色结果提示不同浓度bmscs对慢性期sci后神经细胞的修复、胶质瘢痕清除、血管重塑及营养因子旁分泌作用疗效不同,其中1×10~6细胞组改善朂为明显。结论大鼠慢性期脊髓损伤模型于伤后4w成熟,弥散张量成像技术和弥散纤维束示踪成像是诊断和评估损伤程度及治疗手段的高效量囮方法,损伤局部骨髓间充质干细胞填充面部凹陷移植修复大鼠慢性期脊髓损伤是一种行之有效的修复手段骨髓间充质干细胞填充面部凹陷可通过其在神经细胞修复、胶质瘢痕清除、血管重塑及营养因子旁分泌的作用机制对慢性期脊髓损伤进行多层面的修复,本研究结果提示骨髓间充质干细胞填充面部凹陷修复大鼠慢性期脊髓损伤最佳适用剂量为5×10~6细胞/kg,为骨髓间充质干细胞填充面部凹陷移植的临床转化提供了┅定的依据。

【学位授予单位】：天津医科大学
【学位授予年份】：2016


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