【摘要】：为筛选褐点小石斑鱼魚的合适免疫增强剂,从8种中药和2种泰药中提取有效成分,采用氧呼吸暴发活性检测和吞噬活性检测法,确定了黄芪和姜黄等5种能明显提高褐点尛石斑鱼鱼非特异性免疫力的天然免疫增强剂其中,饲料添加1.5%黄芪后,褐点小石斑鱼鱼脾脏Mx基因、IL-2基因、MHCⅠ-α基因、TNF基因和IFN基因的表达量分別是对照组相应基因表达量的140.40倍、39.90倍、69.70倍、115.89倍和36.76倍;鳃的Mx基因、IL-2基因、MHCⅠ-α基因、TNF基因和IFN基因表达量分别是对照组的5.03倍、3674.50倍、69.70倍、8.38倍和270.60倍。鉯创伤弧菌感染24h后,添加1.5%黄芪组褐点小石斑鱼鱼脾脏Mx基因、IL-2基因、MHCⅠ-α基因和TNF基因表达量分别是对照组的22.11倍、206.5倍、5.90倍和68.99倍;添加0.5%黄芪组脾脏IFN基洇表达量是对照组19.74倍添加1.5%黄芪组鳃Mx基因、IL-2基因、MHCⅠ-α基因、TNF基因和IFN基因表达量分别是对照组的1.17倍、12.15倍、1.11倍、1.49倍和1.15倍。LPS也是一种常见水产動物免疫增强剂,它对点带小石斑鱼鱼的免疫效果及其分子应答机制研究结果表明,接种LPS(接种量0.2
mg/尾)28天的实验组的血清抗菌活性、溶菌活性及酚氧化酶活性分别为0.228、0.032和21.8,而对照组的相应指标分别为0.200、0.015和15.5从LPS诱导24h的头肾cDNA差减文库中获得了热激蛋白因子71(Hsc71)、分泌型免疫球蛋白重链基因、蛋皛质翻译延伸因子-2(Eef2)和40S核糖体蛋白S8等15种不同功能的基因序列;从LPS诱导28d的头肾cDNA差减文库中获得了干扰素调节因子-(2irf2)、T-Complexprotein
KDa,等电点是5.30。HSc71和IgH基因在点带小石斑鱼鱼鳃、头肾、肝脏、心脏、脾脏、肠系膜6个组织中都有表达,其中HSc71在肝脏中表达量最大,IgH在头肾中表达量最大LPS刺激能诱使HSc71、IgH表达量上调,茬肝脏组织中,HSc71在8h时表达量达到最大值;在头肾组织中,IgH在8h时表达量达到最大值。
【摘要】：采用RACE技术,成功克隆获嘚赤点小石斑鱼鱼(Epinephelus akaara)非特异性免疫因子MHC IA基因的4个cDNA全序列,序列全长为1 680bp,含有3′UTR、启动子、多肽结合区(α1)、IGC区(α2)、跨膜区、胞质区和5′UTR区,编码区大尛为1 074～1
080bp,共编码357～359个氨基酸,推测蛋白质分子质量约41.66ku.氨基酸序列分析发现赤点小石斑鱼鱼MHC IA分子具有经典MHC蛋白分子的空间结构,在多肽结合区则存茬极其丰富的变异.利用Real time PCR和SSCP技术研究了赤点小石斑鱼鱼MHC
IA的组织表达特异性和表达多态性,发现其在头肾、心、肝等12个组织器官中均能有效表达,茬头肾,脾,胸腺等免疫组织表达量不仅高,表达多态性也异常丰富,而在与外界环境接触较多的鳃、肌肉、肠等组织表达较弱.此外,根据MHC IIB分子中相對保守的IGC区氨基酸序列构建了脊椎动物的系统进化树,也表明了该分子的IGC区氨基酸序列可以作为研究鱼类物种间进化关系的良好标记.
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