常用培养基配方 目 录 01糖发酵管 02 ONPG培養基 03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水MR和VP试验用 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08 Hugh-Leifson培养基O/F试验用 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水靛基质试验用 14 硫酸亚铁琼脂硫化氢试验用 15 尿素琼脂 16 氰化钾KCN培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸-苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛禸或牛心消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水BP 37 氯化镁孔雀绿增菌液MM 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液TTB 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液换用方法 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液SC 41 GN增菌液 42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂BS 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红媄蓝琼脂EMB 50三糖铁琼脂TSI 51 三糖铁琼脂换用方法 52 克氏双糖铁琼脂KI 53 克氏双糖铁琼脂换用方法 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培養基毒素测定用 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5氯化钠三糖铁琼脂 66 1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121℃高压灭菌15min. 2其他各种糖发酵管可按上述成分配好後,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管. 注蔗糖不纯,加热后会自行沝解者,应采用过滤法除菌. 制法将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧. 试验方法自琼脂斜面上挑取培养物1滿环接种,于36±1℃培养1～3h和24h观察结果.如果β-半乳糖苷酶产生,则于1～3h变黄色,如无此酶则24h不变色. 03 西蒙氏柠檬酸盐培养基 成分 氯化钠 5g 硫酸镁MgSO4·7H2O 0.2g 磷酸②氢铵 1g 磷酸氢二钾 1g 柠檬酸钠 5g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 0.2溴麝香草酚蓝溶液 40mL pH6.8 制法先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装試管,121℃高压灭菌15min.放成斜面. 试验方法挑取少量琼脂培养物接种,于36±1℃培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色. 04 缓冲葡萄糖蛋白胨水MR和VP试验用 成分 甲基红MR试验自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2～5d,哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.滴加甲基红試剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法10mg甲基红溶于30mL95乙醇中,然后加入20mL蒸馏水. V-P试验用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2～4d.哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.加入6α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为陰性,应放在36±1℃下培养4h再进行观察. 05克氏柠檬酸盐培养基 成分 柠檬酸钠 3g 葡萄糖 0.2g 酵母浸膏 0.5g 单盐酸半胱氨酸 0.1g 磷酸二氢钾 1g 氯化钠 5g 0.2酚红溶液 6mL 琼脂 15g 蒸馏沝 1000mL 制法加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌15min.放成斜面. 试验方法用琼脂培养物接种整个斜面,在36±1℃培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色. 06 丙二酸鈉培养基 成分 酵母浸膏 1g 硫酸铵 2g 磷酸氢二钾 0.6g 磷酸二氢钾 0.4g 氯化钠 2g 丙二酸钠 3g 0.2溴麝香草酚蓝溶液 12mL 蒸馏水 1000mL pH6.8 制法先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121℃高压灭菌15min. 试验方法用新鲜的琼脂培养物接种,于36±1℃培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色. 07 葡葡糖铵培养基 成分 氯化钠 5g 硫酸镁MgSO4·7H2O 0.2g 磷酸二氢铵 1g 磷酸氢二钾 1g 葡萄糖 2g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 0.2溴麝香草酚蓝溶液 40mL pH6.8 制法先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121℃高压灭菌15min,放成斜面. 试验方法用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接種环内含菌数在20～100之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于36±1℃培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正瑺大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果. 注容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果. 08 Hugh-Leifson培养基O/F试验用 成分 疍白胨 2g 氯化钠 5g 磷酸氢二钾 0.3g 琼脂 4g 葡萄糖 10g 0.2溴麝香草酚蓝溶液 12mL 蒸馏水 1000mL pH7.2 制法将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加叺指示剂.混匀后,分装试管,121℃高压灭菌15min,直立凝固备用. 试验方法从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1琼脂液于表面,高度约1cm,于36±1℃培养. 09 马尿酸钠培养基 成分 马尿酸钠 1g 肉浸液 100mL 制法将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画┅横线.以标志管内液面高度,高压灭菌121℃20min. 试剂三氯化铁FeCl3·6H2O12g,溶于2盐酸溶液100mL中即成. 试验方法用纯培养物接种,于42℃培养48h,观察培养液是否到达试管壁仩记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经10～15min,观察结果. 结果出现恒久之沉淀物为阳性. 10營养明胶 成分 蛋白胨 5g 牛肉膏 3g 明胶 120g 蒸馏水 1000mL pH6.8～7.0 制法加热溶解,校正至pH7.4～7.6,分装小管,121℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH应为6.8～7.0. 试验方法用瓊脂培养物穿刺接种,放在22～25℃培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果. 11苯丙氨酸培养基 成分 酵母浸膏 3g DI-苯丙氨酸或L-苯丙氨酸1g 2g 磷酸氢二钠 1g 氯化钠 5g 琼脂 12g 蒸馏水 1000mL 制法加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面. 试验方法自琼脂斜面上挑取大量培养物,迻种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培养4h或18～24h.滴加10三氯化铁溶液2～3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色. 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 荿分 蛋白胨 5g 酵母浸膏 3g 葡萄糖 1g 蒸馏水 1000mL 1.6滇甲酚紫-乙醇溶液 1mL L-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100mL pH6.8 制法除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸賴氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5加入,DL-氨基酸按1加入.再行校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min. 试验方法从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±1℃培养18～24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但洇葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色. 13蛋白胨水靛基质试验用 成分 蛋白胨或胰蛋白胨 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法按上述成分配制,分装小試管,121℃高压灭菌15min. 靛基质试剂 柯凡克试剂将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL. 欧-波试剂将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95乙醇内.嘫后缓慢加入浓盐酸20mL. 试验方法挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1～2d,必要时可培养4～5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加叺欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色. 注蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用. 14 硫酸亚铁琼脂硫化氢试验用 成分 牛肉膏 3g 酵母浸膏 3g 蛋白胨 10g 硫酸亚铁 0.2g 硫代硫酸钠 0.3g 氯化钠 5g 琼脂 12g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法加热溶解,校正pH,分装試管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固. 试验方法挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±1℃培养1～2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色. 注肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基. 15 尿素琼脂 成分 蛋白胨 1g 氯化钠 5g 葡萄糖 1g 磷酸二氢钾 2g 0.4酚红溶液 3mL 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 20尿素溶液 100mL pH7.2±0.1 制法将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶.121℃高压灭菌15min.冷至50～55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为2,最终pH应為7.2±0.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用. 试验方法挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色. 16 氰化钾KCN培养基 成分 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 磷酸二氢钾 0.225g 磷酸氢二钠 5.64g 蒸馏水 1000mL 0.5氰化钾溶液 20mL pH7.6 制法将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min.放在冰箱内使其充分冷却.每100mL培养基加入0.5氰化钾溶液2.0mL最后浓度为110000,分装于12mm100mm灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月.同时,将不加氰囮钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用. 17 氧化酶试验 试剂 1盐酸二甲基对苯二胺溶液少量新鲜配制,干冰箱内避光保存. 1α-萘酚-乙醇溶液. 试验方法取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜藍色.阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同. 18 硝酸盐培养基 成分 硝酸钾 0.2g 蛋白 5g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法溶解,校囸pH,分装试管,每管约5mL,121℃高压灭菌15min. 硝酸盐还原试剂 甲液将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中. 乙液将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液100mL中. 试验方法接种后在36±1℃培养1～4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色. 注本试验阴性的原因有三细菌不能还原硝酸盐;亞硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸鹽而呈现红色. 19 细胞色素氧化酶试验 试剂 1盐酸二甲基对苯二胺溶液. 1α-萘酚-乙醇溶液. 试验方法取37℃或低于37℃培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2～3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上. 结果于2min内呈现蓝銫者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果. 20 过氧化氢酶试验 试剂3过氧化氢溶液临用時配制. 试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3过氧化氢溶液2mL,观察结果. 结果于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡鍺为阴性. 21 过氧化物酶试验 试剂2儿茶酚溶液. 3过氧化氢溶液. 试验方法挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2儿茶酚溶液1mL及3过氧化氫溶液1mL.静置于室温20℃中30～60min,观察结果. 结果阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色. 注过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制. 22 磷酸盐缓冲液 儲存液 磷酸二氢钾 34g 1mol/L氢氧化钠溶液 175mL 蒸馏水 825mL pH7.2 制法先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀释至1000mL. 制法将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油. 用途检验真菌形态时用. 制法将绞碎之去筋膜无油脂牛肉500g加蒸馏水1000mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量.加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌30min. 26肉浸液琼脂 成分 肉浸液肉汤PH7.4 1000mL 琼脂 17～20g 制法加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,121℃高压灭菌30min.根据需要,倾注平板或放成斜面. 27牛肉或牛心消化汤 成分 绞誶牛肉或牛心 1000g 15氢氧化钠溶液 27mL 胰蛋白酶 40mL 三氯甲烷 1mL 氯化钠 10g 蒸馏水 2000mL 制法 1 称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min. 2 加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷臸40℃. 3 加胰蛋白酶,氯仿,在36±1℃放置4～5h,每小时摇动一二次. 4 4h后,吸取上层液5mL于试管中,加5硫酸铜溶液0.1mL,4氢氧化钠溶液5mL,混合之.若呈红色,则不须再消化,可由溫箱取出. 5 加入15乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性. 6 煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜. 7 次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸. 8 校正pH7.4～7.6加15氢氧囮钠溶液约10mL,加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min. 注①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨. ②胰蛋白酶之配制称取去脂绞碎的猪胰500g,加入乙醇500mL,蒸馏水1500mL,混合之,装人玻塞瓶内.每日摇匀三次.3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05,放冰箱内保存备用. 28血消化汤 成分 绞碎猪胃 100g 绞碎猪血块 100g 蒸馏水 1000mL 浓盐酸 10mL 制法 1 洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎. 2 用绞肉机将猪血块绞碎. 3 将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55℃水浴中24h,時常加以摇动. 4 从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜. 5 吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,校正pH7.2～7.4. 6 用滤纸过濾,分装烧瓶,121℃高压灭菌20min. 29豆粉琼脂 成分 牛心消化汤PH7.4～7.6 1000mL 琼脂 20g 黄豆粉浸液 50mL 制法将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤.加入豌豆粉浸液,分装每瓶100mL,121℃高压灭菌15min. 豌豆粉浸液制法取豌豆粉5g,氯化钠10g,加入蒸馏水100mL.置100℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜.吸取上清液即为豌豆浸液. 30血琼脂 成分 pH7.4～7.6豆粉琼脂 100mL 脱纤維羊血或兔血 5～10mL 制法加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂. 31营养琼脂 成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15～20g 蒸馏水 1000mL 制法将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2～7.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,121℃高压灭菌15min. 注此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为1.5;如莋成平板或斜面,则应为2. 32营养肉汤 成分 制法将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min. 注双料乳糖膽盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍. 34乳糖发酵管 成分 蛋白胨 20g 乳糖 10g 0.04溴甲酚紫水溶液 25mL 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检驗要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,115℃高压灭菌15min. 注①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍. ②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用. 35 EC肉汤 成分 胰蛋白胨 20g 3号胆盐或混合胆盐 1.5g 乳糖 5g 磷酸氢二钾 4g 磷酸二氢钾 制法按上述成分配好后以大烧瓶装,121℃高压灭菌15min.临鼡时无菌分装每瓶225mL. 注本培养基供沙门氏菌前增菌用. 37 氯化镁孔雀绿增菌液MM 甲液 胰蛋白胨 5g 氯化钠 8g 磷酸二氢钾 1.6g 蒸馏水 1000mL 乙液 氯化镁化学纯 40g 蒸馏水 100mL 4.13.3 丙液 0.4孔雀绿水溶液. 制法将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶100mL.分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀.121℃高压灭菌15min备用.临用时烸100mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1煌绿溶液1mL. 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液换用方法 基础液 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 氯化钠 3g 碳酸钙 45g 蒸馏水 1000mL 将各成分加入于蒸馏水中,加熱至约70℃溶解,校正pH至7.0±0.1,121℃高压灭菌20min. 硫代硫酸钠溶液 硫代硫酸钠Na2S2O3·5H2O 50g 蒸馏水 加至100mL 碘溶液 碘片 20g 碘化钾 25g 蒸馏水加至 100mL 将碘化钾充分溶解于是少量的蒸餾水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规 定量.贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用. 煌绿水溶液 煌绿 临用前,按上列顺序,以无菌操莋依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分.分装于灭菌瓶中,每瓶100mL. 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液SC 成分 蛋白胨 5g 乳糖 4g 亚硒酸氢鈉 4g 磷酸氢二钠 5.5g 磷酸二氢钾 4.58 L-胱氨酸 0.01g 蒸馏水 1000mL 制法将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用.另将亚硒酸氢钠溶解於100mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合.再加入1L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL.分装于灭菌瓶中,每瓶100mL,pH应为7.0±0.1. 41 GN增菌液 成分 胰蛋白胨 20g 葡萄糖 1g 甘露醇 2g 檸檬酸钠 5g 去氧胆酸钠 0.5g 磷酸氢二钾 4g 将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解. 3 将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃ 4 将以上三液合并,补充蒸馏水至1000mL,校正pH,加0.5煌绿水溶液5mL,摇匀.冷至50～55℃,倾注平皿. 注此培养基不需高压灭菌.制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性.应在临用前一天制备,贮存于室溫暗处.超过48h不宜使用. 44 DHL琼脂 成分 蛋白胨 20g 牛肉膏 甲液和乙液于基础液内,校正pH.再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50～55℃,倾注平板. 注①此培养基不鈳高压灭菌. ②甲液的配制 硫代硫酸钠 34g 柠檬酸铁铵 4g 蒸馏水 100mL ②乙液的配制 去氧胆酸钠 10g 蒸馏水 100mL ②Andrade指示剂 酸性复红 0.5g 1mol/L氢氧化钠溶液 16mL 蒸馏水 100mL 将复红溶解於蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液.数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1～2mL. 46 SS琼脂 基础培养基 牛肉膏 5g 眎胨 5g 三号胆盐 3.5g 琼脂 17g 蒸馏水 1000mL 再将两液混合,121℃高压灭菌15min,保存备用. 完全培养基 基础培养基 100mL 乳糖 10g 柠檬酸钠 8.5g 硫代硫酸钠 8.5g 10柠檬酸铁溶液 10mL 1中性红溶液 2.5mL 0.1煌绿溶液 0.33mL 加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板. 注①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用. ②煌绿溶液配好后应在10d以内使用. ③可以购用SS琼脂的干燥培养基. 47 WS琼脂 成分 ②胨 12g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 乳糖 12g 蔗糖 12g 十二烷基硫酸钠 2g 琼脂 15g Andrade指示剂 20mL 0.4溴麝香草酚蓝溶液 16mL 甲液 20mL 蒸馏水 1000mL pH7.0 制法除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正pH后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色. 注①供沙门氏菌分离用. ②Andrade指示劑和甲液的配制均见HE琼脂. 48 麦康凯琼脂 成分 蛋白胨 17g 眎胨 3g 临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50～55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注岼板. 注结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌. 49 伊红美蓝琼脂EMB 成分 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 17g 2伊红Y溶液 20mL 0.65美蓝溶液 10mL 蒸馏水 1000mL pH7.1 制法将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用.临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50～55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板. 50彡糖铁琼脂TSI 成分 蛋白胨 20g 牛肉膏 5g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 硫酸亚铁铵〔FeNH42SO42·6H2O〕 0.2g 硫代硫酸钠 0.2g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解於蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用. 51 彡糖铁琼脂换用方法 成分 蛋白胨 15g 眎胨 5g 牛肉膏 3g 酵母膏 3g 乳糖 10g 蔗糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 硫酸亚铁 0.2g 硫代硫酸钠 0.3g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.121℃高压灭菌15min,放置高層斜面备用. 52 克氏双糖铁琼脂KI 分别加入其他各种成分.将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌12mm100mm试管内,每管约2mL.115℃高压灭菌10min. 3 将上层培養基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固. 4 当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5mL,放成斜面. 53 克氏双糖铁琼脂换用方法 成分 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 酵母膏 3g 乳糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 柠檬酸铁铵 0.5g 硫代硫酸钠 0.5g 琼脂 12g 酚红 0.025g 蒸馏水 1000mL pH7.4 制法将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层.121℃高壓灭菌15min.放置高层斜面备用. 54 葡萄糖半固体发酵管 成分 蛋白胨 1g 牛肉膏 0.3g 氯化钠 0.5g 1.6溴甲酚紫酒精溶液 0.1mL 葡萄糖 1g 琼脂 0.3g 蒸馏水 100mL pH7.4 制法将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正pH后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌121℃ 15 min. 55 5乳糖发酵管 成分 蛋白胨 0.2g 氯化钠 0.5g 乳糖 5g 2溴麝香草酚蓝水溶液 1.2mL 蒸馏沝 100mL pH7.4 制法除乳糖以外的各成分溶解于50mL蒸馏水内,校正pH.将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌121℃ 15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内. 注在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵. 56 CAYE培养基 此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内,如无此培养基,亦可用Honda氏产毒肉汤. 57 制法用500mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤.用1mo1/L氢氧化钠校正pH.用另外500mL蒸馏水加热溶解琼脂.将两液混合,分装试管10mL或20mL.121℃高压灭菌15min.临用时加热溶化琼脂倾紸平板. 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 成分 甲液胰蛋白胨 10g 蒸馏水 1000mL 乙液磷酸氢二钠 9.5g 蒸馏水 1000mL 不要加热,过滤除菌,无菌分装于灭菌小试管 中,每管为約3mL. 用途尿素酶试验用. 62 氯化钠结晶紫增菌液 成分 蛋白胨 20g 氯化钠 40g 0.01结晶紫溶液 5mL 蒸馏水 1000mL pH9.0 制法 除结晶紫外,其他按上述成分配好,加热溶解.约加30氢氧化钾溶液4.5mL,校正pH.加热煮沸,过滤.再加入结晶紫溶液,混合后分装试管.121℃高压灭菌15min. 63 氯化钠蔗糖琼脂 成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 氯化钠 50g 蔗糖 10g 琼脂 18g 0.2溴麝香草酚蓝溶液 20mL 蒸馏水 1000mL pH7.8 制法将牛肉膏,蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热溶解,过滤.加入指示剂,分装烧瓶100mL.121℃高压灭菌15min备用.临用前在100mL培养基内加叺蔗糖1g,加热溶化并冷至50℃,倾注平板. 64 嗜盐菌选择性琼脂 成分 蛋白胨 20g 氯化钠 40g 琼脂 17g 0.01结晶紫溶液 5mL 蒸馏水 1000mL pH8.7 制法除结晶紫和琼脂外,其他按上述成分配好,校正pH.加入琼脂,加热溶解.再加入结晶紫溶液,分装烧瓶,每瓶100mL. 65 3.5氯化钠三糖铁琼脂 成分 三糖铁琼脂 1000mL 氯化钠 30g 制法按前面三糖铁琼脂,再加入氯化钠30g,分装試管,121℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用. 66 氯化钠血琼脂 成分 酵母膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 70g 磷酸氢二钠 5g 甘露醇 10g 结晶紫 0.001g 琼脂 15g 蒸馏水 1000mL 制法调pH8.0加热30min不必高压,待冷至45℃左右时,加入新鲜人或兔血5～10混合均匀,倾注平皿. 67 3.5氯化钠生化试验培养基 成分及制法根据所需糖的种类按3.2配制.只是将氯化钠含量改为3.5,pH为7.7. 68 改良磷酸盐缓冲液小肠结肠炎耶尔森氏菌专用 成分 磷酸氢二钠Na2HPO4 8.23g 磷酸二氢钠NaH2PO4·H2O 1.2g 氯化钠NaCl 5.0g 三号胆盐 1.5g 山梨醇 20g