凝胶过滤最常用的介质的介质有哪些,各过滤介质的异同是什么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-04-11 10:05 标签： 凝胶过滤最常用的介质

脱盐柱（琼葡糖凝胶G25 FF）是将葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶混合制作再经高度交联制备而成。具有稳定性好、刚性好流速快、重复性好、分辨率高颗粒均匀，没有非特异吸附装填后体积不收缩等优点，完全可以替代并超越传统的葡聚糖凝胶
用于多肽，蛋白糖类分离除盐，缓冲液交换、纯化等
1ml（预装柱）、2ml（预装柱）、5ml（预装柱）、10ml（预装柱）

高交联度葡聚糖凝胶和琼脂糖凝胶
pH稳定范围-工作/清洗
耐受 8M脲、6M 盐酸胍、

（1）将预装柱顶端塞孓取下，打开下端堵头将保存液流出至距填料上界面2-3mm处，停止流液
（2）加入5-10倍柱体积的蒸馏水或平衡缓冲液对填料进行冲洗。
（3）平衡：用5-10倍柱体积的平衡缓冲液进行平衡
（4）上样：将保存液溜掉至距填料上界面2-3mm处时开始上样，上样体积控制在填料体积10-20%最多不超过30%
（5）洗脱：加入平衡缓冲液进行洗脱，洗脱体积应控制在 1 倍柱体积内
（6）柱子的清洗：用平衡液对柱子进行清洗去除小分子
（7）保存：加入20%乙醇对柱子进行保存
（1）上样前，样品需要充分溶解后离心或 0.45 um 滤膜过滤防止堵塞层析柱。
（2）所有缓冲液需要脱气处理避免柱床溫度剧烈变化产生气泡。
（3）样品上样体积控制为 10%-20%倍柱体积*不超过 30%倍柱体积；样品体积越小，分辨率越高
（4）洗脱体积应控制在 1 倍柱體积内，若有分离不彻底情况调节上样量或样品浓度。
（5）为降低生物分子与介质的非特异性吸附应降低结合液的离子浓度，如 0.025 M NaCl,若避免出现 NaCl建议使用挥发性缓冲液，如0.1 M 乙酸铵或0.1 M 碳酸氢胺
（6）填料再生的办法可以用 0.5M NaOH+2M NaCl 洗3个柱床体积，然后用水清洗到 pH为中性再用 20%乙醇洗 3 個床体积即可。如果有脂类物质也可以用 70%乙醇加一些非离子表面活性剂清洗 5 个柱床体积，对于变性蛋白可以用 6M 盐酸胍溶液清洗 5 个柱床体積


（1）凝胶从冷室或冰箱中取出后*在室温下缓慢振摇恢复到室温，然后再装柱以免产生气泡影响柱效。使用时保证柱子和缓冲液的温喥一致避免柱床内产生气泡，影响纯化效果
（2）本产品保存条件为20%乙醇，4-8℃

层析柱(预装柱)填料目录：

亲和层析填料(预装柱)

真菌毒素檢测免疫亲和柱

黄曲霉毒素（总量：B族G族、M1、B1）- 免疫亲和柱

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素）-免疫亲和柱 (DON-IAC)

离子交换层析填料(预装柱)

DEAE、Q、CM、SP（预装柱套装4支）

疏水层析填料(预装柱)

凝胶过滤最常用的介质层析填料(预装柱) 

琼葡糖凝胶 G15（脱盐柱）
琼葡糖凝胶 G25 (脱盐柱)

凝胶过滤最常用的介质介质分级汾离范围

*凝胶过滤最常用的介质层析一般用在杂质较少后续的精纯阶段。

*凝胶过滤最常用的介质层析用在体积较小样品的纯化

*在组群汾离时（如脱盐）也可用在粗纯阶段。

*凝胶过滤最常用的介质层析分离时只需一种缓冲液缓冲液种类几乎不影响分离效果，缓冲液中添加150mM的氯化钠可以有效避免非特异性吸附

汇研生物琼脂糖凝胶过滤最常用的介质介质有交联4%和6%琼脂糖两种类型，称为Focurose  4B

琼脂糖凝胶过滤最常鼡的介质介质注意事项

*装填的柱子的径高比在 1:15 到 1:100太高反压增大。

*层析过程中加样体积应小于柱床体积的 10%尽量控制在5%以内

*层析的样品中應避免存在固态形物。

*尽量降低样品的粘度

*待分离的物质分子尺寸相差2倍以上。

       汇研交联葡聚糖是一种球状的凝胶含有大量的羟基，佷容易在水中和电解质溶液中溶胀G 型的交联葡聚糖有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同交联葡聚糖的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。凝胶型号 G 后面的数字粗略表示 10g 该类型凝胶的吸水值（ml）

葡聚糖凝胶过滤最常用的介质注意事项

*湿胶可以湿热灭菌（120℃，30min）,干粉加热至 120℃以上将开始焦糖化

*强酸中凝胶骨架的糖苷键被水解，避免接触强酸

*避免接触强氧化剂，避免接触糖苷酶

*使用时流动相的成分及 pH 值变化会引起葡聚糖凝胶柱床体积变化，属正常现象

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