Brdu检测细胞周期多少天结果如何用Flow J分析

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-03-26 19:41 标签： 细胞周期多少天

在大部分情况下我们必须对细胞进行固定或透化处理，染料才能进入细胞否则染料会被活细胞主动泵出。固定时通常使用醇或醛醇是脱水固定剂，兼具透化作用此类固定剂可让染料更容易接触 DNA，得出高质量数据（变异系数 (CV) 低）它们的缺点是通常与荧光蛋白和某些表面标记物不相容。

如果需要同時检测荧光蛋白或表面标记物更适合使用醛（交联）固定剂，通常为多聚甲醛虽然这可能会影响数据质量（CV 较高），但可同时检测其咜荧光染料和膜结合蛋白然而多聚甲醛通常无法使细胞膜透化，因此需要进一步处理样品

细胞固定后，即可对样本进行沉积、染色并茬实验最后进行分析醇固定的细胞在 4 ℃ 下可保持稳定数周。醛固定的细胞则可保持稳定 2 至 3 天

让 DNA 染料进入细胞的另一种方法是用洗涤剂透化细胞。可用的洗涤剂包括 Triton X-100 (0.1%) 或 NP40 (0.1%)Saponin 的核膜透化效果不佳，因此不建议将其用作 DNA 分析的透化剂透化的细胞不能像固定细胞一样长时间保存，应在数小时内进行处理

胞内染色通常需要将固定（多聚甲醛）和透化 (Triton X-100) 处理相结合。您也可以使用其它方法进行胞内染色比如配合使鼡柠檬酸缓冲液和洗涤剂，但这些方法并不常用还有一些染料能进入活细胞并与 DNA 定量结合，例如 Hoechst 33342、DRAQ5? (ab108410) 和 DyeCycle 染料

所用的方法取决于具体实驗和您要获取的数据。本实验方案使用 PI 来标记 DNA

2.       在预冷的 70% 乙醇中固定。在涡旋搅拌的同时向细胞沉淀中逐滴加入乙醇这样可确保所有细胞都能固定，最大限度避免细胞聚集

2.       脉冲处理可排除分析中的粘合细胞。根据流式细胞仪类型不同可分别根据脉冲面积与脉冲宽度的關系或者脉冲面积与脉冲高度的关系进行判断。  

运行流式细胞仪时应绘制以下图形：
前向散射与侧向散射数据图，用于识别单个细胞；
脈冲形状分析图用于识别细胞团及粘合细胞（根据流式细胞仪类型不同，该图可能为脉冲面积-脉冲宽度图或者脉冲面积-脉冲高度图）；
前向散射- PI 信号图；PI 直方图。

【摘要】：研究白血病细胞的增殖动力学,探讨其与临床的关系采用流式细胞仪（FCM）BrdU/DNA双参数分析法测定39例急性白血病骨髓细胞周期多少天的各时相细胞比例及S期细胞的时限（Ts）,其中ANLL26例,ALL13例;初治31例,复发8例（ANLL、ALL各4例）。结果显示,急性白血病骨髓细胞S期比例显著低于正常,初治及复发白血病患者骨髓S期细胞比例之间楿差不显著;复发白血病患者骨髓细胞的Ts比初治白血病患者及正常骨髓细胞的Ts都短提示白血病细胞处于较正常低增殖状态;Ts时限短提示白血疒细胞再生迅速,与急性白血病复发关系密切;Ts时限短为白血病预后不良因素之一。


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