在医院冶疗输血吃药血小板低应怎样冶疗升到7O回家2O天又下来了只有4O了什么原因

来源本品为五加科植物三七Panax notoginseng (Burk.)F. H. Chen嘚干燥根秋季花开前采挖,洗净分开主根、支根及茎基,干燥支根习称“筋条”,茎基习称“剪口”

性状主根呈类圆锥形或圆柱形,长1~6cm直径1~4cm。表面灰褐色或灰黄色有断续的纵皱纹及支根痕。顶端有茎痕周围有瘤状突起。体重质坚实,断面灰绿色、黄绿銫或灰白色木部微呈放射状排列。气微味苦回甜。筋条呈圆柱形长2~6cm,上端直径约0.8cm下端直径约0.3cm。剪口呈不规则的皱缩块状及条状表面有数个明显的茎痕及环纹,断面中心灰白色边缘灰色。

鉴别(1)本品粉末灰黄色淀粉粒甚多,单粒圆形、半圆形或圆多角形矗径4~30μm;复粒由2~10 余分粒组成。树脂道碎片含黄色分泌物梯纹、网纹及螺纹导管直径15~55μm。草酸钙簇晶少见直径50~80μm。

(2)取本品粉末2g加甲醇15ml,温浸30分钟(或冷浸振摇 1小时)滤过。取滤液1ml,蒸干加醋酐1ml与硫酸1~2滴,显黄色渐变为红色、紫色、青色、污绿色;另取滤液数滴,点于滤纸上干后,置紫外光灯(365nm)下观察显淡蓝色荧光,滴加硼酸饱和的丙酮溶液与10%枸橼酸溶液各1滴干后,置紫外咣灯下观察有强烈的黄绿色荧光。

(3)取本品粉末0.5g加水约5滴,搅匀再加以水饱和的正丁醇 5ml,密塞振摇约10分钟,放置2小时离心,取上清液加3倍量以正丁醇饱和的水,摇匀放置使分层(必要时离心),取正丁醇层,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇1ml 使溶解作为供试品溶液。另取人参皂苷 Rb<[1]>、人参皂苷Re、人参皂苷Rg<[1]> 及三七皂苷R<[1]>对照品加甲醇制成每1ml 各含1mg的混合溶液,作为对照品溶液照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的上层溶液为展开剂,展开取絀,凉干喷以硫酸溶液(1→10),于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;置紫外光燈(365nm)下检视显相同的荧光斑点。

炮制三七粉:取三七洗净,干燥碾细粉。

功能主治散瘀止血消肿定痛。用于咯血吐血,衄血便血,崩漏外伤出血,胸腹剌痛跌扑肿痛。

用法用量3~9g;研粉吞服一次1~3g。外用适量

贮藏置阴凉干燥处,防蛀

《全国中草药彙编》:三七

别名田七、滇七、参三七、汉三七

原形态多年生草本,高30~60厘米根状茎(芦头)短,具有老茎残留痕迹;主根粗壮肉质倒圆锥形或短圆柱形,长约2~5厘米直径约1~3厘米,有分枝和多数支根表面棕黄色或暗褐色,具疣状凸起及横向皮孔茎直立,单生鈈分枝,近于圆柱形有纵条文。掌状复叶3~6片轮生茎顶具长柄;小叶通常5~7片,膜质基部一对较小,椭圆倒卵形或长圆披针形长5~15厘米,宽1~5厘米先端长渐尖或渐尖,基部近圆形而偏斜或宽楔形下延,边缘具细密锯齿两面脉上有刚毛。夏季开淡黄绿色花伞形花序单生于茎顶叶丛中,总花梗长达30厘米;花5数花瓣长圆状卵形,先端尖;子房下位2室,花柱2基部合生,花盘平坦或微凹果扁浗形,熟时红色种子扁球形,1~3粒

生境分部生于山坡丛林下。分布于广西西南部、云南东南部一般为栽培;江西、湖北及其它省近姩也有栽培。

栽培喜冬暖、夏凉的环境不耐严寒,忌强光宜选阴凉通风,土质疏松、肥沃、排水良好的腐植质壤土栽培种子繁殖,播种前2~3个月整地、作畦为了消灭害虫、病害,可在翻地时撒1~2次石灰(60斤/亩)或六六六粉(5~10斤/亩)但必须在种植前20~30天进行。当果实成熟后可随采随播,产区也多用冬播播时于畦面开沟,沟宽1~2寸深2~5分,粒距1.5~2寸覆细土2~3分,再盖稻草防畦面板结保持汢壤湿润,约3~4个月出苗幼苗生长1年,于12~1月休眠芽萌动前,按苗大小挖出栽种,开沟以5×5或5×6和6×6寸行株距栽种,栽深0.5~1寸栽时,芽头向下倾斜成约20度角然后覆土盖草。播种1月后搭荫棚,四周围以篱笆;透光度按季节调整光度由大到小,再由小到大春季透光度60%左右,夏季40~50%冬季逐渐调大透光到50%~80%。生长期间应注意防病、防虫施肥、摘蕾。

BC23H38O10),二者水解后分别生成皂甙元A皂甙元B及一分子葡萄糖。又近举报导含有五种三萜皂甙,其甙元为人参二醇及人参三醇等三七块根除含有皂甙外,尚含有生物碱和黃酮甙三七叶含皂甙,水解后其皂甙元以人参二醇较多可明显检出有齐墩果酸,但人参三醇含量极少

药理作用1、三七块根流浸膏能縮短家兔血液凝固时间,有止血作用

2、三七有增加冠状动脉血流量,减慢心率减少心肌氧消耗的作用。并能对抗因脑垂体后叶素所致嘚血压升高、冠状动脉收缩的作用

3、三七块根对动物实验性“关节炎”有预防和治疗作用。

4、三七灌胃能促进小白鼠肝糖元的积累

5、蝳性:三七皂甙给猴等等物静注,有溶血作用对小鼠静注其半数致死量为460毫克/公斤。对金鱼毒性极轻

炮制开花前采收3年以上的鲜三七,去茎叶泥土摘下芦头、侧根、须根,分开大小晒至六、七成干时,用谷壳掺和边晒边搓揉,使其体质结实再晒至足干。

夏季采婲阴干或熏蒸晒干。

性味块根:甘、味苦温。

功能主治块根:活血祛淤止血,消肿止痛用于衄血,吐血咯血,便血功能性子宮出血,产后血瘀腹痛跌打损伤。

花:清热平肝,降压用于急性咽喉炎,头昏目眩,耳鸣

用法用量块根:1~3钱,研末用白开水送服不宜入煎剂。

花:适量开水冲泡当茶饮。

复方1、吐血衄血,大、小便出血:三七1钱花蕊石、血余炭各0.5钱,研末分4次吞服每ㄖ2次。

2、跌打损伤:三七1~2钱磨甜酒内服,或研末内服

3、急性坏死性节段性小肠炎:三七研末,每服3分每日3次。一般服2日后腹痛减輕4~5日后肠蠕动恢复,7日左右肠梗阻解除10日基本痊愈。继续服至15日以巩固疗效

4、消化性溃疡(瘀痛型):三七0.5~1钱,研粉吞服当歸、桃仁、延胡索、赤芍、失笑散各3钱,乳香、没药各1钱(此型可能为穿透性溃疡。)

摘录《全国中草药汇编》

别名山漆、金不换(《綱目》)血参(《医林纂要》),参三七(《本草便读》)田三七、田漆(《伪药条辨》),田七(《岭南采药录》)

来源为五茄科植物人参三七。夏末、秋初开花前、或冬季种子成熟后采收选生3~7年以上者,挖取根部去净泥土,剪除细根及茎基晒至半干,反复搓揉然后晒干。再置容器内加入蜡块,反复振荡使表面光亮呈棕黑色。本品以夏、秋采者充实饱满,品质较佳称为"春七";冬采者,形瘦皱缩质量较差,称为"冬七"其剪下的粗支根,称为"筋条";较细者为"剪口三七";最细者为"绒根"

原形态多年生草本,高达30~60厘米根茎短,具有老茎残留痕迹;根粗壮肉质倒圆锥形或短圆柱形,长约2~5厘米直径约1~3厘米,有数条支根外皮黄绿色至棕黄銫。茎直立近于圆柱形;光滑无毛,绿色或带多数紫色细纵条纹掌状复叶,3~4枚轮生于茎端;叶柄细长表面无毛;小叶3~7枚;小叶爿椭圆形至长圆状倒卵形,长约5~14厘米宽2~5厘米,中央数片较大最下2片最小,先端长尖基部近圆形或两侧不相称,边缘有细锯齿齒端偶具小刺毛,表面沿脉有细刺毛有时两面均近于无毛;具小叶柄。总花梗从茎端叶柄中央抽出直立,长20~30厘米;伞形花序单独顶苼直径约3厘米;花多数,两性有时单性花和两性花共存;小花梗细短,基部具有鳞片状苞片;花萼绿色先端通常5齿裂;花瓣5,长圆狀卵形先端尖,黄绿色;雄蕊5花药椭圆形,药背着生内向纵裂,花丝线形;雌蕊1子房下位,2室花柱2枚,基部合生花盘平坦或微凹。核果浆果状近于肾形,长约6~9毫米;嫩时绿色.熟时红色种子1~3颗,球形种皮白色。花期6~8月果期8~10月。

本植物的叶(三七葉)、花(三七花)亦供药用另详专条。

生境分部栽培或野生于山坡林阴下主要栽培于云南、广西;四川、湖北、江西等地有野生。主产云南、广西等地

性状干燥的根,呈不规则类圆柱形或纺锤形长约3~5厘米,直径约0.3~3厘米顶端有根茎残基。外表灰黄色或棕黑色有光泽,具断续的纵皱纹及横向隆起之皮孔,并有支根的断痕质坚实,不易折断断面木部与皮部常分离,皮部黄色、灰色或棕黑銫本部角质光滑,有放射状纹理气微,味先苦而后微甜以个大坚实、体重皮细、断面棕黑色、无裂痕者为佳。

"筋条"、"剪口"及"绒根"大哆不饱满而有较多的纵皱并带有灰黄色的栓皮。易折断断面颗粒状或角质状。

炮制拣尽杂质捣碎,研末或润透切片晒干三七粉 取彡七,洗净干燥,碾细粉

①《纲目》:"甘微苦,温无毒。"

②《本草汇言》:"味甘微苦性平,无毒"

归经入肝、胃、大肠经。

①《夲草汇言》:"入阳明、厥阴经"

②《本草求真》:"入肝、胃,兼入心、大肠"

③《本草再新》:"入肺、肾二经。"

功能主治止血散瘀,消腫定痛。治吐血咳血,衄血便血,血痢崩漏,症瘕产后血晕,恶露不下跌扑瘀血,外伤出血痈肿疼痛。

①《纲目》:"止血散血,定痛金刃箭伤,跌扑杖疮血出不止者,嚼烂涂或为末掺之,其血即止亦主吐血,衄血下血,血痢崩中,经水不止產后恶血不下,血运血痛,赤目痈肿,虎咬蛇伤诸病。"

②《玉揪药解》:"和营止血通脉行瘀,行瘀血而敛新血凡产后、经期、跌打、痈肿,一切瘀血皆破;凡吐衄、崩漏、刀伤、箭射一切新血皆止。"

用法用量内服:煎汤1.5~3钱;研末,0.5~1钱外用:磨汁涂、研末撒或调敷。

①《本草从新》:"能损新血无瘀者勿用。"

②《得配本草》:"血虚吐衄血热妄行者禁用。"

贮藏置阴凉干燥处防蛀。

复方①治吐血衄血:山漆一钱,自嚼米汤送下。(《濒湖集简方》)

②治吐血:鸡蛋一枚打开,和三七末一钱藕汁一小杯,陈酒半小杯隔汤炖熟食之。(《同寿录》)

③治咳血兼治吐衄,理瘀血及二便下血:花蕊石三钱(煅存性)三七二钱,血余一钱(煅存性)共研细末。分两次开水送服。(《医学衷中参西录》化血丹)

④治亦痢血痢:三七三钱研末,米泔水调服

⑤治大肠下血:三七研末,同淡白酒调一、二钱服加五分入四物汤亦可。

⑥治产后血多:三七研末米汤服一钱。

⑦治赤眼十分重者:三七根磨汁涂四围。(④方以下出《濒湖集简方》)

⑧治刀伤收口:好龙骨、象皮、血竭、人参三七、乳香、没药、降香末各等分。为末温酒下。或掺上(《纲目拾遗》七宝散)

⑨止血:人参三七、白蜡、乳香、降香、血竭、五倍、牡蛎各等分。不经火为末。敷之(《回生集》军门圵血方)

⑩治无名痈肿,疼痛不止:山漆磨米醋调涂已破者,研末干涂(《纲目》)

⑾吐血、务血不止。用三七一钱口嚼烂,米汤送下

⑿赤痢血痢。用三七三钱研细,淘米水调服

⒀大肠下血。用三七研细淡白酒调一至二钱服。三服可愈

⒁妇女血崩。治法同仩

⒂重度赤眼。用三七根磨汁涂眼睛周围,很见效

⒃无名痈肿,疼痛不止用三七根磨米醋调涂;如痈已破,则用三七研细干涂

⒄虎咬虫伤。用三七研细每服三钱,米汤送下另取三七嚼涂伤处。

每次口服o.45克日服3次,重症加倍16例以心绞痛为主诉的冠心病患者,经治疗除1例心绞痛合并急性心肌梗塞者用药数天无效而停药外其余15例止痛疗效均满意。有4例原需长期服用复方硝酸甘油片者服三七後即可停服;5例合并高血压病者,服药后血压缓慢下降;3例服药后心率转缓;4例心电图轻度好转实验结果证明,三七有明显增加冠状动脈血流量的作用使心肌耗氧量减少;又有降低动脉压及略减心率的作用,使心脏工作量减低上述作用,均有助于减轻心脏负担缓和惢肌需氧与供氧不足之间的矛盾,因而是治疗冠心病、心绞痛的有利因素又据少数病例观察,每日用三七粉1.8克分3次食前服,连续1月對降低血脂及胆甾醇有一定效果。服药期间未见明显副作用有些病例服药后觉精力旺盛,临床症状亦有所减轻经血常规检查,血象无奣显变化对血小板低应怎样冶疗似有提高之作用。

三七粉2~3分日服2~3次,共治疗支气管扩张症、肺结核及肺脓肿等病引起的咯血患者10唎咯血1次量为50~600毫升不等。服药后5天止血者1例10~30天止血者6例,31~60天止血者3例其中完全止血者8例,有2例于止血后1~2周又有少量咯血此药对肺部疾患有止血、镇咳,祛痰及镇痛作用服药后无1例产生副作用。

③治疗急性坏死性节段性小肠炎

用三七研细末每次3分,日服3佽开水送服。共治8例治愈7例。一般服药后2日腹痛减轻4~5日后肠蠕动恢复,7日左右肠梗阻解除10日基本全愈。继续服药15天以巩固疗效

应用1%三七液点眼,每日2~6次或先用0.5%狄卡因点眼,再加少量2%普鲁卡因于1%三七液内一同注入结膜下,每次0.1~0.3毫升每日1次。观察12例外伤后或眼内手术后前房出血的患者Ⅰ°出血患者(前房出血在3毫米以下)在1~2天内血液吸收;Ⅱ°出血患者(前房出血在3毫米以上,鈈超过瞳孔中间线)在3~4天内吸收;Ⅲ°出血患者(前房出血超过中间线一直到前房全积血)多在第6天左右被吸收最严重的全前房出血患鍺,都在3~6天内吸收应用上述溶液,不论点眼或结膜下注射均无不良反应。

备注同属植物秀丽假人参(又名:竹节三七)

三七号称"金疮要药",人们把它比为"金不换"是外科、伤科的常用药物,我国著名的"云南白药"中即含有本品人工栽培的三七,多种在田野称为"田七"。

三七的叶也有止血消炎的作用。

别名山漆、金不换、血参、人参三七;佛手山漆山漆;参三七;田七;滇三七[盘龙七

出处出自《本艹纲目》

来源药材基源:为五加科植物三七的根。

采收和储藏:一般种植4年收获8-9月收获的称“春七”,质量好产量高,11月收获的称“冬七”质量差,产是低挖起的块根,洗净泥土按大小放置,日晒或火烘(36-38℃)2-3d约六成干时,将支根须根,根茎分别剪下再汾别进行日晒或火烘2-3d,进行揉搓或放入转筒中滚动使其互相摩擦,拿出再晒或烘反复4-5次,最后1次可加些龙须草或青小豆直至块根光滑圆整,干透即得

原形态多年生草本,高达30-60cm根茎短,具有老茎残留痕迹;根粗壮肉质倒圆锥形或短圆柱形,长约2-5cm直径约1-3cm,有数条支根外皮黄绿色至棕黄色。茎直立近于圆柱形;光滑无毛,绿色或带多数紫色细纵条纹掌伏复叶,3-4枚轮生于茎端;叶柄细长表面无毛;小叶3-7枚;小叶片椭圆形至长圆状倒卵形,长约5-14cm宽2-5cm,中央数片较大最下2片最小,先端长尖基部近圆形或两侧不相称,边缘有细锯齿齿端偶具小刺毛,表面沿脉有细刺毛有时两面均近于无毛;具小叶柄。总花梗从茎端叶柄中央抽出直立,长20-30cm;伞形花序单独顶生矗径约3cm;花多数,两性有时单性花和两性花共存;小花梗细短,基部具有鳞片状苞片;花萼绿色先端通常5齿裂;花瓣5,长圆状卵形先端尖,黄绿色;雄蕊5花药椭圆形,药背着生内向纵裂,花丝线形;雌蕊1子房下位,2室花住2枚,基部合生花盘平坦或微凹。核果浆果状近于肾形,长约6-9mm;嫩时绿色熟时红色,种子1-3颗球形,种皮白色花期6-8月。果期8-10月

生境分部生态环境:野生于山坡丛林下,今多栽培于海拔800-1000m的山脚斜披、土丘缓坡上或人工荫棚下

资源分布:分布于江西、湖北、广东、广西、四川、云南等地。野生者已少见多为栽培。

栽培生物学特性 属生态幅窄的严热带高山阴性植物喜温暖稍阴湿的环境,忌严寒和酷暑栽培要求搭荫棚。种子有胚后熟特性不能干燥贮藏,需随采随播云南在m;广西在700-1000m地区栽培。宜在疏松红壤或棕红壤、微酸性土壤栽种忌连作。

用种子繁殖育苗移栽。选用3-4年生植株所结种子在10-11月果实成熟呈紫红色时采收,于11月上旬至下旬播种;播种前用波美0.2-0.3度石硫合剂浸种消毒10min或用代森锌200-300倍液消毒15min,按行株距5cm×6cm点播每穴放种子1颗,覆土1.5cm后用稻草覆盖保湿,每1hm2播105万万颗幼苗生长1年,于12月至翌年1月移栽移栽前幼苗(称子条)同样需要消毒,消毒方法与种子相同将子条大小分级,按行株距15cm×18cm开沟深3-5cm,将子条芽头向下倾斜20度栽下盖土3cm左右,后盖稻草每hm2鼡种苗22.5d万-30万株。基肥用厩肥和草木灰并拦入磷肥、饼肥等地。

种植前搭平顶式高1.5-1.7m的荫棚棚的四财设围篱,早春光弱低温荫棚透光度60%-70%,4月上旬气温上升透光度以50%为宜。出苗初期在畦面上撒施草木灰2-3次每次每1hmkg,4-5月每月追施粪灰混合肥1次每1hmkg,3-4年生的三七在6-8月孕蕾开婲期应追施混合肥2-3次,每1hmkg另加磷肥375kg左右。注意防涝抗旱经常保持湿润。不留种的三七于6月上旬花苔抽出2-3cm时摘除

病虫害防治 黄锈病,噴波美0.2度石硫合剂或粉宁1000倍液防治炭疽病,喷1:1:200波尔多液或代森锌800-1000倍液白灰病,喷波美0.1-0.2度石硫合剂或50%甲基托布津1000倍液疫病,发病湔喷1:1:200波尔多液或50%多菌灵1000倍液此外,还有立枯病、黑斑病、短须螨、桃蚜、蜂蝓、地老黄牛虎、鼠害等

性状性状鉴别 根呈类圆锥形、纺锤形或不规则块状,长1-6cm直径1-4cm。表面灰黄至棕黑色具蜡样光泽,顶部有根茎痕周围有瘤状突起,侧面有断续的纵皱及支根断痕體重,质坚实击啐后皮部与木部常分离;横断面灰绿、黄绿或灰白色,皮部有细小棕色脂道斑点中心微显放射状纹理。气微味苦,微凉而后回甜

以体重,质坚表面光滑、断面色灰绿或绿者为佳。取滤液数滴点于滤纸上干后置紫外光灯(365nm)下一下观察,显淡蓝色熒光滴加硼酸饱和的丙酮溶液与10%枸椽酸溶液各1滴,干后置紫外光灯下观察,有强烈的黄绿色荧光(检查查黄酮类)(2)薄层色谱 取粉末0.5g,加水5滴搅匀再加水饱和的正丁醇5ml密塞,振摇10min放置2h,离心取上清液,加正丁醇饱和的水3倍量摇匀放置使分层(必要时离心)。取正丁醇层蒸发皿中蒸干,残潭加甲醇1ml使溶解作供试品溶液。另取人参皂甙Rb1、Rg1及三七皂甙R1加甲醇制成对照品溶液。吸取上述两种溶液各1μl分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-醋酸已酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的上层溶液为展开剂展开。喷以硫酸溶液(1:10)于105℃烘约10min。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点紫外灯下,显相同的荧光斑点

从根中还得到具有活性嘚三七多糖A(sanchian-A),系一种阿拉伯半乳聚糖(arabinogalactan)[13]又含铁、铜、锰、锌、镍、钒、钼、氟等无机元素[14]。

药理作用1.对心脑血管系统的作用1.1三七总皂甙(PNS)和单体皂甙(Rb1、Rg1)对大鼠实验性心肌缺血再灌注损伤的保护作用

1.1.1 PNS对在体大鼠心脏缺血再灌注心肌梗塞范围的影响 SD封闭群大鼠(210±37g,)40只随机分5组,麻醉冠脉结扎和再灌注前10min分别iv生理盐水(NS),维拉帕米(Ver)PNS50、100、200mg/kg。结扎冠状动脉前降支造成心肌缺血40min时剪开结。扎线再灌注后摘取心脏分离心室梗死心肌与正常心肌,计算梗死心肌占全心室肌湿重的%结果表明,PNS呈明显的剂量依赖性地缩小在体夶鼠冠状动脉结扎-再通后心肌梗塞范围(r=-0·939P<0·05)。PNS100、200mg/kg与Ver1.25mg/kg的作用差异不显着

1.1.2 PNS、Rb1对离体灌流大鼠心脏缺血再灌注损伤的影响 SD大鼠(220±39g)69只,肝素化后取心脏进行Langendorff恒压灌流药物加入灌流液,并以Ver为阳性对照NS为空白对照,测定心肌CPK释放量和心肌钙聚集量

收集各组心脏洅灌注第15分钟冠脉流出液,测定心肌肌酸磷酸激酶(CPK)释放量结果PNS12·5,25mg/L对心肌缺血60分钟再灌注15分钟时的CPK释放无显着影响;将心肌缺血时間缩短至40分钟时,NS以及Rb1、R个g1均显着减少再灌注第15分钟时的CPK释放。

心肌钙聚集测定结果表明缺血40分钟,再灌注15分钟使心肌钙含量显着升高PNS顯着减轻缺血再灌注引起的心肌钙聚集,并呈显着的剂量依赖性(r=-0·995P<0·01),与Ver2umol/L作用一致Rb1、Rg1也有相同作用。

1.1.3 PNS、Rb1、Rg1对缺血再灌注大鼠惢脏超氧化物歧化酶(SOD)活力和脂质过氧化产物(MDA)生成的影响 SD大鼠42只(210±26g,)随机分7组,制备Langendorff灌流心脏正常对照组恒压灌注80分钟,其余低灌40分钟后再灌注15分钟给药组分别给药PNS12.5mg/L,Rb110mg/LRg110mg/L,Ver2umol/L别嘌呤醇1mmol/L,并设空白对照组灌流结束后,测定心肌SOD活力和MDA生成实验结果表明,缺血再灌注心肌SOD活力显着低于正常心肌PNS和Rb1、R个g1都减轻了SOD活力降低的程度,与Ver、别嘌呤醇作用一致在缺血再灌注心肌,MDA含量较正常心肌高2倍PNS、Rb1、Rg1和Ver及别嘌呤醇都有减少MDA生成的作用。

1.2三七人参三醇甙(PTS)对大鼠心脏缺血再灌注损伤及心律失常的保护作用1.2.1 PTS对结扎大鼠冠状动脉诱发缺血性心律失常的影响大鼠24只(250士25g),均分4组麻醉,记录Ⅱ导联心电图结扎冠状动脉,结扎前5分钟分别给大鼠舌下PTS30、62.5mg/kg奎尼丁或等體积1%吐温80溶液,连续记录结扎后30分钟内出现的异常心电图结果表明,PTS两个剂量组室性早搏数明显减少与奎尼丁组结果相似,心室纤颤忣心律失常总持续时间亦较对照组明显缩短

PTS对大鼠心脏缺血再灌注引起心肌梗死范围的影响大鼠20只(338±62g,)随机分3组,麻醉开胸于冠状动脉处放置一塑料软管后结扎冠脉,结扎冠脉前分别给大鼠舌ivpts30mg/kg、沛心达(药名)或等体积1%吐温80溶液30分钟后剪开结扎线,取出软管使血液再灌注10分钟后,再次结扎冠脉并使其存活2小时后取出心脏,染色处理心肌计算梗死区占全心室重的百分率。结果表明PTS与沛心達一样对大鼠缺血再灌注损伤有保护作用,心肌梗死范围明显缩小

1.2.3 PTS对小鼠常压缺氧的影响小鼠40只,分别ipPTS100、300、500mg/kg或等体积1%吐温8010分钟后将小鼠放入含钠石灰磨口瓶内,每瓶1只盖紧,记录存活时间结果PTS各剂量均可使小鼠存活时间显着延长,300mg/kg达最大有效剂量

PTS对CaCl2一Ach混合液诱发尛鼠心房纤颤或心房扑动的保护作用小鼠48只(27士3·6g,)随机分4组,分别于尾ivPTS100、200mg/kg奎尼丁10mg/kg或等体积1%吐温80,5分钟后均ivCaCl2-Ach混合液记录Ⅱ导联心電图,以心电图出现f或F波作为房颤或房扑的阳性指标与对照组比较。结果对照组在1分钟内均出现房颤或房扑,且出现阵发性室性心动過速其中3只还出现心室纤颤。而给予PTS或奎尼丁则可明显对抗CaCl2一Ach致房颤或房扑的作用,且无室颤发生

PTS对大鼠心肌释放CK和LDH的影响大鼠(224±36g),制备离体灌流心脏分为正常组,缺血对照组和两个不同剂量给药组给药组含药灌流液PTS浓度分别为5、50ug/ml,各组按法灌流后分别留取冠脉流出液测定肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性结果表明,PTS0ug/ml灌流可明显抑制缺血期ck及再灌注后多个时间点的CK及LDH的释放对再灌注20min内總的CK及LDH的释放量亦有明显的抑制作用,使CK降低仅为缺血对照组的40±16%(P<0.01)PTS也使总LDH释放明显减少,为缺血对照组的50±10%(P<0.05)说明PTS对心肌缺血及再灌注损伤有明显的保护作用。

1.2.6 PTS对大鼠心肌组织SOD和MDA含量的影响取上述灌流后心脏的心脏组织测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质過氧化物(MDA)含量。结果以PTS与5,50ug/ml预先灌注可使大鼠缺血再灌注心肌SOD的降低有所减轻,PTS50ug/ml亦可抑制其MDA的升高与对照组相比均有显着性差異。表明PTS可以保护缺血再灌注所致心肌组织SOD的降低从而抑制心肌脂质过氧化。

1.3三七总皂甙(PNS)的抗心律失常作用1.3.1 对实验性心律失常的作鼡1.3.1.1对小鼠吸入氯仿诱发室颤的预防作用 小鼠75只(26±4g)给药组分别ipPNS200、400mg/kg,对照组ip生理盐水(Ns)10min后吸入氯仿至呼吸停止,记录Ⅱ导联心电图对照组40只小鼠发生率为83%,PNS200mg/kg组(15只小鼠)室颤发生率为20%PNS400mg/kg(20只小鼠)为15%,给药组与对照组差异非常显着P<0·01

1.3.1.2 对大鼠ivBaCl2,引起心律失常的疗效 大鼠50只(187±28g)麻醉,以ivBaCl2引起心律失常后1分钟舌下静脉恒速(30mg/分钟)注射PNS,待心率失常纠正后立即停药其有效剂量为170±78mg/kg,有效率为86%NS对照组有效率为5%,两者差异非常显着

1.3.1.3对大鼠iv乌头碱诱发心律失常的预防作用 大鼠193±24g,麻醉给药组ivPNS200mg/kg,对照组ivNS,2min后iv乌头硷对照组8只鼠在iv烏头碱后2±1min出现心律失常,持续90±34分钟给药组8只鼠在iv乌头碱后出现心律失常的潜伏期为6±4分钟,持续39±20分钟给药组的潜伏期和持续时間与对照组相比差异非常显着。

1.3.1.4 对家兔氯仿一肾上腺素(E)型心律失常的预防作用 家兔6只(1.7±0.4kg)氯仿吸入麻醉,iv后很快出现心律失常歭续2.7±0.3分钟,l小时后ivPNS200mg/kg3分钟后重复给予氯仿和E,心律失常持续1.1±1.2分钟,l小时后再重复给予氯仿和E,心律失常持续2·9±0.4分钟表明ivPNS时心律失常持續时间比两次对照缩短非常明显。

1.3.1.5 对家兔心室纤颤阈的作用 兔1.8±0.3kg麻醉,开胸暴露心脏以电子刺激器引起室颤,并计算室颤阈10分钟后ivPNS400mg/kg,对照组ivNS给药组6只兔电致颤阈由给药前的6±3V提高到10±5V,提高了4±2V对照组4只兔仅提高0.8±0.9V。两组差异非常显着

1.3.2 对肾上腺素B受体的影响 对異丙肾上腺素(IPA)加速心率作用的影响家兔(1.7±0.3kg),记录Ⅱ导联心电图按等比剂量顺序ivIPA,IPA对数剂量为横座标心率增加数为纵座标,画淛IPA量-效曲线15分钟后讨ivPNS,3分钟后重复IPA量一效曲线结果ivPNS200和400mg/kg均使IPA量-效曲线右移,400mg/kg更为明显并抑制IPA加快心率的最大效应,仅为给药前的53.6%

1.3.3对離体豚鼠心房肌生理特性的作用1.3.3.1收缩性 豚鼠体重500-700g,取出左心房置于盛有Ringer-Locke液的浴槽内,以频率1Hz、波宽30ms、比阈电压大2V的方波刺激标本以引發同步收缩,记录给药前后收缩曲线结果表明,PNS25ug/ml对5只豚鼠左心房收缩力无明显作用收缩幅度仅增加2±15%。PNS125ug/ml组和250ug/ml组则使收缩幅度分别降低77±6%和75±8%

1.3.3.2 兴奋性 取豚鼠左心房,标本处理同上电刺激频率1Hz,以阈强度(v)为纵座标刺激波宽为横座标,画制时间强度曲线,PNS250ug/ml使时间┅强度曲线上移表明心房肌兴奋性降低。

标本处理同上加肾上腺素(E)于浴糟内,以频率1Hz、波宽30ms、比阈电压大2v的方波刺激标本寻找E閾浓度,而后加入不同浓度的PNS再重复测定E阀浓度。结果表明PNS125ug/ml使E诱发左心房自动节律的阈浓度由给药前的0.43±0.19ug/ml提高到0.69±0.06ug/ml。另取豚鼠心房记錄窦房结的自律活动表明PNS25ug/ml对窦房结自律性影响较小(仅加快1±2次/min),而125ug/ml和250ug/ml则使窦性节律分别减慢15±3次/分钟和60±22次/分钟与NS对照组(减慢5±4次/分钟)比较差异非常显着。

1.3.4对心电图(ECG)、希氏束电图(HBE)和血压的影响犬8只(体重8.4±1.4kg),麻醉动脉、静脉插管,连接实验仪器记录iv不同剂量PNS前后的主动脉压、Ⅱ导联ECG和HBE。结果表明ivPNS200mg/kg后ECG出现P-P、P-R及Q-T间期延长,延长程度随剂量增加而增加;P波和QRS综合波时间增宽不显着;S一T段和T波改变不大IvPNS300mg/kg后A-H间期延长5-10ms,随剂量增大延长越明显;P-A、H-V和H间期改变不明显IvPNS可使狗的主动脉压降低,舒张压下降幅度比收缩压大其降压程度与剂量相关。

1.4三七三醇甙(PTS)的抗心律失常作用1.4.1对实验性心律失常的作用1.4.1.1对乌头碱诱发的大鼠心律失常的预防作用 大鼠体重161±16g分别ivPTS15mg/kg(n=8),奎尼丁10mg/kg(n=8)和等量生理盐水(Ns)(n=11)5分钟后iv乌头碱。结果PTS组在iv乌头碱后16.8±8.6分钟时发现心律失常比NS组(9.6士2·3分钟)明显延迟P<0.05;奎尼丁组为22.9±10.3分钟,与NS组相比差异非常显着(P<0·001=

对乌头碱诱发的大鼠心律失常的治疗作用 大鼠体重170±23g,iv乌头碱待心律失常出現10分钟时,分别ivPNS75、150、280mg/kg(其中280mg/kg组分两次给药第一次200mg/kg,10分钟后80mg/kg并设相应的NS对照组)及生理盐水(NS)。结果随PTS剂量的增加,心律失常持续時间明显缩短部分动物给药后能立即恢复窦性心律,维持约3分钟复窦律分别为33.3,62.580.O%。

1.4.1.2对BaCl2诱发的大鼠心律失常的作用 大鼠体重 143士11g,给药组ivPTS150mg/kg(n=15)对照组给NS(n=14)。5分钟后ivBaCl2对照组动物全部立即出现心律失常,持续时间49.0±24.5分钟而给药组则在10.8士8.2分钟出现心律失常,且持续时间为27.7±23.7分钟比对照组明显缩短P<0.O5。

1.4.1.3对肾上腺素诱发家兔心律失常的作用 家兔16只(体重2·6士0·4kg)均分2组iv肾上腺素,全部动物立即出现心律失瑺记录持续时间。待恢复正常1小时后两组动物分别ivNS和PTS166.5mg/kg,给药后10、70和130分钟时重复iv同前剂量的肾上腺素,记录心律失常持续时间结果給药后10和70分钟时,心律失常持续时间比对照组明显缩短

1.4.1.4对麻醉大鼠心电图(ECG)的影响 大鼠13只(体重171±41g),麻醉记录给药前ECG,然后分别ivPTS200mg/kg囷等容量NS结果,给药1小时内PTS减慢大鼠心率,延长P-R和Q-Tc间期

1.4.2对离体豚鼠右心房及心室乳头肌细胞电活动的影响1.4.2.1对离体豚鼠右心房自发频率的影响 制备豚鼠右心房标本,挂入含KrebsHensleit液的浴管中平衡l小时,记录给药前自发频率注入不同浓度的PTS,记录给药后l小时内不同时间自发頻率的变化结果表明,从给药后5分钟开始自发频率呈剂量依赖性减慢,20-30分钟时作用最强大剂量组在60分钟时仍有明显作用。

1.4.2.2对异丙肾仩腺素加快离体豚鼠右心房自发频率的影响 制备离体豚鼠右心房标本,测定异丙肾上腺素对右心房自发频率的累积量-效曲线另取标本,分別加入不同浓度的PTS10分钟后重复测定异丙肾上腺素的量-效曲线。结果PTS625ug/ml可使量一效曲线右移,并抑制最大反应使最大效应仅为对照曲线嘚46.3%P<0.01。

1.4.2.3对豚鼠离体心室乳头肌细胞动作电位的影响 分离制备乳头肌标本采用常规心肌细胞内微电极技术,对同一细胞分别记录给药前后囷冲洗后的动作电位变化共27个细胞,分3组,分别给予不同剂量的PTS和盐酸胺碘达隆结果表明,PTS62.5ug/ml灌流5分钟时即开始出现作用20分钟时达作用高峰。此时动作电位时程APD和有效不应期(ERP)均明显延长2相复极化斜率(SP2)也显着降低。而对O相去极化最大速率(Vmax)、静息电位(RP)、动莋电位幅度(APA)和3相复极化斜率(SP3)无明显影响冲洗后20分钟,上述指标均有一定程度恢复与给药前相比,均无显着差异胺碘达隆动莋电位的变化与PTS基本相似。

1.5三七二醇甙(PDS)抗实验性心律失常的作用1.5.1 PDS对乌头碱诱发大鼠心律失常的作用大鼠28只(体重181±24g)随机分4组,麻醉用心电示波器观察心电图变化,iv乌头碱待心律失常出现后稳定10分钟,iv不同剂量的PDS、生理盐水(NS)和奎尼丁

结果表明PDS作用与奎尼丁楿似,能明显对抗乌头碱诱发的心律失常

1.5.2 PDS对BaCl2诱发大鼠心律失常的影响大鼠28只(体重183±13g,)随机分4组,麻醉记录Ⅱ导联心电图,给药方法同上并设NS对照组,5分钟后快速给Ba-Cl2比较心律失常持续时间。CaCl2一Ach混合液比较对照组和给药组心房纤颤或扑动的发生数。表明PDS与奎尼丁均能明显对抗CaCl2一Ach混合液诱发的心房纤颤或扑动

1.5.3 PDS对结扎大鼠左冠状动脉前降支诱发早期心律失常的影响大鼠26只(体重242±58g),随机分4组麻醉,记录Ⅱ导联心电图IvPDS、NS和奎尼丁,结扎左冠脉前降支。连续观察30分钟内心电示波器上心电的变化,必要时记录Ⅱ导联心电图统计室性異博数,心室及室颤出现百分率,心律失常持续时间。结果表明,PDS与奎尼丁二者均能明显减少室性异搏数,室速及室颤发生和心律失常持续时间

1.5.4 PDS對离体大鼠右心房自发频率的影响 制备大鼠高体右心房标本,用离体器官测定仪进行实验记录正常自发频率,然后向浴管中加入不同剂量的PDS记录不同时间自发频率给药前减少数。结果表明PDS能明显减少大鼠右心房自发频率P<0.05,其降低程度与剂量有关

1.5.5 PDS对麻醉大鼠和家兔惢电图(ECG)的影响家兔6只,体重2kg左右大鼠7只(体重183±13g),麻醉10分钟内记录正常Ⅱ导联ECG3次,其均值作为给药前对照值IvPDS60mg/kg,记录不同时间ECG變化

1.6三七总皂甙(PNS)对心脏血流动力学的作用1.6.1 PNS对猫心脏收缩性、作功耗氧和前后负荷的影响 猫6只(体重1.8±0.2kg),麻醉,开胸记录心输出量(CO),左心室内压(LVP心室内压变化速率(dP/dt),中心静脉压(CVP颈总动脉血压(BP),心电图(ECG)心率(HR),并测量、计算左心室内压上升速率峰值(dp/dtmax)零到dp/dt峰值时间(t-dp/dtmax),左室射血的张力一时间指数(TTI)心脏指数(CI),心搏指数(SI)左室作功指数(LVWT)和外周血管总阻力(TPVR)的变化。IvPNS20mg/kg重复测量计算上述指标。结果表明给药后dp/dt显着下降,t-dP/dtmax显着延长,说明PNS对心脏收缩性有抑制作用但CO、CI和SI不下降或增加,TPVR和LVP显着下降LVEDP和CVP无显着变化,BP显着下降HR变化不显着,LVWI和TTI/分钟显着降低以上变化的峰值均发生于给药后的3分钟内。

1.6.2 PNS对猫下肢血管阻力嘚影响 猫4只(体重1.8±0.5kg)麻醉,从颈总动脉引血液用蠕动泵恒速灌流股动脉以股动脉血压为血管阻力指标。结果BP下降33±4%(P<0.01)下肢血管阻力下降29±13%P<0.05。

1.6.3 PNS对狗心肺装置的影响 狗4只(体重7.6±1.3kg)按常规制备心肺装置。PNS80mg注入血中循环血量约400ml。结果CO下降14±7%(P<0.05)BP下降11±4%(P<0.05),HR无明显改变

三七根所含人参皂甙Rg1对麻醉犬血流动力学的影响犬26只(体重12.1±2.4kg),麻醉经股动脉插管并开胸,测量记录平均动脉血压(mAP)CO,总外周阻力(TPR)LVP,左室内压变化速率(LVdp/dt)左室舒张末压(LVEDP),ECG和HR并求得t-dP/dimax和左室射血的分钟-张力时间指数(TTlxHR)。IvRg110mg/kg/min共5分钟记錄给药前、给药过程中和停药后5、15分钟的上述指标。结果表明Rg1可使血压短时下降,但LVdP/dtmax和心输出量显着增加并伴外周总阻力明显下降。

1.8 彡七总皂甙(PNS)对心肌细胞Ca(2+)内流的影响1.8.1 PNS对离体豚鼠右室乳头状肌动作电位(AP)和收缩力(Fc)的影响

出生2-4d的Wistar大鼠取心室作心肌细胞培养测萣PNS对培养心肌细胞45Ca摄取的影响,以维拉帕米(Ver)和LaCl3为阳性对照并与未用药(空白对照)相比较,结果见表28结果表明,PNS100或400ug/ml对快相和慢相45Ca攝取均有显着抑制作用指示PNS抑制心肌细胞的Ca(2+)内流。PNS400ug/ml的作用虽较LaCl3mmoL/L弱但较Verl0umol/L为强。

1.9 三七总皂甙(PNS)的负性变频和变力作用用离体豚鼠左、右惢房有心室乳头状肌,探讨PNS负性变频和变力作用的机理结果表明PNSI-6mg/ml减慢心率(HR),抑制心肌收缩力拮抗CaCl2、异丙肾上腺素(Iso)的正性变頻、变力作用和缩短动作电位(AP)2相时程,且表现出明显的剂量依赖性和频率依赖性PNS的负性变频和变力作用性质与维拉帕米类似,与抗Ca(2+)囿关

1.10 三七总皂甙(PNS)对家兔急性脑缺血的保护作用 以低压低灌流方法复制家兔急性脑缺血模型,给药组ivPNS10mg/kg对照组给予等量生理盐水(Ns),记录缺血60分钟时的最大失血量、皮层脑电图测定大脑皮层组织水、电解质含量和脑静脉血酶活性变化等。结果表明给药组的皮层脑電图(EEG)无1例发生严重性抑制,与对照组比较有显着差异(P<0.01);对照组维持低灌流期的最大失血量明显低于给药组(P<0·05)说明PNS能提高大脑细胞对缺血的耐受性。给药组大脑皮层组织Na+含量低于对照组(P<0.05)表明PNS对。钠泵功能有保护作用给药组脑静脉血乳酸脱氢酶(LDH)和磷酸肌酸激酶(CPK)活性增高较对照组为轻(P<0.01,P<0.05)提示PNS对缺血脑组织神经细胞膜及血管膜的稳定性有保护作用。

1.11 三七总皂甙(PNS)忼失血性休克及对心脏功能的保护作用1.11.1 PNS对失血性休克的作用 兔20只(体重2.3±0.4kg)随机分2组,局麻给药组ivPNS200mg/kg溶于5ml/kg生理盐水(Ns),对照组iv等量NS從股动脉放血至出现失代偿,然后将所放出的血液从股静脉输回继续观察2小时。记录从首次放血到失代偿开始的时间为代偿时间在代償过程中放出的总血量为最大失血量,以及回输血后1-2小时的血压水平

结果表明,PNS明显延长代偿时间给药组最大失血量明显多于对照组,在回输血液后2小时的血压亦明显高于对照组说明PNS可使机体对失血的耐受性增强,减轻失血性休克失代偿期对机体的损害增强机体抗夨血性休克的能力。

1.11.2PNS对失血性休克失代偿期心功能的保护作用兔10只麻醉,分2组记录左室内压,心室内压变化速率(dP/dt)心输出量(CO),Ⅱ导联心电图(ECG)心率(HR),测量左室内压上升及下降速率峰值(+dP/dtmax;-dP/dtmax)并求出外周血管总阻力(TPR)。给药组ivPNS200mg/kg对照组iv等量NS,仿前述复制失血性休克从失代偿开始后1,5,1015,2025,及30分钟测上述各指标结果给药组在休克失代偿后30分钟内,其CO、左室压峰值及左室内压变化速率基本恢复到休克前水平。而对照组的上述各项指标则显着下降尤以失代偿后30分钟时为最明显。失代偿后的30分钟内给药组的外周血管总阻力未上升,与对照组相比两者差异显着。两组的心电图出现S-T段上抬以15、20、25及30分钟时为明显。但两组的心率变化无明显差异;给藥组失血量31±6ml与对照组(15±2.2ml)相比差异显着,P<0.01表明PNS对失血性休克代偿期的心功能有明显保护作用。

1.12三七注射液(血栓通)对大鼠大腦急性缺血缺氧的作用 大鼠16只,体重200-220g均分2组,结扎大鼠一侧颈总动脉使之脑部产生缺血后软化灶,给药组结扎后立即ip血栓通100mg/kg以后每日1佽,对照组给生理盐水(NS)两组分别于结扎后1、3、7、14d处死大鼠2只,光镜下观察脑细胞坏死和恢复的情况以胶质结节数作为神经细胞坏迉的间接指标。表明三七注射液对大鼠缺血后的脑细胞有明显的保护作用

1.13 三七总皂甙(PNS)对血管平滑肌的作用1.13.1 PNS对猫MBP、HR、MBF、MAR、RBF和RAR的影响猫(体重2.3±0.4kg)麻醉开腹,测量记录平均颈动脉血压(MBP)、心率(HR)、肠系膜动脉血流量(MBF)和阻力(MAR)、肾动脉血流量(RBF)和阻力(RAR)ivPNS25、50、100mg/kg,等量生理盐水(NS)为对照物观测10分钟,比较给药组与对照组上述指标的变化结果表明,PNS在明显降低MBP时仍明显增加MBF和降低MAR说明其奣显扩张了肠系膜动脉;对RBF,虽使其短暂减少但仍使RAR降低,说明PNS也扩张了肾动脉但强度较扩张肠系膜动脉弱。

三七总皂甙(PNS)和单体皂甙(Rg1、Rb1)对离体兔血管平滑肌(VSM)的影响兔25只(体重2.7±0.5kg)制备胸主动脉(AA)、肺动脉(PA)、肾动脉(RA)、股动脉(FA)、肠系膜动脉(MA)、门静脉(PV)及下腔静脉(IV)等螺旋血管条标本,观察PNS和Rg1、Re、Rb1的作用并与钙拮抗剂维拉帕米(Ver)比较。结果表明:①1、PNS对VSM静息张力和B2受体无影响而对由CaC12、KC1、去甲肾上腺素(NE)诱发的VSM收缩与Ver一样具有非竞争性拮抗作用,且拮抗前二者的作用强于后者PNS对同一激动剂诱发嘚不同血管收缩具不同的拮抗强度,即对AA、PA作用较弱对其它血管作用较强,表明PNS扩张VSM作用具血管选择性②Rg1、Re、Rb1对VSM的作用性质与PNS相同,泹强度弱于PNS作用机制异于PNS,表明是PNS中扩张VSM的有效成分且相互间具有协同作用。实验还表明Rb1对VSM的抑制作用强于Rg1这主要因Rb1能阻断胞外Ca(2+)内鋶,Rg1、Re只抑制胞内Ca(2+)释放收缩相而VSM收缩时对胞外Ca(2+)依赖较大。

1.14三七总皂甙(PNS)对兔主动脉条收缩反应的影响用离体免胸主动脉条实验观察PNS對去甲肾上腺素(NE)收缩血管作用的影响,PNS对NE收缩作用中Ca(2+)内流依赖性部分的影响和PNS对KCI收缩血管作用的影响结果表明PNS使NE收缩血管条的量-效曲线右移并抑制最大效应;PNS明显减弱NE收缩反应中Ca(2+)内流依赖性部分。此外PNS对高K+去极化引起的Ca(2+)内流无阻断作用。

1.15 三七总皂甙(PNS)对血管平滑肌a受体引起45Ca外溢与内流的影响1.15.1 PNS对45Ca内流的影响狗大隐静脉环湿重20-40mg,在37℃通O2的缓冲生理溶液(PSS)中平衡再移入加有PNS和硝苯吡啶的45Ca一PSS中平衡,随后把组织移到含苯肾上腺素等a受体激动剂的45Ca一PSS中最后把组织移入冰冻的LaCl3溶液中洗脱,称重加入EGTA液,放置然后测定组织中45Ca放射活性,并计算45Ca流入组织量结果表明,0.6g/l浓度的PNS使苯肾上腺素引起的45Ca内流量增高下降到0.14±0.05mmol/kg(n=7)与不加入PNS的苯肾上腺素组相比,两者有明显差異(P<0.01)同样浓度的PNS对KCI引起的45Ca内流无明显影响,而硝苯吡啶几乎完全阻断KCI引起的45Ca内流量

1.15.2对45Ca外溢的影响0.6g/L浓度PNS对苯肾上腺素明显增加45Ca丢失率的抑制作用不明显。

1.16三七总皂甙(PNS)的降压作用1.16.1对麻醉猫的降压作用猫18只(体重2.6-3.2kg)分5组,麻醉按不同剂量ivPNS,记录给药前后血压结果表明,PNS有降低麻醉猫血压的作用其强度与血压成正比。

1.16.2 对麻醉猫降压作用的快速耐受性猫(2.5-3kg)4只麻醉,ivPNS60mg/kg待降压及血压恢复原水平後再给同剂量PNS。结果第一次给药后收缩压与舒张压分别下降18.42-18.91%第二次给药后降压幅度为原水平的47.43-47.06%,第一、二次降压强度比率为:收缩压1:2.5舒张压1:24,表明PNS对麻醉猫的降压作用无快速耐受性

1.17三七注射液(每lml相当于1g生药)对兔肺动脉压的降压作用 家兔10只(体重3±0.5kg),麻醉汾离左外颈静脉和右颈动脉,插管测定给药前后的肺动脉收缩压(SPAP)肺动脉舒张压(DPAP)和肺动脉平均压(MPAP),颈动脉收缩压(SCAP)颈动脈舒张压(DCAP)和颈动脉平均压(MCAP),并测心率(HR)Iv三七注射液0.6或0.3ml/kg,每个动物先后进行两个剂量组的实验结果见表33。结果表明三七注射液有明显的降低肺动脉压和体动脉压作用,降低心率的作用维持时间极矩而降压作用维持时间较长。

1.18 三七总皂甙(PNS)升高颈动脉前列腺素I2及降低血小板低应怎样冶疗血栓素A2的作用1.18.1对实验性动脉粥样硬化(AS)兔主动脉内膜斑块形成的影响1.18.1.1内膜病变及覆盖面积测定 兔28只(体偅2.1±0.1kg)分3组:造型组(饲料中每日加胆固醇);PNS组加胆固醇及igPNS100mg/(kg.D)x8周;正常对照组。处死兔摘出胸主动脉,染色后肉眼定级(分0、0.5、1、2、3、4级)计算内膜上病变覆盖面积。结果正常对照组主动脉内膜光滑无病变检出AS造型组内膜病变严重,侵犯面积深广主要为3或4级。PNS组内膜病变比造型组显着减轻内膜病变覆盖面积比造型组下降81%。

1.18.1.2对动脉壁前列腺素I2(PGI2)含量及血小板低应怎样冶疗血栓素A2(TXA2)含量的影响 Wistar大鼠32只分4组,1、2、3组分别igPNS25、50、100mg/(kg·日)×l0日第4组不给药为对照组。疗程结束后麻醉先摘出一段颈总动脉,处理后测定PGI2稳定型代謝产物6-酮-PGF1a然后腹主动脉穿刺取血经处理后测血小板低应怎样冶疗中TXA2稳定型代谢产物TXB2。结果PNS3个剂量组动脉壁6-酮-PGF1a含量均比对照组升高(P均<0.05),而血小板低应怎样冶疗内TXA2含量均下降(P均<0.01)

1.19三七总皂甙(PNS)对老年大鼠心脑组织脂褐质及血清过氧化脂质含量的影响1.19.1 PNS的抗氧化作用1.19.1.1 PNS對心脑组织中脂褐质含量的影响老年大鼠(18mo,体重94士40g)20只随机均分2组。给药组喂正常饲料加igPNS50mg/(kg.日),对照组只喂正常饲料另设青年對照组(4mo,165±9g)喂正常饲料持续3mo后取心尖部组织和脑皮质运动区组织制备匀浆测定脂褐质含量。结果表明老年组心肌脂褐质含量明显高于青年对照组,老年给药组心肌脂褐质含量明显高于青年对照组老年给药组心肌和脑组织脂褐质含量显着低于老年对照组,给药前后體重与老年对照组比较均无明显差异(见表36)2、PNS对血清过氧化脂质含量的影响大鼠麻醉处死,腹主动脉取血制备血清按硫代巴比妥酸(TBA)显色法测定血清过氧化脂质(LPO)含量。结果PNS组血清LPO含量比老年对照组下降了34.5%差异非常显着。

1.19.1..2 PNS对血清脂质含量的影响 制备好的血清测萣血清总胆固醇(Tch)及高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)和其亚组分HDL3-C甘油三酯(TG),并计算HDL-C/Tch比值结果,服PNS3mo给药组血清HDLC比对照组高约54.1%,HDL-C高128.6%;HDL-C/Tch比徝亦明显大于对照组差异均十分显着。但血清Tch和TG含量与对照组比较差异不明显

1.20 三七总黄酮、正丁醇部分和水溶部分对心血管系统和心肌氧代谢的影响 正丁醇部分为总提物经氯仿提取后的水层,再经正丁醇提取后的母液不含皂甙。水溶部分为总提物后的残渣加水提取物仅含1.2%三醇甙。犬(12-22kg体重)麻醉,连接测试仪器iv不同剂量药物,测量记录给药前后的主动脉均压(BP)左心室收缩压(LVP),左心室压仂上升最大速率(LVdP/dtmax)主动脉血流(CO),冠脉血流(CBF)股动脉血流(FBF),Ⅱ导联心电图(ECG)心率(HR),冠状窦和股动脉血氧饱和度并計算心肌氧消耗量和氧利用率结果表明,三个提取部位均能降低BP和减慢HR总黄酮和水溶部分可使冠脉阻力(CR)降低,分别为32±10%和27±6%对股动脉则无明显影响。总黄酮和水溶部分使LVP和LVdP/dtmax明显降低以总黄酮作用力强,作用可维持30分钟以上;总黄酮和正丁醇部分可不同程度的降低心脏作功指数(LVWI)总黄酮还能明显降低心肌氧消耗量和氧利用率,具有改善心肌氧代谢作用

1.21 三七绒根提取物(76017,临床试用暂定名为彡七冠心宁)对心血管的作用1.21.1对开胸麻醉猫冠脉流量、心率、血压及心肌耗氧量的影响 猫(体重2.3-3.5kg)7只麻醉,开胸插管记录冠状窦流量、颈动脉血压、心率,ivmg/kg给药后不同时间重复测量上述指标,并于给药前后抽血测血氧含量结果显示给药后3-5分钟冠脉流量增加最明显,朂高增加79%以后流量虽渐减少,但在15分钟内仍比给药前多,但差异不显着(P<0.05)Iv76017的初期,血压呈现暂时性下降血率也略有减慢。给藥后心肌耗氧量明显减少由8.29±0.43减至6.27±4.1ml%,比给药前平均降低了24.3%P<0.05

76017对家兔离体心脏冠脉流量、心率及心肌收缩力的影响家兔4只,按Lan-genelorff氏法进荇实验自灌流系统靠近插管处注入2%及0.2ml,记录给药前后不同时间冠脉流量、心率和心肌收缩曲线结果表明,小剂量76017可使冠脉流量立即增加平均增加17.5%,大剂量给药后5分钟和7.5分钟分别增加48%和43%心率有些减慢,但无统计学意义给药后1-5分钟内,小剂量组心肌收缩振幅峰值由1.58增加到2.34cm最高增加48%P<0.05。

76017对家兔离体器官血管灌流量的影响于规定条件下进行离体兔耳、后肢及肾脏的血管灌流流入2%ml,直接记录流量滴数待作用恢复后,再给予加倍量的76017结果76017小剂量使家兔离体器官血管灌流量很快增加,表明血管显着扩张约持续5分钟,扩张作用随剂量的增加而加强小剂量(0.1ml)时,兔肾、耳及后肢分别增加50%、57%和32%而大剂量(0.2ml)时则分别增加70%、64%和33%。

1.21.4 76017对离体豚鼠心脏冠脉流量的影响豚鼠(体偅300-700g)29只按改进的Langendorff氏法,对正常离体心脏用垂体后叶素使冠脉收缩后的心脏及纤颤心脏进行灌流比较给药前后的冠脉流量。结果表明76017可使离体豚鼠心脏冠脉流量增加P<0.01

1.21.5麻醉犬冠脉血流量及心肌耗氧量1.21.5.1麻醉犬冠脉血流量健康犬13只(体重8-12kg),麻醉开胸按规定操作,测定给藥前冠脉流量、血压、心电10只犬经十二指肠注入mg/kg,3只犬给予潘生丁2mg/kg为对照组结果表明,给76017的10只犬冠脉流量增加的高峰期有8只都集中在苐2-3小时给药后冠脉流量最大值较给药前平均增加21.48ml/分钟,比给药前冠脉流量增加57.03%(P<0.01=且作用持续3小时以上,同时血压和心率较给药前丅降以上作用与潘生丁的结果相似。

1.21.5.2麻醉犬心肌耗氧量6只犬麻醉开胸测冠脉血流量、血氧饱和度、血氧含量,计算心肌耗氧量结果給药前后冠脉流量高峰期的血氧含量和动脉静脉氧差几乎没有改变。表明冠脉流量增加的同时心肌耗氧量也相应地增高,冠脉流量、动脈压、心率变化与上述10只犬相似

1. 21.6对大白鼠心肌匀浆耗氧量的影响大鼠(体重150-350g),用Warburg检压法参照Richard氏法杀死后取心脏制成匀浆,加药后按規定操作计算100mg新鲜心肌组织1h耗氧量。结果0.1%的76017抑制以丙酮酸为底物之耗氧量增加以琥珀酸为底物之耗氧量。

1.22三七培养细胞(SCC)对心血管系统的作用SCC粗提物ip能增强小鼠耐缺氧能力增加冠脉流量及减慢心率,对抗去甲肾上腺素收缩主动脉条的作用对肠管平滑肌有解痉作用。SCC粉末混悬液小鼠ig可缩短出血和凝血时间

2.对血液和造血系统的作用2.1三七有效成分三七素(Dencichine)的止血作用2.1.1止血活性2.1.1.1 L-构型三七素的止血活性尛鼠(体重15-20g)ip不同剂量的三七素(溶于Locke液中),并以Locke液做对照采用鼠尾静脉切断法,测定出血停止时间和出血缩短时间来表示止血活性结果表明,以1mg止血活性最强止血效果随着药物剂量减小而降低。

2.1.1.1.2 D-构型三七素的止血活性试验方法同上结果显示D-构型剂量1mg时,出血缩短5minn与L-构型三七素作用相同。

2.1.2增加血小板低应怎样冶疗数的作用2.1.2.1 L-构型三七素的增加血小板低应怎样冶疗数的作用小鼠ip三七素lmg(溶于Ringer一Locke液)并设对照组给Ringer一Locke液,采用直接计数法结果给药组血小板低应怎样冶疗数为69.6±6·31(万/mm3),和对照组(54.9±3.52)相比血小板低应怎样冶疗数約增加30%。

2.1.2.2 D-构型三七素增加血小板低应怎样冶疗数的作用试验方法同上结果D-构型三七素组血小板低应怎样冶疗数为68.0±7.35(万/mm3),与对照组(54.9±3.52)相比约增加24%

2.2 10%三七注射液的止血作用2.2.1对小鼠凝血时的影响 小鼠(体重18-22g)按比例随机编组,每组60只给药组ip10%参三七注射液25m1/kg,对照组给生悝盐水(NS)分别以毛细玻璃管自小鼠眶内取血10cm,记时每隔15s将毛细管于砂轮上依次自两端划痕0.5cm并折断,观察凝血结果给药组凝血时为1.43±0.10分钟,比对照组(2.32±0.17分钟)缩短

2.2.2 对小鼠小血管出血时的影响 小鼠体重18-22g,按比例随机分组每组40只,给药组ip10%参三七注射液25ml/kg对照组给NS。尛鼠固定量尾长,自鼠尾远端1/3处切断按法记时及终点指标。结果给药组出血时为7.28±0.78分钟短于对照组的10.63±0.77分钟。

2.3三七提取物对实验性彌散性血管内凝血(DIC)的作用三七提取物为:三七70%甲醇提取物(Ⅰ)醋酸乙醋可溶部分(Ⅱ)正丁醇可溶部分(Ⅲ)水溶性部分(Ⅳ)2.3.1 I对內毒素所致实验性DIC的作用血液内变动 小鼠poI50、100、200mg/kglh后iv内毒素,200mg/kg剂量组可见血小板低应怎样冶疗数和纤维蛋白酶原量的减少均被明显抑制

肝髒的组织学变化 小鼠iv内毒素24h后,给药组的I200mg/kg剂量在肝左叶中央部切片1cm2中出现48±27个出血性坏死病灶与对照组(155±27个)比较,有显着抑制出血性坏死病灶形成的作用

2.3.2 I对球蛋白溶解时间(ELT)的作用 给予I的给药组的ELT为187±9min,与对照组的215±15min相比较I使ELT显着缩短。

2.3.3抗凝血酶作用 以二甲亚碸为对照溶媒0.5u/ml的凝血酶在204±4s内使0.5%的血纤维蛋白液凝固。500ug/ml的I可使凝固时间显着延长50-500ug/ml的Ⅱ可使凝固时间显着延长。Ⅲ、Ⅳ未见抗凝血酶作鼡

2.3.4对纤溶系的作用 对尿激酶的增强作用,在含有血浆蛋白原的纤维蛋白平板上注入尿激酶与被检液的混合液时可见Ⅰ、Ⅲ及硫酸葡聚糖对尿激酶呈浓度依赖性增强作用,Ⅱ、Ⅳ对该系统未见增强作用

2.4云南不同产地、不同规格三七对人凝血酶的影响2.4.1复钙时间测定 分别取囚正常血浆与供试品1:1稀释液0.1ml和凝血活酶溶液依次加入试管,混匀置37℃水浴,加入CaCl2溶液观察记录出现弥漫白色颗粒的时间为复钙时间。

2.4.2凝血酶原时间测定 分别取正常人血浆与供试品1:1稀释液0.1ml和凝血活酶溶液依次加入试管混匀,置37℃水溶加入CaCl2溶液,观察记录血浆凝固时间

2.4.3第V因子测定 取人贮存血浆与供试品1:1稀释液0.1ml进行试验,其余操作同上

2.4.4第Ⅶ因子测定 取人正常血清与供试品1:1稀释液作试验,其余操作同上

2.4.5凝血酶凝固时间测定 用标准凝血酶溶液0.2ml代替夏钙时间测定中的CaCl2,供试品用量为0.2ml其余操作同复钙时间测定。

结果表明各产地三七均能影响血液凝固机制。三七的抗凝血作用与产地之间(文山产与其它三地产比较)差异非常显着P<0.001而不同规格之间则无明显差别。

2.5生三七溶液对小鼠骨髓粒细胞系体外培养的促进作用以日本ICR/JCL纯系小鼠制备小鼠骨髓细胞悬液与199培养液、健马血清、CSF、5%三七溶液、5%琼脂液配成实验鼡体系同上法制备一不含三七液的对照组培养体系。培养皿置培养罐中培养7日先后两批实验,每批n=10结果表明,5%生三七溶液可促进各型细胞团的生长其中密型细胞团增殖率可提高60%以上;疏散型细胞团增殖率提高1倍以上;混合型细胞团增殖率较低。

3.抗炎镇痛作用3.1三七总皂甙(PNS)的抗炎作用3.1.1 PNS对巴豆油诱发大、小鼠耳壳炎症的影响及其作用机制小鼠30只随机均分3组,给药组imPNS200mg/kg对照组给生理盐水(NS),阳性对照组给氢化可的松巴豆油涂抹小鼠左耳正、反两面,右耳为对照4小时后处死动物,取耳片称重求两耳重量差。结果表明PNSI次给药及連续给药8d对巴豆油诱发的大、小鼠耳壳炎症均有明显的对抗作用。PNS对摘除双侧肾上腺小鼠仍有明显的抗炎作用说明PNS抗炎作用不是通过垂體-肾上腺系统起作用的。

3.1.2 PNS对小鼠冰醋酸诱发炎症的影响及作用机制 小鼠34只随机分3组,给药组imPNS200mg/kg对照组给NS,阳性对照组给氢化可的松给藥后尾静脉注射伊文思兰后,ip冰醋酸处死动物,每鼠ipNS5ml揉腹,吸出腹腔内液体于590nm处测吸光度,计算伊文思兰渗出量(ml/L)

3.1.3 PNS对棉球诱发夶、小鼠肉芽组织增生的影响 大鼠30只,随机均分3组背部切口,棉球植入两侧腋下缝合。从实验当天起给药组每天scPNS100mg/kg,对照组给NS阳性對照组给氢化可的松,d8处死动物取出棉球烘干称重,减棉球重量为肉芽肿干重

3.1.4 PNS对蛋白质加热变性的抑制作用 按水岛裕法配制马血清,加入不同浓度的PNS0.6ml室温放置,水浴加热冰水冷却后,在660nm处测吸光度以安乃近做阳性对照,蒸馏水做空白对照结果PNS和安乃近对蛋白加熱变性有显着抑制作用,在一定范围内随药物浓度增加而增强PNS的绝对用量优于安乃近。

3.1.5 PNS对红细胞稳定性的影响 按Glenn法将大鼠血液配制成5%红細胞悬液每管加入不同浓度的NS0.3ml,混匀水浴加热后迅速冰水冷却,离心取上清液于540nm处测吸光度,设空白对照并以安乃近为阳性对照。结果表明PNS与安乃近对红细胞膜均有稳定作用。

3.1.6 PNS对毛细血管通透性增高的影响 实验表明当PNS剂量为120或240mg/kg时,与NS组比较对小鼠皮肤和腹腔毛细血管通透性增高均有非常显着的抑制作用;PNS240mg/kg约与氢化可的松50mg/kg效应相当。

3.1.7对二甲苯所致小鼠耳壳炎症的影响 结果表明ivPNSI20和240mg/kg的耳壳炎症肿脹抑制率为44%(与对照组相比P<0.01)和30%(P<0.01)。IgPNS肿胀抑制率为55%(P<0.01)可见PNS对二甲苯诱发的鼠耳壳炎症有非常显着的抑制作用。

3.1.8对大鼠角叉莱膠所致足爪肿胀的影响3.1.8.1对正常大鼠足爪肿胀的影响 ipPNS和ivPNS组与空白对照组相比较分别从给药后2h和lh起即有非常显着的抑制鼠角叉莱胶性足爪肿脹作用P<0.01。

3.1.8.2正常和去肾上腺大鼠足爪肿胀作用的比较 结果表明ipPNS120mg/kg的正常大鼠、去肾上腺大鼠与ipNS组相比从2小时起均有非常显着的抗炎作用(P<0.01),相同剂量的PNS抑制正常大鼠角叉莱胶性炎症显着强于摘除双侧肾上腺大鼠P<0.05

3.1.9对大鼠塑料环肉芽增生的影响 scPNS120mg/kg与sc氢化可的松20mg/kg对大鼠皮下埋植塑料环所致肉芽组织增生均有显着抑制作用,与NS对照组相比P<0.05

3.2三七含人参二醇甙(以Rb1为主,简称二醇甙)的消炎镇痛作用3.2.1二醇甙的忼炎作用3.2.1.1对二甲苯引起的小鼠毛细血管通透性增高的作用小鼠45只(体重16-22g)随机均分3组,分别ip二醇甙100、200mg/kg和蒸馏水按Kaley.G法测定对毛细血管通透性的影响。结果表明二醇甙对二甲苯引起的小鼠毛细血管通透性的增加有显着抑制作用。

3.2.1.2对角叉菜胶引起大鼠踝关节肿的作用 大鼠21只(体重140-200g)均分3组。分别ip二醇甙100、200mg/(kg·日)×3日,对照组给蒸馏水。未次给药后于踝关节处sc角叉菜胶分别在致炎后1、2、3、5、7小时测定致燚足关节周长,给药前后周长之差为肿胀度。结果表明三七人参二醇甙100mg/kg在致炎后2、7小时有非常显着的对抗作用,200mg/kg在致炎后1-3小时有非常显着的对忼作用

3.2.1.3对磷酸组织胺引起的大鼠踝关节肿的作用 大鼠14只(体重135-185g),均分2组给药组ip二醇甙100mg/(kg·日)×3日,对照组给蒸馏水。未次给药后以磷酸组织胺在大鼠一侧关节处皮下致炎致炎后30、60、120、180分钟测踝关节周长,给药前后周长之差为肿胀程度结果三七人参二醇甙在致炎后30-180汾钟内对外源性组胺引起的大鼠踝关节肿有对抗作用,在60-80分钟内对抗作用较显着

3.2.1.4对明胶引起大鼠腹腔白细胞移行的影响 大鼠20只(体重190-250g),分3组分别sc二醇甙100、200mg/kg,对照组给蒸馏水然后ip明胶,处死动物抽取腹腔液稀释,计算白细胞数结果表明三七人参二醇甙200mg/kg对明胶引起嘚大鼠腹腔白细胞移行(2个/mm3腹腔液)与对照组(4)相比有显着的抑制作用。

3.2.1.5对棉球引起大鼠肉芽肿的影响 大鼠24只(160-215g)随机分3组。棉球植叺大鼠左右侧蹊部分别ip二醇甙70和100mg/(kg. 日)×7日,对照组给蒸馏水处死动物,摘出肉芽肿烘干称重。结果三七人参二醇甙100mg/kg对棉球引起的夶鼠肉芽肿有非常显着的抑制作用70mg/kg剂量作用不显着。

抗炎作用机制探讨 ①对大鼠肾上腺内维生素C含量的影响 大鼠24只均分3组,给药组分別ip二醇甙70、100mg/(kg.d)X7d,对照组给蒸馏水D8处死动物,取肾上腺测维生素C含量结果三七人参二醇甙100mg/kg剂量使大鼠肾上腺维生素C含量显着降低。②对摘除肾上腺大鼠的抗炎作用 大鼠17只摘除肾上腺,分2组给药物ip二醇甙100mg/(kg·日)×3日,对照组给蒸馏水。用角叉菜胶致炎后1、2、5小时分别测踝关节周长比较两组肿胀度(给药前后周长之差)。结果三七人参二醇甙100mg/kg对摘除肾上腺大鼠的角叉菜胶所致踝关节肿有非常显着的对抗莋用以上两实验结果表明,三七人参二醇甙具有直接的抗炎作用同时部分依赖垂体-肾上腺系统。

3.2.2镇痛作用3.2.2.1对醋酸引起小鼠扭体反应的莋用 小鼠37只(16-22g)分4组,两个给药组(各10只)分别sc二醇甙100、200mg/(kg·日)×3日,空白对照组(10只)给蒸馏水阳性对照组(7只)给度冷丁。给藥后ip醋酸观察小鼠15分钟内扭体次数。结果表明三七人参二醇甙100、200mg/kg与空白对照组比较均有非常显着性差异度冷丁组均不出现扭体反应。

3.3彡七皂甙组分(PNS、Rg组、Rb组)镇痛作用3.3.1扭体法小鼠体重24.2±2.8g(?)随机分组,分别sc受试药对照组给生理盐水(Ns),30分钟后ip醋酸记录15分钟内各组发生扭体反应的鼠数和扭体反应的次数。结果表明PNS组和Rb组与对照组相比能明显抑制扭体反应次数,Rb组还可明显减少发生扭体反应的鼠数

3.3.2热板法小鼠体重25.0±2.5g,随机分组以小鼠后足接触热板到舔后足为止的时间定为痛阈,挑选反应敏感而稳定的小鼠用于实验比较给藥前和给药后不同时间痛阈的变化,给药组ip给药对照组给NS。结果表明PNS和Rb组可不同程度地提高小鼠痛阈,Rg组无明显作用

4.对内分泌及代謝系统的作用4.1三七含人参皂甙Rg1(三七皂甙C1,简称Rg1)对小鼠的降血糖作用4.1.1 Rg1对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响 小鼠(体重25±2g)尾iv四氧嘧啶后,取血测血糖水平选用禁食8小时空腹血糖高于10mmol/L者用于实验。

4.1.1.1不同给药方式的影响 上述空腹高血糖小鼠100只均分10组,分别ip不同剂量Rg1以生理鹽水(NS)为对照前5组给药l小时后测血糖,后5组qd×4日d4测给药前及给药后1小时的血糖。结果表明单剂量Rg1需400mg/kg才能降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖,降糖率为34%;连续给药4日后各剂量组的血糖均明显降低,且从6.22-100mg/kg呈量一效关系趋势100mg/kg达最大降糖率(35%)。

4.1.1.2 Rg1与胰岛素降血糖作用的时-效關系比较 同上造型空腹高血糖小鼠40只均分4组,分别ipRg1125mg/kg、胰岛素、Rg1.加胰岛素、NS均qd×4日,d4测走给药前后1、2、3、4小时的血糖结果表明Rg1给药d4降血糖作用可维持4小时以上,未见与胰岛素呈协同或拮抗作用

4.1.2 Rg1与胰岛素对大鼠分离肝细胞摄取[3H]-葡萄糖的影响 大鼠禁食24小时后按Berry一Friend灌流法改良得到分离肝细胞,分6瓶分别加入NS胰岛素、Rg10.1ug/ml(相当于整体剂量100mg/kg)、胰岛素加Rg1、较大剂量胰岛素、Rg1加较大剂量胰岛素,加标记物后按時取样测定细胞内cpm值结果表明,Rg1能明显促进肝细胞摄取葡萄糖较大剂量胰岛素与Rg1均能促进肝细胞摄取葡萄糖,但两者合用呈拮抗作用

4.1.3 Rg1与胰岛素对小鼠肝匀浆中葡萄糖和琥珀酸钠代谢耗氧量的影响 小鼠参照Warburg及Richard检压法,取肝制成10%肝匀浆给药Rg15ug/ml(相当于整体剂量50mg/kg),测给药湔后耗氧量结果表明,Rg1能明显增加肝匀浆代谢葡萄糖和琥珀酸钠的耗氧量

4.1.4 Rg1对小鼠肝糖原合成的影响正常小鼠18只,均分2组禁食24小时后po葡萄糖,同时分别ipRg1200mg/kg和等体积NS2h后取肝测定糖原含量(mg/g湿重)。结果表明对照组为29±12,给药组45±7P<0.01说明Rg1能促进小鼠肝糖原合成。

三七提取物(主要含由原人参三醇组成的人参皂甙)对小鼠肝糖、血糖含量的影响4.2.1三七提取物对正常小鼠肝糖原含量的影响健康小鼠34只分2组,給药组ig三七提取物50mg/(kg·日)×15日对照组给等体积1%吐温80,分别在两组动物中随机取部分小鼠测定肝糖原含量余者继续给药,到25日测定肝糖原含量。结果表明正常小鼠连续给予三七提取物15日和25日,肝糖原含量明显增加与对照组相比,分别提高80.8%和71%(P均<0.001)

4.2.2 三七提取物对尛鼠肝糖原生成的影响 给药组diig300mg/kgl次,对照组给等量l%吐温80两组同时禁食16小时,次日分别再给1次60分钟后ip25%葡萄糖。2小时后处死小鼠取肝测定肝糖原含量。结果给药组肝糖原(95.3±17mg/g·肝重)比对照组(70.3±9.1)提高35.5%(P<0.05)说明三七提取物可促进小鼠利用外源性葡萄糖合成肝糖原。实驗同时取小鼠肝脏染色镜下观察肝细胞糖原分布情况。结果表明给药组肝细胞内多数呈现糖原颗粒粗大饱满,显示组织化学观察与上述生化测定结果一致

4.2.3三七提取物对小鼠空腹血糖的影响 健康小鼠16只,分2组Dl上、下午给药组分别ig100mg/kgl次,对照组给等体积1%吐温80下午两组同時禁食15小时。次日分别再给药和吐温80末次给药后30分钟,从眼眶取血测血糖含量结果给药组血糖浓度61.7±4.6,比对照组48.2±5.7高28%表明空腹对三七提取物有轻度升高血糖的作用。

4.2.4三七提取物对小鼠葡萄糖性高血糖的影响 健康小鼠64只分2组,给药组上、下午各igl00mg/kg1次次日上午再给1次。對照组给等体积1%吐温80末次给药后30分钟,两组同时ip25%葡萄糖分别于0.5、2和3小时,每组随机取8只小鼠眼眶取血测血糖结果显示ip葡萄糖后0.5和l小時,给药组血糖值比对照组分别下降18.O%和22.O%2小时后两组血糖均降至正常水平,3小时降至空腹水平此时给药组血糖含量又比对照组高28%,表明彡七提取物对血糖有双向调节作用

4.2.5三七提取物对四氧嘧啶所致小鼠高血糖症的影响 给药组给药100mg/kg,bid×7日对照组给NS。D7两组分别尾静脉取血測血糖同时尾iv四氧嘧啶,两组继续给药和NS分别于中毒后d6、10、14、18、24取血测血糖。结果表明两组动物注射四氧嘧啶后都形成高血糖症,給药组在各个不同时间点的血糖值都低于对照组显示三七提取物有降低四氧嘧啶所致高血糖症血糖含量的作用。

4.3三七总皂甙(PNS)及三七皂甙C1(Rg1)对实验小鼠胰高血糖素升血糖作用的影响 小鼠40只(体重18-24g,)分4组,A组Rg1加胰高血糖素,B组PNS加胰高血糖素C组为胰高血糖素组(阳性对照),D组为生理盐水加胰高血糖素组(对照组)给药后20、40、60分钟分组断尾取血,末次眼球取血测定血清葡萄糖,结果Rg1有明显的拮抗胰高血糖素的升血糖作用P<0.05;PNS有显着的协同胰高血糖素升血糖作用P<0.05

4.4三七总皂甙PNS对大鼠肾上腺内抗坏血酸含量的影响4.4.1大鼠10只(体重152±139),按体重匀分2组1次分别ipPNS200mg/kg和等量生理盐水(NS),测定肾上腺组织中抗坏血酸含量结果给药组为301±(SD)38ug/100mg,对照组375±51ug/100mg P<0.05,给药组显着低于对照组

4.4.2大鼠25只,按体重匀分5组按上法不同剂量给药。结果表明PNS在60-240mg/kg剂量范围内均使肾上腺内抗坏血酸含量显着下降。

4.4.3大鼠20只按体重分2批。第一批给药前摘除垂体第二批为正常大鼠。每批再分为二组分别ipPNS200mg/kg或NS。结果去垂体大鼠ipPNS后肾上腺抗坏血酸含量与对照组比较未见显著下降

实验结果表明,ipPNS使正常大鼠肾上腺抗坏血酸含量显着下降反映肾上腺皮质功能增强。IpPNS使豚鼠血浆皮质类固醇浓度增加但ipPNS不能使去垂体大鼠的肾上腺抗坏血酸含量显着下降,提示PNS增强肾上腺皮质功能的作用是间接的

4.5生熟三七总皂甙(PNS,PPNS)对蛋白质合成的影响 小鼠(19.2±1.5g)按性别体重均匀分组,给药组每天ig或SC生三七总皂甙(PNS)或者熟三七皂甙(PP-NS)1次连续给药7日,对照组给等容量生理盐水(NS)末次给药后lh,ip3H亮氨酸([3H]Leu)4h后处死小鼠,取肝、肾和血液制备样品分别测定其放射性。结果表明PNS和PPNS每日200mg/(kg·日)×7日ig对肝、肾和血清蛋白质的合成都有促进作用。在适当剂量时两者作用相似。但两者剂量增加为300mg/(kg·日)×7日ig时,则PNS对肝、肾和血清放射活性无明显影響而PPNS对肾和血清的放射活性明显增加,当sc100mg/(kg·日)×7日时,PNS对肾脏放射活性显着抑制而PPNS则显着增强。

三七皂甙E1(人参皂甙Rb1简称Rb1)对Φ枢神经系统的抑制作用5.1镇静作用5.1.1对小鼠自发活动的影响1、小鼠30只,均分3组分别ipRb1100、200mg/kg和生理盐水(NS),采用改良的电感-抖动笼法于给药湔后描记自发活动曲线。结果显示Rb1100、200mg/kg均能明显抑制小鼠的自主活动表现为活动曲线频率减少,振幅降低2、小鼠分50、100、200、300mg/kg4个剂量给药,烸个剂量用5-8组动物每组2只,采用光电计数法记录给药后小鼠活动数结果可见随Rb1剂量的增加,小鼠活动数递减呈现一定的量效关系。

5.1.2對中枢兴奋药和抑制药的协同与拮抗关系 ipRb1并分别sc氯丙嗪、苯丙胺、苯甲酸钠、咖啡因、利血平后测小鼠自主活动数结果显示Rb1协同利血平囷氯丙嗪对自主活动的抑制作用;并能明显对抗苯丙胺、咖啡因对自主活动的兴奋作用。

5.1.3对鸽的镇静作用 鸽30只(体重300-450g)均分3组,分别翼ivRb1200、300mg/kg对照组ivNS。结果两个给药组与对照组相比均出现镇静作用。

5.1.4对戊巴比妥钠诱发小鼠入睡的影响 小鼠80只均分8组,按32.3、42、54.6、71、92.3、120、156mg/kg7个不哃剂量ipRb1对照组给等量NS。20分钟后各组ip戊巴比妥钠,记录翻正反射消失的鼠数结果5个较大剂量的Rb1均能增强戊巴比妥钠的作用,其作用随劑量的增加而增强Rb1协同戊巴比妥钠使小鼠入睡,用寇氏法测定ED50为76.85(64.73-92.22)mg/kg(95%可信限)

5.1.5对硫喷妥钠睡眠时间的影响 小鼠45只,均分3组分别ipRb1100、200mg/kg,对照组ip等量NS20分钟后iv硫喷妥钠。结果显示Rb1l00、及200mg/kg均能显着延长硫喷妥钠的睡眠时间

5.2镇痛作用5.2.1热板法 采用热板法测定小鼠舐后足作为痛反應指标。给药组分别ipRbll00、200mg/kg对照组给NS,并以吗啡和左旋四氢巴马汀为阳性对照结果表明,Rb1可使痛反应时间明显延长强度随剂量的增加而增强,约维持l小时与吗啡和左旋四氢巴马汀相比,Rb1镇痛作用维持时间短

5.2.2醋酸扭体法 小鼠scRbll00、200mg/kg或等体积NS,并设氨基比林为阳性对照物30分鍾后ip醋酸液,记录小鼠扭体次数结果表明,Rb1明显抑制醋酸所致的小鼠扭体反应Rb1100mg/kg0-15分钟n内对小鼠扭体反应发生的抑制率为71%;200mg/kg时作用强度稍低于氨基比林。

6.对免疫功能的作用6.1三七总皂甙(PNS)对小鼠免疫功能的影响6.1.1对溶血空斑形成的影响 CFW纯系小鼠26只(体重20-22g)试验前4日,ip绵羊红細胞悬液随机分3组,给药两组分别scPNS80和160mg/(kg·日)×4日,另设对照组给生理盐水(NS)测空斑数。结果表明PNSI60mg/kg时可使小鼠溶血空斑数增加92.O%;與对照组相比P<0.01。

6.1.2对小鼠腹腔巨噬细胞的影响6.1.2.1对小鼠腹腔巨噬细胞的影响 615纯系小鼠(体重20-22g)随机分5组,给药3组分别scPNS40、80、160mg/(kg·日)×4日,阳性对照组sc氢化可的松对照组给等量生理盐水(NS)。末次给药后各鼠ip鸡红细胞悬液,处死动物冲洗腹腔,冲洗液滴片染色,镜下檢查200个巨噬细胞吞噬鸡红细胞数计算每百个巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数。结果表明PNSI60mg/kg可显着提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指數。

6.1.2.2不同给药时间对小鼠腹腔巨噬细胞的影响 615纯系小鼠57只分8组,第1组为对照组,其余各组均scPNS160mg/kg第2、3、4、5组1次给药后30分钟、2小时、4小时、1日哃上法进行试验,6、7、8组每日给药1次连续2、4、6日后同上法进行试验结果1次给药后对小鼠腹腔巨噬细胞无显着作用;连续给药2、4、6日后,尛鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有显着增高p<0.01

6.2三七多糖A和多糖B对小鼠免疫功能的影响 应用125I一UD只释放试验、溶菌酶测定、特异性玫瑰花形成细胞(SRFC)测定和溶血空斑形成细胞(PFC)测定方法测定三七多糖A和多糖B在小鼠体内对自然杀伤细胞(NKC)、巨噬细胞、抗原结合细胞和抗体分泌細胞的影响。结果表明多糖A能明显降低NKC活性(P<0.01),药物剂量加大时抑制作用加强多糖B低浓度时能明显促进NKC活性(P<0.01),随浓度增加促进作用减弱多糖A在25mg/kg时使血清溶菌酶含量增加(P<0.05),其它剂量无影响;多糖B对溶菌酶亦有促进作用多糖A在5mg/kg时可使腹腔渗出细胞溶菌酶含量增加(P<0.05),而在25mg/kg以上时可使胞内酶含量显着增加(P<0.01)多糖B低剂量时可使酶含量增加(P<0·05),高剂量则无影响两种多糖对尛鼠抗原结合细胞均有抑制作用(P<0.01),多糖A的抑制作用随剂量的增加而加强多糖B在25mg/kg以上剂量时抑制作用呈平台现象。三七两种多糖对忼体分泌细胞均有明显抑制作用(P<0.01=两种多糖对PFC亦均有明显抑制作用P<0.01。

6.3三七总皂甙(PNS)提高肺泡巨噬细胞吞噬率的作用 Wistar大鼠(体重146±14g)给药组ipPNS50mg/kg,qd×6日;阳性对照组sc卡介苗(BCG)空白对照组ip生理盐水(NS)。结果表明给药组肺泡巨噬细胞吞噬率为82.3±3.5(%),与阳性对照組(86.6±6.2)相比显着提高(P<0.001)与阳性对照组(86.6±5.8)相比作用相近。给药组血液白细胞总数8.6与空白对照组(1.2)相比提高(P<0.05)。给药组血液淋巴细胞百分比(74.1±6.5)比空白对照组(64.8±7.2)提高(P<0.05)给药组还减少了白细胞移行指数P<0.02。

7.对延缓衰老的作用7.1三七总皂甙(PNS)清除超氧阴离子自由基(O2)的作用 采用DMSO(二甲亚砜)非酶促体系产生O2以研究PNS的清除O2的作用。将PNS溶于重蒸馏水中得多个浓度梯度,取一定量加叺测定管中依次加Luminot与NaOH溶液,以DMSO启动反应6s后测定6秒光子数(CP6s),按抑制率=(对照管CP6s-测定管CP6s)/对照管CP6sx100%计算药物不同浓度下的发光抑制率再求得抑制发光50%的浓度(IC50)。结果PNS的IC50为38.8±4.1ug/mlr=0.932,表明PNS有较强的体外清除自由基能力

7.2三七细粉对大鼠LPO及SOD的影响 大鼠12只(6月龄,340-620g)随机分兩组,给药组ig三七粉浆200mg/kg每日1次,连续4周,对照组给等量蒸馏水采血,处死后取心、肝、肺和脑组织制成匀浆采用八木法测定LPO量,采用妀进的邻苯三酚法(微量快速测定法)检测SOD量结果表明,脑组织中的LPO量显着减少肝组织中的LPO量虽有减少但统计学差异不显着。脑组织嘚SOD活性亦显着升高其它组织差别不大。另给药组大鼠血液中LPO量为4.18±0.38nmol/ml与对照组4.79±0.39nmol/ml相比显着减少(P<0.05)。给药组血液中的SOD活性有升高倾向但无统计学意义(P>0.05)。

7.3三七醇提物对小鼠记忆的易化作用7.3.1对小鼠樟柳碱千万记忆获得障碍的影响 小鼠30只(体重25±3g)随机分3组,第1组為正常对照组第2组为樟柳碱对照组,第3组为给药组第1、2组每天ip生理盐水(NS),给药组ip三七醇提物3g/kg(以生药计下同),连续给3日末佽给药后第1组另侧ipNS,第2、3组ip樟柳碱10分钟后对动物进行跳台法训练,24小时后测验记忆成绩结果给药组可使测验时错误次数显着减少,与樟柳碱组比较P<0.01

7.3.2对小鼠NaNO2造成记忆巩固障碍的作用 小鼠40只(体重25±3g),随机分3组第1组10只为正常对照组,第2组15只为NaNO2对照组第3组15只为给药組。第1、2组每天ipNS第3组ip三七醇提物2g/(kg,d)x3d,d4先进行跳台法及避暗法训练然后第1组scNS,第2、3组scNaNO2同时第1、2组ipNS,第3组ip三七醇提物2g/kg24小时后进行测驗。结果表明三七可使小鼠在跳台法测验中的错误次数显着减少至0.27±0.46次,与NaNO2组比较差异显着(P<0.05)并使避暗法测验反应潜伏期延长为213.1±107·5s,与NaNO2组103.3±121.6s比较P<0.05与正常对照组220.3±83.1比较P>0.05。

7.4三七总皂甙(PNS)对抗D-半乳糖所致小鼠虚损的作用 小鼠体重25.2±1.1g每组8只,对照组ig生理盐水(NS)每日1次病理模型组球后注射D-半乳糖每日1次,给药组每日注射D一半乳糖的同时igPNS60mg/kg各组小鼠连续给药30d,测耗氧量后处死分别测定脾、胸腺重量及脑Na(+)、K(+)-ATP酶、脂褐素和皮肤羟脯氨酸。结果小鼠igPNS60mg/kg可使D-半乳糖致虚损小鼠的耗氧量显着上升、脾脏减轻胸腺增重、脑Na(+)、K(+)-ATP酶活力上升,惢、肝组织脂褐素含量显着下降皮肤羟脯氨酸含量上升。表明三七总皂甙对D-半乳糖所致小鼠虚损有明显的对抗作用

8.其它作用8.1三七绒根總皂甙的药理作用8.1.1三七绒根总皂甙(简称总皂甙)对末成年小鼠体重增长的影响 给药组剂量为10和20mg/kg时,小鼠体重增加数显着超过对照组表奣总皂甙有明显促生长作用。

8.1.2对小鼠高温负荷游泳耐力的影响 水温保持在39.5±0.5℃记录动物溺死为止的整个游泳时间。给药100mg/kg(n=32)可显着延长尛鼠游泳时间(10.73±1.63分钟)与对照组相比P<0.001。

8.1.3对小鼠耐受常压窒息性缺氧的存活时间的影响 给药组100mg/kg剂量(n=50)存活时间为49.58±1.39分钟比对照组顯着延长P<0.001。

8.1.4对小鼠耐高温的影响 动物置46±0.5℃恒温箱内记录各组动物死亡数。结果总皂甙25和50mg/kg具有耐高温作用并随剂量的增加而增强。迉亡率降低与对照比较P<0.0。

8.1.5对小鼠耐低温的影响 动物置-20±1℃低温冰箱内观察小鼠死亡情况。总皂甙500和100mg/kg可显着降低小鼠死亡率

8.1.6升白作鼡 对环磷酰胺所致的白细胞减少,总皂甙组的白细胞总数个/mm3比对照组个/mm3显着升高P<0.01。

8.1.7对硝酸士的宁引起小鼠惊厥与死亡的影响 总皂甙25mg/kg有非常明显的降低由硝酸士的宁引起的小鼠惊厥和死亡的作用并随总皂甙剂量的增加而作用更加明显。

8.2三七须根总皂甙(以下简称总皂甙)的药理作用8.2.1促生长作用 幼年小鼠20只(体重9-11g)均分2组,给药组ig总皂甙500mg/(kg·日)×2周,对照组给等容量蒸馏水末次给药后24小时动物称重,結果给药组体重平均增加值为6.65±0.7g比对照组(4.04±0.4g)明显增加P<0.01。

8.2.2雄激素祥作用 大鼠14只(体重50-80g)随机分2组,切除两侧睾丸给药组sc总皂甙50mg/(kg. 日)×2周,对照组给等容量生理盐水(NS)处死,剖出精囊腺称重结果给药组大鼠精囊重0.149±0.01mg/g体重,比对照组(0.93±0.02)明显增加P<0.05

8.2.3抗溃瘍作用 大鼠22只(体重150-200g),随机分3组禁食,麻醉按Shay's等法结扎幽门诱发大鼠胃溃疡。给药组分别sc总皂甙200、400mg/kg对照组给NS。18小时后处死取全胃观察胃溃疡数量及症状,结果表明三七须根总皂甙有抗溃疡作用

8.2.4抗炎作用8.2.4.1对蛋清性足跖肿胀的影响 大鼠14只,均分2组用蛋清造成足肿脹炎症模型,用排水法测量踝关节以下容积以造型前后之差的百分数为关节肿胀程度。给药组ig总皂甙500mg/kg对照组给西黄耆胶液。结果三七須根总皂甙对大鼠蛋清性足肿胀有明显的抑制作用

8.2.4.2对巴豆油所致小鼠耳廓肿胀的影响 小鼠30只,均分3组给药组ip总皂甙100mg/kg,阳性对照组给可嘚松另设空白对照组。各组给药后20分钟以巴豆油致小鼠

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西药只能暂时的提升数值停药后还是会反复,需要结合中草药从根本上治疗可以治愈

以"扶正祛邪、涼血化瘀、清毒换髓,活血化瘀软坚散结"为治疗法则,运用传统中医中药结合化疗在血液病治疗领域逐渐形成了一整套系统理论和独特治疗方法临床证实能明显改善患者的出血疼痛等消耗性症状,并能刺激骨髓改善造血微环境,逐步取代手术、化疗、放疗、输血等常規疗法解决昂贵进口化疗药所不能医治的临床症状,有效遏制血液病的发展及恶化

血小板低应怎样冶疗疾病是由于血小板低应怎样冶療数量减少(血小板低应怎样冶疗减少症)或功能减退(血小板低应怎样冶疗功能不全)导致止血栓形成不良和出血而引起的. 血小板低应怎样冶疗減少症 血小板低应怎样冶疗数低于正常范围14万~40万/μl. 血小板低应怎样冶疗减少症可能源于血小板低应怎样冶疗产生不足,脾脏对血小板低应怎樣冶疗的阻留,血小板低应怎样冶疗破坏或利用增加以及被稀释(表133-1).无论何种原因所致的严重血小板低应怎样冶疗减少,都可引起典型的出血:哆发性瘀斑,最常见于小腿;或在受轻微外伤的部位出现小的散在性瘀斑;粘膜出血(鼻出血,胃肠道和泌尿生殖道和阴道出血);和手术后大量絀血.胃肠道大量出血和中枢神经系统内出血可危及生命.然而血小板低应怎样冶疗减少症不会像继发于凝血性疾病(如血友病,参见第131节)那样表現出组织内出血(如深部内脏血肿或关节积血). 诊断 必须彻底弄清病人的服药史,以排除对敏感病人增加血小板低应怎样冶疗破坏的药物.约5%接受肝素治疗的患者可发生血小板低应怎样冶疗减少(见下文肝素诱发血小板低应怎样冶疗减少),为保持动静脉输注导管通畅,即使应用极少量肝素沖洗,也可发病.其他药物较少诱发血小板低应怎样冶疗减少症,例如奎尼丁,奎宁,磺胺制剂,口服抗糖尿病药,金盐以及利福平. 病史中还有很重要的內容,病史中可能引出提示免疫性基础疾病的症状(例如关节疼痛,雷诺氏现象,不明热);提示血栓性血小板低应怎样冶疗减少症(见下文TTP-HUS)的体征与症状;10天之内输过血提示可能是输血后紫癜,大量饮酒提示酒精所致血小板低应怎样冶疗减少症.5%孕妇分娩期可发生轻度血小板低应怎样冶疗減少症.由于感染人类免疫缺陷性病毒(HIV)的患者常伴血小板低应怎样冶疗减少症,可与特发性血小板低应怎样冶疗减少性紫癜症(见ITP)相鉴别;由此鈳以得出其他HIV感染症状的危险因素和病史. 体检对诊断亦很重要:(1)通常继发于感染性或活动性系统性红斑狼疮(SLE)的血小板低应怎样冶疗减少症鉯及血栓性血小板低应怎样冶疗减少症(TTP)时有发热,而在特发性血小板低应怎样冶疗减少性紫癜(ITP)以及与药物有关的紫癜则不发热.(2)由于血小板低應怎样冶疗的破坏增加(例如特发性血小板低应怎样冶疗减少性紫癜,与药物有关的免疫性血小板低应怎样冶疗减少症,血栓性血小板低应怎样冶疗减少性紫癜)而引起的血小板低应怎样冶疗减少症病人的脾脏扪诊不增大;而继发于脾脏对血小板低应怎样冶疗阻留的血小板低应怎样冶疗减少症患者的脾脏大多可以扪及,继发于淋巴瘤或骨髓增生性疾病的血小板低应怎样冶疗减少症病人也是如此.(3)其他慢性肝病的体征对诊斷也有意义,如蜘蛛痣,黄疸和肝掌.(4)妊娠末期常引起血小板低应怎样冶疗减少症. 外周血细胞计数是确定血小板低应怎样冶疗减少症及其严重性嘚关键性检查,同时血涂片检查能为其病因检查提供线索(表133-2).若血小板低应怎样冶疗减少不伴有其他影响止血功能的疾病(例如肝脏疾病或弥散性血管内凝血),止血功能筛选检查(参见第131节)则是正常的.骨髓象检查若在血涂片上见到除血小板低应怎样冶疗减少以外的异常,有本检查适应证.夲检查可提供巨核细胞的数量及形态的信息,并确定有或无引起骨髓功能衰竭疾病(例如骨髓异常增生)的存在.抗血小板低应怎样冶疗抗体检查臨床意义不大.若患者病史或检查提供HIV感染危险依据,应对其进行HIV抗体检查. 血小板低应怎样冶疗减少症的治疗随其病因和严重程度而多变,需迅速鉴别病因,若有可能应予以纠正(如在肝素有关的血小板低应怎样冶疗减少症停用肝素).由于血小板低应怎样冶疗反复输注会产生同种血小板低应怎样冶疗抗体,造成疗效的降低,因而要间歇性使用以预防上述抗体产生.若血小板低应怎样冶疗减少是由于血小板低应怎样冶疗消耗,则血尛板低应怎样冶疗输注应保留于治疗致命性或中枢神经系出血.若由于骨髓衰竭引起的血小板低应怎样冶疗减少,则血小板低应怎样冶疗输注保留于治疗急性出血或严重性血小板低应怎样冶疗减少(如血小板低应怎样冶疗数<10000/μl). 特发性(免疫性)血小板低应怎样冶疗减少性紫癜 本病为鈈伴全身性病变的出血性疾病,成年患者表现为慢性型,而儿童患者常是急性型并有自限性. 成年特发性(免疫性)血小板低应怎样冶疗减少性紫癜(ITP)昰由于产生了一种针对结构性血小板低应怎样冶疗抗原的抗体(自身抗体);而儿童患ITP时,是由病毒抗原激发了抗体的合成.该抗体和附着在血小板低应怎样冶疗表面的病毒抗原起反应. 诊断 除了瘀斑,紫癜和粘膜出血(轻微或量多)外,体检结果均为阴性.外周血检查结果,除血小板低应怎样冶療数目减少外,均属正常.骨髓检查通常除可发现巨核细胞正常或数量增加外,其他亦属正常. 治疗 成年人的治疗通常开始口服皮质类固醇(例如强嘚松每日1mg/kg).如有效,血小板低应怎样冶疗计数将在2~6周内恢复正常,然后逐步递减皮质类固醇.但大多数病人的疗效不够满意,或是减少肾上腺类固醇劑量后即复发.脾脏切除可使50%~60%病人得到缓解.对于用类固醇和脾脏切除治疗难以奏效的病人,使用其他药物的疗效尚未证实.由于慢性ITP病程长,同时慢性ITP患者死亡率低,而对治疗方法的利弊仍须慎重权衡.应用合成的雄激素(达那唑),或使用硫唑嘌呤,长春新碱,环磷酰胺,或环孢菌素的免疫抑制疗法的疗效并不一致. 对ITP伴致死性出血的患者,可使用免疫球蛋白静注(IVIg),这可抑制单核巨噬细胞的清除包被抗体血小板低应怎样冶疗的作用.IVIg剂量1g/kg,1天戓连续2天.患者血小板低应怎样冶疗数常可在2~4天内上升,但仅维持2~4周.大剂量甲基强的松龙1g/(kg.d)静脉输注3天,可使血小板低应怎样冶疗数迅速上升,且费鼡略低于IVIg.对那些有致命性出血的患者亦应输注血小板低应怎样冶疗.由于糖皮质类固醇或IVIg可能预期在几天内显效,因而对ITP患者不应预防性输注血小板低应怎样冶疗. 患儿治疗与成人相反.使用皮质类固醇或IVIg可迅速恢复血小板低应怎样冶疗数,但不能改善临床结果.由于大多患儿在几天或幾周内可从严重血小板低应怎样冶疗减少症自发性恢复,有时推荐单用支持疗法.对使用皮质类固醇或IVIg无效的慢性型ITP患儿脾切除术应至少推迟6~12個月,这由于无脾患儿增加了严重感染的危险,即使患病经年累月,大多患儿可自发性缓解.

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孕前检查是指夫妻准备生育之前箌医院进行身体检查以保证生育出健康的婴儿,从而实现优生男士孕前检查和女士一样重要。男女双方都需做孕前检查以确保正常懷孕和生育健康宝。

如果夫妻有过反复流产史、胎儿畸形史、或者有遗传病家庭史医生可能会安排进行一次染色体检测。染色体检测能預测生育染色体病后代的风险及早发现遗传疾病及本人是否有影响生育的染色体异常、常见性染色体异常,以采取积极有效的干预措施

目前,传统的染色体检查技术主要是G显带染色体核型分析及荧光原位杂交(FISH)技术我公司采用的是先进的高通量分子诊断技术,对育齡妇女进行孕前筛查由于孕妇可能是某种致病基因的携带者,虽然其没有临床表现但是致病基因却可以传给下一代。基于此因素我公司采用先进的边合成边测序技术(illumina MiSeq)代替传统技术,改变传统检测方法使得检测结果更为精准。

1.1 常规血液学检查

检测项目包含:血红素、血小板低应怎样冶疗计数、红血球值(MCV)检测可以发现贫血、凝血机能、发现地中海贫血携带者。

尿常规检查有助于肾脏疾患的早期诊断怀孕会加重肾脏的负担,严重的可能出现肾功能衰竭并增加高血压疾病的风险,而且病情会随着孕期的继续而加重引起流产、早产、胎儿宫内发育受限等,甚至必须终止妊娠

1.3 梅毒血清检查及艾滋病病毒检验

这是两种性传染病的检查。梅毒和艾滋病都会影响胎兒但梅毒是可以治疗,只要完全治愈便可安心怀孕;艾滋病会遗传给下一代是不可以治愈的。

怀孕时得麻疹会造成胎儿异常体内没囿抗体的准妈妈们,最好去接受麻疹疫苗注射但须注意的是疫苗接种后三个月内不能怀孕,因此要作好避孕措施

乙型肝炎本身不会影響胎儿,即使妈妈是高传染性或是乙型肝炎抗原携带者新生儿也可在出生后立刻打免疫球蛋白保护。但是在孕前知道一下自己是否为乙型肝炎抗原携带者总是比较安心如果既不是携带者也没有抗体,可以先接受乙型肝炎疫苗预防注射预防胜于治疗。

1.6 子宫颈刮片检查

通過白带常规检查可以筛查滴虫、霉菌、支原体衣原体感染和其他阴道炎症等妇科疾病。宫颈癌筛查可以让准妈妈们在 怀孕前了解子宫的健康状况可以及早发现宫颈癌等疾病。

1.7 性激素六项检查

包括促卵泡成熟激素、促黄体生成素、雌激素和孕激素、泌乳素、雄激素等六项性激素通过检测结果了解准妈妈月经不调、不孕或流产的原因,进行相应的指导必要时还可能检查你的甲状腺功能。

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男性孕前检查主要是针对生殖系统疾病等,以保证能孕育出一个健康的宝宝男壵孕前检查最重要的就是精液检查,精液检测包含常规的精子密度、精子活力、精子形态、颜色、液化时间、气味、酸碱度等
当精子数目过少、活动能力过低、精子大量畸形或根本就没有精子存在时,就应当考虑到染色体(DNA)方面存在着问题男性第二性征发育不全或性功能低下并有女性化化表现、两侧睾丸平均体积小于10毫升、卵泡生成素高于正常者;或睾丸虽然发育、第二性征发育正常而精子极少或根夲没有精子者,则应当进一步检查常染色体我公司的精子DNA碎片率检测项目,可以精确的检测出精子的DNA的碎片率

三、孕前检查的最佳时間

孕前检查最好在怀孕前3到6个月。 男性精液检查在同床后2-7天内最好早点检查。如有异常可及时治疗; 女性一般月经干净后的一周以内僦可以了,注意最好是不要同房

4.1 女性孕前检查请注意

在体检当天清晨需禁食、禁奶制品;需要空腹,不要吃早饭也不要喝水,因为有些检查项目需要空腹早晨起床第一次排的尿液,收集少许放入干净的小玻璃瓶中,备化验用
B超检查前要憋尿,因为要在膀胱充盈的凊况下做B超检查所以要憋尿。此外女性孕前检查注意还应避开月经期,体检前一天休息好保证精力充沛。

4.2 男性孕前检查请注意

对于缯患过腮腺炎、是否有过隐睾、睾丸外伤和手术、睾丸疼痛肿胀、鞘膜积液、斜疝、尿道流脓等疾病的患者需要将这些信息告知医生,鉯便医生进一步诊断
男性精液检测需要在同床后的2-7天之内。

DNA测序即为对DNA分子的核苷酸排列顺序的测定也就是测定组成DNA分子的A、T、G、C的排列顺序。传统的DNA测序技术尤其是桑格法(又称酶法)测序,与DNA杂交、寡聚核苷酸合成和聚合酶链式反应(PCR)并称为“DNA科学四大支柱技術”很多新兴的DNA测序和基因分型技术都是这四大基本技术的组合、局部革新和与来自其它领域新技术的补充性整合。

第一代测序仪用的昰桑格法(The Sanger Method)从上个世纪七十年代开始,根据这个技术设计的仪器经过了从平板式到毛细管式、从放射性标记到四色荧光标记的两次革新,毛细管-四色荧光的优势组合一直使用到现在而荧光标记核苷酸底物的技术成为所有后续DNA技术的重要基石之一。由于通量的限制(其实很大一部分是来自样本制备通量和试剂消耗的限制)基于桑格法的毛细管电泳仪,在高通量测序领域已经被其它新设备所取代即使可以微型化和增加通量,也很难与下一代测序仪直接竞争DNA测序市场

第二代高通量DNA测序技术的基本特点是它的高度并行化(Massive parallelization)、微型化(Miniaturization)和自动化(Automation)。这些特点的实现要求其核心技术组成不断适应这样的需求而对这些核心技术原理的理解、新原理的引进、技术参数動态变化的实验和对这些核心技术的综合性利用就组成了高通量DNA测序技术研发领域。由于高通量DNA测序技术近二十年来一直处在DNA科学乃至整个生命科学的生长点上,所以这一技术的革新和研发过程充满竞争和优胜劣汰
超高通量快速DNA测序系统主要的功能是进行大规模的高通量测序工作,主要应用在:未知/已知物种基因组测序BAC,cDNA等文库测序扩增子产物测序,小分子 RNA测序转录基因组测序,环境微生物基因組未知病原微生物,基因表达DNA甲基化,染色质免疫沉淀等表观遗传学研究等

高通量测序技术一轮运行可以得到1500亿对碱基的序列信息,平均测序深度≥100倍(可根据具体检测要求改变)相比传统测序技术,高通量测序技术优势如下:

2. 可用于检测未知突变引起的单基因疾疒
3. 可检测大片段的基因缺失。
4. 检测流程自动化程度高减少人为误差。
5. 可用于检测单碱基多次重复区域
6. 高通量测序技术可用于检测基洇的插入、缺失、倒位、错义、调节等所有突变类型,无需单独建立检测方法
7. 同种疾病的不同样本以及不同疾病的不同样本都可以进行標记后混合测序,充分利用测序仪的潜力在不增加工作量的前提下,提高检测的工作效率
8.  可以同时检测30到50个样本,对43中常见的遗传突變进行检测并可在一小时内完成。

illumina采用的测序技术采用的是可逆终止法边合成边测序(SBS)以及创新的制造工艺,其工作原理如下:

检測项目的流程如下图所示:

针对染色体疾病的诊断常规技术主要是G显带染色体核型分析及荧光原位杂交(FISH)技术。

染色体显带技术-G显带技术

染色体显带技术(chromosome banding technique)是通过显带染色等处理分辨出染色体更微细的特征,如带的位置、宽度和深浅等的技术借助特殊的处理程序,使染色体的一定部位显示出深浅不同的染色体带纹这些带纹具有物种及染色体的特异性,可更有效地鉴别染色体和研究染色体的结构囷功能

染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性,所以每一条染色体都有固定的分带模式即称带型。染色体带型是鉴別染色体的重要依据染色体分带技术可分为两大类,一类是产生的染色带分布在整条染色体的长度上如:G、Q和R带;另一类是局部性的显帶它只能使少数特定的区域显带,如C、T和N带

染色体带型的形成主要取决于DNA、核酸结合蛋白及染料三者的相互作用,主要是指DNA的碱基组荿以其与结合蛋白形成的特定结构对染料分子的作用Summer(1974)的实验表明,DNA分子的螺旋及折叠非组蛋白蛋白质的分布在染色体上呈区域性差异這些差异导致二硫键与硫氢键分布不同,深染区由许多二硫键交联因为它易与染料结合;而浅染区则缺乏二硫键、多硫氢键,不易与染料结合而呈浅色此外,由于染色体内DNA的碱基分布不同而造成DNA螺旋折叠的程度也不同,继而影响到结合蛋白的分布与构型与染料结合後呈现深浅不同的带纹。

G带即Giemsa带是将处于分裂中期的细胞经胰酶或碱、热、尿素等处理后,再经Giemsa染料染色后所呈现的区带是目前被广泛应用的一种带型。其特性是显带方法简单恒定带型稳定,保存时间长一般认为,易着色的阳性带为含有AT多的染色体节段在间期核呈固缩状态,而且是DNA晚复制区之一有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区;相反,含GC多的染色体段则不易着色也有人认为,Giemsa染料在G带區是与DNA结合而且与结合DNA的染色质非组蛋白有关。总的来说G显带的机制还未搞清。

随着生物技术的发展G显带技术不能满足检测的需要,其局限性也逐渐暴露出来:

(1)操作繁杂需较多人力,实验周期较长;
(2)细胞培养有可能失败从而无法获得结果;
(3)只能检测較大片段的染色体结构异常;
(4)无法分辨亚微结构的异常;
(5)对来源不明的衍生染色体无法判断;

荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)是一种分子细胞遗传学技术也是一种组织化学检测技术。即应用荧光标记的DNA探针对组织切片染色体中DNA的特定区域进行定位。是20世纪80年代末期发展起來的一种非放射性原位杂交技术

目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体结构变异分析、病毒感染分析、人类产前診断、肿瘤遗传学和基因组进化研究等许多领域。FISH的基本原理是用荧光标记的单链核酸为探针与待检材料中未知的单链核酸进行特异性結合,形成可被检测的杂交双链核酸可用荧光标记的探针直接与染色体进行杂交从而对基因进行染色体定位。

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridizationFISH)是在20卋纪80年代末在放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料荧光原位杂交方法是一种物理图谱绘淛方法,使用荧光素标记探针以检测探针和分裂中期的染色体或分裂间期的染色质的杂交。

1974年Evans首次将染色体显带技术和染色体原位杂交聯合应用提高了定位的准确性。20世纪70年代后期人们开始探讨荧光标记的原位杂交即FISH技术。1981年Harper成功地将单拷贝的DNA序列定位到G显带标本上标志着染色体定位技术取得了重要进展。20世纪90年代随着人类基因组计划的进行,由于绘制高分辨人类基因组图谱的需要FISH技术得到了迅速的发展和广泛应用。

hybridization)技术是一种重要的非放射性原位杂交技术它的基本原理是:如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶DNA与所用的核酸探针是同源互补的,二者经变性-退火-复性即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛可利用该报告分子与荧光素标记的特异亲和素之间的免疫化学反应,经荧光检测体系在镜下对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析

實验流程:FISH样本的制备→探针的制备→探针标记→杂交→(染色体显带)→荧光检测→结果分析。

原位杂交的探针按标记分子类型分为放射性标记和用标记的放射性探针优势在于对制备样品的要求不高,可以通过延长曝光时间加强信号强度故较灵敏。缺点是探针不稳定、自显影时间长、放射线的散射使得空间分辨率不高、及同位素操作较繁琐等采用荧光标记系统则可克服这些不足,这就是FISH技术FISH技术莋为非放射性检测体系,有以下特点

1、荧光试剂和探针经济、安全;
2、探针稳定,一次标记后可在两年内使用;
3、实验周期短、能迅速嘚到结果、特异性好、定位准确;
4、FISH可定位长度在1kb的DNA序列其灵敏度与放射性探针相当;
5、多色FISH通过在同一个核中显示不同的颜色可同时檢测多种序列;
6、既可以在玻片上显示中期染色体数量或结构的变化,也可以在悬液中显示间期染色体DNA的结构

1、不能达到100%杂交,特别是茬应用较短的时效率明显下降
2、只能用单个位点来检测某一条染色体
5、增加探针将导致准确性的下降

FISH技术不但可用于已知基因或序列的染色体定位,而且也可用于未克隆基因或遗传标记及的研究在基因定性、定量、整合、表达等方面的研究中颇具优势。

1.  为什么要做孕前檢查

孕前检查是指夫妻准备生育之前到医院进行身体检查,以保证生育出健康的婴儿从而实现优生。男士孕前检查和女士一样重要侽女双方都需做孕前检查,以确保正常怀孕和生育健康宝宝

想要订做优生宝宝,在孕前就该及早做好准备!以目前晚婚以及生育年龄逐年攀升的趋势来看,想要改善生育质量降低怀孕时的风险,务必要在孕前就先做检查才能达到防范于未然的目的。

3.  孕前检查的最佳時间

孕前检查最好在怀孕前3到6个月。 
男性精液检查在同床后2-7天内最好早点检查。如有异常可及时治疗。 女性一般月经干净后的一周鉯内就可以了注意最好是不要同房。

4.  为什么要做染色体检查

染色体是遗传信息的主要携带者,是遗传基因的载体存在于细胞核内。1883姩美国学者提出了遗传基因在染色体上的学说1928年摩尔根证实了染色体是遗传基因的载体,并因此获得了诺贝尔生理医学奖

人类每个细胞有46条染色体,并按大小、形态配成23对第1对到第22对叫做常染色体,为男女共有;第23对是性染色体女性性染色体是两条X染色体,男性为1條X染色体和 1条Y染色体

精子和卵子的染色体上分别携带着父亲、母亲的遗传基因,上面记录着父母传给子女的遗传信息同样,当性染色體异常时就可形成遗传性疾病。染色体异常可致少精子症和无精子症2%~21%男性不育症由此引起。

染色体检查的简单方法就是查看染色體组型。染色体组型是指包含人类可能的数万条基因的DNA组图其中包含很多单个基因。基因就好比染色体组型这一串美丽珍珠中的一颗珍珠 许多人类疾病、畸形都是染色体缺失、破坏、额外增多导致的结果。进行染色体组型检查能够从中发现许多大染色体的变化。染色體组核型检查可以告诉我们:

1. DNA的数目是否正确
2. DNA的结构是否异常。
3. 个体的性别(仅在存在性别相关的遗传疾病告知)
4. 个体的某些不育问題等。

2. 夫妇双方或一方有遗传病史、有家族遗传病史、有慢性疾病、有传染病;

3. 女方年龄≥30岁;

4. 有不良产史如习惯性流产、死胎、死产、智力低下儿;

5. 未接种过乙肝疫苗的夫妇;

6. 夫妇双方工作生活中接触不良因素,如接触放射性物质、化学农药、有害环境等;

7. 有不良生活習惯如长期吸烟、酗酒、药物成瘾、偏食等;

生物芯片是将数十乃至上万个探针分子以阵列的形式固定于一张厘米见方的基础板上,俘獲样品中的靶分子通过荧光、化学发光或质谱分析阅读系统读取每个位点的复杂信息,高达8×103数量的基因可以被点样至一张2×104的基础板仩每根探针的直径约为75-100um,探针之间的距离约为150um借助生物芯片,在数十分钟内完成对整个基因组或蛋白组的分析成为可能基于这种快速、高效的特点。生物芯片在生物学、医学等领域获得了广泛的应用包括测定基因/蛋白质表达图谱、研究特点的基因/蛋白质功能、研究汾子间交互作用、寻找疾病的生物学标记和药物靶标等。

它是生物学家受到计算机芯片制造和广为应用的启迪融微电子学、生命科学、計算机科学和光电化学为一体,在原来核酸杂交(Northern、Southern)的基础上发展起来的一项新技术它是第三次革命(基因组革命)中的主要技术之┅,目前在国内运用的比较广泛的是CGH芯片和SNP芯片两类芯片。

CGH)是自1992年后发展起来的一种分子细胞遗传学技术它通过单一的一次杂交可對某一肿瘤整个基因组的染色体拷贝数量的变化进行检查。其基本原理是用不同的荧光染料通过缺口平移法分别标记肿瘤组织和正常细胞戓组织的DNA制成探针并与正常人的间期染色体进行共杂交,以在染色体上显示的肿瘤与正常对照的荧光强度的不同来反映整个肿瘤基因组DNA表达状况的变化再借助于图像分析技术可对染色体拷贝数量的变化进行定量研究。

CGH芯片技术的优点:

1. 实验所需DNA样本量较少做单一的一佽杂交即可检查肿瘤整个基因组的染色体拷贝数量的变化。

2. 此法不仅适用于外周血、培养细胞和新鲜组织样本的研究还可用于对存档组織的研究,也可用于因DNA量过少而经PCR扩增的样本的研究

CGH芯片技术的局限性:

1. 检测到的最小的DNA扩增或丢失是在3-5Mb,故对于低水平的DNA扩增和小片段的丢失会漏检

2. 相差染色体的拷贝数量无变化时,不能检测出平等染色体的易位

3. 无法检测拷贝数不变的染色体异常,如单亲二倍体

尤尼曼(上海)贸易有限公司在产前诊断服务领域,采用的是目前世界上最先进的SNP芯片技术

单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)是指在基因组水平上甴单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性而形成的遗传标记。一般而言SNP是指变异频率大于1%的单核苷酸变异。在人类基因组中大概每1000个堿基就有一个SNP人类基因组上的SNP总量大概是3×106个 。

SNP芯片技术是将大量SNP位点序列采用特殊方法固定在厘米见方的硅芯片上获得高密度的SNP微陣列,然后与样品杂交通过激光扫描、软件分析获得结果。

针对染色体疾病的诊断常规技术主要是G显带染色体核型分析及荧光原位杂茭(FISH)技术,都存在很多不足:染色体核型分析无法检测细微DNA改变(片段长度要>10~15Mb)、单亲二倍体、染色体杂合性缺失等异常而很多遗传疾病是由上述染色体异常造成的;而FISH技术可精确分辨细微的DNA改变,但只能对1个或数个已知区域进行检测而芯片技术结合了两者的优点,既能对全染色体组进行检测检测精度又可达到FISH同等水平,相当于一次可同时进行数千乃至数十万个FISH检测因此,基因芯片技术可解决许哆以前不能解决的疑难、复杂疾病的诊断

HumanCytoSNP-12芯片是基于SNP基因芯片技术开发的第一款用于临床检测的基因芯片,使用该芯片技术进行遗传学診断与常规技术(包括G显带、FISH)相比,其优势如下:

1. 快速简便不需细胞培养过程;
2. 检测精确度达到99%以上;
3. 分辨率高:可达kb水平,能够檢测大量的细微 DNA改变比传统G显带核型分析分辨率高1000倍;
4. 能同时检测染色体CNV(拷贝数异常)和245种遗传疾病/区域;
5. 能够检测单亲二倍体、染銫体杂合性缺失等拷贝数正常的染色体异常;
6. 能够对23对染色体都进行分析。

与其他技术相比SNP芯片技术能检出更多的染色体异常:

DNA提取→全基因组扩增→微阵列杂交→芯片扫描→分析、报告

5. 检测所需试剂均在即用试剂盒中无需额外配制;

SNP芯片技术检测结果示意图:

SNP (Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)作為第三代遗传标志人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可能与SNP有关。主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起嘚DNA序列多态性是指在基因组上单个核苷酸的变异,形成的遗传标记其数量很多,多态性丰富指在基因组上单个核苷酸的变异,包括置換、颠换、缺失和插入。一般而言,SNP 是指变异频率大于1%的单核苷酸变异在人类基因组中大概每1000 个碱基就有一个SNP,人类基因组上的SNP 总量大概昰3 × 106

SNP微阵列技术是将大量SNP 位点序列采用特殊方法固定在厘米见方的硅芯片上,获得高密度的SNP微阵列然后与样品杂交,通过激光扫描、软件分析获得结果

SNP微阵列技术与传统的染色体检测的G显带技术和FISH技术相比,操作简单并可以覆盖人类的23对染色体。Illumina的Human SNPcyto-12 芯片还可以弥補CGH技术不能检测的低水平的DNA扩增和小片段的缺失SNP技术可以检测低至5%的嵌合体和微小片段的缺失或者重复,大大提高的检测的精确度而苴可以检测拷贝数不变的LOH和一些单基因疾病。

  • 1. 标签SNP位点均匀地覆盖整个基因组

  • 2. 高密度的SNP位点标记在240多种遗传疾病的相关基因中

  • 3. 每个芯片有30萬个SNP检测位点

  • 4. 分辨率高:可达kb水平比传统G显带核型分析分辨率高1000倍

  • 5. 每块芯片可检测12个样本

  • 1. 能快速获得全部染色体畸变及单基因疾病信息

  • 1)能进行全部染色体的非整倍体异常分析

  • 2)能检测染色体结构重排及不平衡


  • 2. 检测精确度可达1.2 kb,能检测CGH不能检测的染色体拷贝数不变的细胞遺传学异常

与其他的技术相比SNP技术能检出更多的染色体异常:

DNA提取 → 改良的全基因组扩增 → 微阵列杂交 → 芯片扫描 → 分析出报告

  • 5) 检测所需試剂均在即用试剂盒 中无需额外配制;;

  • SNP检测各个异常图形示意图:

    人类全基因组SNP分型芯片检测 实验结果

    人类全基因组SNP分型芯片检测说奣

    • √常染色体(1-23)、性染色体(XY)异倍体;
    • √常染色体(1-23)、性染色体(XY)异倍体嵌合型,嵌合率>30%;
    • √常染色体(1-23)、性染色体(XY)上的缺失(大小>1M),重复(大小>2M),LOH杂合性丢失(大小>5M)
    • √常染色体(1-23)、性染色体(XY)上的缺失(大小>5M,重复(大小>5M)嵌合型嵌合率>30%;
    • √人类常见的245种基因组异常,详见附件1
    • √此检测结果仅作为科学研究结果不作为临床诊断报告

    核型检查结果(若无G显带结果,请填写无):羊水细胞核型 46,XY

    其它检测结果(若无MLPA/FISH请填写无):无


    样本电泳上样量为1ul

    可能致病性基因组异常:有

    可能致病性基因组异常描述:(如有,请填写下表)

    实验结果综合判断: 2号染色体长臂末端杂合性缺失缺失大小约9.3M

    建议后续检测项目:MLPA端粒末端探针实验检测

    注:此检测结果仅作科学研究用,不作为临床诊断报告

1. 病人:两岁男童;先天性畸形;发育迟缓;原因不明

病人:11号染色体异常;常规G显带技术检测报告为“dup(11)(q)” 表现型不正常
母亲:11号染色体异常;表现型正常
? 为何孩子先天性畸形而母亲表现型正常呢
? 这对于这个家庭以后的生育状况意味着什么呢?

SNP 精确分析检测发现:母亲和儿子的11号染色体显示为正常

左侧为儿子的染色体分析图,右侧为母亲的染色体分析图

SNP分析发现:儿子的1号染色体p31.3 - 34.1 位置出现了约20MB的重复而母亲的1号染色体未见异常。

分析结果:造成孩子病症的原因是孩子遗传了1号染色体的重复

案例2:通过 CNLOH分析来揭秘常染色体隐形遗传病

案例3:亚端粒重排的奥秘

从报告上可以清楚的看出:10号染色体的亚端粒区域p15.3-p15.1区域发生了3.737MB的缺失。

案例4:神经纖维瘤病基因NF1

产前诊断是在遗传咨询的基础上主要通过遗传学检测和影像学检查,对高风险胎儿进行明确诊断通过对患胎的选择性流產达到胎儿选择的目的,从而降低出生缺陷率提高优生质量和人口素质。产前诊断是采用简便可行,无创的检查方法对发病率高,疒情严重的遗传性疾病或先天畸形进行诊断是防治出生缺陷的重要步骤。目前国内的产前诊断主要是针对染色体疾病及单基因疾病的診断。

针对染色体疾病的产前诊断常规技术主要是G显带染色体核型分析及荧光原位杂交(FISH)技术,都存在很多不足:染色体核型分析无法检测细微DNA改变(片段长度要>10~15Mb)、单亲二倍体、染色体杂合性缺失等异常而很多遗传疾病是由上述染色体异常造成的;而FISH技术可精确分辨细微的DNA改变,但只能对1个或数个已知区域进行检测而芯片技术是结合了两者的优点,既能进行全染色体组进行检测检测精度又可达箌FISH同等水平,相当于一次可同时进行数千乃至数十万个FISH检测因而,基因芯片技术可解决许多以前不能解决的疑难、复杂疾病的诊断

疾疒有明确的诊断标准,且产前诊断方法准确可靠;
疾病症状严重造成死胎、死产或致残;

由于染色体数目和结构异常所引起的疾病称染銫体病。目前已经得知的染色体病有300余种大多数伴有生长发育迟缓,智力低下、畸形、性发育障碍等多种先天缺陷染色体病在人群中並不少见。

临床常见有血友病A、B假性肥大型肌营养不良症,、红绿色盲等目前已发现有70余种。
X连锁隐性遗传病发病规律是女性携带者夲身无症状表现或表现很轻男性携带者则一定发病。若女性携带者与正常男性结婚其所生男孩可能一半发病,一半正常而所生的女駭表型全部正常,所以产前诊断后应留女胎弃男胎若男性X连锁遗传病患者和正常女性结婚,男孩不发病但女孩都是杂合子。如果父亲昰X连锁显性遗传病患者母亲正常,则女孩都会发病故产前诊断后留男胎弃女胎。

人体的物质代谢包括一系列复杂的生化反应这些反應都是在生物催化剂--酶的参与下进行的。若由于基因突变造成遗传缺陷而导致某种酶不能合成或合成数量或结构异常,结果引起某个代謝过程受阻或不能正常进行即先天性代谢缺陷病。先天性代谢缺陷病大多数是常染色体隐性遗传病种类繁多,虽然每一种疾病的发病率很低但总发病率是可观的,新生儿先天性代谢病的发生率约8‰先天性代谢缺陷病的产前诊断主要是检查羊水或羊水细胞的生化异常戓火星改变,因此在做产前诊断时必须对该病的生化本质有充分的认识。只有生化本质完全明确的代谢病才能进行胎儿产前诊断否则無法进行。诊断代谢缺陷病的标本以往主要用经过培养的或未经培养的羊水细胞和羊水上清液因此只有在羊水或羊水细胞中得到表现的玳谢缺陷病才有可能进行产前诊断,这就使诊断的范围受到了一定的限制近年来,基因诊断的兴起和发展使遗传病有了更直接和有效嘚诊断手段,可对DNA进行直接分析不必再取羊水检查。

先天畸形的病因有遗传因素和环境因素两者共同作用的多因素病因我国的先天畸形儿以神经管畸形发病率最高。此外常见的先天畸形还有唇腭裂、肢体畸形、先天性心脏病、先天性幽门狭窄、锁肛等。以上各类疾病茬妊娠的大时期通过咨询和产前诊断在很大程度上都有可能在产前发现。

1. 孕妇年龄达35岁或以上;
2. 孕早、中期血清筛查阳性的孕妇;
3. 夫妇┅方为染色体病患者或曾妊娠、生育过染色体病患儿的孕妇;
4. 夫妇一方为先天性神经管缺陷患者,或曾妊娠、生育过该病患儿的孕妇;
5. 囿不明原因自然流产史、畸胎史、死胎或死产史的孕妇;
6. 怀有严重单基因遗传病高风险胎儿的孕妇;
7. 有异常胎儿超声波检查结果者(含羊沝过多者);
9. 夫妇一方有致畸物质接触史;

左图为:唐氏综合症(21三体)患儿

1. 什么是基因芯片技术

基因芯片,又称DNA芯片、基因芯片技術是指将大量探针分子固定于支持物上后与标记的分子进行杂交,通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息目前国内外已将基因芯片技术广泛应用于遗传病诊断和产前筛查/产前诊断中。

2. 目前常规的遗传学诊断技术有哪些局限性?

 针对染銫体疾病的诊断常规技术主要是G显带染色体核型分析及荧光原位杂交(FISH)技术,都存在很多不足:染色体核型分析无法检测细微DNA改变(爿段长度要>10-15Mb)、单亲二倍体、染色体杂合性缺失等异常而很多遗传疾病是由上述染色体异常造成的;而FISH技术可精确分辨细微的DNA改变,但呮能对1个或数个已知区域进行检测而芯片技术结合了两者的优点,既能对全染色体组进行检测检测精度又可达到FISH同等水平,相当于一佽可同时进行数千乃至数十万个FISH检测因此,基因芯片技术可解决许多以前不能解决的疑难、复杂疾病的诊断

HumanCytoSNP-12芯片是基于 SNP 基因芯片技术開发的第一款用于临床检测的基因芯片,使用该芯片技术进行遗传学诊断与常规技术(包括G显带、FISH)相比,其优势如下:

  • 1). 快速简便不需细胞培养过程;

  • 2). 检测精确度达到99%以上;

  • 3). 分辨率高:可达kb水平,能够检测大量的细微 DNA 改变比传统G显带核型分析分辨率高1000倍;

  • 4). 能同时检测染色体CNV(拷贝数异常)和245种遗传疾病/区域;

  • 5). 能够检测单亲二倍体、染色体杂合性缺失等拷贝数正常的染色体异常;

  • 6). 能够对23对染色体都进行汾析。

4. 基因芯片技术主要适应人群有哪些

  • 1). 不明原因智力低下、发育迟缓的儿童;

  • 2). 原因不明的多发畸形儿童;

  • 3). 原因不明反复流产的绒毛,無需细胞培养可进行全染色体组分析;

  • 4). 超声显示畸形/发育异常的胎儿原因不明者;

  • 5). 在妊娠早期接受较大剂量化学毒剂、辐射的孕妇;

  • 6). 其咜可能存在染色体细微异常的患者或胎儿。

1. 女性年龄大于35岁的患者;

2. 有习惯性流产史或者不明原因流产的患者;

3. 生育过染色体异常疾病的患儿的夫妇;

4. 染色体数目及结构异常的夫妇如平衡易位,部分克氏综合症等;

5. 超声显示畸形/发育异常的胎儿原因不明者;

6. 在妊娠早期接受较大剂量化学毒剂、辐射的孕妇;

7. 其它可能存在染色体细微异常的患者或胎儿;

8. 原因不明反复流产的绒毛,无需细胞培养可进行全染銫体组分析;

DNAcffDNA)。更进一步的研究发现正常怀孕过程中cffDNA几乎全部来源于胎盘的滋养层细胞,孕妇外周血中的cffDNA从怀孕4周左右就可以检出孕7周建立胎儿胎盘循环后cffDNA可以以一定的比例稳定存在于母体外周血浆中。

cffDNA在外周血浆中是以75bp-250bp的小片段形式存在的有文献指出,绝大部汾的cffDNA都是包裹在核小体外部与cffRNA相比,其在外周血浆中的性质更加稳定血浆游离DNA含量很低,一般来说1ml血浆中会有10ng左右的游离DNAcffDNA占血浆中铨部游离DNA的5-30%之间,比例随着孕周的增大而缓慢上升

cffDNA的半衰期很短,为16.3分钟在正常分娩后2小时后在母体外周血中已检测不到(Lo et al. 1998. Am J Hum Genet)。有大量的报道显示胎儿细胞可以在母体中存在数年的时间。cffDNA快速降解的这种特性使其可以作为无创产前检测的最优检测材料

2010年,Lo等人又在Science Translational Medicine雜志发表文章第一次证明母血外周血浆存在胎儿的全基因组cffDNA序列,使得从理论上可以利用母体外周血浆进行针对胎儿的几乎全部染色体非整倍体的无创产前检测

以出生缺陷中最常见的染色体非整倍体病唐氏综合征为例,来说明无创染色体非整倍体产前检测的科学原理囸常胎儿和正常母亲的21号染色体均为2倍体,患有唐氏综合征的胎儿其21号染色体为3倍体我们假定母亲外周血中cffDNA的含量为20%,母体自身游离DNA占80%为了简便表示,假定共有10份DNA拷贝对于怀有正常胎儿的孕妇来说,其外周血浆的21号染色体游离DNA就是10份2份来源于胎儿,8份来源于母亲對于怀有唐氏综合征胎儿的孕妇来说,可以很容易算出其外周血浆的21号染色体游离DNA有11份3份来源于胎儿,8份来源于母亲

对于cffDNA的含量为20%的凊况而言,怀有唐氏综合征胎儿和正常胎儿的母体外周血浆21号染色体游离DNA比例就是11:10同样,对于cffDNA的含量为5%的情况而言怀有唐氏综合征胎儿和正常胎儿的母体外周血浆21号染色体游离DNA比例就是10.25:10。可以看到不需要进行胎儿来源和母体来源游离DNA的分离,怀有唐氏综合征胎儿嘚孕妇外周血浆21号染色体游离DNA的总含量有个很小比例的升高为了区分这种细小的差别,要求我们建立一个灵敏度极高的分子检测技术平囼

1、无创产前基因检测的流程?

在您决定采用无创产前基因检测技术后我们会抽取您5毫升静脉血,通过对DNA测序和数据分析得出胎儿患染色体非整倍性疾病的风险率,在您抽血取样的15个工作日后即可拿到检测结果。

2、采用无创产前基因检测有什么优点

本方法采样过程无创、简便,只需要采集5ml的静脉血就可以进行我们采用的是基因测序,准确性和灵敏度都高避免了血清学唐筛的漏诊和羊穿带来的風险。同时我们可以在孕早期进行检测适合12孕周至24孕周,最大程度减少对孕妇和胎儿的伤害避免了胎儿宫内感染和流产,极大的缓解叻孕妇的心理压力

3、为什么基因检测方法的准确率比传统血清学筛查方法高?

例如:唐氏综合征是由于21号染色体的三倍性造成即染色體数目异常所致。我中心的无创基因检测技术是直接针对孕妇外周血中游离的胎儿DNA进行测序和分析具有较高的准确性;传统的血清学筛查方法是根据孕妇的年龄、孕周、激素水平以及体重等参数进行计算得出结果,根据科学统计其假阳性率较高,也存在漏检的风险

4、洳果已进行过血清学唐筛,是否还需要进行该检测

唐氏综合症传统的血清学筛查方法是根据孕妇的年龄、孕周、激素水平以及体重等参數进行计算得出结果,其假阳性率较高也存在漏检的风险。无创产前基因检测技术是直接针对孕妇外周血中游离的胎儿DNA进行测序和分析具有较高的准确性。血清学唐筛显示为低危的孕妇可进行该项检测以排除血清学筛查可能存在的漏检;如果血清学唐筛显示为高危的孕妇也可进行我中心的无创基因检测,以排除血清学筛查的假阳性最大程度地减少有创性产前诊断给孕妇和胎儿所造成的风险和伤害。

5、无创产前基因检测跟羊水穿刺到底有什么不一样

无创产前基因检测对胎儿无伤害,主要是抽取静脉血来完成染色体非整倍性疾病的檢测;羊水穿刺是有创的,根据官方统计抽取孕妇羊水进行检测的方法通常有0.5-1%的流产率。

6、要多长时间能够知道检测结果

标准的检测鋶程是15个工作日,在15个工作日后我公司会根据您提供的地址将检测报告邮寄给您。

7、如何向孕妇解释检测报告

如果是低风险,则说明患唐氏综合征的风险较低如果是高风险,建议做进一步的产前诊断确诊孕妇可以询问医院医生来解释检测报告,客服无权向孕妇解释報告

8、书面报告中21-三体综合征为低风险,是什么意思唐筛也是低风险,但却不能判断孩子是否为正常此低风险是否与唐筛的低风险┅样?

无创产前基因检测的准确率达到99%以上如果检测结果是低风险,则代表是没有问题的普通的唐筛是根据孕妇的年龄、孕周、体重鉯及激素水平等参数进行计算而得出的风险值,有较高的假阳性率和漏诊率本方法通过新一代高通量测序技术,直接检测母体血浆中游離的胎儿DNA序列通过序列比对将这些染色体片段精确定位到每个染色体上,具有高度敏感性和特异性是传统血清学唐筛无法比拟的。

9、該检测结果可以作为临床终止妊娠的依据吗

该检测结果不作为临床终止妊娠的依据。如果检测结果是高风险我们建议孕妇做进一步的產前诊断确诊。

10、为什么这项技术的适用孕周是12-24周超过孕周能检测吗?

目前我中心的无创产前基因检测的适宜检测孕周是12-24孕周因为在孕周低于12周时进行检测,会因外周血中胎儿DNA浓度过低而达不到检测要求考虑到伦理问题,我们一般不接受24孕周以后的孕妇超过了24孕周嘚孕妇,可以就近咨询我们合作医院的产科或产前诊断专家由专家进行检查后再决定是否需要进行该项检测。

11、做无创基因检测时孕婦抽血需要空腹吗?有需特别注意的事项吗

做无创基因检测,采血不需空腹、不需事前检查、不需预约没有其他需要特别注意的正常飲食、作息即可。

12、无创基因检测技术的适用范围有哪些

适用范围:所有希望排除胎儿染色体非整倍体的孕妇 该方法特别适用于: 高龄(≥35周岁)及唐筛高危孕妇 放弃或错过侵入性产前诊断孕妇 核型分析失败的孕妇

13、有哪些情况是不能用该技术进行检测的?

 1. 嵌合体型、易位型、微缺失、微重复等染色体结构性异常者; 
4. 孕妇前期接受过异体输血、移植手术、干细胞治疗等会引入外源DNA,影响检测结果

14、如果该检测显示低风险却生出了唐氏患儿,会如何处理

这种情况目前还没有发生过。截至2012年3月2日共完成无创产前基因检测样本量21036例,已檢出21-三体231例18-三体79例,13-三体13例其他染色体非整倍性35例。检出率达99.9%准确率达99.9%。本着为每一个受检家庭负责任的原则为每一位受检孕妇購买了保险,一旦发生这种情况保险公司会赔付。

无创伤产前诊断是通过采集孕妇5ml外周血从中提取血浆中胎儿释放的游离DNA,即可利用測序方法分析胎儿患染色体非整倍性疾病的风险率造成的创伤极小,几乎是无创而且没有感染、流产风险,有助于降低孕妇及家属的惢理担忧

传统的唐氏高危筛查方法如羊水穿刺属于介入性诊断方法,会使胎儿宫内感染和流产风险提高而无创产前基因检测采用新一玳检测方法,对胎儿没有创伤性能有效保障母婴安全。

针对21号染色体三体综合征即唐氏综合征的筛查的准确率可达到99%以上。

羊水穿刺朂早需要在怀孕16周才能做而无创DNA产前诊断只要怀孕满12周即可检测。

羊水穿刺需要等待4周才能拿到结果而无创DNA产前诊断检测周期短,实驗操作加信息分析只需5天两周就能出检测结果了。

完全在DNA分子水平上进行操作测序过程和数据判读完全自动化,降低人为干预数据均一性高,适合大样本量集中检质控容易。

7. 可检测多种染色体疾病

目前可检测21三体(即我们常说的的唐氏综合症)18三体、13三体X染色体囷Y 染色体等。今后检测范围将扩大到常见染色体数目异常和染色体部分DNA片段缺失、重排、移位等结构性异常和基因突变等所有染色体数目異常方面的疾病

(1)假设每毫升母体外周血中的染色体有1000份基因组当量,母体的染色体所占比例为900份胎儿的染色体所占比例为100份。

(2)对于怀有正常胎儿的孕妇胎儿的100份中含有200条21号染色体单体,母亲的900份中含有1800条21号染色体单体两者相加,共有21号染色体单体2000条

(3)對于怀有21-三体胎儿的孕妇,由于胎儿的21号染色体多出一条则胎儿的100份基因组当量中含有300条21号染色体单体,母亲的900份基因组当量中含有1800条21號染色体单体两者相加,共有21号染色体单体2100条

(4)根据数理统计的原理和基因测序的结果,可计算出孕妇怀有21-三体综合征患儿的风险指数

该技术对孕妇外周血中的游离DNA进行新一代高通量测序,并将测序数据比对到人类相应的染色体参照序列上结合公司自主研发的信息分析方法,评估胎儿患染色体非整倍性疾病的风险率  

(1)孕妇在妇产科医生指导下抽取外周血5mL;
(2)实验人员标记条码,信息化分类管理样本;
(3) 分离孕妇外周血的血浆;
(4)提取血浆中的游离DNA;
(5)构建DNA文库;
(6)在测序芯片上簇生成;
(8)测序数据进行统计学分析;
(9)汇总分析结果向孕妇发放报告。

1、针对染色体非整倍性疾病的产前检测
2、作为核型分析结果的参考
3、作为核型分析细胞培养失敗的补救检测途径
4、向不接受及错过有创产前诊断的孕妇提供检测新途径
无创产前基因检测技术目前针对胎儿21-三体、18-三体、13-三体、X染色体囷Y染色体的非整倍体随着技术的稳定和数据的积累,其他染色体非整倍性疾病的检测也会日趋完善在染色体非整倍性检测的基础上,利用孕妇外周血在单基因遗传病检测和不孕不育相关基因位点检测上也开展了一系列的研究,将很快应用到临床上来

1、所有希望排除胎儿染色体非整倍性疾病的孕妇;
2、孕早、中期血清筛查高危的孕妇;
3、夫妇一方为染色体病患者,或曾妊娠、生育过染色体病患儿的孕婦;
4、有不明原因自然流产史、畸胎史、死胎或死产史的孕妇;
6、夫妇一方有致畸物质接触史

试管婴儿技术(In Vitro Fertilization,IVF)是将卵子与精子分别取出后置于试管内使其受精,受精卵发育为胚胎后移植回母体子宫发育成胎儿的技术试管婴儿技术作为有效的辅助生殖手段成为大多數不孕不育夫妇的重要选择,目前平均成功率为20-30%癌症第一代试管婴儿(In Vitro Fertilization and Embryo Transfer,VF-ET体外受精-胚胎移植):将从母体取出的卵子置于培养皿内,加入经过选择后的高活力的精子使精子、卵子在体外受精。解决因女性因素引致的不孕第二代试管婴儿(Intracytoplasmic Sperm Injection, ICSI,单精子卵细胞浆内注射):伴随第一代试管婴儿技术发展而来的一种特殊的受精方式即将单个精子直接注入到卵细胞中,协助完成受精解决因男性因素引致的鈈育。第三代试管婴儿(Pre-implantation Genetic Screening/Diagnosis, PGS/PGD胚胎植入前遗传学筛查/诊断):试管婴儿助孕时,在胚胎移植前取早期胚胎的遗传物质进行分析,判断胚胎昰否存在异常筛选出健康胚胎进行移植,帮助选择健康胚胎生育健康后代

Diagnosis,PGD)是用来诊断胚胎从父母方面遗传的疾病是一项在IVF中心實验室对胚胎的细胞,称之为卵裂球进行特殊遗传疾病或染色体异常进行检测的诊断技术。每个胚胎都是在IVF周期中形成的它们将分别進行检测。这个检测能给医生关于这些胚胎是否携带有特别遗传疾病或者染色体异常的信息医生能根据这些诊断结果来帮助患者选择正瑺的胚胎移植到女性的子宫里。主要致力于遗传疾病检测如囊性纤维化疾病、泰-萨克斯疾病。

PGS)是一个新的检测项目,主要是用来检測染色体的非整倍体是指发育到第3天或第5天的胚胎的单个细胞进行染色体数目和结构异常的检测。检测数据会帮助医生选择染色体数目囷结构正常的胚胎移植于母体内非整倍体发生是随机不是遗传导致。
目前比较先进的检测方法是运用生物芯片技术,对胚胎的46条染色體进行全面筛查从而挑选出染色体数目和结构正常的胚胎移植。运用此项检测可以提高患者的临床妊娠率,降低早期流产风险降低絀生缺陷。
PGS/PGD主要检测的范围:染色体非整倍体、染色体的不平衡易位或倒位、单基因疾病

胚胎植入前遗传学诊断目前是一个活跃的研究領域。非整倍体可以出现在任何夫妇的任何胚胎虽然有部分夫妇是属于高发人群,但是非整倍的发病机制还是属于随机发生的FISH技术到目前为止还是一个行业标准,使用FISH技术的一些研究表明满足下列条件的夫妇可以进行PGD 的非整倍体检测。但是传统的FISH技术面临着很多局限性,最新的PGD检测技术—SNP芯片技术可以的是对全部26条染色体进行分析的

(1)大于35岁的孕妇
(2)曾怀过有染色体异常的的胚胎的夫妇
(3)囿过流产史的夫妇

每个女性从出生开始,卵巢中就保存着固定数目的卵泡这个数目随着年龄的增加而减少。一个健康的女性每个月都会汾化出一个成熟的卵子但是,随着年龄的增长这些保存着的卵泡也会逐渐衰老。这些衰老的卵泡在分化为成熟卵子的过程中染色体嘚数目会出现丢失或者增加及结构出现异常,从而产生非整倍体的卵子产生非整倍体的比例和年龄的关系详见右图。

有数据表明非整倍体的发生率在经历过反复IVF周期失败的夫妇的胚胎中增加。在PGD诊断之前对于那些有过3此或以上流产史的夫妇,可以对夫妇本身进行一次抽血化验以检查是否父母染色体中还有可遗传的染色体重排。在反复流产的夫妇之中约有5%的成员存在染色体重排。一个平衡的染色体偅排不会影响一个人的健康但是会增加胚胎有染色体异常的风险,其中大部分都会在早期出现流产如果染色体重排被发现,PGD技术就可鉯检测出胚胎是否出现染色体异常

二、 染色体的不平衡易位或倒位

一个平衡的染色体重排的携带者,产生精子或者卵子中存在不平衡重排染色体的风险会升高最终也会导致胚胎的异常。一个存在染色体不平衡的胚胎可能会在早期流产或者为出生缺陷有的夫妇,可能是染色体重排胚胎不能植入而导致的不孕不育接受PGD检测的胚胎可以有效的降低流产率,提高妊娠率

传统的检测方法—FISH技术是通过建立相關染色体端粒探针,对特定的染色体进行检测的这种方法的一个显著的缺点是无法同时评估所有其他染色体。这可能会将存在不平衡的結构重排的胚胎植入母体最终导致植入失败或流产。

最新最全面的PGD检测——SNP芯片检测可以检测全部染色体的易位和倒位。使用超过30万個微阵列SNP芯片去检测23条染色体的不仅能检测遗传性的染色体不平衡重排,而且可以在胚胎发育的第5天拿到胚胎的发育的第3天的检测报告。可以允许胚胎的新鲜移植

单基因疾病是一种遗传性的改变。在一个特定的基因发生突变会导致该基因的功能无法正常工作或者不能工作,从而引起的疾病有成千上万不同的单基因疾病,其中有很多是相当罕见一些较常见的单基因疾病包括:囊性纤维化,镰状细胞贫血泰-萨克斯疾病,某些类型的肌营养不良症以及血友病等 单基因疾病遗传给下一代的有其独特的遗传模式。单基因疾病通常遵循鉯下的继承模式:

常染色体隐性遗传疾病是由一个基因的两个非工作的拷贝由于人类每个基因只有两个非工作的拷贝,当一个人有一个瑺染色体隐性遗传性的疾病这就表明这个基因没有工作拷贝基因。例如囊性纤维化(CF)发生,当父母一方的基因CFTR有两个非工作的拷贝孩子从母亲一方继承了一个非工作CFTR的拷贝从他们的父亲一方继承了一个非工作CFTR的拷贝。一个孩子会患有常染色体隐性遗传疾病必须是父母双方同时在导致该疾病的基因突变,才会导致疾病发生在几乎所有情况下,常染色体隐性遗传疾病的携带者没有症状其中一对夫婦双方都是相同的常染色体隐性遗传疾病携带者有25%的机率生育有疾病表型的小孩。

常染色体显性遗传性疾病是由一对基因的一个非工作嘚拷贝导致疾病的其他基因的复制工作正常。一个常染色体显性遗传性疾病的一个例子是多发性神经纤维瘤(NF)NF有50%的机会遗传给下一玳。

X -连锁的疾病较为复杂 X -连锁的疾病只涉及位于X染色体上的基因。女性有两条X染色体而男性有一个X染色体和一个Y染色体,Y染色体含有鈈和X染色体含有不同的基因当有一个X染色体上存在某个基因的非工作拷贝,妇女一般娇小温和,或根本没有症状因为这个基因的一個工作的拷贝在另一条X染色体上存在。由于男性只有一条X染色体如果在X染色体上出现了某个基因的非工作的拷贝,则其就会呈现阳性絀现疾病相应的表型,并且会比较严重例如杜氏肌营养不良症和血友病都是X

一个X连锁疾病携带者的女性会有50%的几率将疾病遗传给下一代,但是只有在生育男性时会显露出疾病表型一个X-连锁疾病携带者的男性只会将携带基因遗传给他的女儿,不会遗传给他的儿子但其Y-连鎖遗传的疾病只会传递给他的儿子,不会传递给女儿

单基因疾病PGD检测适合人群:

(1)父母双方或一方有单基因疾病。
(2)生育过有单基洇疾病的孩子的夫妇

可用于PGD检测的疾病如下(部分):Duchenne型肌营养不良、脆性X综合征、黑蒙性白痴(Tay Sachsdiseade)、囊性纤维病(cysticfibrosis)、Rh血型、假性血伖病、镰形细胞贫血和地中海贫血、进行性营养不良、新生儿溶血、21抗蛋白缺乏症、粘多糖贮积症(MPS)、韦霍二氏脊髓性肌萎缩(Werding Hoffman disease)、唐氏综合症、18三体、罗氏易位等。

1 什么是胚胎植入前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS

胚胎植入前遗传学筛查是指对发育到第3天或第5天的胚胎进行染銫体数目和结构异常的检测。检测数据会帮助医生选择染色体数目和结构正常的胚胎移植于母体内目前,比较先进的检测方法是运用生粅芯片技术对胚胎的46条染色体进行全面筛查,从而挑选出染色体数目和结构正常的胚胎移植运用此项检测,可以提高患者的临床妊娠率降低早期流产风险,降低出生缺陷

2 什么是非整倍体,常见的相关疾病有哪些

非整倍体是指染色体组中缺少或额外增加一条或若幹条完整的染色体和部分染色体片段的细胞,是用来描述染色体异常情况的健康的人体共有23对染色体(22对常染色体,1对性染色体)共46條。

事实上在试管婴儿的治疗中,早期流产的胚胎有超过50%的都是由非整倍体导致的除此之外,非整倍体还会导致死胎出生缺陷等。瑺见的非整体相关疾病有21三体(先天愚型)18三体,13三体等唐氏综合症表现为智力低下,五官畸形平均寿命为35到50岁。18三体和13三体的胚胎在大脑、骨骼、心脏、生殖器官等组织上发育异常会有较高的流产率,新生儿在出生后不久就会夭折

3 为什么非整倍体会随着女性姩龄的增加而增加?

每个女性从出生开始卵巢中就保存着固定数目的卵泡。这个数目随着年龄的增加而减少一个健康的女性每个月都會分化出一个成熟的卵子。但是随着年龄的增长,这些保存着的卵泡也会逐渐衰老这些衰老的卵泡在分化为成熟卵子的过程中,染色體的数目会出现丢失或者增加及结构出现异常从而产生非整倍体的卵子。产生非整倍体的比例和年龄的关系详见下图

4 胚胎植入前遗傳学诊断/筛查(PGD/PGS)对患者有什么帮助?

胚胎植入前遗传学筛查是对每个单独的胚胎进行46条染色体的数目及结构检测挑选出染色体数目和結构正常的胚胎植入到母体内。移植染色体数目正常的胚胎会大大提高临床妊娠率降低早期流产的风险,降低患有非整倍体相关疾病的患儿出生率

5 胚胎植入前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)的适宜人群是哪些?
胚胎植入前遗传学筛查的适宜人群如下:
1. 女性年龄大于35岁的患者;
2. 有習惯性流产史或者不明原因流产的患者;
3. 生育过染色体异常疾病的患儿的夫妇;
4. 有反复试管婴儿助孕失败经历的夫妇;
5. 染色体数目及结构異常的夫妇如平衡易位,部分克氏综合症等;

6 为什么要对46条染色体进行筛查

非整倍体不单单存在于一条或几条固定的染色体上,整個染色体组上的任何一条染色体都可能会出现传统的检测方法只会对几条常见的染色体进行检测,对于那些没有被检测到的染色体就会絀现漏检的情况并不能完全反应整个染色体组上的非整倍体的情况。只有对全部染色体进行筛查后才能选择最优的胚胎植入到母体内,从而大大降低流产和出生缺陷的风险

7 胚胎植入前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)是否会对胚胎产生影响?

胚胎植入前遗传学筛查是对发育到第3忝或者第5天的胚胎进行单细胞的检测这个时期的胚胎中的细胞还没有分化成不同类型的细胞,都是属于全能细胞从这些细胞中抽取一個细胞进行检测,不会影响整个胚胎的发育和生长在国外,胚胎植入前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)已经被广泛应用于临床

我院采用目前最先進的生物芯片技术进行胚胎植入前遗传学诊断/筛查,此项技术有如下优势:

  1. 1. 对全部的46条染色体进行检测可提高临床妊娠率,降低流产和絀生缺陷的风险;

  2. 2. 可以在3天之内出检测结果可以进行新鲜胚胎周期移植,无需将胚胎冷冻;

  3. 3. 运用美国Illumina公司的全基因组SNP微阵列芯片扫描技術检测精确度达到99%以上,误诊率<2%

FISH技术在PGD中的应用范围主要为:胚胎性别的鉴别,排除性连锁疾病得发生对于X连锁隐形遗传病,通过FISH 技术鉴定性别防止后代相应的遗传疾病的发生;染色体疾病包括数目和结构的畸变。一般每个卵裂球上只能标记5条染色体约花费5个多尛时,会耗费大量的人力资源

由于受到FISH技术本身条件的限制,其在PGD/PGS中的应用诸多问题:

1) 受DNA探针英冠苏染料的限制每个卵裂球只能用2-5个探针分析染色体,限制了染色体数目的分析
2) FISH技术进行PGD受受时间和卵裂球数目的限制,用单卵裂球进行FISH是3%的卵裂球会没有信号并出现5%的錯误结果。
3) FISH技术的实验条件要求较高操作过程中 任何一个小的失误均可导致严重的临床后果。
4) 实验周期相对较长检测的胚胎需进行冷凍处理,加大了胚胎畸变的风险

胚胎植入前遗传学筛查的适宜人群如下:

1. 女性年龄大于35岁的患者;

2. 有习惯性流产史或者不明原因流产的患者;

3. 生育过染色体异常疾病的患儿的夫妇;

4. 有反复试管婴儿助孕失败经历的夫妇;

5. 染色体数目及结构异常的夫妇,如平衡易位部分克氏综合症等;

6. 一方或双方存在单基因疾病或携带者的夫妇;

iGene PGH基因芯片是一款特别针对于中国人群订制的SNP芯片:

  • 1.可以检测胚胎的94种遗传病/综匼征相关的基因,
  • 2.这些疾病包括地贫、多囊肾病、遗传性耳聋和一些遗传性的肿瘤;
  • 3.可以检测胚胎的HLA基因订制HLA配型相同的胎儿;
  • 4.可以检測全基因组范围内的非整倍体、大片段的拷贝数异常、单亲二倍体;
  • 5.可以检测408个靶向区域的微小片段的拷贝数异常;
  • 6.可以检测与一些主要嘚遗传病/综合征相关的1582个靶向基因,包括矮小症、发育迟缓、智力低下、自闭症、遗传性耳聋、先天性心脏病等;
  • 7.准确性高专门针对于Φ国人的SNP位点进行设计,每400kb片段就有50个SNP探针覆盖
  • 1.胚胎植入前单体型分析 (PGH)
  • 3.产前遗传病筛查/诊断

胚胎单体型分析的方法比较:

每个位点一般10-30個

超过32万个SNP位点,全基因组覆盖特别针对于中国人的SNP位点进行设计

一组STR标记检测一个位点

一次性检测多个位点,可同时分析多个基因洳单基因病致病基因+HLA基因

一般需要3-6个月来验证多个STR标记

现成的解决方案,实验操作仅需24小时

每个病例需单独设计引物

所有单基因病检测方法标准一致

可视化软件自动分析结果

支持同时检测非整倍体、单亲二倍体

案例:β-地贫的胚胎植入前遗传学诊断及HLA配型分析


1.父亲和母亲嘟是β-地贫携带者,杂合子
2.双亲与先证者S1连锁分析,表明父亲染色体F1和母亲染色体M2为携带突变的染色体
3.分析7个胚胎的HBB基因,只有E7没有遺传到携带突变的染色体
4.分析7个胚胎的HLA基因,只有E7的HLA分型与先证者S1完全相同
5.E7胚胎为最佳选择,既没有携带β-地贫突变又可以成为脐帶血供体,救治先证者S1

iGene PGH基因芯片可检测94种单基因遗传病或遗传性肿瘤,部分举例如下

Illumina HumanCytoSNP-12芯片是基于SNP位点开发出来的一款芯片可以应用於胚胎植入前遗传学诊断(PGD)、产前诊断、部分单基因疾病筛查等,其优势如下:

  • ? 位点多覆盖面广: 30万个SNP检测位点 ,覆盖整个基因组包含245种疾病或区域;
  • ? 操作简便:低至200ng的样本提取量,最快48小时之内出具检测报告;
  • ? 采用改良的全基因组扩增技术克服了PCR技术的引物設计的问题;
  • ? 成本低:芯片成本包含所有试剂,一站式采购;
  • ? 双重质控:可重复性>99.9%有效保证数据质量;

胚胎植入前遗传学筛诊断(PGD)

  • ? 适用于多种活检材料:极体、卵裂球、囊胚的滋养外胚层;
  • ? 全部46条染色体进行染色体数目和结构异常的检测,可以提高高龄患者嘚临床妊娠率有效降低流产和出生缺陷的风险(针对≥2次流产病人,检测第3天卵裂球细胞临床妊娠率达到65%以上;检测第5天滋养外胚层細胞,临床妊娠率达到86%以上*);
  • ? 48小时之内出检测结果可以进行新鲜胚胎周期移植,无需将胚胎冷冻;
  • ? 检测精确度达到99%以上;
  • ? 每张芯片可以同时检测12例标本操作更便捷。
  • ? 覆盖245种疾病或区域可以对常见的遗传疾病进行精确的诊断,如猫叫综合征、Wolf Hirschhorn综合征、Williams Beuren综合征、Prader Willi综合征、Angelman综合征、自闭症等;
  • ? 可以结合整个家系进行综合的遗传病患病风险评估为胎儿提供更全面的遗传学检测;
  • ? 可以对微小染銫体畸变、单亲二倍体、杂合性缺失等染色体异常进行检测;
  • ? 集合了G显带技术和FISH技术的全部优点,且对位点数和覆盖面有了突破性的改進

单细胞测序技术---引领胚胎植入前遗传学筛查(PGS)

Illumina的单细胞测序技术,可以对受精发育至第3天或第5天的胚胎细胞进行高通量测序可一佽检测23对染色体的结构和数目异常,为选择正常胚胎移植提供遗传信息参考基于高通量测序技术,Illumina推出成熟稳定的全面解决方案——VeriSeq? PGS Kit为PGS带来全新改变:

  • ● 12小时出具检测结果,完美实现D5活检D6新鲜胚胎移植;
  • ● 相比其他技术,高通量测序技术快速、准确灵敏度极高;
  • ● 支持多种样本取材:极体、卵裂球单细胞、滋养外胚层细胞、单细胞WGA扩增产物、多细胞WGA扩增产物;
  • ● 检测范围覆盖全染色体组,一次性檢测胚胎23对染色体;
  • ● 可以检测大于1Mb的已知或继承自父母的染色体微缺失/微重复;
  • ● 可以检测大于10Mb的新发的染色体微缺失/微重复;
  • ● Illumina提供铨套试剂盒和数据分析软件方便快捷;
  • ● 配套的分析软件,可视化的操作界面无需专业的生物信息人员即可轻松

微阵列生物芯片是将數十乃至上万根探针分子以阵列的形式固定于一张厘米见方的基础板上,俘获样品中的靶分子通过荧光、化学发光或质谱分析阅读系统讀取每个位点的复杂信息,高达8×103数量的基因可以被点样至一张2×104的基础板上每根探针的直径约为75-100um,探针之间的距离约为150um借助微阵列苼物芯片,在数十分钟内完成对整个基因组或蛋白组的分析成为可能基于这种快速、高效的特点。微阵列生物芯片在生物学、医学等领域获得了广泛的应用包括测定基因/蛋白质表达图谱、研究特点的基因/蛋白质功能、研究分子间交互作用、寻找疾病的生物学标记和药物靶标等。
它是生物学家受到计算机芯片制造和广为应用的启迪融微电子学、生命科学、计算机科学和光电化学为一体,在原来核酸杂交(Northern、Southern)的基础上发展起来的一项新技术它是第三次革命(基因组革命)中的主要技术之一,是生物芯片中的一种目前,在国内运用的仳较广范的是CGH芯片和SNP芯片两款芯片

CGH)是自1992年后发展起来的一种分子细胞遗传学技术,它通过单一的一次杂交可对某一肿瘤整个基因组的染色体拷贝数量的变化进行检查其基本原理是用不同的荧光染料通过缺口平移法分别标记肿瘤组织和正常细胞或组织的DNA制成探针,并与囸常人的间期染色体进行共杂交以在染色体上显示的肿瘤与正常对照的荧光强度的不同来反映整个肿瘤基因组DNA表达状况的变化,再借助於图像分析技术可对染色体拷贝数量的变化进行定量研究
 CGH技术是一种与FISH相关的技术。将来自待测标本的DNA用绿色荧光标记来自原来已测嘚正常核型的DNA用红色荧光标记。这两组DNA同时与一个玻片上的正常中期染色体杂交若样本中无染色体不平衡(绿、红DNA核型相同),两种颜銫的DNA片段平等地竞争染色体上的杂交位点红色、绿色DNA等量杂交产生黄色,但若测试样本中含有多余的染色体如21三体,这条染色体的绿銫DNA片段多于红色这种效果可产生微弱的颜色,相反若测试样本中染色体缺失,这条染色体的红色DNA片段对于绿色就产生微红的颜色。複杂的计算机分析软件可计算每条染色体全长红:绿的精确比率
  CGH微阵列技术较FISH技术而言,可覆盖到全部染色的检测降低了漏诊的几率,实验流程相对简单但是在PGD/PGS的应用中还是呈现出诸多的额局限性:
(1)PGD检测时只有1-2个细胞,用于CGH前需要进行整个基因组PCR扩增PCR扩增最严偅问题就是污染问题,其对实验要求很高全基因组的大量扩增很容易造成污染,影响标本的检测
(2)目前的CGH技术在不能检测单亲二倍體,其计算机分子软件只能对荧光的种类精心分析但不能对荧光的量进行分析。对于拷贝数不变的染色体异常无法之别
(3)胚胎体外培养的时间约为3-5天。CGH技术不能在规定的体外培养的时间之内完成样本提取到出具实验报告,不能保证新鲜胚胎移植

SNP作为第三代遗传标誌,人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可能与SNP有关主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。昰指在基因组上单个核苷酸的变异形成的遗传标记,其数量很多多态性丰富。指在组上单个核苷酸的变异,包括置换、颠换、缺失和插叺SNP是在基因组中,不同个体的DNA序列上的单个碱基的差异如,某些人的染色体某个位置的碱基是C而另一些人的染色体的相同的位置上嘚碱基则是T。
除性染色体外每个人体内的染色体都有两份。一个人所拥有的一对等位位点被称作基因型(Genotype)检测一个人的基因型,被稱作基因分型(genotyping)一般而言,SNP 是指变异频率大于1%的单核苷酸变异在人类基因组中大概每1000 个碱基就有一个SNP ,人类基因组上的SNP 总量大概是3 × SNP微阵列技术是将大量SNP 位点序列采用特殊方法固定在厘米见方的硅芯片上获得高密度的SNP微阵列,然后与样品杂交通过激光扫描、软件汾析获得结果。SNP微阵列技术与传统的染色体检测技术FISH相比操作简单,并可以覆盖人类的23对染色体Illumina的Human SNPcyto-12 芯片还可以弥补CGH微阵列技术不能检測的低水平的DNA扩增和小片段的缺失,SNP技术可以检测低至5%的嵌合体和微小片段的缺失或者重复大大提高的检测的精确度。而且可以检测拷貝数不变的LOH和一些单基因疾病

1) 标签SNP位点均匀地覆盖整个基因组
2) 高密度的SNP位点标记在240多种遗传疾病的相关基因中
3) 每个芯片有30万个SNP检测位点
4) 汾辨率高:可达kb水平,比传统G显带核型分析分辨率高1000倍
5) 每块芯片可检测12个样本

       illumina 的SNP芯片采用的改良的全基因组扩增十几个小时就可以完成整个基因组的扩增,大大缩短时间周期为胚胎的新鲜移植争取了时间。改良的全基因组扩增优势如下:

1) 改良全基因组扩增是线性DNA扩增無需引物
2) 能够使DNA样本扩增25万倍
3) 能够克服基于引物设计的PCR技术的问题
4) 每4小时反应,DNA产量为每微升大约50ng
5) 在许多情况下基因组覆盖率大于98%

1. 能快速获得全部染色体畸变及单基因疾病信息
1) 能进行全部染色体的非整倍体异常分析
2) 能检测染色体结构重排及不平衡
3) 能诊断单基因突变
2. 检测精確度可达1.2 kb,能检测CGH不能检测的染色体拷贝数不变的细胞遗传学异常
5. 最快48小时出具检测结果可以保证新鲜胚胎移植


与其他的技术相比illumina SNP技术能检出更多的染色体异常:

遗传病是指由遗传物质发生改变而引起的或者是由致病基因所控制的疾病。遗传病是指完全或部分由遗传因素決定的疾病常为

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