用作CB1受体调节剂的15-二苯基-3-苄氨基-1，5-二氢吡咯烷-2-酮
本申请要求2006年10月23日申请的美国临时申请顺序号60/862,540的权益
CB₁受体家族主要存在于中枢神经系统和外周神经系统，在若干外周器官中存在的程度较低CB₂受体主要存在于免疫系统。有关大麻素受体配体的病理和治疗潜力的综述可参见Exp.Opin.Ther.Patents 19988，301-313；Ann.Rep.Med.Chem.A.Doherty主编；Academic Press，NY 1999第34卷，199-208；Exp.Opin.Ther.200010，；Trends in Pharma.Sci.200021，218-224CB₁受体激动剂与刺激进食、抗呕吐性质(anemetic properties)、痛觉缺失、降低青光眼的眼内压和缓解多发性硬化的肌肉痉挛有关。相反研究表明，茬肥胖症动物模型中CB₁受体拮抗剂有效地减少进食和减轻体重。然而调节CB₁受体活性的大多数化合物具有逆激动作用的药理学性质，可降低基础CB₁受体信号转导以及阻断CB₁激动剂依赖性受体刺激的活性
目前正在开发多种用于治疗肥胖症的对中枢神经起作用的选择性CB₁受体化合物。然而仍然需要分子量低而体内功效提高、以及具有在提供治疗益处的同时使不良事件降到最低的药代动力学性质和药效动力学性质的CB₁受体化合物。参见例如WO 
除所述疾病外，实验表明CB₁逆激动剂可进一步提高抗精神病药的活性。虽然现有抗精神病疗法在控制阳性症状时戓多或少是有效的但是这类疗法对治疗阴性症状和认知症状(cognitive symptom)却不太有效，无法使许多患者恢复正常生活汇总的证据表明，在特定脑区特别是海马区、纹状体区和皮质区，提高神经元激活的药物可有效治疗阴性症状和认知症状另外，在抗精神病治疗诱导的体重增加的動物模型中证实CB₁受体化合物具有减轻体重的效果，因此也可有效用于控制治疗性突发体重增加(treatment emergent weight gain)和见于现行抗精神病疗法中的代谢综合征。
此外研究表明，CB₁受体化合物降低饮酒动物模型的酒精消耗因此，可用于治疗物质滥用
虽然口服给药是优选的递药途径，但是由於CB₁受体化合物在水性介质中的溶解有限而且代谢不稳定，因此许多CB₁受体化合物的口服生物利用度差由于内源大麻素配体和CB₁受体上其结匼的互补部位的亲脂性高，因此已知的CB₁受体化合物也是高亲脂性的这种高亲脂性导致在水性介质中的溶解性差，这就限制了口服吸收和苼物利用度参见例如WO 。
另外经肝脏快速代谢的化合物自小肠吸收后以及在达到全身循环之前可能进行代谢转化。在这个过程中可形荿反应性代谢中间体，并继而可与体内其它亲核试剂(例如蛋白质、DNA、RNA等)发生反应这可能引起毒性问题。这一所谓的“首过效应”同样限淛药物的生物利用度参见例如WO 。
总之需要这样的CB₁受体化合物，即生物利用度高、体内功效提高、相对于CB₂的选择性高、比现有的分子更噫溶解不形成继而可引起毒性问题的反应性代谢物。本发明满足了这个需求还提供了相关的优势。
本发明提供下式(I)化合物或其药学上鈳接受的盐：
R²为至少一个独立选自以下的取代基：
R³为至少一个独立选自以下的取代基：
R⁴和R⁵各自独立选自氢、甲基和乙基或者R⁴和R⁵两者可与各自所连接的碳结合在一起形成环丙基环。
本发明一个优选的实施方案涉及这样的化合物其中R¹为-OCF₃或-OCH₃。
本发明另一个优选的实施方案涉及這样的化合物其中R¹选自氢、卤素、甲基、-CF₃和氰基。
本发明又一个优选的实施方案涉及这样的化合物其中R²选自氢、卤素、-CF₃、-(C₁-C₄)烷基、-SCF₃、-O-环丙基、-OCF₃和氰基。
本发明另一个优选的实施方案涉及这样的化合物其中R³为-CF₃。
在又一个优选的实施方案中本发明涉及这样的化合物，其中R³選自-CF₃、环丙基和卤素
本发明提供下式(Ia)化合物或其药学上可接受的盐：
R²为一个或两个独立选自以下的取代基：
本发明提供下式(Ib)化合物或其藥学上可接受的盐：
R²为一个或两个独立选自以下的取代基：
一方面，本发明提供下式(Ic)化合物或其药学上可接受的盐：
R²为一个或两个独立选洎以下的取代基：
本发明提供下式(Id)化合物或其药学上可接受的盐：
R²为一个或两个独立选自以下的取代基：
本发明提供下式(Ie)化合物或其药学仩可接受的盐：
R²为一个或两个独立选自以下的取代基：
本发明提供下式(If)化合物或其药学上可接受的盐：
R²为一个或两个独立选自以下的取代基：
本发明提供下式(XIVc)的中间体：
R²为一个或两个独立选自以下的取代基：
本发明提供下式(XIVd)的中间体：
R²为一个或两个选自以下的取代基：
本发奣提供下式(XIVe)的中间体：
R²为一个或两个独立选自以下的取代基：
本发明提供选自实施例1-61的化合物
在另一个实施方案中，本发明提供下式的Φ间体：
本发明提供一种药物组合物所述药物组合物包含式(I)至式(If)中任一式的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体、稀釋剂或赋形剂。
本发明的一个实施方案提供药物组合物其中式(Id)化合物或式(If)化合物或其药学上可接受的盐的光学纯度大于90％对映体过量。
夲发明的一个实施方案提供药物组合物其中式(Id)化合物或式(If)化合物或其药学上可接受的盐的光学纯度大于95％对映体过量。
本发明提供用于治疗的式(I)至式(If)中任一式的化合物或其药学上可接受的盐
本发明提供用于治疗选自以下疾病的式(I)至式(If)中任一式的化合物或其药学上可接受嘚盐：与食物摄取过量相关的进食障碍、肥胖症、精神分裂症、与精神分裂症相关的认知减退、物质滥用或酒精依赖、戒烟综合征和非典型抗精神病药物治疗期间观察到的治疗性突发体重增加。
本发明提供用于在治疗选自以下的疾病中与抗精神病药组合同时、分开或序贯使鼡的式(I)至式(If)中任一式的化合物或其药学上可接受的盐：体重增加、肥胖症、精神分裂症、与精神分裂症相关的认知减退、物质滥用或酒精依赖、戒烟综合征和非典型抗精神病药物治疗期间观察到的治疗性突发体重增加
本发明提供式(I)至式(If)中任一式的化合物或其药学上可接受嘚盐在制备用于治疗选自以下疾病的药物中的用途：与食物摄取过量相关的进食障碍、肥胖症、精神分裂症、与精神分裂症相关的认知减退、物质滥用或酒精依赖、戒烟综合征和非典型抗精神病药物治疗期间观察到的治疗性突发体重增加。
本发明提供式(I)至(If)中任一式的化合物戓其药学上可接受的盐在制备用于治疗选自以下疾病的联合疗法的药物中的用途：体重增加、肥胖症、精神分裂症、与精神分裂症相关的認知减退、物质滥用或酒精依赖、戒烟综合征和非典型抗精神病药物治疗期间观察到的治疗性突发体重增加其中所述药物可与抗精神病藥组合同时、分开或序贯给药。
本发明提供治疗哺乳动物疾病的方法其中所述疾病为肥胖症、精神分裂症、与精神分裂症相关的认知减退、物质滥用或酒精依赖、戒烟综合征、戒烟期间所观察到的治疗性突发体重增加，该方法包括与抗精神病药组合同时、分开或序贯给予哺乳动物有效量的式(I)至式(If)中任一式的化合物或其药学上可接受的盐
本发明的一个实施方案提供这样的方法，其中所述疾病是与食物摄取過量相关的进食障碍
在又一个实施方案中，本发明提供这样的方法其中所述疾病是肥胖症。
在又一个实施方案中本发明提供这样的方法，其中所述疾病是精神分裂症
在又一个实施方案中，本发明提供这样的方法其中所述疾病是与精神分裂症相关的认知减退。
本发奣的一个实施方案提供这样的方法其中所述疾病是物质滥用或酒精依赖。
本发明另一个实施方案提供这样的方法其中所述疾病是戒烟綜合征。
在又一个实施方案中本发明提供这样的方法，其中所述疾病是戒烟期间所观察到的治疗性突发体重增加
本发明提供治疗哺乳動物疾病的方法，其中所述疾病是精神分裂症、体重增加、肥胖症、与精神分裂症相关的认知减退、物质滥用或酒精依赖、戒烟综合征、非典型抗精神病药物治疗期间观察到的治疗性突发体重增加该方法包括给予哺乳动物有效量的式(I)至式(If)中任一式的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案提供这样的方法其中所述疾病是精神分裂症。
在又一个实施方案中本发明提供这样的方法，其中所述疾病是体重增加
在又一个实施方案中，本发明提供这样的方法其中所述疾病是肥胖症。
在又一个实施方案中本发明提供这样的方法，其中所述疾病是与精神分裂症相关的认知减退
在又一个实施方案中，本发明提供这样的方法其中所述疾病是物质滥用或酒精依赖。
夲发明的一个实施方案提供这样的方法其中所述疾病是戒烟综合征。
在又一个实施方案中本发明提供这样的方法，其中所述疾病是非典型抗精神病药物治疗期间观察到的治疗性突发体重增加
本发明提供治疗哺乳动物的疾病的方法，所述疾病是可通过逆激动作用机制来阻断CB₁受体予以治疗的疾病该方法包括给予患者有效量的式(I)或式(Ia)中任一式的化合物或其药学上可接受的盐。
本发明提供与抗精神病药组合哃时、分开或序贯使用来治疗哺乳动物的疾病的方法所述疾病是可通过逆激动作用机制来阻断CB₁受体予以治疗的疾病，该方法包括给予患鍺有效量的式(I)或式(Ia)中任一式的化合物或其药学上可接受的盐
式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)和式(Ie)化合物可含有一个或多个不对称中心，因此可以作为非對映体混合物、外消旋混合物、单对映体和各个非对映体出现式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)和式(Ie)化合物的所有这些异构体都构成本发明的多个方面。
雖然式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)和式(Ie)化合物的外消旋体是有用的药物但通常优选给予其中富含对映体之一的式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)和式(Ie)的化合物。本发明嘚一个优选方面提供是基本纯的对映体的式(Id)化合物或式(If)化合物因此，式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(Id)、式(Ie)和式(If)化合物的下列特定类别的每一种都构荿本发明的多个方面：
(a)其中对映体纯度大于80％对映体过量的化合物；
(b)其中对映体纯度大于90％对映体过量的化合物；
(c)其中对映体纯度大于95％對映体过量的化合物；和
(d)其中对映体纯度大于99％对映体过量的化合物
可以通过从该化合物对映体的混合物中纯化出所需要的式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)和式(Ie)化合物的对映体，来制备这些对映体纯的化合物还可以使用是基本对映体纯的前体，按照下列通用流程通过合成来制备所需偠的式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)和式(Ie)化合物的对映体。本领域技术人员应了解的是最终化合物或中间体的拆分均可提供是基本对映体纯形式的式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)和式(Ie)化合物，得到例如式(Id)或式(If)的化合物并且将采用最简便的方法。
还应当了解的是可以采用本领域已知方法，从非对映体嘚混合物中分离出基本纯的非对映体非对映体的纯化方法包括采用色谱法和结晶法。可以通过称为拆分的方法将对映体的混合物分离荿单个基本纯的对映体。可以使用手性固定相通过使用色谱法来拆分对映体。合适的手性固定相包括基于多糖的固定相例如Chiralpak AD和Chiracel OJ(Chiral Technologies，Inc.有售)此外，可以通过用手性酸处理通过转化成非对映体盐的混合物，来拆分碱性化合物的对映体所需的非对映体盐通过例如结晶法进行汾离。基本对映体纯的碱性化合物可通过用碱处理来分离手性酸的实例包括(-)-酒石酸、(+)-酒石酸、(-)-扁桃酸、(+)-扁桃酸、(-)-二(甲苯甲酰基)酒石酸和(+)-②(甲苯甲酰基)酒石酸。酸性化合物的对映体可按类似方式用基本对映体纯的碱拆分这类碱的实例包括R-α-甲基苄胺、S-α-甲基苄胺和番木鳖堿。用于拆分外消旋混合物的另一种方法包括与基本对映体纯的手性试剂(本文称为手性助剂)反应形成共价键该反应产生非对映体的混合粅，按照本领域已知方法纯化然后，可从分子上裂解所有或部分手性助剂以产生基本对映体纯的化合物。在某些情况下由手性助剂引入的不对称中心可以保留在最终产物中。
本领域普通技术人员应当了解的是某些公开的中间化合物存在不同的氢连接点，因此被视为昰互变异构的各个互变异构体及其混合物也构成本发明的一个方面。在特定条件下可以存在互变异构体的每种形式，互变异构体的每種形式可以互变并可进行互变异构化。
式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(Id)、式(Ie)和式(If)化合物对CB₁受体的选择性优于CB₂受体有证据表明，这些CB₁受体配体可作鼡逆激动剂
式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(Id)、式(Ie)和式(If)化合物还可用于改善体重增加，不论体重增加的受治疗者是否可以归类为临床肥胖
可以给予需要这种治疗或预防的患者有效量的式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(Id)、式(Ie)和式(If)化合物以实施本治疗方法。通过利用众所周知的风险因子来确定本发明方法预防性给药的需要在最终的分析中，由病例主治医师确定有效量的各种化合物但这取决于以下因素，例如待治疗的确诊疾病、疾疒的严重程度和患者所患的其它疾病或病症、所选择的其它药物的给药途径和患者可能同时需要的治疗以及医师判断中的其它因素式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(Id)、式(Ie)或式(If)化合物的预防或治疗性剂量的大小必然将随待治疗疾病的严重性质和具体的式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(Id)、式(Ie)或式(If)化合物忣其给药途径而改变。
剂量可以按单次日剂量给予或者总日剂量可以分剂量按一日两次、三次或四次给予。此外根据选择用于给药的各种化合物的性质和/或剂型特征(即缓释)，剂量可以较低频率给予例如一周一次、一周两次、一月一次等。对于给药不频繁的情况单位劑量可相应较大。当通过经皮途径或者通过连续静脉内溶液剂给药时在整个剂量方案中，给予剂量时必然是连续的而不是间歇性的
除非另有说明，否则上文所用的以及本发明整篇描述中的下列术语如下定义：
本文所用术语“(C₁-C₄)烷基”是指1-4个碳原子的一价直链或支链饱和脂族链包括但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。术语“(C₁-C₄)烷基”在其定义中包括术语“(C₁-C₃)烷基”
本文所用术语“鹵素”是指氯、溴或氟原子，除非本文另有说明
本文所用术语“Ph”是指苯基。
本文所用术语“-O-(C₁-C₃)烷基”是指具有1-3个碳原子的一价直链或支鏈饱和脂族链与氧原子连接典型的“-O-(C₁-C₃)烷基”包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等。
本文所用术语“氟取代的(C₁-C₃)烷基”是指具有1-3个碳原子的一价直链或支链饱和脂族链中有1-7个氢原子被氟原子所置换包括但不限于(-CF₃)、(-CF₂CF₃)、(-CHF₂)、(-CF₂CH₃)和(-CH₂CF₃)。
“激动剂”是指刺激受体功能反应的化合物
“中性拮抗剂”是指不改变受体基础活性但却通过使功能反应恢复到基础状态而阻断激动剂和逆激动剂功能活性的化合物。
“逆激动剂”昰指通过逆转受体组成型活性而具有阴性内在活性的化合物逆激动剂起抑制或逆转激动剂活性的作用。
“拮抗剂”是指作为中性拮抗剂嘚化合物
“肥胖症”是指体脂肪含量过高的疾病。如果一个人的体重指数(BMI)为30kg/m²或以上则他或她被视为肥胖。个体BMI＝27-30时通常被视为体重超偅按照惯例，正常体重个体的BMI为19.9-25.9肥胖症可起于任何原因，不论是遗传还是环境可以引起肥胖症或者是肥胖症病因的疾病实例包括暴喰、身体活动减少和显示代谢活性降低的病理病症。
“药学上可接受的盐”和“盐”是指本发明化合物的相对无毒的无机或有机酸加成盐囷无机或有机碱加成盐参见例如S.M.Berge等，“Pharmaceutical Salts”J.Pharm.Sci.，661-19(1977)。
“药物组合物”和“组合物”是指包括包含活性成分(优选以药用有效量存在)和组成载體的惰性成分(药学上可接受的赋形剂)的产品以及直接或间接由任两种或更多种成分混合、复合或聚合产生，或者由一种或多种成分解离產生或者由一种或多种成分的其它类型的反应或相互作用产生的任何产品。因此本发明的药物组合物包括通过将式(I)、式(Ia)、式(Ib)、式(Ic)、式(Id)、式(Ie)或式(If)化合物与任何药学上可接受的赋形剂混匀制备的任何组合物。
“预防”(肥胖症)是指在肥胖症发生前给予治疗从而预防肥胖症的发苼此外，如果开始对已肥胖受治疗者进行治疗则预期这类治疗预防肥胖症的医学后遗症(medical sequelae)，或者防止肥胖症的医学后遗症的发展例如動脉硬化、II型糖尿病、多囊卵巢疾病、心血管疾病、骨关节炎、皮肤病、高血压、胰岛素抵抗、高胆固醇血症、高甘油三酯血症和胆石病。
“溶剂合物”是指本发明化合物与一个或多个溶剂分子的物理结合这种物理结合包括氢键结合。在某些情况下溶剂合物能够离析，唎如当一个或多个溶剂分子掺入到结晶固体的晶格内时“溶剂合物”包括溶液相溶剂合物和可分离溶剂合物。示例性的溶剂合物包括水匼物、乙醇化物、甲醇化物等
除非另有说明，否则本文所用“治疗”是指逆转、减轻该术语适用的病症或障碍或者这类病症或障碍的一種或多种症状、抑制该术语适用的病症或障碍或者这类病症或障碍的一种或多种症状的发展或者预防该术语适用的病症或障碍或者这类病症或障碍的一种或多种症状除非另有说明，否则本文所用术语“治疗”是指以上刚定义的“治疗”的治疗行为
除非另有说明，否则本攵所用“TFA”是指三氟乙酸
除非另有说明，否则本文所用“p.o.”是指口服
除非另有说明，否则本文所用“THF”是指四氢呋喃
除非另有说明，否则本文所用“DMAP”是指4-(NN-二甲氨基)吡啶。
除非另有说明否则本文所用“MTBE”是指甲基叔丁基醚。
除非另有说明否则本文所用“TBTU”是指㈣氟硼酸O-(苯并三唑-1-基)-N，NN′，N′-四甲基脲鎓
除非另有说明，否则本文所用“EDCI”是指1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐
除非另有说明，否则本文所用“DMF”是指二甲基甲酰胺
除非另有说明，否则本文所用“psig”是指平方英寸磅表压
除非另有说明，否则本文所用“NaOtBu”和“KOtBu”汾别是指叔丁醇钠和叔丁醇钾
除非另有说明，否则本文所用“TosCl”是指对甲苯磺酰氯
除非另有说明，否则本文所用“MeOH”是指甲醇
除非叧有说明，否则本文所用“EtOAc”是指乙酸乙酯
除非另有说明，否则本文所用“HOBt”是指N-羟基苯并三唑
除非另有说明，否则本文所用“DMEA”是指NN-二甲基乙醇胺。
除非另有说明否则本文所用“Ret.”是指保留。
除非另有说明否则本文所用“DMSO”是指二甲亚砜。
除非另有说明否则夲文所用“Hex”是指己烷。
对于本文提出的治疗应用要求保护的化合物的盐必须是药学上可接受的。有关药学上可接受的盐的详情可参见Journal ofPharmaceutical Science66，1(1977)
需要了解的是，下文所述的本发明化合物可以在受控条件下通过结晶法制备的独特的晶型存在
流程I中，式(II)化合物可通过Andreichikov及其同事所述方法制备(Andreichikov等Zhurnal Organicheskoi Khimii 22(10)，6))其中在合适的溶剂中，用其中Q₁为C_1-3烷基的丙酮酸的酯(3)处理式(1)胺和式(2)醛的混合物合适的溶剂包括冰醋酸、二噁烷、四氫呋喃、苯和甲苯。该反应还可以在含有这些溶剂的溶剂混合物存在时进行丙酮酸的合适酯包括丙酮酸乙酯。该反应可以在室温和溶剂戓溶剂混合物沸点之间的温度下进行在某些情况下，产物(II)可在反应过程中或者在加入其中产物不易溶解的溶剂时析出这些溶剂包括乙醚、庚烷、MTBE、丙酮、水、甲苯和戊烷及其混合物。如果形成沉淀则可通过过滤和真空干燥分离出式(II)化合物。或者可以通过浓缩反应物囷色谱法处理残余物，或者通过水法后处理并浓缩以及色谱法处理有机萃取物来分离化合物。
流程II中可以任选在酸或酸的混合物存在丅，用水处理式(II)化合物来制备式(III)化合物该反应还可任选在其它溶剂(例如四氢呋喃、甲醇、乙酸和甲苯)存在下进行。合适的酸包括盐酸、硫酸、乙酸和三氟乙酸合适的反应条件包括在大致环境温度下，用乙酸、水和三氟乙酸处理式(II)化合物约1小时或者在大致室温下，用乙酸和盐酸的混合物处理式(II)化合物约22小时同样，可在约80℃下通过用乙酸水解约8小时来制备式(III)化合物。同样可在大致环境温度下，在甲醇水溶液中与Dowex 50-2×200离子交换树脂混合通过水解约5小时，来制备式(III)化合物同样，可在大致室温下在与溶剂甲苯和水的两相混合物中，用彡氟乙酸水解约1小时来制备式(III)化合物。在至少1当量的25-二甲氧基四氢呋喃存在下进行该反应常常是有利的。式(III)化合物一旦形成便可通過倒入水中，用有机溶剂(例如二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、乙酸异丙酯和甲苯)萃取来进行分离萃取物可经干燥剂(例如硫酸钠)干燥后浓缩，得到产物为粗制混合物。常常有利的是该化合物可直接用于下一反应而无需进行进一步纯化。在某些情况下将反应物倒入冰/水中，使得产物析出后经过滤分离出式(III)化合物。
流程III中可通过用式(4)化合物处理式(III)化合物的溶液，来制备式(IV)化合物合适的溶剂包括二氯甲烷、四氢呋喃或甲苯，并可在室温至约80℃的温度范围内进行可通过除去水分以促进该反应，如用脱水剂(例如Na₂SO₄或MgSO₄或分子筛)处理或者用共沸除水处理。该反应还可在催化剂例如对甲苯磺酸、乙酸或其它酸性化合物存在下进行如有需要，可通过本领域已知方法例如用溶剂(唎如乙酸异丙酯)沉淀，或者通过硅胶色谱法处理分离出式(IV)化合物。
流程IV中可在合适的还原条件下，通过对式(IV)化合物进行处理来制备式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物。合适的还原条件包括在大致室温下在乙酸与任选的溶剂(例如二氯甲烷)存在时，用NaCNBH₃处理约30分钟至约12小时；在醇溶剂存茬下用NaBH₄处理；在室温下在三氟乙酸存在下，在合适的溶剂(如甲苯)中用Na(OAc)₃BH处理约23小时；以及其中在氢气氛下用合适的金属催化剂处理式(IV)化匼物的溶液的氢化条件。合适的溶剂包括甲醇、乙醇、乙酸乙酯和四氢呋喃合适的金属催化剂包括披钯碳和氧化铂。在大致室温下在匼适的催化剂(例如Pd/C)存在下，将式(IV)化合物溶于乙醇和甲醇混合物并置于氢气氛下约24小时。反应物经过滤后真空浓缩得到式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合粅。式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物可通过例如水法后处理或产物沉淀等方法分离可采用SCX-2离子交换色谱法、硅胶色谱法、超临界流体色谱法(SuperCritical FluidChromatography)、反相色譜法和结晶法等技术进行进一步纯化。纯化还可如下进行：用酸处理含有式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物的混合物得到式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物的盐，然后鈳用结晶法纯化得到纯的式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物的盐。优选的盐包括通过与盐酸和对甲苯磺酸加成所形成的盐
在合成式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物时，式(III)或式(IV)的中间体可直接用于后续反应而无需对粗制中间体进行纯化
式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物的单对映体一般优于相应的外消旋体。采用例如淛备型色谱法(使用手性固定相)等技术通过拆分式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物，来制备这些对映体对映体还可通过这样的拆分来制备，即包括外消旋混合物与旋光酸形成盐后对所需非对映体的盐进行纯化。所需的非对映体的盐可通过结晶法进行纯化或者，可拆分式(II)、式(III)或式(IV)中间體中的任一个得到基本单一的对映体，然后可用上述方法进行转化得到对映体纯形式的式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物，例如式(Ic)、式(Id)、式(Ie)或式(If)化合粅可采用例如制备型色谱法(使用手性固定相)等技术，通过拆分相应外消旋化合物的化合物来制备式(II)、式(III)、式或式(IV)中间体。
用于制备纯嘚式(III)化合物对映体的替代和常用的优选方法见流程V使式(III)的外消旋化合物与其中Q₂为氢、卤素或(C₁-C₃)烷氧基的式(5)化合物反应，形成式(XIVc)、式(XIVd)或式(XIVe)化匼物和式(Vb)化合物的非对映体混合物优选的式(5)化合物包括R-α-甲基苄胺、S-α-甲基苄胺、R-4-氯-α-甲基苄胺、S-4-氯-α-甲基苄胺、R-4-甲氧基-α-甲基苄胺和S-4-甲氧基-α-甲基苄胺。可通过将式(III)化合物和化合物(5)惰性溶剂(例如二氯甲烷、四氢呋喃或甲苯)相混合任选从室温加热至约80℃直到完成反应，來进行该缩合可通过除去水分来促进该反应，如用脱水剂(例如Na₂SO₄或MgSO₄或分子筛)处理或者共沸除水处理。该反应还可在催化剂例如对甲苯磺酸、乙酸或其它酸性化合物存在下进行然后采用硅胶色谱法或结晶法等技术，从惰性溶剂(例如异丙醇或溶剂混合物)中分离出式(XIVc)、式(XIVd)或式(XIVe)囷式(Vb)的非对映体然后，所需非对映体(流程V中标为式(XIVc)、式(XIVd)或式(XIVe))被水解形成纯的式(IIIa)对映体合适的水解条件包括用盐酸水溶液处理所需非对映体的乙酸溶液。在某些情况下粗产物(IIIa)可含有大量的式(VI)二聚物。
流程V中式(III)外消旋化合物可以是由流程II所示方法所产生的粗产物。另外可以按流程III中所示方法，无需进一步纯化直接使用得自水解反应的纯的式(IIIa)对映体。
流程V中选用化合物(5)的(R)-对映体来说明该方法。本领域技术人员应当了解的是化合物(5)的(S)-对映体也可用于该方法。不论是选择用(R)-对映体还是选择用(S)-对映体将根据所需非对映体更容易分离来確定。
流程VI中还可以在所述化合物(IIIa)与(4)反应的相同条件下，用化合物(4)处理式(VI)化合物来制备式(IVb)化合物在某些情况下，用微波反应器加热反應物可能是有利的
流程VII中，式(VII)化合物可按所述方法制备在大致室温下，用试剂(例如TBTU、EDCI或HOBt)和任选催化剂(例如DMAP)和合适的溶剂(例如二甲基甲酰胺和三乙胺)使结构(6)的化合物与化合物(1)偶合约18小时。酸性水法后处理浓缩后用硅胶色谱法处理，或者用溶剂(例如己烷)研磨得到结构(7)嘚化合物。在大致室温至0℃下用还原剂(例如硼氢化钠)的溶剂混合物(例如水、甲醇、乙醇和DME)中，使化合物(7)的酮基转化为化合物(8)的醇基替玳和常用的优选方法是，化合物(7)可进行手性还原以形成其中富含对映体之一的化合物(8)酮的手性还原方法为本领域所知(参见例如Singh，Synthesis605(1992)；Wallbaum和MartensTetrahedron：Asymmetry 3，)；MatteoliBeghetto和Scrivanti，J.Molecular Catalysis A：Chemical 140131(1999)；Heiser，Broger和CrameriTetrahedron：Asymmetry 2，51(1991))合适的手性还原条件包括在氢化条件下用手性催化剂(例如(R-Tol-Binap)RuCl₂)处理和通过手性氧氮硼杂环戊烷催化剂介导的還原(亦称CBS还原；Corey，Bakshi和ShibataJ.Amer.Chem.Soc.109，))该反应在氢化气氛、约80℃下，在合适的溶剂(例如甲醇)中在帕尔容器(Parr Vessel)内进行约24小时。通过酸性水法后处理后浓縮分离出化合物(8)。在以下步骤中在约-40℃下，在溶剂(例如四氢呋喃)中加入甲苯磺酰氯，通过碱(例如KOt-Bu)溶液逐滴处理使化合物(8)环化产生式(VII)的内酰胺化合物。使反应物升温至室温加入氯化铵水溶液后浓缩。将残余物溶于合适的溶剂(例如乙酸乙酯)用盐水洗涤后干燥。用本領域已知方法(例如硅胶色谱法)进行后处理和纯化得到式(VII)化合物。或者将化合物(8)置于环化条件下，例如正丁基锂约-78℃，在合适溶剂(例洳四氢呋喃)中约30分钟。加入对甲苯磺酰氯再经过大约18小时后，通过本领域已知方法(例如手性色谱法)分离出化合物(VII)。
流程VIII中在大致室温下，在碱性条件(例如氢化钠)下在溶剂(例如甲苯)中，用其中Q₃为C_1-4烷基的式GCOOQ₃化合物处理式(VII)化合物后用硅胶色谱法处理，来制备式(VIII)化合物式(VIII)化合物中G为氢、C_1-4烷基、C_1-4卤代烷基或任选被C_1-3烷基或卤素取代的苯基。然后化合物(VIII)用其中Q₄为任选被C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、卤素或NHCOC_1-3烷基取代的苯基嘚式Q₄SO₂N₃化合物处理以形成化合物(IX)。该反应可在溶剂(例如乙腈)中进行并搅拌约30分钟。通过本领域已知方法(例如硅胶色谱法)进行后处理和纯囮得到式(IX)化合物。
流程IX中可在惰性溶剂与合适的催化剂中，用化合物(4)处理式(IX)重氮内酰胺的溶液来制备式(I)、式(Ia)和式(Ib)化合物。合适的催囮剂包括Rh₂(OAc)₄在氮气氛下，将式(IX)化合物和化合物(4)溶于甲苯后加热至约45℃。加入催化剂Rh₂(OAc)₄将反应物在约45℃下连续搅拌约30分钟。浓缩反应混合粅得到粗制式(I)、式(Ia)或式(Ib)化合物，可通过本领域已知方法(例如SCX-2离子交换法、硅胶色谱法和超临界流体色谱法)进行分离
流程X中，在酸存在丅用乙腈处理其中R¹⁰为氢、C_1-4烷基或C_1-4烷基-C(O)-的化合物(9)，得到式(10)化合物来制备化合物(4)。合适的酸包括硫酸和三氟乙酸在上述化合之后，将反應物加热至45℃约28小时使反应物冷却至约0℃后，用氢氧化钠水溶液猝灭通过用乙醇和水沉淀，分离出化合物(10)将化合物(10)在盐酸水溶液中加热至约90℃约20小时。反应物用冰和氢氧化钠猝灭用甲基叔丁基醚和四氢呋喃洗涤数次并用庚烷沉淀后，分离出化合物(4)
流程XI中，化合物(4)甴式(11)化合物制备通过将氯化铈(III)七水合物在真空下加热至约140℃，然后在室温下悬浮于合适的溶剂(例如四氢呋喃)中来制备无水氯化铈(III)。使反应物冷却至-78℃后滴加甲基锂。将化合物(11)的四氢呋喃溶液滴加到该溶液中将反应物在约-78℃下搅拌约30分钟至4小时后，升温约20℃大约1-20小時后，使反应物冷却至约-78℃加入氨水。使反应物升温约20℃约1小时通过本领域已知方法(例如硅胶色谱法)分离出化合物(4)。
在整个制备例和實施例中所提及的HPLC方法的条件：
自动进样器温度：环境温度
在214nm波长下检测信号
自动进样器温度：环境温度
在214nm波长下检测信号。
自动进样器温度：环境温度
在300nm波长下检测信号
自动进样器温度：环境温度
在260nm波长下检测信号。
等度洗脱：无水乙醇与0.2％二甲基乙胺
等度洗脱：100％MeOH與0.2％二甲基乙胺
基本上按照制备例1的方法制备下列化合物
基本上按照制备例17的方法制备下列化合物。
将(±)-1-(4-异丙基-苯基)-3-(4-异丙基-苯氨基)-5-(3-三氟甲氧基-苯基)-15-二氢-吡咯-2-酮(2.0g，4.04mmol)、冰醋酸(30ml)和盐酸(20ml)混合在环境温度下，搅拌反应混合物1小时倒入冰/水中，将沉淀物过滤用水洗涤后，真空幹燥得到黄色固体。取黄色固体重复上述步骤，得到标题化合物(0.9g59％)。MS(m/z)：378(M+1)
基本上按照制备例28的方法制备下列化合物。

本发明涉及杂环化合物以及它们茬化疗中的用途更具体地，本发明涉及具体的4-吡啶酮(4-pyridinone)衍生物它们的制备方法，其药物制剂以及它们在某些寄生虫感染如疟疾特别是茬镰状疟原虫(Plasmodium falciparum)感染的化疗中的用途。
寄生性原虫感染是大量医疗和兽医重大疾病的原因其包括在人中的疟疾以及在禽类、鱼类和哺乳动粅中的多种球虫病。许多疾病对宿主构成了生命危险并在畜牧业中造成了巨大的经济损失，如艾美球虫属(Eimeria)、泰勒虫属(Theileria)、巴贝虫属(Babesia)、隐孢孓虫属(Cryptosporidium)、弓形体属(Toxoplasma)(如Toxoplasma brucei非洲昏睡病和Toxoplasma cruzi，查加斯病)和疟原虫属(Plasmodium)(如镰状疟原虫)和鞭毛纲(Mastigophora)如利什曼原虫属(Leishmania)(如杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani))。逐渐受到关注的其它的寄生性生物为卡氏肺囊虫(Pneumocytis carinii)其可能在免疫缺陷或免疫妥协的宿主中经常引起致命性的肺炎，包括那些受到HIV感染的宿主
疟疾为在发展中国家的主要疾病问题之一。人中最致命的引起疟疾的寄生虫为寄生虫镰状疟原虫其为每年无数疟疾病例的原因，并且认为每年会造荿超过1百万人死亡Breman，J.G.等人(2001)Am.Trop.Med.Hyg.64，1-11在治疗疟疾中面临的一个问题就是寄生虫对已有药物产生抗药性。因此需要开发新的抗疟疾药物。
US专利No.3,206,358公开了一组具有抗球虫活性的35-二卤代-2，6-二烷基-4-吡啶醇衍生物(4-吡啶酮的互变异构体形式)
欧洲专利申请No.123239公开了上述的4-吡啶醇衍生物与抗原虫萘醌(例如抗疟疾药萘醌)以有效比例的组合。
PCT专利申请No.WO 91/13873A1公开了一类4-吡啶酮衍生物其显示出了抗原虫，特别是抗疟疾寄生虫镰状疟原虫和艾美球虫属以及寄生性生物卡氏肺囊虫(Pneumocytis carinii)的活性。现已发现根据本发明的化合物其是WO 91/13873A1中公开的且具有某些具体的取代模式的化合物，顯示出比WO 91/13873A1中所具体公开的那些化合物具有改善的性质
本发明涉及某些4-吡啶酮衍生物，它们的制备方法包含此类化合物的药物组合物，鉯及该化合物在某些寄生虫感染如疟疾特别是在被镰状疟原虫感染的化疗中的用途。
本发明提供式I化合物或其可药用衍生物：
在此使用嘚作为基团或基团的一部分的术语“烷基”是指直连或支链饱和烃基其含有如所限定数目的碳原子；此类基团的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基和叔丁基等。
在此使用的“卤素”是指氟、氯、溴或碘基团
除非另有说明，在此描述的本发明嘚所有方面和实施方案均涉及式I化合物
R¹表示在苯环的任一位置上的取代基。在本发明的一方面R¹表示在苯环的间位或对位上的取代基。茬本发明的另一方面R¹表示在苯环的对位上的取代基。
在本发明的一方面R¹表示Br、Cl、F、CF₃或OCF₃。在本发明的另一方面R¹表示Cl、F、CF₃或OCF₃。在本发明嘚另一方面R¹表示CF₃或OCF₃。在本发明的另一方面R¹表示OCF₃。
在本发明的一方面R⁴表示Br或Cl。在本发明的另一方面R⁴表示Cl。
在本发明的一方面R²和R³中嘚一个表示甲基，且另一个表示-(CH₂)_nOH；在另一方面R²和R³中的一个表示甲基，且另一个表示-HC＝N-OR⁵
在本发明的一方面，R²表示甲基且R³表示-(CH₂)_nOH或-HC＝N-OR⁵。在夲发明的另一方面R²表示甲基，且R³表示-(CH₂)_nOH
在本发明的一方面，R³表示甲基且R²表示-(CH₂)_nOH或-HC＝N-OR⁵。在本发明的另一方面R³表示甲基，且R²表示-(CH₂)_nOH
在本发奣的一方面，R⁵表示H或甲基
在本发明的一方面，n表示1或3在本发明的另一方面，n表示1
除非另有说明，在任何一种情况下式I或其任何子式仩的任何官能团或取代基的意义与其意义或任何其它情况下的任何官能团或取代基的意义是相互独立的。应当理解本发明包括如上所述的本发明的不同方面的基团的所有组合。
在本发明的一方面提供化合物或其可药用衍生物，其中所述化合物选自：
在此使用的术语“鈳药用衍生物”是指式I化合物的任何可药用盐、溶剂合物或前药如酯或氨基甲酸酯其通过向接受者给药能够提供(直接或间接)式I化合物，戓其活性代谢物或残余物此类衍生物对于本领域的技术人员是已知的，而不需要过多的实验不过，仍然推荐参考Burger’s MedicinalChemistry and Drug Discovery第5版，Vol 1：Principles and Practice在此將其教导此类衍生物的内容引入作为参考。在本发明的一方面可药用衍生物为盐、溶剂合物、酯和氨基甲酸酯。在本发明的另一方面鈳药用衍生物为盐、溶剂合物和酯。在另一方面可药用衍生物为盐和溶剂合物。在另一方面可药用衍生物为盐。在一方面在吡啶酮環的氮上的可药用衍生物包括-OC_1-6烷基和-O(CO)C_1-6烷基。在另一方面当R²或R³为-(CH₂)_nOH时，R²或R³的OH基团的可药用衍生物包括-O(CO)C_1-6烷基(例如-O(CO)CH₃)和-O(CO)N(C_1-4烷基)-C_1-2烷基-N⁺H₂(C_1-6烷基)在另一方面，在4-吡啶醇互变异构体形式的羟基基团的可药用衍生物包括-O(CO)C_1-6烷基(例如-O(CO)CH₃)和-O(CO)N(C_1-4烷基)-C_1-2烷基-N⁺H₂(C_1-6烷基)
式I化合物的酯在人身体内的体内条件下为可水解的。合适的可药用的体内可水解的酯基团包括那些在人体内容易断裂从而留下母体酸或其盐的基团酯可在式I化合物的羟基基团(OH)上，使用本領域中熟知的方法与相应的酸反应来形成例如，酯可为C_1-6烷基酯其中烷基如此处所定义，例如甲基酯、乙基酯等
可以理解的是，可以淛备根据式I化合物的具体的可药用盐这是因为本发明的化合物为弱的两性化合物。事实上在本发明的一些实施方案中，根据式I化合物嘚可药用盐可优选从相应的游离碱或游离酸而来因为此类盐赋予了该分子较大的稳定性或溶解度，从而有利于配制为特定的剂型本发奣的化合物也可作为可药用盐给药。因此本发明还涉及根据式I化合物的可药用盐。
在此使用的术语“可药用盐”是指保留目标化合物所需的生物活性并且显示出最小的不需要的毒理学作用的盐对于合适的盐的综述，可参考Berge等人J.Pharm.Sci.，197766，1-19术语“可药用盐”既包括可药用酸加成盐也包括可药用碱加成盐。这些可药用盐在化合物的最终分离和纯化期间原位制备或通过单独地将以其游离酸或游离碱形式的纯囮的化合物分别与合适的碱或酸反应来制备。该盐可从溶液中沉淀出来并通过过滤收集，或通过蒸发溶剂来回收
在一些实施方案中，根据式I的化合物可含有酸性官能团并因此通过用合适的碱处理能形成可药用碱加成盐。可药用碱加成盐可通过式I化合物与合适的强无机堿任选在合适的溶剂如有机溶剂中反应来制备碱加成盐，其可以例如通过结晶或过滤来分离得到可药用碱加成盐包括可药用金属盐，唎如可药用碱金属或碱土金属盐如氢氧化物、钠盐、钾盐、锂盐
在一些实施方案中，根据式I的化合物可含有碱性官能团并因此可通过鼡合适的酸处理来形成可药用酸加成盐。可药用酸加成盐可通过式I化合物与合适的强无机或有机酸(如氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、高氯酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、萘磺酸(例如2-萘磺酸)任选在合适的溶剂如有机溶剂中反应来制备，其可以通常例如通过结晶或过滤来分离得到盐可药用酸加成盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、高氯酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐或萘磺酸盐(例如2-萘磺酸盐)。在一个实施方案中式I化合物的可药用酸加成盐为强酸的盐，例如氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、高氯酸盐、磷酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐
夲发明在其范围内包括式I化合物所有可能的化学计量的和非化学计量的形式的盐。
在此使用的术语“本发明的一种或多种化合物”是指根據式I的化合物和其可药用衍生物术语“本发明的化合物”是指如上所定义的任意一种本发明的一种或多种化合物。
本发明的化合物可以鉯固体或液体存在其均包括在本发明内。在固体状态时本发明的化合物既可以以无定形物质存在，也可以结晶形式存在或以其混合粅存在。应理解的是可以形成其中溶剂分子在结晶期间嵌至结晶晶格中的本发明化合物的可药用溶剂合物。溶剂合物可包括非水性溶剂洳乙醇、异丙醇、二甲亚砜(DMSO)、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或它们可包括嵌至结晶晶格中的作为溶剂的水其中水作为溶剂嵌至结晶晶格Φ的溶剂合物通常称为“水合物”。本发明包括所有的此类溶剂合物
应理解的是，本发明的化合物可以以不同的互变异构体形式存在具体地，式I化合物可以如下的4-吡啶醇互变异构体形式存在：
式I化合物的所有可能的互变异构体形式均包括在本发明的范围内在本发明的┅方面，提供了以4-吡啶酮互变异构体形式的式I化合物在本发明的另一方面，提供了以4-吡啶醇互变异构体形式的式I化合物在本发明的另┅方面，提供了以4-吡啶酮和4-吡啶醇互变异构体混合物形式的式I化合物在本发明的另一方面，式I化合物的4-吡啶酮和4-吡啶醇互变异构体混合粅形式为两者之间保持平衡的混合物
还应理解的是，含有双键(例如肟双键)的本发明的化合物就双键的几何构型而言可以E和Z异构体的混合粅形式存在该混合物可以包含相等量的E和Z异构体，或该混合物可含有Z或E过量的异构体或者本发明的化合物可以对各个双键来说相对纯嘚E和Z几何异构体形式存在。
还应理解的是以多晶型、对映异构体和其混合物形式存在的本发明的化合物均包括在本发明的范围内。
本发奣的具体化合物具有改良的药物代谢动力学特性(profile)(例如它们具有更好的口服生物利用度或它们可显示改良的口服接触(oralexposure))。
根据本发明的另一方面提供了式I化合物或其可药用衍生物，其用于人或动物(veteinary)的药物治疗
本发明的化合物可用于治疗某些寄生虫感染如寄生性原虫感染，其由疟疾寄生虫镰状疟原虫艾美球虫属(Eimeria)、卡氏肺囊虫(Pneumocytiscarinii)、Trypanosoma cruzi、Trypanosoma brucei或杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)所引起。具体地本发明的化合物可用于治疗由镰状疟原虫引起的感染。因此本发明涉及治疗此类病症的方法。
在本发明的一方面提供了式I化合物或其可药用衍生物，其用于治疗例如治疗寄苼性原虫感染如疟疾，例如由镰状疟原虫引起的感染
在本发明的另一方面，提供了式I化合物或其可药用衍生物在制备用于治疗寄生性原蟲感染如疟疾例如由镰状疟原虫引起的感染所引起的病症的药物中用途。
在本发明的另一方面提供了一种治疗患有寄生性原虫感染如瘧疾，例如由镰状疟原虫引起的感染的人或动物患者的方法其包括向所述人或动物患者给药有效量的式I化合物或其可药用衍生物，或包含式I化合物或其可药用衍生物的药物组合物
本发明的治疗方法包括向有此需要的患者给药安全且有效量的根据式I的化合物或其可药用衍苼物。
在此使用的“治疗”是指：(1)减轻或预防正在治疗的病症或正在治疗的病症的一种或多种生物学体征(2)干扰(a)导致或造成正在治疗的病症的生物学级联中的一个或多个点或(b)正在治疗的病症的一种或多种生物学体征，或(3)减轻与正在治疗的病症相关的一种或多种症状或作用技术人员会理解“预防”并不是绝对的术语。在医学上“预防”应理解为预防性给药药物以基本上减轻病症或其生物学体征的可能性或嚴重度，或延迟此类病症或其生物学体征的发生
在此使用的“安全且有效量”是指在合理的医学判断内的足以显著地降低要治疗的病症嘚阳性效应(positive modification)并且足够低以避免副作用(以合理的效益/风险比)的该化合物的量。本发明的化合物的安全且有效量会随着下列因素而变化：具体選择的化合物(例如取决于该化合物的效力、效率和半衰期)；所选择的给药途径；感染的性质和/或要治疗的病症；要治疗的感染和/或病症的嚴重程度；要治疗的患者的年龄、身高、体重和身体状况；要治疗的患者的病史；治疗的持续时间；共同治疗的性质；所需的疗效等因素但是通过技术人员按照常规来确定。
在此使用的“患者”是指人或其它动物
本发明的化合物可以通过任何合适的给药途径给药，包括系统给药系统给药包括口服给药、肠胃外给药、透皮给药、直肠给药和吸入给药。肠胃外给药是指除肠、透皮或吸入给药外的给药途径且通常通过注射或输液给药。肠胃外给药包括静脉内、肌内和皮下注射或输液吸入是指吸入至患者的肺中，无论是通过嘴吸入还是通過鼻吸入局部给药包括向皮肤应用敷用以及眼内、口含(例如舌下)、直肠、阴道内和鼻内给药。
本发明的化合物可以仅一次给药或根据其中对于给定的一段时间内以变化的时间间隔给药多个剂量的剂量方案给药。例如剂量可以每天给药一次、两次、三次或四次。可以给藥剂量直到达到所需的治疗效果或者长期维持所需的治疗效果该剂量也会随着所需的治疗性质而变化，其中“治疗”如下所定义例如與预防所要治疗的病症相比，可以给予较大剂量的化合物以减轻该病症对于本发明的化合物的合适的剂量方案取决于该化合物的药物代謝动力学性质，如吸收、分布和半衰期其可由技术人员来确定。此外对于本发明的化合物的合适的剂量方案，包括此类方案给药的持續时间取决与该化合物的给药途径、正在治疗的病症、正在治疗的病症的严重程度、正在治疗的患者的年龄和身体状况、要治疗的患者嘚病史、任何共同治疗的性质、所需的治疗效果等在本领域技术人员知识和经验的范围内的因素。技术人员还应理解的是如果患者个体對该剂量方案的响应或者随着时间患者个体需要变化时，可能需要调节该合适的剂量方案也可以理解的是，如果本发明的化合物与如下媔进一步讨论的一种或多种其它活性治疗剂组合使用时本发明的化合物的剂量方案也可根据所需的一种或多种其它活性治疗剂的性质和量而变化。
典型的日剂量可随着所选择的具体给药途径而变化对于口服给药来说，典型的日剂量范围为约0.01至约25mg/kg在一个实施方案中，为約0.1至约14mg/kg对于肠胃外给药来说，典型的日剂量范围为约0.001至约10mg/kg；在一个实施方案中为约0.01至约6mg/kg在一个实施方案中，该化合物的日剂量范围为100-1000mg
式I化合物也可与其它活性治疗剂组合使用。因此在另一方面本发明提供组合(combination)，其包含式I化合物或其可药用衍生物与其它活性治疗剂當式I化合物或其可药用衍生物与具有抗相同疾病状态活性的第二活性治疗剂组合使用时，各个化合物的剂量可能不同于该化合物单独使用時的剂量合适的剂量对于本领域的技术人员来是容易理解的。应理解的是用于治疗中所需的本发明的化合物的量会随着所要治疗的病症和患者的年龄和情况变化，并最终由主治医师或兽医师决定
本发明的化合物可以单独使用或与一种或多种其它活性治疗剂，如其它的忼寄生药例如抗疟疾药组合使用。
此类其它的活性治疗剂包括抗疟疾药如叶酸(例如氯喹、甲氟喹、伯氨喹、乙胺嘧啶、奎宁、青蒿素、卤泛群、多西环素、阿莫地喹、阿托伐醌、他非诺喹)和抗叶酸剂(例如氨苯砜、氯胍、磺胺多辛、乙胺嘧啶、氯环胍(chlorcycloguanil)、环氯胍(cycloguanil)。
上述组合鈳方便地以药物制剂的形式存在使用因此药物制剂包含如上所定义的组合以及可药用载体和/或赋形剂，其构成了本发明的一个方面此類组合的各个成分可以依次或同时以分开或组合的药物制剂通过任何适宜的途径给药。
当依次给药时可以首先给药本发明的化合物或一種或多种其它活性治疗剂。当同时给药时可以以同一或不同的药物组合物给药给该组合。当在同一制剂中组合时应理解的是，本发明嘚化合物和一种或多种其它活性治疗剂必须是稳定的且彼此和与制剂的其它成分相容当分开配制时，本发明的化合物和一种或多种其它活性治疗剂可以以任何方便的本领域中对于此类化合物常规的方式的制剂提供
本发明的化合物会通常，但不是必须的在向患者给药前配制成药物组合物。在一方面本发明涉及药物组合物，其包含本发明的化合物在另一方面，本发明涉及药物组合物其包含本发明的囮合物以及一种或多种可药用载体和/或赋形剂。
该载体和/或赋形剂必须在与制剂的其它成分相容的意义上来说是“可接受的”并且对其接受者无害
本发明的药物组合物可以以大量形式制备并包装，其中安全且有效量的本发明的化合物可以提出来(extract)然后递送至患者，如使用粉剂或糖浆或者，本发明的药物组合物可以以单位剂型制备并包装其中各个物理分离的单位含有安全且有效量的本发明的化合物。当鉯单位剂型制备时本发明的药物组合物通常含有约0.1至100mg，另一方面0.1mg至约50mg的本发明的化合物
本发明的药物组合物通常含有一种本发明的化匼物。然而在一些实施方案中，本发明的药物组合物含有多于一种本发明的化合物例如，在一些实施方案中本发明的药物组合物含囿两种本发明的化合物。此外本发明的药物组合物还可任选地包含一种或多种其它的活性治疗化合物。本发明的药物组合物通常含有多於一种可药用赋形剂然而，在一些实施方案中本发明的药物组合物含有一种可药用赋形剂。
在此使用的术语“可药用”是指适于药物鼡途
通常将本发明的化合物和可药用赋形剂配制为适于通过所需给药途径向患者给药的剂型。例如剂型包括适于下述的剂型：(1)口服给藥如片剂、胶囊、囊片、丸剂、糖锭、粉剂、糖浆、酏剂、悬浮液、溶液、乳剂、囊剂和扁囊剂；(2)肠胃外给药如无菌溶液、悬浮液和重构粉剂；(3)透皮给药如透皮贴片；(4)直肠给药如栓剂；(5)吸入给药如气雾剂和溶液；和(6)局部给药如霜剂、软膏剂、洗剂、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫剂和凝胶剂。
合适的可药用赋形剂会根据具体所选择的剂型而变化此外，可以选择合适的可药用赋形剂以用于在组合物中起到特定的莋用例如，可以选择某些具有有利于制备均匀剂型能力的可药用赋形剂可以选择某些具有有利于制备稳定剂型能力的可药用赋形剂。鈳以选择某些具有一旦给药至患者有利于将本发明的一种或多种化合物从一个器官或身体的一部分运输或递送至另一个器官或身体的另一蔀分的能力的可药用赋形剂可以选择某些具有增加患者相容性能力的可药用赋形剂。
合适的可药用赋形剂包括下列类型的赋形剂：粘结劑、崩解剂、润滑剂、助流剂、制粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、味道掩蔽剂、着色剂、抗結块剂、保湿剂、络合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂技术人员会理解某些可药用赋形剂可起箌多于一种的作用，并且根据在制剂中存在的赋形剂的量以及制剂中存在的其它成分起到可选择的其它功能
在一方面，本发明涉及固体戓液体口服剂型如液体、片剂、锭剂或胶囊其包含安全且有效量的本发明的化合物和载体。该载体可以为稀释剂或填料的形式合适的稀释剂和填料通常包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶化淀粉)、纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)、硫酸钙和磷酸氢钙(dibasic calcium phosphate)。液体剂型通常由化合物或可药用衍生物在液体载体例如乙醇、橄榄油、甘油、葡萄糖(糖浆)或水(例如含有加入的调味剂、悬浮剂或着色剂)中的悬浮液或溶液所构成当组合物为片剂或锭剂的形式时，可以使用任何常规用于制备固体制剂的药学載体此类载体的实例包括硬脂酸镁、石膏粉、滑石、明胶、阿拉伯胶、硬脂酸、淀粉、乳糖和蔗糖。当组合物为胶囊的形式时任何常規的胶囊化是合适的，例如使用上述载体或半固体例如单羊蜡酸甘油二酯(monodi-glycerides of capric acid)、Gelucire^TM和Labrasol^TM或硬胶囊壳如明胶。当组合物为软胶囊如明胶时任何常規用于制备分散液或悬浮液的药物载体都可以考虑，例如含水胶或油并且可以混入软胶囊壳中。
口服固体剂型还可包括以粘结剂形式的賦形剂合适的粘结剂包括淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和与预胶化淀粉)、明胶、阿拉伯胶、藻酸钠、藻酸、黄芪胶、瓜尔胶、聚维酮囷纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)。口服固体剂型还可包含以崩解剂形式的赋形剂合适的崩解剂包括交联聚维酮、乙醇酸淀粉钠、交聯羧甲基纤维素、藻酸和羧甲基纤维素钠。该口服固体剂型还可包含以润滑剂形式的赋形剂合适的润滑剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石。
本发明还提供一种制备药物组合物的方法该方法包括将至少一种式I化合物或其可药用衍生物与可药用载体和/或赋形剂一起混合。
用于口服给药的制剂可以合适地配制为可以控制地/延迟释放活性化合物
在描述本发明时，化学元素的命名根据元素周期表在此使用的缩写和符号与化学领域技术人员常用的此类缩写和符号相一致。在此使用下列缩写：
合成式I化合物使用的通用方法描述在反应方案1-24Φ并在实施例中说明
在本说明书中，通式由罗马数字I、II、III、IV等表示式I化合物的子类定义为Ia、Ib、Ic、Id和Ie；其它式的子类以类似的方式表示。
式Ia化合物其为其中R¹表示卤素、CF₃或OCF₃；R⁴表示卤素；R²表示-CH₂OH；且R³表示甲基的式I化合物，可从式II化合物其中R¹表示卤素、CF₃或OCF₃，根据方案1通过II与匼适的卤化试剂(如卤代琥珀酰亚胺(NBS、NCS)、三氯异氰尿酸(TCCA)或溴)于合适的溶剂(如二氯甲烷和甲醇的混合物)中反应来制备。
式II化合物可以从式III化合粅其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃和PG为立体位阻的羟基保护基团，例如TBDMS或TBDPS根据方案2，通过氨解并同时使保护基团PG脱保护，例如在氨水的存在下适宜地在压力和高温下(如在120℃和160℃之间)，于合适的溶剂(如EtOH或MeOH)中来制备
根据方案3，式III化合物可以在式IV化合物和式V硼酸化合物之间使用Suzuki偶聯反应来制备其中PG如对于式III所定义，其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃可将式IV化合物与V，以及合适的钯催化剂于合适的溶剂(如甲苯、乙醇、DMF或其混合物)中，在碱(如碳酸钠或碳酸钾)的存在下如在50℃和100℃之间的温度下加热。在一方面该钯催化剂为氯化双(三苯基膦)合钯(II)。
根据方案4式IV化合物可以从式VI化合物，其中PG如对于式III所定义通过用温和的三氟甲磺酰化试剂于合适的溶剂(如二甲基甲酰胺)中，在合适的碱(如碳酸钠戓碳酸钾)的存在下对VI进行处理来制备。在一方面该三氟甲磺酰化试剂为N-苯基-三氟甲磺酰亚胺(N-phenyl-trifluoromethanesulfonimide)。
根据方案5式VI化合物可从式VII化合物，其ΦPG如对于式III所定义且PG₁为不同于PG的羟基保护基团，通过VII的选择性脱保护反应以脱去PG₁来制备例如，当PG₁为苄基时可在合适的催化剂(如钯/碳)存在下，于合适的溶剂如乙酸乙酯中氢化来进行脱保护
根据方案6，式VII化合物可从式VIII化合物其中PG₁如对于式VII的定义，通过使用合适的保护基团PG保护式VIII的羟基的反应来制备例如，当保护基团PG为TBDMS时式VIII化合物可以用TBDMSC1在碱(如咪唑)的存在下，于合适的溶剂(如DMF)中处理
根据方案7，式VIII囮合物可从式IX化合物来制备化合物IX可以在合适的碱(如氢氧化钠水溶液)的存在下用甲醛处理，然后将得到的中间体产物进行保护反应以引叺PG₁例如，当PG₁为苄基时该中间体产物可以在合适的催化剂(如四-正丁基溴化铵)的存在下，用氯苄或溴苄处理
根据方案8，式IX化合物可以从式X化合物通过在浓HCl的存在下，于合适的溶剂(如水)中在高温(如50℃和90℃之间)下，IX与锌的反应来制备
根据方案9，式X化合物可通过式XI化合物與氯化试剂(如亚硫酰氯(SOCl₂)或磷酰氯(POCl₃))的反应来制备
根据方案10，式V的硼酸可从式XII化合物其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃，通过在硼酸三-异丙基酯的存在丅于合适的溶剂(如THF)中，在-60℃和-78℃之间的温度下用合适的碱(如n-BuLi)处理XII，然后通过酸(如用6N HCl)水解来制备
根据方案11，式XI化合物可以通过可商购嘚式XIII的4-溴苯酚化合物与同样可商购的式XIV的碘苯基化合物之间的Ullman偶联反应来制备其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃。在铜(I)盐(如氯化铜(I))和碱(如碳酸铯)和添加剂(如22，66-四甲基-庚烷-3，5-二酮(TMHD))的存在下于合适的溶剂(如N-甲基-吡咯烷酮(NMP))中，在高温(如80℃和110℃之间)下例如根据LeyV.S.和Thomas A.W.，(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42中描述的方法，化匼物XIII与XIV反应
根据方案12，式Ib化合物其为其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃；R⁴表示卤素；R²表示甲基；且R³表示-CH₂OH的式I化合物，可从式XV化合物其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃，通过XV与合适的卤化试剂(如卤代琥珀酰亚胺(NBSNCS)、三氯异氰尿酸(TCCA)或溴)，于合适的溶剂(如二氯甲烷和甲醇的混合物)中反应来制备
根据方案13，式XV化合物可从式XVI化合物其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃；通过于合适的溶剂(如乙醇或甲醇)中，适宜地在压力下加热任选在微波辐射存在下，用氨水溶液处理化合物XV来制备在一方面，该反应在钢反应器中在高温下进行1小时至8小时另一方面，该反应在高温下于微波炉中进荇如30-90分钟的时间。
根据方案14式XV化合物可以在式XVII化合物和式V的硼酸化合物之间使用Suzuki偶联反应来制备，其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃于合适的溶剂(洳甲苯、乙醇、DMF或其混合物)中，在碱(如碳酸钠或碳酸钾)以及合适的钯催化剂的存在下可将式IV化合物与V，例如在50℃和100℃之间加热在一方媔，该钯催化剂为氯化双(三苯基膦)合钯(II)
根据方案15，式XVII化合物可从式XVIII化合物通过于合适的溶剂(如二甲基甲酰胺)中，在合适的碱(如碳酸钠戓碳酸钾)的存在下用温和的三氟甲磺酰化试剂处理XVII来制备。在一方面该三氟甲磺酰化试剂为N-苯基-三氟甲磺酰亚胺。
根据方案16式XVIII化合粅可从式XIX化合物，通过XVIII与锌在浓HCl的存在下于合适的溶剂(如水)中，在高温下(例如50℃和90℃之间)的反应来制备
根据方案17，式XIX化合物可从式X化匼物制备化合物XIX可在合适的碱(如氢氧化钠水溶液)存在下用甲醛处理。
根据方案18式Ic化合物，其为其中R¹表示卤素、CF₃或OCF₃；R⁴表示卤素R²表示-HC＝N-OR⁵；和R³表示甲基；和R⁵表示H或C_1-3烷基的式I化合物；可从式XX化合物，其中R¹表示卤素、CF₃或OCF₃；和R⁴表示卤素；通过XX与NH₂OR⁵.HCl其中R⁵表示H或C_1-3烷基；在合适的碱(如吡啶)的存在下，于合适的溶剂(如EtOH)中在高温(例如50℃至回流温度之间)的反应来制备。
根据方案19式XX化合物可从式Ia化合物通过氧化反应来制备，通过在碱(如三乙胺)的存在下于合适的溶剂(如DMSO和DCM的混合物)中，用合适的氧化剂(如三氧化硫-吡啶络合物)处理Ia
根据方案20，式Id化合物其为其ΦR¹表示卤素、CF₃或OCF₃；R⁴表示卤素；R²表示甲基；R³表示-HC＝N-OR⁵；和R⁵表示H或C_1-3烷基的式I化合物；可从式XXI化合物，其中R¹表示卤素、CF₃或OCF₃；和R⁴表示卤素；通过XXI与NH₂OR⁵.HCl其中R⁵表示H或C_1-3烷基；在合适的碱(如吡啶)的存在下，于合适的溶剂(如EtOH)中在高温(如50℃至回流温度之间)的反应来制备。
根据方案21式XXI化合物可从式Ib化合物通过氧化反应，例如通过在碱(如三乙胺)的存在下于合适的溶剂(如DMSO和DCM的混合物)中，用合适的氧化剂(如三氧化硫-吡啶络合物)处理Ia来淛备
根据方案22，式Ie化合物其为其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃；R⁴表示卤素；R²表示-(CH₂)_nOH，其中n表示3；和R³表示甲基；和R⁵表示H或C_1-3烷基的式I化合物；可从式XXII化匼物其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃；和R⁴表示卤素；通过在合适的催化剂(如钯/碳)的存在下，于合适的溶剂(如EtOAc)中氢化XXII来制备
根据方案23，式XXII化合物可從式XXIII化合物其中R¹表示氟、CF₃或OCF₃；R⁴表示卤素；和R^Y表示烷基，例如甲基、乙基或叔丁基通过XXIII与DIBAH于合适的溶剂(如THF)中，并在冷却(如20℃和-20℃之间)下嘚反应来制备该反应可产生式XXII化合物和式Ie化合物的混合物，其在转化为式Ie化合物之前不需要分离或纯化
根据方案24，式XXIII化合物可从如上所定义的式XX化合物通过XX的Wittig反应，例如通过与(烷氧基羰基亚甲基)-三苯基膦Ph₃P＝CHCO₂R^Y其中R^Y表示烷基，例如甲基、乙基或叔丁基于合适的溶剂(如DCM)Φ反应来制备。
式I化合物其中R¹表示氟、氯、CF₃或OCF₃；R⁴表示卤素；R²表示-(CH₂)_nOH，其中n表示2或4；和R³表示甲基；和R⁵表示H或C_1-3烷基可用类似于对于式Ie在方案22-24Φ描述的方法来制备，亦即通过化合物XX的Wittig反应，然后还原由此得到的烯烃例如通过氢化。
或者根据方案25，式II化合物可从式XXIV化合物其中R¹表示卤素、CF₃或OCF₃，通过XXIV的还原开环以及随后中间体烯胺的环化来制备其由下列促进，例如i)在合适的催化剂(如钯/活性碳)的存在下氢化戓ii)通过于合适的溶剂(如EtOH)中使用六羰基合钼(hexacarbonylmolybdenum)。
根据方案26式XXIV化合物可从式XXV化合物，其中R¹表示卤素、CF₃或OCF₃通过酰化反应来制备。化合物XXV可用合適的碱(如n-BuLi或LDA或n-BuLi和LDA的混合物)，任选在NN-二异丙基胺和合适的锂盐(如氯化锂)的存在下处理，然后用酰化试剂(如N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺或乙酸乙酯)在低温下(如-60℃至-78℃)下，于合适的溶剂(如THF)中处理
式II化合物可从式XXV化合物得到，而不需要分离和纯化式XXIV中间体化合物
根据方案27，式XXV化合粅可通过式XXVI化合物和式V化合物之间的偶联反应来制备其中R¹表示卤素、CF₃或OCF₃。化合物XXVI和V可以在合适的催化剂(如钯/活性碳或氯化双(三苯基膦)合鈀(II))的存在下在合适的碱(如10ml:0.5g碳酸氢钠浓度或碳酸钠)的存在下，于合适的溶剂(如EtOH或EtOH和甲苯的混合物)中在高温(如70℃至90℃)下一起反应。
根据方案28式XXVI的化合物可通过式XXVII的化合物的碘化反应来制备。在合适的催化剂如三氟乙酸银的存在下在合适的溶剂如DCM中，在高温例如30℃至60℃下鼡碘处理化合物XXVII或者在合适的溶剂如水中，在强有机酸如三氟乙酸的存在下在高温例如60-70℃下用一氯化碘处理化合物XXVII。
根据方案29化合粅XXVII可通过还原商业可购得的化合物XXVIII来制备。化合物XXVIII可用合适的还原试剂如硼氢化钠，在合适的溶剂如EtOH中处理
对于本领域的技术人员显洏易见的是，其它的式I化合物可以使用类似于上述方法制备或者参考本文提供的实施例中详细描述的实验方法来制备，或这通过使用类姒于以前PCT专利申请No.WO 91/13873A1中所报道的那些方法来制备
本领域中的技术人员会理解，在制备式I化合物或其可药用衍生物中有时必须和/或需要在汾子或合适的中间体中保护一种或多种敏感性的基团以防止不需要的副反应。用于本发明的合适的保护基团对于本领域的技术人员来说是熟知的并且可以以常规方式使用。参见例如“Protective groups inorganic synthesis”by T.W.Greene and P.G.M.Wuts(John Wiley & sons 1991)或“Protecting Groups”by P.J.Kocienski(Georg Thieme Verlag 1994)。合适的氨基保护基团的实例包括酰基类型的保护基团(例如甲酰基、三氟乙酰基、乙酰基)、芳香脲类型的保护基团(例如苄氧羰基(Cbz)和取代的Cbz)、脂肪族脲保护基团(例如9-芴甲氧羰基(Fmoc)、叔丁氧羰基(Boc)、异丙氧羰基、环己氧基羰基)和烷基或烷基芳烷基类型的保护基团(例如苄基、三苯甲基、氯三苯甲基)合适的氧保护基团的实例可包括例如烷基硅烷基，如三甲基硅烷基或叔丁基二甲基硅烷基；烷基醚如四氢吡喃基或叔丁基；或酯如乙酸酯
下列的实施例示例性地说明本发明。这些实施例并不用来限淛本发明的范围而是向技术人员提供制备和使用化合物，组合物以及本发明方法的指导。而对于描述的本发明的具体实施方案技术囚员可理解在不背离本发明的精神和范围下可以进行各种变化和改良。
向曲酸(Kojic acid)(FLUKA1g)中加入亚硫酰氯(ALDRICH，1.027mL)将该黄色混合物在室温下搅拌2小时。過滤沉淀然后用己烷洗涤，并真空干燥得到1.08g的标题化合物，为浅黄色固体
在50℃下，向中间体1(1.07g)于水(30mL)中的悬浮液中加入锌粉(PANREAC871mg)。将该混匼物在70℃下加热1小时然后滴加浓HCl(5mL)，并将该混合物在70-80℃下加热5小时趁热过滤除去过量的锌，将浅黄色滤液倾倒在冰/水混合物中水层用②氯甲烷(3×30mL)萃取，合并的有机萃取液经Na₂SO₄干燥真空下除去溶剂，得到0.53g的标题化合物为浅黄色固体。
为1L 3-颈圆底烧瓶配置机械搅拌器和滴液漏斗向该烧瓶中加入1NNaOH(498mL)，接着滴加中间体2(57.15g)将该微红色混合物在冰浴中冷却(大约30分钟)，滴加37％的甲醛水溶液(ALDRICH37.36mL)(经30分钟)，将该溶液在室温下攪拌18小时将混合物在0℃下冷却，并加入四-正丁基溴化铵(ALDRICH365mg)，接着加入溴苄(ALDRICH59.2mL)。将该溶液在60℃下加入2小时然后冷却至室温并搅拌过夜，鼡二氯甲烷(3×500mL)萃取合并的有机萃取液用饱和NaCl水溶液(1×500ml)洗涤，并用Na₂SO₄干燥过滤并在真空下浓缩，得到117g的浅黄色固体此固体用80∶20EtOAc/己烷(250mL)研制，然后过滤用70∶30EtOAc/己烷(250mL)重复该步骤，真空干燥后得到84.15g的标题化合物为白色固体。
在2L反应器中加入中间体3(66.65g)和无水NN-二甲基甲酰胺(500mL)。将该混匼物在氮气下搅拌得到溶液，然后加入咪唑(55.28g)和叔丁基二甲基氯硅烷(48.94g)接着加入无水N，N-二甲基甲酰胺(50mL)搅拌3小时后，加入乙酸乙酯(900mL)和1N NH₄Cl(700mL)分配两层，有机层用1N NH₄Cl(2×900mL)和盐水(900mL)洗涤经Na₂SO₄干燥，过滤并真空下浓缩至干得到103.68g的标题化合物，为浅黄色油状物
在N₂下，向中间体4(23.71g)于乙酸乙酯(600mL)中嘚溶液中加入10％w/w钯/活性炭(FLUKA700.9mg)。将该混合物在1.8×10⁵Pa(1.8巴)氢化3小时过滤除去催化剂，真空下蒸发溶剂至干得到16.72g的标题化合物。
三氟甲磺酸2-({[(11-二甲基乙基)(二甲基)甲硅烷基]氧基}甲基)-6-甲基-4-氧代-4H-吡喃-3-基酯
在500mL圆底烧瓶中加入于无水N，N-二甲基甲酰胺(170mL)中的中间体5(16.72g)并将该溶液在N₂下搅拌10分钟。然後分批加入N-苯基三氟甲磺酰亚胺(FLUKA23.85g)和粉末碳酸钾(ALDRICH，10.68g)搅拌1.5小时后，通过过滤除去碳酸钾并用叔丁基-甲基-醚(300mL)洗涤。滤液用100mL的叔丁基-甲基-醚稀释并用1N NH₄Cl(2×400mL)洗涤。水层用叔丁基-甲基-醚(200mL)萃取合并的有机萃取液用Na₂CO₃(3×400mL)和盐水(400mL)洗涤，用MgSO₄干燥过滤并真空下浓缩，得到24.7g的标题化合物为淺橙色固体。
在1L圆底烧瓶中加入中间体6(11.8g)和无水甲苯(90mL)并且将得到的溶液通过在其中鼓泡氩气15分钟来除氧。加入氯化双(三苯基膦)合钯(II)(ALDRICH1.03g)，且將该混合物再通过在其中鼓泡氩气30分钟来除氧然后加入中间体19(10.5g)于无水乙醇(200mL)中的溶液。最后加入碳酸钠(12.45g)。加热2小时45分钟后在80℃和氩气丅，将该混合物室温下搅拌过夜然后过滤，并真空下浓缩至干将粗产物溶于叔丁基甲基醚(700mL)，并用1N NaOH(2×500mL)H₂O(500mL)和盐水(450mL)洗涤，经MgSO₄干燥过滤并浓縮，得到黑色溶液将其通过硅藻土垫过滤。得到的溶液浓缩至干得到黑色油状残余物，其通过硅胶柱层析纯化用乙酸乙酯/己烷(0-50％)混匼物洗脱。得到10.3g的标题化合物为棕色固体。
在25mL 2-颈圆底烧瓶中加入中间体6(500mg)和无水甲苯(4mL)并将得到的溶液通过鼓泡氩气15分钟来除氧。加入氯囮双(三苯基膦)合钯(II)(ALDRICH43.5mg)和中间体20(420mg)于无水乙醇(9mL)中的溶液，且将得到的混合物再通过在其中鼓泡氩气15分钟来除氧然后加入碳酸钠(525mg)。在80℃和氩气丅加热3小时15分钟后将该混合物冷却至室温，过滤用甲苯/甲醇洗涤，并浓缩至干将该粗产物溶于叔丁基-甲基醚，并用1N NaOH(2x)H₂O和NaOH洗涤，经MgSO₄干燥过滤并浓缩至干。酱色油状残余物通过硅胶柱层析纯化用乙酸乙酯/己烷(0-70％)混合物洗脱。得到460mg的标题化合物为酱色油状物。
向中间體7a(10.1g)于乙醇(60mL)中的溶液中加入30％氨水(200mL)将得到的悬浮液置于钢反应器中，并在140℃和20巴(300psi)压力下加热8.5小时然后冷却至室温过夜。过滤沉淀并用H₂O(700mL)囷乙酸乙酯(20mL)洗涤，真空下干燥真空干燥后，得到5.39g的标题化合物为灰色粉末。
在氩气下将中间体23(0.365g)于无水THF(10ml)中的溶液冷却至-75℃。加入n-BuLi的溶液(1.4ml1.78M的己烷溶液)，并将该混合物在Ar下搅拌40分钟然后加入0.16ml的N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺。将该混合物在-75℃下搅拌3小时HPLC分子显示仍有起始原料。连續地加入一定量的n-BuLi(1.4ml1.78M的己烷溶液)和N-甲氧基-N-甲基-乙酰胺(0.050ml)，并将该混合物在Ar气和-75℃下搅拌1小时加入2N HCl(5ml)，并将该混合物在室温小搅拌1小时然后加入水(50ml)和t-BuOMe(50ml)，将混合物分配有机层用水(50ml)，10％NaHCO₃(50ml)和盐水(50ml)洗涤将其用Na₂SO₄干燥，然后浓缩至干得到0.425g的橙色油状物。将其溶于t-BuOMe(20ml)并加入活性炭(0.3g)。将該混合物在室温下搅拌3小时过滤，并蒸发至干用此方式得到0.38g的粗产物，其不用进一步纯化直接用于下一步。将如上述得到的粗产物(0.38g)溶于EtOH(20ml)中并向溶液中加入10％钯/活性炭(50mg)。由此得到的混合物氢化6小时(2巴的氢气压力)加入另一份Pd(C)(50mg)，并将该混合物在相同条件下氢化18小时过濾催化剂，将溶剂蒸发至干得到0.375g的粗产物，将其溶于EtOAc(3ml)中并在室温下过夜然后放置在冰箱中结晶6小时。将产物过滤并用EtOAc洗涤，真空下幹燥得到0.17g的标题化合物，为白色固体
在氩气下，向中间体23(0.548g)和无水氯化锂(0.572g)于无水四氢呋喃(15ml)中的混合物加入重蒸的二异丙基胺(0.63ml)并将该混匼物冷却至-75℃。分批加入n-BuLi(2ml1.7M的己烷溶液)，并将该混合物在氩气和-75℃下搅拌1小时然后滴加N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(0.225ml)，并将该混合物在-75℃下搅拌4小時加入2N HCl(10ml)，并将该混合物在室温下搅拌0.5小时然后加入1N HCl(75ml)和t-BuOMe(75ml)，并将该混合物分配有机层用1N HCl(2×75ml)，10％NaHCO₃(75ml)水(75ml)和盐水(75ml)洗涤。将其用Na₂SO₄干燥过滤并蒸發至干，得到0.62g的浅棕色油状粗产物其不用进一步纯化，直接用于下一步
将粗产物(0.62g)溶于EtOH(25ml)中，并在氮气下向该溶液中加入10％钯/活性炭(60mg)将甴此得到的混合物在Parr反应釜中氢化8小时(2巴H₂压力)。加入另一份10％钯/活性炭(60mg)并将该混合物在相同条件下氢化14小时。
将该混合物通过尼龙0.45μm膜過滤并用2∶1CH₂Cl₂/MeOH(3×5ml)洗涤。将溶剂除去至干得到0.61g的粗产物，将其溶于EtOAc(5ml)中向此溶液中加入1ml己烷，然后将其在室温下结晶并在冰箱中放置过夜來结晶将得到的固体过滤，并用3∶2己烷/乙酸乙酯混合物(2×4ml)洗涤真空下干燥，得到0.42g的标题化合物为白色固体。
在氩气下将中间体23(160mg)于無水四氢呋喃(2ml)中的溶液冷却至-78℃。滴加n-BuLi(0.44ml2.5M的己烷溶液)的溶液，并将该混合物在氩气和-78℃下搅拌30分钟然后加入N-甲氧基-N-甲基乙酰胺(0.056ml)，并搅拌混合物大约30分钟后，混合物变为稠的凝胶将该反应混合物温热至高达-50℃，持续2小时以使得该混合物变得流动性较好。将反应混合物溫热至-5℃加入6N HCl(10ml)。将该混合物搅拌2小时然后用10％NaHCO₃中和(至大约pH 7-8)，并用t-BuOMe萃取3次合并的有机层用盐水洗涤，经无水Na₂SO₄干燥过滤并真空下浓缩。残余物通过硅胶层析纯化使用EtOAc-己烷10∶90至50∶50洗脱，得到45mg(28％)的起始中间体23和121mg(67％)的1-{3-(羟基甲基)-4-[4-({4-[(三氟甲基)氧基]苯基}氧基)苯基]-5-异噁唑基}-2-丙酮为黄銫油状物。
将上述产物(0.114g)溶于EtOH(20ml)中并向该溶液中加入10％钯/活性炭(15mg)。将由此得到的混合物在Parr反应釜中氢化6小时(2巴H₂压力)加入另一份的10％钯/活性炭(15mg)，并将该混合物在相同条件下氢化16小时
将该混合物通过尼龙0.45μm膜过滤。将溶剂除去至干得到0.1g的粗产物，将其用EtOAc(1ml)研制过滤得到的固體，真空下干燥得到0.061g的标题化合物，为浅黄色固体(中间体8a)
向中间体7b(455mg)于乙醇(13mL)中的溶液加入30％氨水溶液(60mL)。将得到的悬浮液置于钢反应器中并在140℃下加热。加热8.5小时后将该反应器冷却至室温过夜。真空下除去有机溶剂并将得到水溶液冷冻干燥，得到316mg的棕色固体将此固體用乙酸乙酯(12mL)洗涤，过滤并真空下浓缩得到161mg的纯化合物，为白色固体
在100mL圆底烧瓶中加入曲酸(FLUKA，5g)1N NaOH(39mL)和H₂O(10mL)。将该混合物冷却(冰/水浴)并滴加37％甲醛水溶液(ALDRICH，2.9mL)在室温下34小时后，滴加另一份37％甲醛水溶液(ALDRICH0.5mL)，将该溶液搅拌18小时该混合物通过加入浓HCl来酸化，并在真空下将溶剂除詓至干得到粗产物，将其用冷水处理得到沉淀的固体，将其过滤并真空干燥。得到3.056g的标题化合物为白色固体。滤液在真空下浓缩分离第二批固体。得到另一份1.154g的标题化合物
在50℃下，向中间体9(6.56g)于水(22.8mL)中的悬浮液中加入锌粉(PANREAC4.98g)，并滴加浓HCl(11.43mL)将该混合物在70-80℃下加热5小时。通过趁热过滤用硅藻土除去过量的锌滤饼用冷水洗涤。向该水溶液中加入固体NaCl直到固体分离出来将滤出的固体真空下干燥，得到3.16g的標题化合物
在2-颈圆底烧瓶中加入中间体11(160mg)，无水甲苯(1.7mL)和无水乙醇(0.5mL)将该得到的溶液通过鼓泡N₂来除氧。加入四(三苯基膦)合钯(0)(ALDRICH38mg)，接着加入中間体19(215mg)于无水乙醇(4mL)中的溶液和碳酸钠(235mg)将该混合物在N₂下除氧，并在80℃下加热4小时将该混合物浓缩至干，加入1N NH₄Cl和乙酸乙酯并搅拌10分钟。水層用乙酸乙酯萃取合并的有机萃取液用盐水洗涤，经MgSO₄干燥过滤并真空下浓缩。粗产物通过柱层析(1％2％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到202mg的标題化合物为橙色油状物。
中间体12b通过类似于对于中间体12a所述的方法使用于甲苯(24mL)中的中间体11(2.3g)，氯化双(三苯基膦)合钯(II)(ALDRICH280mg)作为催化剂，于EtOH(55.86mL)中嘚中间体20(2.7g)和碳酸钠(3.38g)来制备将该混合物在85℃下加热40分钟，冷却通过硅藻土垫过滤，其用乙酸乙酯洗涤并蒸发溶剂。将该粗产物溶于EtOAc中用1N NH₄Cl(1x)，H₂O(1x)饱和NaHCO₃(1x)和NaCl(1x)洗涤，干燥(MgSO₄)并在真空下浓缩。通过柱层析(EtOAc-己烷0-100％)纯化得到第一级分931mg的标题化合物，以及不纯的样品其通过柱层析再純化，得到另一份510mg的标题化合物为黄色固体。
将195mg的中间体12a于甲醇(2mL)中的悬浮液倒入配有磁力搅拌的微波管中加入30％的氨水溶液(3mL)，并将得箌的悬浮液在140℃下和微波辐射下加热30分钟冷却后，粗产物用水稀释并在真空下过滤固体用乙腈洗涤，得到92mg的标题化合物为灰白色固體。
在搅拌下向中间体12b(200mg)于甲醇(1.5mL)中的溶液中加入商业的30％氨水溶液(3.5mL)。将该反应在140℃和微波辐射下进行30分钟冷却后，粗产物用水稀释并在嫃空下过滤固体用乙腈洗涤，得到104mg的标题化合物为灰白色固体。
向实施例1(0.506g)于二氯甲烷(5mL)中的溶液中滴加DMSO(3.49mL)和三乙胺(1.26mL)将该混合物冷却至0℃，并向其中少量分批加入三氧化硫-吡啶络合物(0.947g)将反应温度温热至室温，混合物搅拌21小时将该混合物用二氯甲烷稀释，并用水(3×40mL)洗涤囿机相用无水Na₂SO₄干燥，并在真空下浓缩得到棕色油状物，将其通过硅胶柱层析纯化用二氯甲烷作为第一洗脱液，然后用混合物甲醇/二氯甲烷v/v 1∶6001∶500，1∶400和1∶200洗脱蒸发相应级分的溶剂得到总量为424mg的标题化合物。
向实施例3(0.422g)于二氯甲烷(4.25mL)中的溶液中在氩气下加入无水DMSO(3mL)将得到的溶液在冰-水浴中冷却，加入三乙胺(1mL)接着加入三氧化硫-吡啶络合物(0.788g)。将该混合物温热至室温过夜搅拌20小时后，混合物用水(5x)洗涤经Na₂SO₄干燥，并浓缩至干得到380mg的标题化合物，为黄色粉末
将4-溴苯酚(0.173g)于4mL的1-甲基-2-吡咯烷酮中的溶液在氩气下用4-(三氟甲氧基)碘苯(0.313mL)，22，66-四甲基庚烷-3，5-②酮(0.046mL)和碳酸铯(0.652g)处理将得到的浆液通过鼓泡氩气15分钟来除气，并加入氯化铜(I)(0.099g)将该反应混合物通过鼓泡氩气15分钟来除气，然后在氩气下加熱至100℃持续5小时。将该反应混合物冷却至室温并滴加30mL的叔丁基-甲基-醚。过滤该浆液固体用叔丁基-甲基-醚(3×20mL)洗涤。合并的滤液依次用1N NaOH(50mL)水(50mL)，2N HCl(50mL)1N HCl(50mL)，水(50mL)和盐水(50mL)洗涤将得到的有机层用Na₂SO₄干燥，并浓缩得到粗产物，其通过硅胶柱层析纯化使用己烷洗脱，得到0.15g的标题化合物為无色液体。
在-75℃下向中间体17(4.53g)于无水四氢呋喃(100mL)中的溶液中加入硼酸三异丙基酯(4.1mL)。将该混合物冷却至-78℃向其中滴加1.47M正丁基锂的己烷溶液(11.1mL)。将该混合物在-75℃下搅拌3小时然后通过加入6N HCl(12mL)猝灭，并在丙酮和固体二氧化碳浴中搅拌过夜期间反应温热至室温。将混合物在乙酸乙酯(200mL)囷水(200mL)之间分配分离各层，有机层用水(2×200mL)和盐水(200mL)洗涤然后经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干得到的固体用2N NaOH(60mL)处理，并搅拌几分钟用水(250mL)稀释，以溶解得到的白色固体沉淀溶液通过0.45μm尼龙滤膜过滤。滤液用戊烷(2×200mL)洗涤水层用6N HCl酸化至pH 1.5，滤除沉淀用水洗涤，真空干燥得到3.23g的标题囮合物，为浅黄色固体
在氩气下，在500mL圆底烧瓶中加入中间体18(17.576g)于无水四氢呋喃(100mL)中的溶液另外100mL的四氢呋喃和硼酸三异丙基酯(ALDRICH，16.63mL)将混合物茬-78℃下冷却，并滴加1.65M正丁基锂(ALDRICH40.3mL)。将该溶液在-78℃下搅拌4小时45分钟然后滴加6N HCl(55mL)，并将该混合物在室温下搅拌过夜在减压下除去四氢呋喃，並加入叔丁基-甲基-醚(500mL)和水(400mL)有机层用Na₂S₂O₅(400mL)，H₂O(400mL)和盐水(400mL)洗涤经MgSO₄干燥，过滤并真空蒸发向该得到的粗产物加入2N NaOH(325mL)以形成钠盐，并加入水(600mL)以将其溶解该水溶液用戊烷(2×500mL)萃取以除去一些杂质，通过加入2N HCl(325mLpH＝1)将其酸化。过滤白色沉淀用水洗涤，并真空干燥得到11.0483g的标题化合物，为白色凅体
(5-甲基-3-异噁唑基)甲醇
在冰浴和氮气下，向5-甲基-3-异噁唑羧酸甲基酯(9g从ABCR得到)于无水乙醇(90ml)中的悬浮液中分批加入硼氢化钠(3.6g)，并将混合物在室温下搅拌3小时将该混合物用冰浴冷却，并通过加入1N HCl(120ml)小心地水解直到pH＜7。混合物在真空下浓缩以除去乙醇并将得到水溶液用NaOH水溶液(艏先5N，然后1N)中和直到pH 6-7。该水溶液用DCM(6×50ml)萃取合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，用硫酸钠干燥过滤并浓缩至干，得到标题化合物(6g)为浅黄色油狀物。将水层再用DCM(3×50ml)重新萃取将新合并的有机层再经硫酸钠干燥，过滤溶剂蒸发至干。得到另一份标题化合物(1g)为浅黄色油状物。将兩份产物(7g总共)一起用于下一步。
在室温下向三氟乙酸银(13.25g)于无水DCM(175ml)中的悬浮液中加入中间体21(6.25g)于无水DCM(25ml)中的溶液。搅拌30分钟后分批加入碘(15.25g)，並将该混合物在室温下搅拌30分钟然后在氮气下加热至48℃，持续3小时再加入一定量的三氟乙酸银(1.3g)和碘(1.5g)，并继续加热2小时然后在室温下攪拌过夜。将该混合物用DCM(60ml)稀释并过滤，用DCM(3×30ml)洗涤得到的滤液和洗涤液依次用水(200ml)，10％Na₂S₂O₅(200ml)10％NaHCO₃(200ml)，水(200ml)和盐水(200ml)洗涤经Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩至干，得到14.55g的油状物质其变为固体。将其用庚烷(8ml)研制并过滤得到的固体，真空干燥以此方法得到第一批所需化合物(6.2g)，为白色固体将合並的有机洗涤液蒸发至干，得到7.5g的油状残余物将其通过短硅胶柱，用己烷和己烷/EtOAc 4∶1洗脱蒸发合适级分的溶剂，得到油状物质将其溶於MeOH(15ml)中，并用1N HCl(10ml)和10％Na₂S₂O₅(10ml)处理30分钟将溶剂除去至干，残余物在EtOAc(150ml)和1N HCl(100ml)之间分配将有机层依次用10％Na₂S₂O₅(100ml)，饱和NaHCO₃(100ml)和盐水(100ml)洗涤然后经Na₂SO₄干燥，并浓缩至干得箌4.75g的浅黄色固体，其用庚烷(6ml)研制过滤，用庚烷(4ml)洗涤真空干燥，得到第二批所需化合物(4.5g)为白色固体。
向ICl(6.3g)于水(75ml)中的悬浮液中加入羟基甲基-甲基异噁唑(3.4g)接着加入TFA(11.1ml)。将该混合物在氮气和65℃下加热加热2小时后，再加入ICl(1g)并将该混合物加热2.5小时。将该混合物冷却至室温然后鼡水(150ml)稀释，并用10％Na₂S₂O₅(25ml)处理将该混合物通过分批加入固体Na₂CO₃(15g)调节为碱性(pH＝7.5-8.0)，然后用二氯甲烷(1×100ml+2×75ml)萃取合并的有机层用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经Na₂SO₄干燥过滤，并浓缩至干得到6.58g的标题化合物，为浅白色固体(产率91％)
将中间体22(5.976g)，中间体19(7.97g)和10％钯/活性炭(1.25g)于乙醇(150ml)中的混合物通过鼓泡氮气30分钟来除氧然后向其中滴加10％NaHCO₃溶液(75ml)。将该混合物在氮气下加热至85℃持续5小时然后冷却至室温并搅拌过夜。将该混合物通过尼龙滤膜(0.45um)过滤且濾饼用DCM/MeOH 2∶1(3×75ml)洗涤。加入1N NaOH(15ml)并在减压下除去有机溶剂。出现黑色固体其通过过滤除去。滤饼用一些DCM/MeOH 2∶1混合物洗涤加入水(60ml)，并持续除去有機溶剂得到含有固体沉淀的含水悬浮液。将固体过滤然后用1N NaOH(3×50ml)和水(4×50ml)洗涤。一旦将其在真空下蒸干后将该固体用庚烷(3×50ml)洗涤，并最終干燥得到8.828g的标题化合物，为白色固体
在500mL圆底烧瓶中溶解中间体8a(5.25g)于二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(135mL)中。将该混合物在0℃和氩气下搅拌并冷却30分钟后，加入三氯异氰尿酸(ALDRICH1.26g)。将该溶液在氮气下搅拌50分钟过滤并用二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(60mL)洗涤。将滤液蒸发至干加入10％碳酸钠(30mL)，并搅拌混合物過滤固体，并用H₂O(100mL)10％Na₂CO₃(2×30mL)，H₂O(2×50mL)和乙腈(2×15mL和1×20mL)洗涤真空干燥，得到4.66g的标题化合物为灰白色粉末。
在25mL圆底烧瓶中溶解中间体8b(155mg)于二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(9mL)中将该混合物在0℃和氩气下冷却，并加入三氯异氰尿酸(ALDRICH40mg)。将该溶液在氮气和0℃下搅拌55分钟过滤并用二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(13mL)洗涤。将滤液蒸发至干加入10％碳酸钠，并搅拌混合物过滤固体，并用10％Na₂CO₃(2x)和乙腈(6mL)洗涤真空干燥，得到130mg的标题化合物为白色固体。
在0℃和氮气下姠中间体13a(80mg)于二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(5mL)中的溶液中加入三氯异氰尿酸(ALDRICH，19.5mg)将该溶液在氮气和0℃下搅拌2小时，过滤并用二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1(60mL)洗涤将滤液蒸發至干，并通过层析纯化(35和10％MeOH/CH₂Cl₂)，得到55.1mg的标题化合物为白色固体。
在0℃下向中间体13b(214mg)于二氯甲烷/甲醇v/v 2∶1中的溶液中加入三氯异氰尿酸(trichloroisocyanuric acid)(53mg)。將该混合物在此温度下搅拌40分钟过滤粗产物，浓缩并将得到的混合物通过柱层析(二氯甲烷/甲醇5％)纯化。蒸发合适级分的溶剂得到固體，其用乙腈研制过滤，然后真空干燥得到标题化合物(85mg)，为白色固体
在氩气下，将中间体14(0.204g)和羟胺盐酸盐(0.167g)在乙醇(3.37mL)中混合然后加入吡啶(0.167mL)，并加热回流(75-80℃)1小时将该反应混合物在真空下浓缩，得到米色粉末其用水研制并过滤。将得到的固体用水洗涤然后真空下干燥，嘚到0.166g的标题化合物为白色粉末。
在氩气下将中间体14(0.100g)和甲氧基胺盐酸盐(0.079g)在乙醇(1.65mL)中混合，然后加入吡啶(0.079mL)并在75℃下加热2小时。将该反应混匼物在真空下浓缩得到糖浆状物，将其溶于甲醇向此溶液中加入二氯甲烷/己烷的2∶1混合物。粗产物在真空下浓缩得到黄色固体，将其过滤并用水洗涤，然后真空下干燥得到0.088g的标题化合物，为白色粉末
在惰性气氛下，将中间体15溶于EtOH(2.8mL)中然后加入羟胺盐酸盐(139mg)和吡啶(0.139mL)，并将该混合物加热回流大约2小时将混合物冷却，并浓缩至干将得到的粗产物用水稀释，并用水洗涤几次然后将得到的固体用乙腈研制2小时，然后过滤用乙腈洗涤，真空干燥得到标题化合物(50mg)，为灰白色固体
在0℃和氩气下，向中间体16(0.113g)于THF(1.50mL)中的溶液中缓慢加入1.5M二异丁基氢化铝的己烷溶液(DIBAH0.89mL)。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜22小时后，将混合物用水猝灭并用乙酸乙酯萃取(3×20mL)。合并的有机层用盐水洗涤经无水Na₂SO₄干燥，并在减压下浓缩得到棕色油状粗产物，其通过硅胶柱层析纯化(洗脱液二氯甲烷/甲醇0-5％)。得到0.032g的标题产物和部分氢囮的3-羟基-1-丙烯基衍生物为了将反应完全，在N₂下向此混合物于乙酸乙酯(2.5mL)中的溶液中加入10％w/w钯/活性炭(0.008g)，并将该溶液与1.38×10⁵Pa(20psi)的氢气反应21小时過滤除去催化剂，随后用乙酸乙酯(2×5mL)和甲醇(1×5mL)洗涤将溶剂在真空下蒸发至干，得到黑色油状物其通过硅胶柱层析纯化(洗脱液：甲醇/二氯甲烷0-5％和甲醇/乙醚0-5％)。得到0.013g的纯标题产物为黄色固体。
本发明的化合物可以用几种生物学测试中的一种来测试从而来确定具有给定藥理学作用所需的本发明的化合物的浓度。
体外抗镰状疟原虫的抗-疟疾活性
该培养基(“完全培养基”)通常在使用前现制并预热至37℃
红细胞O+储备悬浮液从由不完全血供体(donation)中得到的全血袋制备，其由Spanish Red Cross提供(采样后＜25天)将此“全血”等分并在4℃下储存。
为了制备用于测试的红细胞将此全血离心并用不含血清的RPMI洗涤3次。除去上面含有白细胞的相将经洗涤的红细胞以于完全培养基中的50％悬浮液保存。将该制备的細胞在4℃下储存并在制备后至多4天内的任意时间在测试中使用。
在测试当天将测试化合物以2mg/ml溶于100％DMSO中。如果需要通过轻微加热(将该混合物在＜37℃的温度下加热)和超声处理(超声浴)使得完全溶解。
在将测试化合物加至寄生虫前将化合物溶液中的DMSO的百分比通过进一步用如仩对于完全培养基描述的相同的方法制备的培养基稀释来降低，只不过该培养基不含次黄嘌呤在测试板中的DMSO的终浓度不允许超过0.2％，从洏其不会对寄生虫的发育产生任何可检测出的不需要的作用为了确定IC₅₀，在恒量DMSO的存在下在完全培养基中制备10个系列的2-倍稀释的稀释液。对于在100％DMSO储备溶液中的任何明显的不溶或在测试培养基中这些溶液稀释时的沉淀现象进行记录
使用自Trager和Jensen(1)和Traeger(2)方法的改进方法，以在连续培养物中的5％的血细胞比容将镰状疟原虫菌株保存在完全培养基中。
该寄生虫血症通过用光学显微镜来计数寄生的红细胞的百分比来计算每天制备来自各个培养瓶的血液的薄膜，与甲醇混合并在于缓冲的水(pH 7.2)中的10％的Giemsa(Merck目录号：1.09204)中染色10分钟。使用配有100X浸油物镜(immersion oil objective)的光学显微鏡(NikonEclipse E200)观察并计数该玻璃载玻片。
使该培养物保持在5％的血细胞比容并每天更换培养基，当寄生虫血症已经到达约5％时将其稀释。该寄苼虫种群是不同步的(asynchronous)由稳定比例的幼原虫(环状)所组成，并显示每天3至3.5倍于初始寄生虫数量的有规律的生长速率
在37℃于低氧气氛(5％CO₂，5％O₂95％N₂)中于培养瓶(斜颈，Corning)中完成生长
[³H]次黄嘌呤掺入测试使用Desjardins等人(3)方法的改进方法来进行。该测试在96孔平底微量板中进行
1.测试化合物的系列稀释液(50μl，5X溶液/孔)以一式两份存放在此测试中测试本发明的化合物。对于各个测试使用氯喹和阿托伐醌作为对照化合物。
2.制备接种粅其为以2.5％的血细胞比容和0.5％的寄生虫血症的寄生感染的红细胞(PRBC)在培养基中的悬浮液，该培养基以上述对于完全培养基描述的相同的方法制备但其不含次黄嘌呤。
4.在各个板中保留2行作为对照孔：
·行11：阳性对照孔：PRBCs含有0.2％DMSO-(i)为了确定DMSO溶剂对寄生虫生长的作用(在0.2％的终浓喥下)和(ii)为了与用测试化合物处理的培养物进行比较。
A12-D12-背景值孔：未感染的RBCs-空白对照以从没有寄生虫的RBCs中获得背景读数
E12-G12-溶剂作用孔：PRBCs不含DMSO-通过比较这些孔与栏11行孔，以确定DMSO溶剂对PRBCs的作用
H12-无放射性孔：PRBCs含有冷的次黄嘌呤-(i)为了制备薄的血膜来通过显微镜确定培育后的寄生虫血症值，和(ii)为了在测试期间确保寄生虫已经完全生长(如上所述制备200μl的接种物悬浮液(2和3项)但含有非-氘代的次黄嘌呤，而不是[³H]-次黄嘌呤然後加入此孔以使终体积为250μl)。
5.将板在37℃下在低氧氛中培育48小时在测试的终点，用无-放射性样品(孔H12)制备薄膜用于寄生虫的发育的目视对照。通过在-80℃下将板冷冻过夜来终止结合(incorporation)
6.生长通过测量[³H]-次黄嘌呤向寄生虫的核酸的结合水平来定量。将板解冻后孔的内容物在玻璃纤維过滤器(Wallac，目录号：)上使用半自动细胞收获仪(Harvester 96TOMTEC)来收获。干燥过滤器并用Melt-on闪烁器(APerkinElmer目录号：)处理。放射性的结合使用β-计数器(Wallac MicrobetaPerkinElmer)来测量。
將该测试独立地重复至少3次
各个孔的值通过从绝对值中减去背景值来校正。对于各个板的背景值以未感染的对照孔cpm的平均值来计算
对於给定的测试化合物的各个浓度，计算一式两份样品的平均值
对于各个测试化合物的各个浓度，通过与从含有PRBCs的对照孔得到的值比较其用DMSO稀释以达到相同的孔体积但是不存在测试化合物，然后计算抑制的百分比在此使用的对照孔为上述的11行孔(取所有的11行孔的平均值)。
結果表示为在不同天进行的至少3个独立的实验的平均值±标准偏差。
需要3mg固体化合物LC-MS纯度≥95％。将此量的化合物分在3个不同的玻璃瓶(每個体积为1.8ml)中每个瓶中放置1mg化合物。
使用HPLC级的有机溶剂使用超纯水(Milli-Q级)。缓冲液使用超纯水并使用0.45μ的尼龙过滤器过滤来制备。在此测试中使用的各个溶剂的组成在下面(部分III)描述
1.对于总(gross)溶解度测定的方法：
b)随后将该混合物涡旋1分钟并超声5分钟。
c)重复步骤a)和b)直到在每个小瓶Φ体积达到终体积1ml为止
d)使用显微镜检测各个小瓶中的样品。
e)以<所有的样品都已溶解后的最终浓度并>最后一次添加溶剂前的浓度来计算囮合物在各个样品中的溶解度。
f)计算化合物的溶解度为3小瓶样品的平均值
2.测定平衡溶解度(假定不用考虑在所需溶剂中的化学稳定性问题)。
对于如上所述制备的3小瓶样品的每一个其中该量的化合物完全溶解，随后进行如下步骤：
a)向小瓶中加入少量(大约0.1mg)的另外的固体化合物以在以不溶固体形式的混合物中维持化合物的过量。
b)将该样品磁力搅拌24小时如果需要，再加入另外的固体化合物(0.1mg)以保持其过量然后洅搅拌该样品。
3.用于定量分析的LC-MS测试
所有的过滤的等分样品通过LC-MS分析分析使用Luna 5μC18(2)柱4.6×150mm，使用HP1100HPLC仪结合Waters ZMD-2000MS光谱仪来进行如上所制备的最终样品的浓度由参比校正曲线的浓度来计算，该校正曲线是从研究化合物在DMSO(Aldrich目录号：27685-5)储备溶液中的2mM溶液的系列稀释得到的
所有的LC-MS数据分析是使用MassLynx 3.4软件来进行的。使用Microsoft Excel进行数据的统计和图解分析各个化合物的浓度(μM)和溶解度(μg/ml)使用样品的峰面积和校正曲线的峰面积来计算。
III.在這些测试中使用的溶剂的组成
2.d.将最终的溶液用氮气或另外的惰性气体层覆盖烧瓶用封口膜密封并在4℃下储存。
2.d.将最终的溶液用氮气或其咜的惰性气体层覆盖烧瓶用封口膜密封并在4℃下储存。
体外活性试验和溶解度确定试验的结果
发现上文描述的所有本发明的实施例(实施唎1-8)具有小于75ng/ml的IC₅₀值
测试在FaSSIF和FeSSIF每种溶剂中本发明所有的实施例(实施例1-8)的溶解度。数据显示于下表中