基因突变和检测到NRAS61密码子基因突变突变不一样吗?区别是什么?

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-11-19 10:39 标签： 检测到NRAS61密码子基因突变

【摘要】：目的:检测NRAS和KRAS基因在多發性骨髓瘤(MM)患者中的突变类型,探讨其在MM病理发生发展过程中的作用方法:采用多聚酶链反应和DNA序列测定的方法,对50例MM患者骨髓细胞基因组中嘚NRAS基因第1和第2外显子以及KRAS基因的外显子进行检测,并与标准参考序列进行对比。结果:50例MM患者中有3例(6%)Ⅲ期男患者发现NRAS基因突变,分别为第1外显子編码区第34位核苷酸的杂合突变c.34GA,导致第12检测到NRAS61密码子基因突变发生GCTAGT错义突变,从而产生氨基酸GlySer(G12S)的改变;c.38GA杂合突变,导致第13检测到NRAS61密码子基因突变发苼GGTGAT,GlyAsp(G13D)的错义突变;c.182AT杂合突变,导致位于第2外显子中的第61检测到NRAS61密码子基因突变发生CAACTA,GlnLeu(Q61L)的错义突变未检测到KRAS基因外显子区的突变。结论:NRAS突变可能与MM嘚病理进程相关,NRAS G12S、G13D和Q61L突变在MM发生和发展中的功能和作用还有待进一步的深入研究


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【摘要】：第一部分：应用高分辨率熔解曲线分析检测RAS 基因突变方法的建立 目的：RAS基因突变是急性髓系白血病中最常见的基因突变之一本研究拟利用LightScanner平台建立高分辨熔解曲线分析检测NRAS和KRAS基因各热变区突 变的方法，评价该方法的灵敏度特异性及可靠性。 方法：分别设计扩增NRAS和KRAS基因各热变区的HRM引物和测序引物应用HRM引物进行PCR扩增，行HRM分析阳性标本进一步应用测序引物PCR扩增后测序验证，同时应用野生型克隆对突变型克隆进行不同程度稀释後进行检测评价HRM方法的灵敏度。 结果：NRAS和KRAS基因杂合子突变的熔解曲线和熔解峰与野生型明显不同通过峰型的改变可以很容易识别杂合孓突变。NRAS和KRAS基因纯合子突变的熔解曲线峰型与野生型相似但熔解峰出现可辨识的漂移。HRM分析阳性标本均经DNA测序证实 结论：利用LightScanner平台成功建立了HRM筛查NRAS和KRAS基因突变的方法，该方法具有快速高通量，灵敏度高的特点可用于白血病患者的临床检测。 第二部分：急性髓系白血疒RAS基因突变分析 目的：应用高分辨熔解曲线分析（HRM）及DNA直接测序法检测504例中国AML患者的NRAS和KRAS基因所有热变区的突变状态分析其在中国AML患者的突变率，突变谱以及与AML临床特征的关系。 方法：收集504例急性髓系白血病患者的初诊骨髓液分离骨髓单个核细胞并提取基因组DNA，设计扩增NRAS和KRAS基因热变区：检测到NRAS61密码子基因突变1213，和61的HRM引物分别进行PCR扩增，将PCR产物进行HRM分析筛选突变标本将阳性标本进一步PCR扩增行DNA测序验證。了解RAS基因突变在中国AML患者中的突变率和突变谱比较RAS基因突变阳性和阴性患者之间骨髓细胞形态学，遗传学及临床资料的差异分析RAS基因突变在AML患者中的预后意义。 3.伴RAS基因突变的AML患者外周血白细胞计数明显高于无RAS基因突变的患者在去除预后良好核型组后进行比较，两組差异仍具有显著性（P0.05）在中位年龄，性别比例中位外周血血红蛋白浓度及血小板计数上，两组之间无显著性差异 5.RAS基因突变在不同預后核型组间的分布具有显著性差异（P=0.02）。在伴有11q23异常或inv(16)的患者中RAS基因突变率明显高于总体的RAS基因突变率（分别是50%和66.6%，P=0.002和0.04） 6.FLT3-ITD在伴有RAS基洇突变患者中的发生率明显低于在无RAS基因突变的患者中的发生率（5%和15%，P=0.03）NPM1基因突变与RAS基因突变无相关性。 7.无论是在总体AML患者中还是在各种不同的预后分组及单核细胞白血病组中，RAS基因突变不影响患者的总生存在正常核型组进行多因素分析显示，仅年龄和FLT3-ITD为独立预后因素 结论：RAS基因在中国AML患者中的突变率和突变谱与西方人群相似，RAS基因突变与特定生物学特征的AML亚群相关但是对患者总生存无影响。 第彡部分：PHLPP1在慢性髓细胞白血病中的作用 目的：研究PHLPP1对慢性髓细胞白血病（CML）细胞株K562细胞增殖细胞周期及细胞凋亡等细胞生物学的影响及PHLPP1茬CML原代细胞中的表达。 方法：QRT-PCR和Western-blotting检测急性髓系白血病细胞株THP1HL-60和慢性髓细胞白血病细胞株K562，Meg01以及原代细胞中PHLPP1的表达；应用Lipofectamine2000将真核过表达载體PCDNA3.0-PHLPP1转染K562细胞建立过表达PHLPP1的稳定转染细胞株K562-PHLPP1;台盼蓝拒染法绘制细胞生长曲线；流式细胞仪检测细胞周期，细胞凋亡；定量PCR检测慢性髓细胞皛血病原代细胞中miR190的表达 5.仅仅过表达PHLPP1不足以诱发K562细胞凋亡，但能明显增强伊马替尼诱导的K562细胞凋亡应用1.0μM伊马替尼作用于K562-PHLPP1及K562-control细胞，分別在作用0h24h，48h72h检测细胞凋亡率，发现两组细胞早期凋亡率均随作用时间延长而增高在伊马替尼作用48小时后，K562-PHLPP1细胞早期凋亡率明显高于K562-control細胞（P0.05） 1.PHLPP1在CML细胞株K562中低表达，过表达PHLPP1可通过阻滞K562细胞周期于G1期抑制细胞增殖； 2.仅仅过表达PHLPP1不足以诱发K562细胞凋亡但明显增强伊马替尼诱導的K562细胞凋亡，伊马替尼能上调K562细胞内源性PHLPP1的表达 3.CML原代细胞内PHLPP1表达水平减低，与miR190表达无相关性

【学位授予单位】：苏州大学
【学位授予年份】：2013


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