急！！！怎样实现目的基因在真核微生物系统的高效表达

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-10-08 04:50 标签： 真核微生物

是广泛应用于外源基因表达的系统之一，酵母作为基因工程表达系统，既有原核生物那样生长、繁殖快速和表达量高的特点，又具有与高等真核生物十分相像的蛋白质翻译后加工和基因表达调控的特征。长期以来酵母作为工业微生物的主要菌种，在工业化发酵方面已经积累了大量的经验。利用酵母进行重组蛋白生产，只有表达产量和质量都合格才能够得到应用，酵母对外源基因的表达水平受很多因素的影响。

在基因水平上，提高和控制外源基因的转录水平是提高表达水平的有效方法之一，所以筛选高效启动子就十分重要。另外表达载体在细胞中的拷贝数和稳定性对外源基因在酵母中的表达也有明显影响。在蛋白水平上，要考虑表达产物的可靠性问题，其中包括外源基因在表达系统中的遗传稳定性、不同生物来源的基因在酵母中表达后加工和修饰的情况。美迪西科研人员建立了成熟的酵母表达纯化服务平台，提供优质的重组蛋白在毕赤酵母和酿酒酵母中的表达与纯化服务。

当遇到外源重组蛋白的表达产率低，产物无活性或被降解的情况或没有检测到蛋白表达，则应该从以下几个方面进行改进:

(1)确定蛋白是否对酵母细胞具有毒性，如果有毒性则选择诱导表达系统；

(2)目的蛋白的水解；

重组蛋白的稳定性是提高蛋白表达量的一个重要因素，如果在表达中有蛋白质降解现象，即使采用高密度培养酵母以提高发酵液中的蛋白含量，但由于相应的蛋白酶的含量也随之增加，目的蛋白的积累会受到严重影响，所以细胞中蛋白酶的水平决定着目的蛋白的最终产量。为了提高目的蛋白的表达产率，可以采用以下策略:

(a)选择蛋白酶缺陷的菌株，避免表达产物的降解，提高目的蛋白的积累量；

(b)在培养基中添加富含氨基酸的组分和酪蛋白的水解物，胃蛋白的水解物，降低对目的蛋白的水解速度；

(c)采用非缓冲体系的培养基，通过pH的改变降低蛋白酶的活性，减少对表达产物的降解量。

分泌表达重组蛋白是一种获得目的产物的理想方法，因为它一方面可以简化后期的分离纯化工艺，另一方面可减轻细胞的负荷，提高细胞生产蛋白的能力。还可以减少蛋白酶对目的蛋白的水解机会。研究者将酿酒酵母的α-因子信号肽的前信号序列融合到人肿瘤抑制因子P53的cDNA区在毕赤酵母中构建MUTs，发现其对人肿瘤抑制因子P53 的表达量比传统中使用的)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

发酵饲料指利用某些特殊的有益功能微生物与一种或多种饲料及辅料混合发酵的鲜湿料或经干燥或制粒等特殊工艺加工而成的含活性益生菌的安全、无污染、无药物残留的优质饲料。发酵后饲料中含有大量有机酸、小肽、维生素等，具有营养、保健双重功效。    微生物发酵饲料的生产与应用是近年来饲料工业和养殖业最热门的话题之一。随着人民生 活水平的不断提高和环境资......

DNA的提取原理及提取技术 天然DNA的来源： 1 染色体DNA   原核生物和真核生物均含有染色体DNA,它是分离目的基因和基因表达调控因子的主要材料。 2 病毒和噬菌体DNA    主要用于构建基因克隆载体，也可作为分离目的基因和基因表达调控因子的材料。 质粒DNA  3多微生物（大肠杆菌、农杆菌和蓝细菌）都......

Northern Blot原理及实验方法 原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。实验方法： [仪器、试剂、材料] （一）仪器 恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉......

里氏木霉纤维素酶CBH1高效分泌表达系统研究

丝状真菌卫氏木霉(T.reesei)是纤维索酶、半纤维素酶的主要工业生产菌株，该菌是美国FDA认证的食品安全级的工业生产菌株，具有强大的蛋白分泌能力，其中纤维二糖水解酶I(CBH1)占其外分泌蛋白的60％以上。里氏木霉具有与高等哺乳动物相似的糖基化系统和蛋白修饰分泌机制。因此，开发可用于高效表达异源蛋白的里氏木霉优秀宿主具有非常广泛的应用价值。本文本着建立高...  

相关论文(与本文研究主题相同或者相近的论文)

同项目论文(和本文同属于一个基金项目成果的论文)

我要回帖

更多关于 真核微生物 的文章

 

随机推荐